1. REVISTA DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA Y BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Junio 2011 Vol. 16 · Nº1
REVISTA
ACTUALIDAD ARTÍCULOS
Implementación de los nuevos criterios de la OMS en la práctica clínica Implicación de la técnica MSOME en ciclos de ovodonación
Diagnóstico Genético Preimplantacional de aneuploidías: indicaciones, Influencia del ejercicio físico y el índice de masa corporal sobre la
técnicas y estrategias calidad espermática: análisis en pacientes de reproducción asistida
AULA JOVEN FORMACIÓN CONTINUADA
Impacto de las anomalías del espacio perivitelino de los ovocitos en el Células madre embrionarias y células pluripotentes inducidas:
desarrollo embrionario y la tasa de implantación ¿pasado, presente y/o futuro en la medicina regenerativa?
¿Es útil el estudio de la fragmentación del ADN espermático para la
indicación de IAC como TRA? AGENDA / NOTICIAS / DEBATE / NORMAS DE PUBLICACIÓN

3. Í N D I C E
Junio 2011 Vol. 16 Nº1
EDITA
Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción
(ASEBIR).
EDITORES Y DIRECTORES CIENTÍFICOS
Dra. Marga Esbert Algam
SUMARIO
IVI BARCELONA, Barcelona
Dr. Jorge Cuadros Fernández
CLÍNICA FIVMADRID, Madrid
SUMARIO Pág. COMITÉ EDITORIAL
Presidente:
Dr. Manuel Ardoy Vilches
EDItORIAl 3 HOSPITAL UNIVERSITARIO GREGORIO MARAÑÓN - Madrid
Certificado ASEBIR en: Reproducción Asistida Humana. Embriología Clínica
Carmen Ochoa Marieta Vicepresidenta y RRPP:
Dra. Carmen Ochoa Marieta
CER. CLINICA COTERO - Santander
ACtUAlIDAD 4
Implementación de los nuevos criterios de la OMS en la práctica clínica Secretaría y RRPP:
Cristina González Ravina, Alberto Pacheco Castro Dra. Montserrat Boada Palá
INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS - Barcelona
Diagnóstico Genético Preimplantacional de aneuploidías: indicaciones,
técnicas y estrategias Tesorería y Relaciones con la Industria:
Dr. Fernando Marina Rugero
Mariona Rius Mas, Laura Marquès Soler, Joaquima Navarro Ferreté
INSTITUTO DE REPRODUCCION CEFER - Barcelona
ARtÍCUlOS 19 Vocalía de Grupos de Interés e Investigación:
Implicación de la técnica MSOME en ciclos de ovodonación Dr. Josep Santaló Pedro
Cristina Urda, Ana R. Díaz, Mª Carmen Cañadas, Vicente Badajoz, Silvia UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA - Bellaterra
Camacho, Moisés de la Casa, Julio Gijón, Jose A. Gragera, Ricardo Bonache,
Vocalía de congresos:
Alberto Martínez de Arenaza
Dra. María José Torelló Ybañez
HOSPITAL QUIRÓN BARCELONA - Barcelona
Influencia del ejercicio físico y el índice de masa corporal sobre la calidad
Dra. Yolanda Mínguez Royo
espermática: análisis en pacientes de reproducción asistida
IVI MADRID - Madrid
Marta Campos Guarnizo, Elena Delgado Niebla, Sara Morgado García,
Beatriz Sánchez-Correa, Mª Rosario Gonzáles Roncero, Juan Gordillo Vocalía de Docencia y formación continuada:
Gonzálvez de Miranda, José De Julián y Fernández de Velasco, Raquel Dr. Ignacio Santiago Álvarez Miguel
Tarazona Lafarga, Javier García Casado INST. EXTREMEÑO REPRODUCCIÓN ASISTIDA –IERA -Badajoz
Dr. Josu Franco Iriarte
AUlA JOVEN 34 CENTRO SANITARIO VIRGEN DEL PILAR - San Sebastian
Impacto de las anomalías del espacio perivitelino de los ovocitos en el Dr. Juan Manuel Moreno García
desarrollo embrionario y la tasa de implantación CLINICA VISTAHERMOSA - Alicante
Marta Herrero, Pere Feliu, Celia Vives, Gerard Albaigès, Mònica Ballesteros,
Teresa Planella, Francesca Vidal, Imma Saumell Vocalía Página Web::
Dr. Juan Manuel Moreno García
CLINICA VISTAHERMOSA - Alicante
¿Es útil el estudio de la fragmentación del ADN espermático para la
indicación de IAC como TRA? La Revista de ASEBIR (Asociación para el Estudio de la Biología
María José Lázaro, Laura Vidal, Concepción Linares, Luz Rodríguez de la Reproducción) está indexada en las bases de datos ICYT, de
ciencia y tecnología, e IME, de Biomedicina, del Consejo Superior de
DEBAtE 44 Investigaciones Científicas (CSIC) de España y en las bases de datos
DPI en enfermedades de aparición tardía LATINDEX, para Iberoamérica y CUIDEN®, de la Fundación Index.
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VI CONGRESO NACIONAl DE ASEBIR 50
Secretaría ASEBIR
Programa Científico Preliminar
C/ Cronos 20, Edificio 4, 1º, 6ª
28037 Madrid - Tfno: 91 367 89 94
FORMACIÓN CONtINUADA 55 www.asebir.com · asebir@asebir.com
Células madre embrionarias y células pluripotentes inducidas: ¿pasado,
presente y/o futuro en la medicina regenerativa? DISEÑO, MAQUETACIÓN E IMPRESIÓN
José Luis Cortés, José Luis García Pérez GÓBALO: Gráfica · Web · Multimedia · Consultoría
C/ Castillo de Fuensaldaña 4, Oficina 213
AGENDA 62 28232 · Las Rozas · Madrid
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ISSN: 1136-4424
Soporte válido: 78-R-CM

5. E D I t I tUlOI A l
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Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2011 Vol. 16 Nº 1
3
CERTIFICADO ASEBIR EN REPRODUCCIÓN ASISTIDA HUMANA. EMBRIOLOGÍA CLÍNICA
Como todos sabéis, la primera convocatoria sobre la certificación ASEBIR en Reproducción Asistida Humana: Embriología Clínica,
ha finalizado el 31 de Marzo del presente año. Quiero comentaros que ha sido un éxito; 137 compañeros la han solicitado a través
de la vía de convalidación.
Los listados con los nombres de cada uno, se encuentran publicados en el área restringida a los socios de nuestra página Web, con
la intención de mantener la privacidad.
A partir de este momento, elevaremos a escritura pública ante notario el citado listado y a continuación se realizarán los diplomas,
con el número de registro individual de cada uno de vosotros. Y se os entregarán, personalmente, en el próximo congreso de
ASEBIR, a todos aquellos que podáis asistir. Al resto se os enviará a vuestra dirección postal.
Desde ASEBIR se continúa trabajando en aras a conseguir el reconocimiento de nuestra especialidad, y entendemos que la
certificación significa un paso transitorio y necesario, que surgió a instancias del Ministerio de Sanidad, Consumo, Política Social
e Igualdad (MSCPSeI), para seguir avanzando en nuestro proyecto.
El reconocimiento de la existencia de una necesidad social y profesional existe, y ha sido aceptado en los diferentes apoyos que
hemos recibido por parte de los colegios profesionales y organizaciones generales de colegios profesionales, así como de diversas
sociedades científicas.
ASEBIR, a través de la comisión de especialidad y de sus delegados autonómicos, está gestionando estos apoyos e intentando
que exista un reconocimiento oficial, vía sanidad, vía educación en las diferentes comunidades autónomas, y por supuesto en el
Ministerio.
Sabemos que es una tarea ardua y larga, y que posiblemente algunos de nosotros no la disfrutemos, pero estamos convencidos de
que es estrictamente necesaria.
