Technique Karyolite BoBs : bilan d’un an d’utilisation en routine
pour le diagnostic prénatal direct
Capucine Hyon
Service...
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers pr...
Introduction
1970
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A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers pr...
Introduction
1970
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A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers pr...
Introduction
1970
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A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers pr...
Objectif
 Évaluer l’apport du kit Karyolite BoBs en anténatal pour le
diagnostic rapide des aneuploïdies et des remanieme...
Technique BoBs
 BoBs : BACs on Beads
 Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et
réassociation s...
Technique BoBs
 BoBs : BACs on Beads
 Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et
réassociation s...
Technique BoBs
 BoBs : BACs on Beads
 Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et
réassociation s...
Kit Karyolite
 Étude des régions télomériques et péricentromériques des 23 pairs
 1 bille = 1 région = 3 BACs ≠
=> 1 rég...
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
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TM
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TM
Principe de la technique
P
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Principe de la technique
Principe de la technique
Principe de la technique
Résultats
Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes
LA 737 531 180 0
BT 210 177 23 8
SF 39 0 0 0
Tis...
Résultats
Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes
LA 737 531 180 0
BT 210 177 23 8
SF 39 0 0 0
Tis...
Résultats
Indications FISH directe
Indication BoBs FISH
Demande de FISH spécifique associée :
4p, 5p, 22q
+
Grossesse géme...
Résultats
Indications FISH
FISH spécifique associée 41
4p 16
4p + 5p 2
TBX1 20
SNRPN 1
Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15...
Résultats
Indications FISH
FISH spécifique associée 41
4p 16
4p + 5p 2
TBX1 20
SNRPN 1
Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15...
Résultats
Indications FISH
FISH spécifique associée 41
4p 16
4p + 5p 2
TBX1 20
SNRPN 1
Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15...
Résultats
Résultats BoBs
Normaux 639
Echec 6
Contamination maternelle 1
Aneuploïdies autosomiques 57
Anomalies des gonosom...
Résultats
Résultats BoBs
Normaux 639
Echec 6
Contamination maternelle 1
Aneuploïdies autosomiques 57
Anomalies des gonosom...
Profils obtenus
Trisomie 21
Profils obtenus
Trisomie 13
Profils obtenus
Trisomie 18
Profils obtenus
Anomalies des gonosomes
Anomalies de structure
del(22)(qter)dn
Indication : MSM T2 à 1/39
Anomalies de structure
del(22)(qter)dn
Indication : MSM T2 à 1/39
Anomalies de structure
+der(22)t(11;22)mat
Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
Anomalies de structure
+der(22)t(11;22)mat
Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
Anomalies de structure
+der(12)t(5;12)mat
Indication : profil particulier au 3ème T
Anomalies de structure
+der(12)t(5;12)mat
Indication : profil particulier au 3ème T
Anomalies de structure
dup(18qter)
Indication : SAE au 3ème T
Anomalies de structure
dup(18qter)
Indication : SAE au 3ème T
Der(12)t(12;18)(p13.3;q12.2)
Anomalies de structures
dup(4qter)
Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
Anomalies de structures
dup(4qter)
Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
Faux positif
Faux positif
Faux positif
Faux négatifs
Trisomie X Triploïdie
Faux négatifs
Trisomie X Triploïdie
Faux positif + faux négatif
Faux positif + faux négatif
Discussion
 Technique BoBs permet diagnostic rapide pour tous les prélèvements
 Taux d’échec <1%
 Détection de toutes l...
Discussion
 Pas de technique en urgence
 FISH directe si MAP
 Difficultés d’interprétation de certains profils
 Faux p...
Remerciements
Service de Génétique et
d’Embryologie Médicales
Sylvie Giaccuzo
Sylvie Lucchini
Patricia Diourne
Catherine J...
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Technique Karyolite BoBs : bilan d’un an d’utilisation en routine pour le diagnostic prénatal direct

  1. 1. Technique Karyolite BoBs : bilan d’un an d’utilisation en routine pour le diagnostic prénatal direct Capucine Hyon Service de Génétique et d’Embryologie Médicales Pr. JP Siffroi Mémoire pour l’obtention du Diplôme d’Étude Spécialisé Complémentaire de Cytogénétique Humaine
  2. 2. Introduction 1970 1980 1990 2000 2010 1960 A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
  3. 3. Introduction 1970 1980 1990 2000 2010 1960 A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales
  4. 4. Introduction 1970 1980 1990 2000 2010 1960 A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies
  5. 5. Introduction 1970 1980 1990 2000 2010 1960 A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA
  6. 6. Introduction 1970 1980 1990 2000 2010 1960 A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA Diagnostic rapide aneuploïdies et syndromes microdélétionnels ou grands remaniements
  7. 7. Objectif  Évaluer l’apport du kit Karyolite BoBs en anténatal pour le diagnostic rapide des aneuploïdies et des remaniements chromosomiques de grande taille pendant un an au laboratoire de cytogénétique de l’hôpital Armand Trousseau.