La sociedad y los pacientes necesitan profesionales regularmente formados y controlados administrativamente, y somos nosotros,
los propios profesionales, los que lo estamos demandando.
Es por esto que os animo a que participéis en las siguientes vías de obtención de dicho Certificado, la vía rápida y la vía mediante
examen. Ambas convocatorias ya están abiertas; inscribiros en ellas y utilizar el listado de los embriólogos que han obtenido la
certificación, para pedirles los avales de los que hablan las normas.
Es un esfuerzo que debemos hacer cada uno de nosotros; solo así conseguiremos las razones suficientes para seguir luchando por
el reconocimiento de nuestra especialidad.
Carmen Ochoa Marieta
Vicepresidenta de ASEBIR

6. A C t UIA l I D A D
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IMPlEMENtACIÓN DE lOS NUEVOS CRItERIOS DE lA OMS EN lA
PRÁCtICA ClÍNICA
Cristina González Ravina1,3, Alberto Pacheco Castro2,3
1
Laboratorio de Andrología y Banco de Semen. Clínica IVI Sevilla, 2Laboratorio de Andrología y Banco de Semen. Clínica IVI Madrid, 3Grupo de
Interés de Andrología ASEBIR
Como es bien sabido, el primer Manual es que se reconoció que el estudio de Con respecto a la morfología, el
de Laboratorio para el análisis de la movilidad progresiva espermática manual refiere la puesta en marcha
semen humano y su interacción con (espermatozoides tipo a y b), así de un estudio multicéntrico para el
el moco cervical se publicó en 1980, como el de la morfología, aparte de análisis de este parámetro seminal.
en respuesta a la elevada necesidad ser subjetivos no estaban sujetos a En esta edición de 1999 se especifica
de estandarizar los protocolos para ningún protocolo bien estandarizado que los datos obtenidos en centros
dicho análisis (WHO Laboratory entre los laboratorios (Cooper et al., con programas de reproducción
Manual, 1999a). Dicho manual ha sido 1992; Dunphy et al., 1989; Neuwinger asistida sugieren que valores de
sometido a 3 revisiones posteriores, et al., 1990). Sin embargo, los valores morfología por debajo del 15% están
y el año pasado, la OMS elaboró la 5ª obtenidos para la concentración relacionados con una disminución
edición del “Manual para el examen y espermática y la movilidad de la tasa de fecundación en FIV
procesamiento del semen humano”. total (a+b+c) sí se consideraron (Ombelet et al., 1997b).
En esta última versión, entre otros aceptables, puesto que podían
aspectos, se han revisado los valores medirse de manera reproducible en En cuanto a la nomenclatura, los
de referencia, el algoritmo para los la mayoría de los centros. Por esto, términos utilizados para expresar
diagnósticos y la interpretación se recomendó que cada laboratorio valores del seminograma por debajo de
clínica de estos diagnósticos. estableciese sus valores límite de los valores de referencia son:
Hasta el año pasado, en todos los normalidad para dichas variables, y
laboratorios de Andrología, así como que además incluyese los adecuados ASTENOZOOSPERMIA: móviles progresivos
los de reproducción asistida, se controles de calidad tanto interno < 50% a+b ó <25% a
trabajaba conforme a las directrices como externo, que han quedado
recomendadas en los tres manuales de ampliamente desarrollados en el nuevo OLIGOZOOSPERMIA: concentración < 20
1999 (WHO, 1999a, b y c). manual de 2010. millones/ml
Haciendo un breve repaso de los A pesar de todo, comparando las TERATOZOOSPERMIA: morfología < 15%
mismos, así como de los valores de características espermáticas de una formas normales
referencia existentes hasta el 2010, serie de varones y utilizando análisis
observamos que si bien cuando estadístico, se definieron rangos NECROZOOSPERMIA: vitalidad < 75 %
se establecieron en 1999 podrían de referencia para los principales
haberse considerado como útiles, con parámetros seminales atendiendo a su CRIPTOZOOSPERMIA: ausencia de
el paso de los años se fue haciendo capacidad para discriminar entre las dos espermatozoides en la muestra de
evidente una necesaria actualización poblaciones estudiadas (fértil vs sub- eyaculado en su análisis inicial, y
de los mismos. No debemos olvidar fértil o sub-fértil vs infértil) (Comhaire presencia de espermatozoides tras la
que los trabajos realizados para et al., 1987; Ombelet et al., 1997a). centrifugación.
establecer los valores de referencia
en 1999 se basaron en el análisis En la tabla se muestran los valores de referencia establecidos en 1999:
de dos muestras de semen de un
número no muy elevado de varones,
Parámetro seminal Valor inferior de referencia
en diferentes laboratorios en los
que no se había estandarizado los Volumen 2.0 mililitros
métodos de trabajo ni implantado los
sistemas de calidad correspondientes. pH 7.2
Concentración 20 millones de espermatozoides por mililitro
En el manual publicado en 1999, los
espermatozoides se clasificaban en 4 Número total de espermatozoides 40 millones de espermatozoides por eyaculado
categorías en función de la movilidad: Movilidad 50% a+b de los espermatozoides del eyaculado
tipo a (móviles progresivos rápidos), 25% a de los espermatozoides del eyaculado
tipo b (móviles progresivos lentos),
tipo c (móviles no progresivos) y tipo Vitalidad 75% vivos de los espermatozoides del eyaculado
d (inmóviles). Una de las principales
Morfología 15% formas normales
limitaciones de aquella clasificación

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AZOOSPERMIA: ausencia de peso al volumen de la muestra (que CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y
espermatozoides en la muestra de antes no era tan relevante) que debe METODOLOGÍA EMPLEADA
eyaculado en su análisis inicial y ser medido con precisión utilizando el
ausencia de espermatozoides tras la método recomendado por la OMS Para el estudio se analizaron
centrifugación. Concentración = 0. las muestras de semen de unos
b) respecto al diagnóstico de 4500 varones de 14 países y 4
ASPERMIA: ausencia de eyaculado. azoospermia, se profundiza en el continentes, divididos en 3 grandes
Volumen = 0. protocolo de trabajo a seguir con grupos: varones fértiles, varones
este tipo de muestras en las que no de fertilidad desconocida y varones
En base a la clasificación seminal se encuentran espermatozoides en normozoospérmicos según el manual
del varón, su historia clínica y su el eyaculado, diferenciando entre de 1999. El grupo de varones
exploración física (así como cualquier la necesidad de obtener un valor de cuya pareja había conseguido
otra información adicional) se concentración y/o movilidad preciso o gestación en un plazo ≤ 12 meses
podría dar el diagnóstico del varón centrifugar la muestra para aumentar se escogió como grupo control para
atendiendo a un diagrama que recoge la probabilidad de encontrar establecer los valores de referencia
diferentes situaciones en cuanto espermatozoides tras el lavado de los parámetros seminales (1953
a la concentración espermática, varones, 5 estudios en 8 países de 3
desde muestras con azoospermia, c) se recogen cambios muy continentes).
criptozoospermia u oligozoospermia significativos en las categorías de
(WHO, 1999). Cabe destacar que movilidad espermática. Se recomienda Todos los laboratorios que
en el manual de 1999 se utiliza una a partir de ahora diferenciar los participaron en el estudio
subclasificación de las distintas espermatozoides únicamente según 3 obtuvieron los datos utilizando
alteraciones seminales (oligo-, categorías: móviles progresivos (PM) métodos estandarizados de análisis
asteno-, terato-, necrozoospermia) en (uniendo las anteriores categorías a seminal (WHO, 1999a, b). Como en
grados que van de leve a grave pasando y b), móviles no progresivos (NP) (la dicho manual se ofrecen diferentes
por moderado. anterior categoría c) e inmóviles (IM) métodos para la determinación
(como categoría previa d) del volumen, la concentración
NOVEDADES DEL MANUAL OMS 2010 espermática y la tinción morfológica,
d) en esta edición se recoge con el método empleado en cada
Tras 11 años desde la edición de 1999, mayor detalle el análisis de la laboratorio se ha tenido en cuenta
se hizo cada vez más necesaria una morfología, y se incluyen fotos a la hora de valorar los resultados.
revisión y actualización de los valores de espermatozoides considerados Además, en muchos laboratorios se
de referencia y los protocolos de trabajo normales y espermatozoides con una implantaron con retraso controles
establecidos, de manera que la nueva o varias anomalías morfológicas, de calidad externos e internos, por
edición online del Manual OMS de 2010 así como explicaciones precisas para lo que los datos se han revisado
presenta un nivel de detalle mucho más mejorar la formación de los técnicos en para calcular la distribución de
elevado en cuanto al análisis seminal: el estudio de dicho parámetro seminal referencia teniendo en cuenta
soluciones de trabajo, procedimientos, este hecho (Castilla et al., 2006).
cálculos e interpretación de los Por otra parte, cuenta con un capítulo
resultados. Además recomienda usar sobre criopreservación de semen Para el estudio se utilizó una única
un método concreto en aquellos casos ampliado e incluido en el apartado de muestra de semen eyaculado por
en que exista más de una posibilidad o preparación de semen; así como un varón, que fue recogida con un
técnica de análisis. capítulo entero dedicado a los controles periodo de abstinencia sexual de
de calidad, que aparte de novedoso 2 a 7 días. La concentración se
Dentro de este aspecto, los principales supone una recomendación de la OMS midió en la mayoría de los casos
cambios reflejados en la 5ª edición para tener garantía de calidad en nuestros empleando el hemocitómetro de
incluyen: laboratorios. Incluye tanto el control de Neubauer mejorado, y, respecto a
calidad externo como el interno. la movilidad, se recogieron datos
a) un nuevo protocolo de trabajo a sobre movilidad total (WHO 1999:
la hora de realizar el recuento de Con todo ello, la 5ª edición del Manual a+b+c) y movilidad progresiva (WHO
la concentración espermática. Se queda dividida en 3 partes: 1999: a+b) (Cooper and Yeung.,
han modificado las diluciones de 2006). Los datos de morfología se
semen recomendadas y las áreas de - Análisis de semen (capítulos 2-4) tuvieron en cuenta sólo de aquellos
la cámara de recuento necesarias - técnicas estándar centros que utilizaron el criterio
para establecer el número de - tests opcionales estricto de Tygerberg (WHO, 1999),
espermatozoides (concentración) - tests de investigación y para la vitalidad (analizada
con objeto de poder contar 200 por tinción eosina-nigrosina), el
espermatozoides por replicado. Se - Preparación de semen (capítulos 5 y 6) número de muestras estudiadas fue
hace mayor hincapié en reducir los signif icativamente menor que para
errores de muestreo, dando un mayor - Control de calidad (capítulo 7) el resto de los parámetros seminales

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Cristina González Ravina et al. Implementación de los nuevos criterios de la oms en la práctica clínica
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(sólo aportaron datos 2 centros). La
ventaja de tener estandarizados los
protocolos de trabajo es que se ha
minimizado el error analítico y los
valores presentados se consideran
representativos de las características
seminales de un varón fértil.
NUEVOS VALORES DE REFERENCIA Y
DIAGNÓSTICOS
En esta edición se revisan y
establecen los nuevos valores de
referencia con los que debemos
trabajar actualmente, que se
encuentran recogidos en el artículo
(de acceso libre) publicado en Mayo
de 2010 en la revista internacional
Human Reproduction Update (Cooper
et al., 2010). En la tabla II, obtenida
de este artículo, se recogen los
valores de referencia establecidos
con un 95% CI. ASTENOZOOSPERMIA: Móviles pero sí que haya también muchos
progresivos < 32 % (no se tiene en inmóviles. De esta manera se evitan
En la tabla A1.1 se recogen con cuenta el total de móviles (% PR+NP) falsas necrozoospermias que alarmen
mayor claridad los límites inferiores aunque esté por debajo del valor de injustificadamente.
de referencia del quinto percentil referencia).
de los valores en una población de CRIPTOZOOSPERMIA/AZOOSPERMIA:
referencia de varones fértiles (Cooper OLIGOZOOSPERMIA: Número total de No hay cambios respecto a 1999.
et al., 2010). espermatozoides < 39 millones. La
OMS prefiere este parámetro antes PROBLEMAS Y MEJORAS DE LA NUEVA
Todo esto va a su vez acompañado que la concentración de la muestra, CLASIFICACIÓN OMS
de algunos cambios en cuanto al que era el parámetro de elección en el
diagnóstico de las muestras, de manual de 1999. Como en todo cambio o revisión,
modo que aunque se mantiene la nos hemos encontrado con mejoras
nomenclatura, se han producido NECROZOOSPERMIA: Vitalidad < 58 importantes pero también con algunos
algunas modificaciones: % y porcentaje de espermatozoides inconvenientes que tendremos que ir
inmóviles muy elevado. Este segundo solucionando a medida que nos vayamos
TERATOZOOSPERMIA: Formas normales criterio es arbitrario ya que la OMS familiarizando con las modificaciones.
por criterio estricto (Tygerberg) < 4 % no indica un número concreto, Algunas de ellas han sido:

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1. Cambio del concepto de del análisis seminal sino el que cada grupo de trabajo en función
oligozoospermia. La OMS de 1999 mayor controversia ha suscitado de la metodología empleada en el
asignaba este diagnóstico a aquellas a efectos de indicar uno u otro centro y la información que espera
muestras con concentraciones por tipo de tratamiento en las clínicas obtener con dicho diagnóstico. Es
debajo del valor de referencia de de reproducción asistida. Se han bien sabido que el estudio de la
dicho parámetro (20 millones/ml). publicado numerosos artículos vitalidad resulta esencial en aquellos
Sin embargo, se ha hecho evidente en defensa o detrimento de la casos en que nos encontremos con
que la propia concentración importancia de la morfología un porcentaje de espermatozoides
depende del volumen final de la en muchos de los aspectos clave inmóviles por encima del 50%. No
muestra, por lo que en el Manual de de estos tratamientos: tasa de es lo mismo tener un porcentaje de
2010 se vincula preferentemente el gestación, tasa de implantación, espermatozoides inmóviles elevado
diagnóstico de oligozoospermia al éxito en la fecundación, etc. pero que estén vivos tras test de
número total de espermatozoides, (Kruger et al., 1986; Kruger et al., tinción (que orientaría a posibles
siempre que éste se encuentre por 1988; Menkveld., 1990; Mortimer defectos estructurales de la cola;
debajo de los 39 millones. Esto ha and Menkveld., 2001; Garrido et Chemes and Rawe, 2003), que un
supuesto una mejora en la valoración al., 2005). De cualquier modo, elevado porcentaje de inmóviles y
de dicho parámetro. siempre ha sido objeto de debate, además muertos (más relacionado