  8. 8. Technique BoBs  BoBs : BACs on Beads  Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN
  9. 9. Technique BoBs  BoBs : BACs on Beads  Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN  BACs fixés sur billes de polystyrène
  10. 10. Technique BoBs  BoBs : BACs on Beads  Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN  BACs fixés sur billes de polystyrène  Coloration des billes avec 2 fluorochromes => Distinction de 100 billes différentes
  11. 11. Kit Karyolite  Étude des régions télomériques et péricentromériques des 23 pairs  1 bille = 1 région = 3 BACs ≠ => 1 région = 1 à 15 Mb
  12. 12. Principe de la technique P TF TM
  13. 13. Principe de la technique P TF TM
  14. 14. Principe de la technique P TF TM
  15. 15. Principe de la technique P TF TM
  16. 16. Principe de la technique P TF TM
  17. 17. Principe de la technique
  18. 18. Principe de la technique
  19. 19. Principe de la technique
  20. 20. Résultats Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes LA 737 531 180 0 BT 210 177 23 8 SF 39 0 0 0 Tissus 11 11 0 0 Total 997 719 203 8 Nombre de prélèvements
  21. 21. Résultats Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes LA 737 531 180 0 BT 210 177 23 8 SF 39 0 0 0 Tissus 11 11 0 0 Total 997 719 203 8 Nombre de prélèvements
  22. 22. Résultats Indications FISH directe Indication BoBs FISH Demande de FISH spécifique associée : 4p, 5p, 22q + Grossesse gémellaire + LA>25 SA Arrivée Lundi - Mardi - Jeudi + Arrivée Mercredi - Vendredi +
  23. 23. Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41 4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1 Convenance personnelle 1 Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32 Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2 BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1 Total 203 Indications FISH directe
  24. 24. Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41 4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1 Convenance personnelle 1 Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32 Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2 BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1 Total 203 Indications FISH directe
  25. 25. Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41 4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1 Convenance personnelle 1 Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32 Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2 BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1 Total 203 Indications FISH directe
  26. 26. Résultats Résultats BoBs Normaux 639 Echec 6 Contamination maternelle 1 Aneuploïdies autosomiques 57 Anomalies des gonosomes 5 Anomalies des autosomes 5 Ségrégation 3:1 t(11;22) 1 Ségrégation 3:1 t(5;12) 1 Duplication 4qter 1 Délétion 22qter 1 Trisomie 18qter 1 Faux positifs 1 Duplication 22qter, XXY Faux négatifs 4 XXX 1 Triploïdie XXX 2 Triploïdie XXY 1 Faux positif et faux négatif 1 Délétion 8p, Duplication 8q Total 719 Dont trisomie 21, 18, 13 et 16 Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y BoBs
  27. 27. Résultats Résultats BoBs Normaux 639 Echec 6 Contamination maternelle 1 Aneuploïdies autosomiques 57 Anomalies des gonosomes 5 Anomalies des autosomes 5 Ségrégation 3:1 t(11;22) 1 Ségrégation 3:1 t(5;12) 1 Duplication 4qter 1 Délétion 22qter 1 Trisomie 18qter 1 Faux positifs 1 Duplication 22qter, XXY Faux négatifs 4 XXX 1 Triploïdie XXX 2 Triploïdie XXY 1 Faux positif et faux négatif 1 Délétion 8p, Duplication 8q Total 719 Dont trisomie 21, 18, 13 et 16 Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y BoBs
  28. 28. Profils obtenus Trisomie 21
  29. 29. Profils obtenus Trisomie 13
  30. 30. Profils obtenus Trisomie 18
  31. 31. Profils obtenus Anomalies des gonosomes
  32. 32. Anomalies de structure del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39
  33. 33. Anomalies de structure del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39
  34. 34. Anomalies de structure +der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
  35. 35. Anomalies de structure +der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
  36. 36. Anomalies de structure +der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T
  37. 37. Anomalies de structure +der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T
  38. 38. Anomalies de structure dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T
  39. 39. Anomalies de structure dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T Der(12)t(12;18)(p13.3;q12.2)
  40. 40. Anomalies de structures dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
  41. 41. Anomalies de structures dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
  42. 42. Faux positif
  43. 43. Faux positif
  44. 44. Faux positif
  45. 45. Faux négatifs Trisomie X Triploïdie
  46. 46. Faux négatifs Trisomie X Triploïdie
  47. 47. Faux positif + faux négatif
  48. 48. Faux positif + faux négatif
  49. 49. Discussion  Technique BoBs permet diagnostic rapide pour tous les prélèvements  Taux d’échec <1%  Détection de toutes les aneuploïdies (y compris T16)  Détection d’anomalies de structure  Principalement sur dépistage 1er ou 2ème T  Diagnostic d’une anomalie non visible au caryotype Avantages
  50. 50. Discussion  Pas de technique en urgence  FISH directe si MAP  Difficultés d’interprétation de certains profils  Faux positifs alors que les critères de qualité sont acceptables  Nouvelles limites du laboratoire  Pas de détection des polyploïdies  Billes 22q proximale ne couvre pas la région DGS  Coût : x3 par rapport à la FISH directe Limites
  51. 51. Remerciements Service de Génétique et d’Embryologie Médicales Sylvie Giaccuzo Sylvie Lucchini Patricia Diourne Catherine Jacquet Dr. Nicole Joyé Pr. Jean-Pierre Siffroi Perkin Elmer Jennifer Perez Alix Joseph Cliniciens Maternité de l’hôpital Trousseau Maternité de l’hôpital Tenon Maternité de la Pitié Salpêtrière Maternité des Bluets Maternité de Villeneuve Saint Georges Maternité du Centre Hospitalier Sud-Francilien

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