no sólo dentro del laboratorio de con patología del epidídimo; Wilton
2. Cambio en las categorías de andrología y FIV, sino entre estos et al, 1988; Correa-Pérez et al., 2004).
movilidad espermática. Dado que la departamentos y los clínicos, pues,
antigua categoría “a” del Manual de salvo casos extremos de morfologías 5. El hecho de que hayan desaparecido
1999 era difícil de justificar cuando con elevadas anomalías, se ha los “adjetivos” de leve, moderado y
el recuento de movilidad de una hecho difícil unif icar los criterios grave hace que los diagnósticos de
muestra se realizaba sin un sistema de valoración morfológica de las muestras con alteraciones queden
computerizado, y que realmente se las muestras, incluso realizando incompletos y se obligue a tener
observó que la información relevante los correspondientes controles en cuenta los valores numéricos
de este parámetro se encontraba en de calidad tanto internos como de volumen, concentración,
el nº total de móviles progresivos externos. movilidad y morfología para poder
(a+b), se han modificado las hacernos una idea real del estado
categorías de movilidad espermática 4. La vitalidad espermática y la de la muestra. Ya que en función
que ahora recomiendan diferenciar necrozoospermia. Parece que este del número de millones de móviles
los espermatozoides según 3 tipos: parámetro, que además la OMS progresivos determinaremos el tipo
móviles progresivos (PM), móviles no incluye como “de obligatorio de tratamiento a realizar en una
no progresivos (NP) e inmóviles estudio” en el seminograma sino pareja, no será lo mismo un varón con
(IM). Algunos centros consideran como algo muy recomendable, alteraciones leves, que en algunos
ventajosa la eliminación de dicha toma fuerza en esta nueva edición. casos permitiría realizar técnicas
categoría. Su vinculación con el porcentaje de inseminación artificial, que otro
de espermatozoides inmóviles, sin varón con alteraciones graves que
3. Disminución del porcentaje de que aparezca establecido un valor serían clara indicación de FIV o
formas normales en la morfología. exacto a partir del cual diagnosticar incluso ICSI.
Es bien sabido que este parámetro una necrozoospermia, hace que sea
es, no sólo el más subjetivo fijado de manera individualizada por 6. Para f inalizar, quizás el aspecto
que más puede haber llamado la
atención es la diferencia entre
Parámetro seminal Semen 1999 Semen 2010 1999 y 2010 de un varón con un
seminograma con sus parámetros
dentro de los valores de referencia
Volumen 2.0 mililitros 1.5 mililitros
en cada caso. Veamos las dos
15x106 espermatozoides/ posibles situaciones.
20x10 espermatozoides/
6
mililitro
Concentración Observamos que el cambio en cuanto
mililitro 39x106 espermatozoides
totales al número de millones de móviles
progresivos se ve reducido en un 64%
(o un 40% si utilizamos el criterio
Movilidad progresiva 50% 32%
de espermatozoides totales ahora
recomendado), respecto al que
Morfología 15% formas normales 4% formas normales se obtenía para un varón con una
muestra de semen con los valores
Millones móviles 7.2 límite de referencia en 1999. El
20
progresivos 12 cambio en este aspecto podría

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Cristina González Ravina et al. Implementación de los nuevos criterios de la oms en la práctica clínica
8
resultar más problemático a nivel de pruebas y reconocimientos, es reference values for human semen
de consulta clínica, ya que varones una herramienta útil para tomar characteristics. Hum Reprod Update
ahora diagnosticados como normales decisiones terapéuticas. El objetivo 2010; 16(3): 231-245.
en nuestros centros pueden recibir la principal es valorar si la muestra,
recomendación de someterse a un ciclo una vez capacitada, permite obtener Cooper TG, Yeung CH. Computer-aided
de IAH o incluso de FIV. Evidentemente, el mínimo de millones de móviles evaluation of assessment of “grade a”
cada centro deberá decidir si cambia progresivos para realizar uno u spermatozoa by experienced technicians.
sus criterios o bien si hace el esfuerzo otro tratamiento de reproducción Fertil Steril 2006; 85:220-224.
de explicar a los pacientes que con los (inseminación artificial: IAH,
parámetros de referencia actualmente Fecundación in Vitro: FIV o Correa-Pérez JR, Fernández-Pelegrina R,
aceptados se asume la posibilidad de Microinyección Intracitoplasmática: Aslanis P, Zavos PM. Clinical management
que, aun siendo normales, pueden ICSI). Podemos pensar que para of men producing ejaculates
indicar un determinado tratamiento de una FIV estándar los nuevos characterized by high levels of dead
reproducción asistida. valores de referencia no deberían sperm and altered seminal plasma
modificar los valores internos que factors consistent with epididymal
DISCUSIÓN cada laboratorio establece según necrospermia. Fert Steril 2004; 81(4):
su protocolo de inseminación, sin 1148-1150.
Es importante en primer lugar embargo deberemos tener cuidado
recordar que el seminograma, por sí con muestras normozoospérmicas Dunphy BC, Kay R, Barratt CL, Cooke ID.
solo, no tiene capacidad diagnóstica con valores en los límites inferiores Quality control during the conventional
(sensibilidad y especificidad) para de los diferentes parámetros, analysis of semen, an essential
indicar infertilidad masculina. Los como ya hemos visto. Por su parte, exercise. J Androl 1989; 10:378-385.
diagnósticos del seminograma se la morfología sigue siendo un
entienden mejor como una simple parámetro de dudosa utilidad clínica Garrido N, Meseguer M, Martínez-
descripción de la muestra para ver para evaluar un seminograma o Conejero JA, Simón C, Pellicer A,
si se “asemejan” a los valores de una derivar un paciente directamente a Remohí J. Impacto de los criterios
población fértil. Sí podrían tener FIV/ICSI, y debe ser considerado en estrictos de morfología espermática
utilidad diagnóstica clínica para su justa medida. en reproducción Asistida. Cuadernos
detectar una criptozoospermia o de Medicina Reproductiva Vol.11 Nº 1.
azoospermia. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Año 2005.
Por otra parte, no estaría de más Castilla JA, Alvarez C, Aguilar J, González- Kruger TF, Menkveld R, Stander FS,
reflejar que, para aquellos que Varea C, Gonzalvo MC, Martínez L. Influence Lombard CJ, Van der Merwe JP, van
nos dedicamos a la reproducción of analytical and biological variation on Zyl JA et al. Sperm morphologic
asistida, es conveniente diferenciar the clinical interpretation of seminal features as a prognostic factor in
entre diagnóstico seminal de un parameters. Hum Reprod 2006; 21:847-851. vitro fertilization. Fertil Steril 1986;
varón y utilidad “real” de la muestra 46:1118-1123.
en un tratamiento de infertilidad. Chemes HE and Rawe VY. Sperm
Sabemos que la OMS establece pathology: a step beyond descriptive Kruger TF, Acosta AA, Simmons KF,
claramente que estar por debajo de morphology. Origin, characterization Swanson RJ, Matta JF, Oehninger S.
los valores de referencia o tener una and fertility potential of abnormal Predictive value of abnormal sperm
muestra no “normozoospérmica” no sperm phenotypes in infertile men. Hum morphology in vitro fertilization.
indica infertilidad masculina, sino Reprod Update 2003; 9:405-428. Fertil Steril 1988; 49:112-17.
que ese parámetro seminal está por
debajo del quinto percentil del valor Comhaire FH, Vermeulen L, Schoonjans Menkveld R, Stander FSH, Kotze TJ,
de ese parámetro en una población F. Reassessment of the accuracy of Kruger TF, van Zyl A. The evaluation
de referencia de varones fértiles. En traditional sperm characteristics of morphological characteristics of
otras palabras, que ese valor está por and adenosine triphosphate (ATP) in human spermatozoa according to
debajo del 95% de los valores que estimating the fertilizing potential of stricter criteria. Hum Reprod 1990;
presentaban estos varones fértiles. human semen in vivo. Int J. Androl 1987; 5(5):586-92.
En teoría, por la forma en la que se 10:653-662.
han obtenido (estadística de los Mortimer D, Menkveld R. Sperm
parámetros en unos 2000 varones Cooper TG, Neuwinger J, Bahrs S, morphology assessment. Historical
fértiles), es posible que los valores Nieschlag E. Internal quality control perspectives and current opinions. J
de referencia vayan actualizándose of semen analysis. Fertil Steril 1992; Androl 2001; 22:192-205.
a medida que se vayan ampliando 58:172-178.
los estudios poblacionales. Pero, Ombelet W, Bosmans E, Janssen M,
aparte de su utilidad para el Cooper TG, Noonan E, von Eckardstein Cox A, Vlasselaer J, Gyselaers W, et al.
diagnóstico de la pareja infértil, S, Auger J, Gordon Baker HW, Behre Semen parameters in a fertile versus
el seminograma, junto al resto HM, et al. World Health Organization subfertile population: a need for change

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9
in the interpretation of semen testing. potential and comparative analysis of Human Semen and Sperm-cervical Mucus
Hum Reprod 1997a; 12:987-993. strict or WHO criteria in a fertile and Interaction, 4th ed. Cambridge: Cambridge
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12. A C t U A l I D A D
10
DIAGNÓStICO GENÉtICO PREIMPlANtACIONAl DE ANEUPlOIDÍAS:
INDICACIONES, tÉCNICAS Y EStRAtEGIAS
Mariona Rius Mas 1,2, Laura Marquès Soler 1 y Joaquima Navarro Ferreté 2
1
Centre de Reproducció Assistida Clínica Sagrada Família
2
Unitat de Biologia Cel·lular i Genètica Mèdica, Facultat de Medicina, Departament de Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia, Universitat
Autònoma de Barcelona
e-mail: mrius@reproduccion-asistida.com; mariona.rius@uab.cat
El Diagnóstico Genético Preimplantacional seleccionados es del 15% (embriones et al., 1993; Sauer et al., 1996), por
(DGP) fue desarrollado para poder que muestran latido cardíaco respecto lo que el primer factor no quedaría
seleccionar embriones libres de a los transferidos). Aunque cabe tener claramente asociado a este fenómeno.
enfermedades monogénicas en un en cuenta que los datos proceden En cambio, existen muchas evidencias
estadio previo a la implantación de centros de distintos países, con de la implicación ovárica en los
(Handyside et al., 1990). Para ello políticas de transferencia diferentes, problemas de fertilidad de mujeres de
se requiere un procedimiento de esta realidad queda lejos de las ≥ 37 años, especialmente de la elevada
fecundación in vitro que permita generar esperanzas depositadas inicialmente en incidencia de aneuploidías en sus
los embriones en el laboratorio. el PGS. De hecho, en los últimos años ovocitos (Nicolaidis y Petersen, 1998;
se ha generado una controversia en Pellestor et al., 2003, 2005; Fragouli et
Teniendo en cuenta que la aneuploidía torno a la utilidad de esta estrategia: al., 2006). Además, se han observado
es una de las causas más evidentes mientras algunos autores publican un altas tasas de aneuploidía (40-80%)
del fallo reproductivo humano y es incremento en la tasa de implantación en embriones derivados de este grupo
responsable de síndromes compatibles de embriones de pacientes sometidos de pacientes (Gianaroli et al., 1997,
con la vida, el concepto de selección al PGS (Gianaroli et al., 1997; Munne 1999; Staessen et al., 2004; Platteau
preimplantacional pronto se adaptó para et al., 1999, 2003), otros ponen de et al., 2005), independientemente
la detección de pérdidas o ganancias manifiesto que este sistema no es capaz de la morfología embrionaria. Por
cromosómicas en los embriones, de mejorar los resultados en mujeres consiguiente, en mujeres de edad
dando lugar al DGP para el cribaje de de menos de 36 años (Staessen et al., avanzada existe un elevado riesgo de
aneuploidías o PGS (Preimplantation 2008) o que incluso los empeora en no implantación, de aborto o incluso
Genetic Screening). El objetivo del PGS mujeres de edad avanzada (Staessen de tener descendencia que padezca
es incrementar la tasa de implantación, et al., 2004; Mastenbroek et al., 2007; síndromes originados por alteraciones
disminuir la tasa de aborto y evitar el Hardarson et al., 2008). cromosómicas. De hecho, se ha descrito
nacimiento de individuos afectados un incremento exponencial de la
por cromosomopatías en pacientes con Evaluando los resultados globales incidencia del síndrome de Down con el
especial riesgo. obtenidos hasta hoy, pues, es necesario aumento de la edad de la madre (Hassold
hacer una reflexión sobre las estrategias y Jacobs, 1984). El riesgo también
Las primeras aplicaciones del PGS utilizadas en el PGS, incidiendo en aumenta para el resto de trisomías
fueron llevadas a cabo por Verlinsky puntos esenciales como qué pacientes viables (las de los cromosomas 13, 18,
et al. (1995) y Munne et al. (1995) pueden beneficiarse del diagnóstico, X e Y) (Warburton, 1986).
y consistieron en el análisis de los qué técnica es la más idónea para el
cromosomas cuyas alteraciones análisis cromosómico o en cuál estadio Parece evidente, pues, que la selección
producen síndromes viables, es decir, celular debe hacerse la biopsia. de embriones libres de alteraciones
X, Y, 13, 18 y 21, más el cromosoma cromosómicas es una condición clave
16, la alteración del cual se halla INDICACIONES PARA EL PGS para aumentar el éxito reproductivo en
frecuentemente en abortos. este grupo de pacientes. Sin embargo,
EDaD matERna avanzaDa los resultados de distintos estudios
Desde de las primeras aplicaciones, clínicos aleatorizados (randomized
el PGS se ha convertido en un análisis Es bien sabido que a medida que controlled trials, RCT) de PGS en mujeres
rutinario para pacientes en los que se aumenta la edad de la madre disminuye de edad avanzada son dispares:
sabe que la aneuploidía es uno de los la tasa de implantación. Se han mientras algunos autores describen
factores causantes de la infertilidad. propuesto varios factores que podrían un claro incremento de la tasa de
En la última recopilación de datos de la estar implicados en dicho declive, de embarazo (Schoolcraft et al., 2010),
European Society of Human Reproduction los cuales los dos más aceptados son la otros no encuentran argumentos a
and Embryology (ESHRE) PGD Consortium disminución de la receptividad del útero favor del diagnóstico en términos de
se contabilizan 16342 casos de PGS y el envejecimiento de los ovocitos resultados clínicos por ciclo iniciado
desde Enero de 1997 hasta Diciembre de (Meldrum, 1993). No obstante, se han (Staessen et al., 2004; Mastenbroek
2007 (Harper et al., 2010). Sin embargo, descrito tasas de embarazo elevadas en et al., 2007; Hardarson et al., 2008;
la tasa global de implantación de los mujeres de edad avanzada receptoras de Schoolcraft et al., 2010). Sin embargo,
embriones transferidos después de ser ovocitos de donantes jóvenes (Abdalla algunos de estos estudios han sido

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criticados por su diseño, es decir, por muestran mejoría en los resultados sencillo, ya que el tiempo de hibridación
no incluir los pacientes adecuados, por clínicos del PGS (Gianaroli et al., 1999; puede durar entre una y 14 horas,
el método de análisis utilizado, etc. Munne et al., 2003; Harper et al., 2006), aproximadamente, y el análisis de los
(Munne et al., 2007). Como veremos mientras que otros describen tasas de resultados se lleva a cabo de forma muy
más adelante, la estrategia utilizada implantación más elevadas (Pehlivan ágil. Otra de las ventajas de la técnica
para el cribado de aneuploidías et al., 2003; Platteau et al., 2006). es que permite identificar y localizar la
puede influir enormemente en los presencia del material cromosómico in
resultados obtenidos. FaCtoR maSCulino situ, es decir, en la muestra examinada;
esto permite re-biopsiar una segunda
aboRtoS DE REPEtiCión El PGS también se recomienda a dos célula para evitar embriones sin
grupos en los que la aneuploidía diagnóstico. Pero la FISH también
El término “abortos de repetición” parece tener un origen claramente presenta limitaciones: para poder
se asigna a parejas que han sufrido masculino. El primer grupo es el de aplicarla es necesario fijar previamente
dos o más abortos consecutivos. La pacientes con azoospermia, obstructiva el material nuclear en un portaobjetos.
prevalencia de este fenómeno en la o no obstructiva, en los embriones Este proceso requiere gran habilidad
población es del 1% y en el 50% de derivados de los cuales se ha observado y experiencia, de lo contrario, puede
los casos no existe una causa aparente una elevada incidencia de alteraciones ocasionar pérdidas de cromatina, que
(Li et al., 2002). La presencia de cromosómicas (Platteau et al., 2004; se interpretarán como falsas pérdidas
alteraciones cromosómicas numéricas Rubio et al., 2005). El segundo grupo cromosómicas. Además, el hecho de que
en abortos espontáneos (Hassold et al., es el de pacientes con teratozoospermia la FISH detecte un único locus en cada
1980), así como su elevada incidencia severa, puesto que se ha detectado un cromosoma hace la estrategia menos
(50-60%) en embriones de parejas con número incrementado de aneuploidías robusta y más susceptible de producir
abortos de repetición no explicados en sus espermatozoides (Bernardini errores de diagnóstico. En ocasiones,
(Pellicer et al., 1999; Rubio et al., 2003; et al., 1998; Calogero et al., 2003). las señales fluorescentes pueden ser
Munne et al., 2005) hace pensar que, en De todas formas, prácticamente no difíciles de interpretar: por ejemplo,
estos casos, la aplicación del PGS podría existen estudios que demuestren el señales dobles pueden corresponder a
ser beneficiosa. De todos modos, los efecto positivo del PGS sobre la tasa de regiones replicadas de un cromosoma
estudios realizados hasta el momento implantación y embarazo en estos casos y, en consecuencia, tratarse de
son controvertidos y no está claro y, en consecuencia, se trata de una disomías; o bien a duplicaciones
que la tasa de aborto pueda reducirse indicación minoritaria. cromosómicas, que producen
únicamente mediante una selección trisomías. Asimismo, solapamientos
cromosómica (Werlin et al., 2003; Rubio En cambio, el PGS sí se aplica a pacientes de DNA pueden ser interpretados como
et al., 2005; Munne et al., 2005), puesto con resultados previos de Hibridación falsas monosomías.
que otros factores como la morfología in situ Fluorescente (Fluorescent in
embrionaria, la receptividad del situ Hybridization, FISH) alterada en Por los motivos anteriores, se
endometrio o el sistema inmunitario espermatozoides o bien con resultados recomienda llevar a cabo el reanálisis
podrían estar también implicados. previos de meiosis alterada (Sanchez- de los núcleos con señales dudosas
Castro et al., 2009; Barri et al., 2005), utilizando sondas distintas a las
FalloS RECuRREntES DE imPlantaCión independientemente de la calidad iniciales. Esta estrategia ha permitido
seminal. disminuir la tasa de error de la FISH
El término “fallos recurrentes de hasta el 4,7%, siempre que se desarrolle
implantación” se asigna a pacientes TéCNICAS UTILIZADAS EN EL PGS el proceso en condiciones óptimas (Colls
que han realizado tres o más ciclos de et al., 2007).
FIV sin éxito o que no han conseguido HibRiDaCión in Situ FluoRESCEntE
el embarazo después de la transferencia De todos modos, la mayor limitación de
de 10 embriones de buena calidad (en En la mayoría de centros donde se la técnica es el número de cromosomas
distintos ciclos de FIV) (ESHRE PGD practica el PGS, la estrategia más que se pueden analizar en un PGS, un
Consortium Steering Commitee, 2002). comúnmente utilizada es la biopsia de máximo de 13 (Abdelhadi et al., 2003),
Del mismo modo que en los abortos de uno o dos blastómeros de los embriones aunque rutinariamente se suelen
repetición, se cree que pueden existir en el día+3 del desarrollo y su posterior estudiar 9 cromosomas (Pujol et al.,
muchos factores causantes del fallo análisis citogenético mediante FISH. 2003). Es decir, entre 11 y 15 de los
implantatorio. La elevada incidencia Esta técnica permite identificar algunos 24 tipos de cromosomas existentes (1-
de aneuploidía es uno de ellos, pero cromosomas predeterminados en el 22, X e Y) quedan sin analizar. Esto es
también lo son una receptividad núcleo interfásico de la célula fijada. debido a la restricción en el número
endometrial disminuida, patologías Consiste en la hibridación de sondas de fluorocromos disponibles y a la
uterinas o incluso una técnica de de DNA específicas (complementarias probabilidad de solapamiento de las
transferencia embrionaria inadecuada a determinadas regiones señales (Wilton, 2005). Por lo tanto,
(Donoso et al., 2007). Se encuentran cromosómicas conocidas) marcadas es necesario hacer varias rondas de
pocos datos publicados, pero existe con fluorocromos de colores distintos. hibridación para poder analizar más
controversia: algunos estudios no Se trata de un procedimiento rápido y de cinco cromosomas (el número de

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Mariona Rius Mas et al. Diagnóstico genético preimplantacional de aneuploidías
12
cromosomas que se puede estudiar en (control y problema), este cromosoma se la situación ideal es evitar este proceso en
una sola ronda), aunque se ha descrito visualiza en la metafase de color amarillo/ el ciclo de FIV con PGS. Con esta finalidad,
que en la tercera ronda se daña ya gran naranja (verde + rojo). En cambio, si la se ha desarrollado hace poco una versión
parte de la cromatina (Liu et al., 1998). intensidad de fluorescencia de la muestra modificada de la CGH convencional, la
Así pues, no es posible examinar todo problema es superior a la de la muestra CGH rápida (Rius et al., 2010, 2011) con
el complemento cromosómico de una control (rojo > verde) el cromosoma la que se obtienen los resultados en poco
célula mediante la FISH. metafásico en cuestión se observará más más de 24 horas, gracias a una reducción
rojo. Por el contrario, si la intensidad de del tiempo de hibridación hasta 12 horas.
éste podría ser el principal motivo fluorescencia de la muestra problema es Esta técnica rinde un éxito de diagnóstico
por el cual la tasa de implantación inferior a la de la muestra control (rojo del 94% (Rius et al., 2010). Al obtener los
de los embriones seleccionados y < verde) el cromosoma metafásico en resultados el día+4, se puede realizar la
transferidos después del PGS es menor cuestión se observará más verde. A partir transferencia “en fresco” de los embriones
que la esperada, como hemos apuntado de los resultados obtenidos, el programa seleccionados en el mismo ciclo de FIV,
anteriormente, del 15% según los informa de las ganancias y pérdidas de evitando la criopreservación y el retraso
datos recopilados por la ESHRE PGD cualquier cromosoma, de modo que se de la transferencia embrionaria.
Consortium (Harper et al., 2010). Y es obtiene un diagnóstico citogenético
por eso que la tendencia actual en el PGS completo de la célula problema. miCRoaRRayS
es pasar a la utilización de técnicas que
permitan estudiar simultáneamente los Así pues, la CGH permite analizar todos Recientemente, la metodología de la
22 cromosomas autosómicos más los los cromosomas y en toda su longitud, CGH convencional se ha adaptado a la
dos sexuales. siendo su límite de resolución de 10-20 tecnología de los microarrays, lo que ha
Mb, por lo que, aparte de las alteraciones originado una nueva variedad de la CGH,
HibRiDaCión GEnómiCa ComPaRaDa que afectan a todo el cromosoma, se el array-CGH (Hu et al., 2004; Le Caignec
pueden detectar también alteraciones et al., 2006; Wells et al., 2008). Con esta
La Hibridación Genómica Comparada parciales de los cromosomas. Además, estrategia, los DNAs problema y control no
(Comparative Genomic Hybridization, la CGH aplicada al análisis de una sola se hibridan sobre metafases de linfocitos
CGH) es una de las técnicas mejor célula tiene una gran ventaja: la célula fijadas en un portaobjetos común, sino
establecidas para el análisis completo analizada se introduce en un tubo de PCR que se utiliza un portaobjetos en el que
del cariotipo humano. Fue descrita por para su lisis y posterior amplificación se han adherido secuencias de DNA que
Kallioniemi et al. en 1992 como método en vez de ser fijada en un portaobjetos. cubren todo el genoma. Por tanto, el
para detectar marcadores cromosómicos El éxito de diagnóstico mediante resultado de la CGH se obtiene evaluando
en el DNA tumoral. Posteriormente, esta técnica es aproximadamente del la fluorescencia hibridada en cada uno
su procedimiento se adaptó para el 94% (Gutierrez-Mateo et al., 2004; de los puntos que contiene el microarray.
análisis de desequilibrios cromosómicos Schoolcraft et al., 2010). Esta tecnología tiene dos ventajas respeto
presentes en células aisladas, previa a la CGH convencional:
amplificación de su DNA (Voullaire et Sin embargo, la CGH también presenta
al., 1999; Wells et al., 1999). limitaciones. Una de ellas es el hecho En primer lugar, la resolución es más
de que no permite detectar cambios de elevada, ya que viene dada por el
El fundamento de la CGH reside en ploidía (triploidías, tetraploidías, etc.) tamaño de las secuencias adheridas en
hibridar de forma competitiva, es ni tampoco permite distinguir entre el portaobjetos. Aun así, los criterios de
decir, con una proporción 1:1, el DNA euploidía y presencia de alteraciones análisis disponibles hasta el momento
de una muestra problema (p.e., un cromosómicas equilibradas (aunque únicamente permiten detectar con
blastómero aislado) y el de una célula éstas no tienen significancia clínica). En seguridad alteraciones que involucren
control (p.e., un fibroblasto euploide) cuanto al procedimiento, esta técnica unas 10 Mb del cromosoma (Hellani et al.,
sobre metafases de linfocitos euploides requiere una gran especialización del 2008; Vanneste et al., 2009). En segundo
(46,XY) fijadas en un portaobjetos. personal que la realiza, tanto para el lugar, la duración del proceso puede llegar
Antes de la hibridación, las muestras procesado de las muestras como para a ser de 16-18 horas y el análisis de los
de DNA se marcan fluorescentemente el análisis de los resultados. En la CGH resultados se hace de forma automatizada,
con dos colores distintos, por ejemplo, convencional el tiempo necesario para por lo que, al igual que con la CGH
en verde el DNA control y en rojo el DNA llevar a cabo todo el proceso es de rápida, se puede hacer la transferencia
problema. Para la interpretación de los aproximadamente cuatro días, ya que la de los embriones seleccionados
resultados es necesario disponer de un hibridación transcurre durante 40-72h; durante el mismo ciclo de FIV.
programa informático con el que capturar lo que implica la criopreservación de Actualmente ya se han llevado a cabo
una docena de imágenes de metafases los embriones biopsiados en el PGD de algunas aplicaciones clínicas del array-
hibridadas por cada célula problema, blastómeros en día+3 y la transferencia CGH (Hellani et al., 2008; Fishel et al.,
realizar su cariotipo y evaluar la ratio entre de los seleccionados en un ciclo adicional 2010) con resultados esperanzadores,
las dos fluorescencias hibridadas en cada posterior. Aunque las técnicas de a la vez que se avanza en la validación
uno de los cromosomas. Si la intensidad vitrificación han incrementado el éxito de de la metodología (Gutierrez-Mateo et
de la fluorescencia para un cromosoma la criopreservación y la supervivencia de los al., 2010) para asegurar la fiabilidad
en concreto es igual en las dos muestras embriones después de la descongelación, del diagnóstico en el PGS. El éxito de

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Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2011 Vol. 16 Nº 1
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diagnóstico mediante array-CGH es del (Bielanska et al., 2002; Wilton, 2005). estudios recomiendan una estrategia
89% (Gutierrez-Mateo et al., 2010). Aunque se cree que este fenómeno podría menos invasiva, biopsiando un solo
tener un predominio en embriones en blastómero, ya que la biopsia de más
Otro sistema desarrollado con microarrays estadio de día+3, se ha observado tanto de una célula puede comprometer la
es el del array-SNPs, que puede ofrecer un en embriones de 6-8 células (Munne et viabilidad del embrión (Goossens et al.,
análisis más completo del DNA problema al., 1994b; Delhanty et al., 1997), como 2008; De Vos et al., 2009).
(Handyside et al., 2009). Esta técnica en blastocistos (Evsikov y Verlinsky,
utiliza un portaobjetos en el que se han 1998; Coonen et al., 2004; Daphnis et Por otro lado, algunos autores argumentan
adherido secuencias de DNA polimórficas, al., 2008). Por el hecho de que la célula que la constitución cromosómica de
SNPs (single nucleotide polymorphisms), diagnosticada puede tener una dotación los blastómeros de embriones en día+3
que se encuentran repartidas por todo el cromosómica distinta a la del resto, el podría no representar correctamente la
genoma. Con los array-SNPs, no sólo se mosaicismo es uno de los principales del embrión que implanta (en estadio
puede determinar el número de copias obstáculos del PGS en embriones. de blastocisto) (Li et al., 2005; Fragouli
de un cromosoma, sino que además se et al., 2008; Barbash-Hazan et al.,
obtiene una “huella dactilar” única del Una de las estrategias que está tomando 2009). En esta línea, se ha postulado
DNA analizado, que identifica el genotipo de nuevo fuerza en el PGS es el análisis del que algunos embriones mosaicos con
de la muestra problema. En este caso, el primer y segundo corpúsculos polares (1CP, células euploides y aneuploides podrían
DNA control y el problema se hibridan 2CP) (Verlinsky et al., 2001; Wells et al., llevar a cabo una autocorrección de las
separadamente en distintas áreas de 2002; Obradors et al., 2008, 2009, Kuliev alteraciones cromosómicas mediante el
SNPs de un mismo portaobjetos y se et al., 2011). Estas dos células tienen una crecimiento preferencial de las células
puede utilizar el mismo fluorocromo para dotación cromosómica complementaria euploides sobre las aneuploides, durante
marcarlos. El número de copias de cada a la del ovocito en estadio de metafase los primeros estadios de la embriogénesis
cromosoma se calcula comparando las II (MII), por lo que con su análisis se y después de la implantación (Li et al.,
intensidades de fluorescencia obtenidas obtiene un diagnóstico indirecto de la 2005; Barbash-Hazan et al., 2009).
para la hibridación control y la hibridación composición cromosómica del ovocito. Contrariamente, otros estudios sugieren
problema. El éxito de diagnóstico El estudio del gameto femenino se que estos embriones podrían acumular
mediante array-SNPs es del 96% (Treff basa en que aproximadamente el 90% más alteraciones cromosómicas causadas
et al., 2010). Esta metodología podría de las aneuploidías encontradas en por errores mitóticos (Munne et al., 2005;
tener un gran potencial de aplicación, los embriones son de origen materno DeUgarte et al., 2008).
pero a día de hoy una de las limitaciones (Nicolaidis y Petersen, 1998). Las
más importantes es la falta de precisión principales ventajas de esta estrategia Independientemente de si existe
en el diagnóstico. Para solucionar son que se analiza una célula que no corrección o acumulación de errores
este problema, es necesario analizar interfiere en el desarrollo embrionario y, cromosómicos, recientemente se
un gran número de SNPs y realizar un tanto con FISH como con CGH, se evita ha promocionado el análisis del
procesamiento estadístico de los datos. la criopreservación. Pero no pueden trofoectodermo de blastocistos como
Además, para poder comprender y valorar detectarse ni los errores cromosómicos de estrategia de PGS, con el fin de obtener el
los resultados es necesario el análisis del origen paterno, ni los errores mitóticos diagnóstico del embrión en el momento
DNA parental, lo que supone un proceso producidos en la etapa poszigótica, que más próximo a la implantación. En este
previo añadido. La complejidad del generan mosaicismo en el embrión. caso, se podrían analizar varias células
sistema hace que de momento su coste utilizando la FISH (McArthur et al., 2005),
sea muy elevado y quede limitado a una Sin embargo, la estrategia más hecho que permitiría una mayor detección
pequeña parte de pacientes. comúnmente utilizada para el PGS en la del mosaicismo. Pero consustancial a la
actualidad es el análisis de blastómeros FISH, reside el problema de la limitación
EStaDio CElulaR y moSaiCiSmo de los embriones en día+3. De hecho, en el número de cromosomas estudiados.
según los datos recopilados por el ESHRE Utilizando la CGH convencional, rápida
Uno de los temas más polémicos en el PGD Consortium (Harper et al., 2010), o el array-CGH, se logra un análisis
campo del PGS, a parte de la técnica en el 83% de los casos de PGS se ha completo del cariotipo, aunque las
utilizada, es el estadio celular en el utilizado la biopsia de blastómero. Esta 5-10 células del trofoectodermo que
cual debe realizarse el diagnóstico. Y la estrategia permite detectar alteraciones se obtienen por biopsia se procesan y
controversia ha surgido, principalmente, cromosómicas de origen tanto paterno analizan conjuntamente (Fragouli et al.,
debido a la existencia de mosaicismo. como materno, así como posibles 2008; Schoolcraft et al., 2010). Por un
El mosaicismo es la presencia de dos o anomalías generadas en las primeras lado, el análisis de varias células juntas
más líneas celulares cromosómicamente divisiones mitóticas del embrión. ofrece un diagnóstico más robusto; por
distintas en un mismo embrión, y es un otro lado, al obtener un resultado que
fenómeno muy común en embriones Para poder detectar el mosaicismo, se representa una media de las distintas
humanos (Munne et al., 1994a; Vanneste ha propuesto realizar la biopsia y el células, tampoco se puede descartar la
et al., 2009). Recopilando varios estudios análisis de dos blastómeros (Baart et al., presencia de mosaicismo. Se ha postulado
de FISH, se ha visto que la proporción de 2006). Aunque se han descrito tasas de que, con este método, sólo se detecta la
embriones que presentan mosaicismo implantación aceptables siguiendo este aneuploidía que realmente podría tener
se encuentra entre el 25% y el 60% método (Van de Velde et al., 2000), otros una repercusión en el desarrollo del

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Mariona Rius Mas et al. Diagnóstico genético preimplantacional de aneuploidías
14
embrión, y que alteraciones presentes en diagnosis of numerical abnormalities for cleavage-stage embryo biopsy in view of
una frecuencia menor a un tercio de las 13 chromosomes. Reprod Biomed Online PGD on human blastocyst implantation: a
células (no detectables mediante CGH) 2003;6:226-231. prospective cohort of single embryo transfers.
no tendrían relevancia clínica (Fragouli et Hum Reprod 2009;24:2988-2996.
al., 2008). Si esta hipótesis se confirma, Baart EB, Martini E, van den Berg I, Macklon NS,
el PGS aplicado al trofoectodermo podría Galjaard RJ, Fauser BC et al. Preimplantation Delhanty JD, Harper JC, Ao A, Handyside AH and
representar una potente herramienta genetic screening reveals a high incidence of Winston RM. Multicolour FISH detects frequent
de selección embrionaria. Aparte, hay aneuploidy and mosaicism in embryos from chromosomal mosaicism and chaotic division
que tomar en consideración que el PGS young women undergoing IVF. Hum Reprod in normal preimplantation embryos from fertile
aplicado a blastocistos no es apropiado 2006;21:223-233. patients. Hum Genet 1997;99:755-760.
para pacientes que producen embriones
con poco potencial de desarrollo in vitro y Barbash-Hazan S, Frumkin T, Malcov M, Yaron DeUgarte CM, Li M, Surrey M, Danzer H,
se requiere la optimización del laboratorio Y, Cohen T, Azem F et al. Preimplantation Hill D and DeCherney AH. Accuracy of FISH
de FIV para cultivar con éxito los aneuploid embryos undergo self-correction analysis in predicting chromosomal status in
embriones hasta el estadio de blastocisto. in correlation with their developmental patients undergoing preimplantation genetic
Otra limitación de esta estrategia es potential. Fertil Steril 2009;92:890-896. diagnosis. Fertil Steril 2008;90:1049-1054.
que requiere la criopreservación de
los embriones biopsiados mientras se Barri PN, Vendrell JM, Martinez F, Coroleu B, Donoso P, Staessen C, Fauser BC and Devroey
obtienen los resultados. Aran B and Veiga A. Influence of spermatogenic P. Current value of preimplantation genetic
profile and meiotic abnormalities on aneuploidy screening in IVF. Hum Reprod
Como hemos visto, el diagnóstico de reproductive outcome of infertile patients. Update 2007;13:15-25.
aneuploidías puede ser beneficioso Reprod Biomed Online 2005;10:735-739.
en casos de edad materna avanzada, ESHRE PGD Consortium Steering Committee
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implantación y casos de factor masculino Flamigni C, Capitanio GL et al. Study of Diagnosis Consortium: data collection III.
severo. Pero se debe tener en cuenta que aneuploidy in normal and abnormal germ cells Hum Reprod 2001;17:233-246.
existen muchos factores que contribuyen from semen of fertile and infertile men. Hum
al éxito del PGS. Aunque tradicionalmente Reprod 1998;13:3406-3413. Evsikov S and Verlinsky Y. Mosaicism in the
se ha utilizado la FISH como método inner cell mass of human blastocysts. Hum
de análisis por su sencillez y rapidez, la Bielanska M, Tan SL and Ao A. Chromosomal Reprod 1998;13:3151-3155.
limitación en el número de cromosomas mosaicism throughout human preimplantation
examinados ha hecho que se desarrollen development in vitro: incidence, type, and Fishel S, Gordon A, Lynch C, Dowell K, Ndukwe
otras estrategias para el estudio de todo relevance to embryo outcome. Hum Reprod G, Kelada E et al. Live birth after polar body
el complemento cromosómico, como la 2002;17:413-419. array comparative genomic hybridization
CGH y su versión rápida, el array-CGH prediction of embryo ploidy-the future of IVF?
o el array-SNPs. Estas técnicas pueden Calogero AE, Burrello N, De Palma A, Barone Fertil Steril 2010;93:1006 e1007-1006 e1010.
aplicarse tanto para el análisis del primer N, D’Agata R and Vicari E. Sperm aneuploidy
y segundo corpúsculos polares, de in infertile men. Reprod Biomed Online Fragouli E, Wells D, Thornhill A, Serhal P, Faed
blastómeros o bien de algunas células del 2003;6:310-317. MJ, Harper JC et al. Comparative genomic
trofoectodermo de los blastocistos. Cada hybridization analysis of human oocytes and
estrategia presenta ventajas y desventajas Colls P, Escudero T, Cekleniak N, Sadowy S, polar bodies. Hum Reprod 2006;21:2319-2328.
respecto a las demás, si bien es verdad que Cohen J and Munne S. Increased efficiency
ninguna de ellas evita el obstáculo del of preimplantation genetic diagnosis for Fragouli E, Lenzi M, Ross R, Katz-Jaffe M,
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estas técnicas contribuyen a aumentar Coonen E, Derhaag JG, Dumoulin JC, van Wissen 2608.
el éxito del PGS, incrementando la LC, Bras M, Janssen M et al. Anaphase lagging
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