1. ! Mise en évidence de la pénétration du Pt dans les
tissus après traitement CHIP de 30 min (signal du 195Pt
en LA-ICPMS 50x plus intense).
Coupe fixée
Carine Arnaudguilhem1, Sandra Mounicou1, Marion Larroque2, David Salazar1, François Quenet2, Florence Boissiere2, Nicole Bec3,
Christian Larroque3, Brice Bouyssiere1
(1) CNRS-UPPA, UMR5254, Laboratoire de Chimie Analytique Bio-inorganique et Environnement, Hélioparc, 2 Av. Président Angot, 64053 Pau
(2) ICM Val d’Aurelle, 208 rue des Apothicaires, 34296 Montpellier
(3) IRCM/INSERM U1194, 208 rue des Apothicaires, 34296 Montpellier
Introduction
Apport de l’imagerie - MS dans l’analyse de métallomédicaments
anticancéreux lors du traitement des cancers péritonéaux par bains CHIP
Influence de la préparation des échantillons.
! Analyse LA ICP MS des plaques immobilisée sur paraffine ⇨"possibilité d’analyser des coupes
antérieures (banque de tumeurs)
! Distribution en Fe, Cu, Zn et Pt possible
! Peu ou pas d’information sur C (contamination de la paraffine)
! Analyse histologique fiable : différenciation des tissus sains des cellules tumorales
! Analyse MALDI impossible due à la présence de paraffine
Coupes congelées
Laser UV 213 nm (UP 213, ESI)
20 Hz, 50% énergie (0,5 J/cm²)
Fluence: 7 J/cm²
vitesse de scan: 120µm/s
Diamètre du faisceau: 100µm
Distance entre les transects:100µm
Gaz vecteur: He à 500 ml/min
Contact : carine.arnaudguilhem@univ-pau.fr
Conditions analytiques:
Workflow
Résultats
Conclusion
Remerciement : Région Aquitaine et Feder pour le support financier des instruments
Les carcinoses péritonéales sont une complication fréquente des cancers d’origine
digestive ou ovarienne et se traduisent par la dissémination dans le péritoine de nombreux
nodules tumoraux, engageant un faible pronostic de survie à 5 ans dans 20% des cas
opérés. Un nouveau traitement, la chimiohyperthermie intrapéritonéale (CHIP), plus
agressive envers les tumeurs, a permis un bénéfice de survie de 6 mois à plus de 5 ans
dans certaines pathologies. Cependant, les mécanismes d’action et de pénétration des
métallomédicaments (généralement oxaliplatine ou cisplatine) dans ce type de traitement
restent peu connus.
La bio-imagerie de tissus tumoraux par laser couplé à la spectrométrie de masse
élémentaire (LA-ICP MS) et moléculaire (MALDI-MS) sont des techniques puissantes et
complémentaires aux études histologiques pour étudier les voies de pénétration et les
mécanismes d’action des sels de platine. Cependant, la préparation des tissus est
primordiale et dépendante du type d’analyse. Dans cette étude, 2 stratégies de préparation
des coupes ont été évaluées : (1) coupes congelées et (2) coupes immobilisées dans la
paraffine, protocole usuel des analyses histologiques.
ICP MS 7700x (Agilent)
Plasma 1550W
Nébulization: 1,13 L/min Ar
Cellule de collision 10ml/min He
Détection 13C –56Fe – 63Cu – 65Cu -
64Zn – 66Zn – 194Pt - 195Pt
Traitement des images par logiciel
développé au laboratoire (sous
Python)
Analyse Histologique
MALDI MS
13C
56Fe63Cu
64Zn
195Pt
Analyse MALDI-MS
Analyse LA-ICP MS
Cellules tumorales
Tissu sain
Analyse Histologique
13C
63Cu 64Zn 56Fe
Tissus tumoral, t = 30 min
Tissus sain, t = 0 min
13C
63Cu 64Zn 56Fe
195Pt
LA-ICP MS
Analyse LA-ICP MS
! Sensibilité insuffisante pour la détection du
Pt en MALDI-MS
Analyse LA-ICP MS
Tissus tumoral, t = 0 min
Analyse Histologique
Cellules tumorales
difficilement identifiables
195Pt
Coupes congelées Coupes fixées
Avantages:
! Complémentarité des analyses en MALDI-MS
(spéciation) et LA-ICP MS (sensibilité de
détection)
Inconvénients:
! Difficulté à identifier les tumeurs en histologie
! Analyse LA-ICP MS possible
⇨" Accès aux banques de tumeurs
disponibles
! Analyse histologique fiable
! Analyse MALDI-MS impossible
! Absence
du profil
isotopique
du Pt
! Présence
du profil
isotopique du
Pt aux m/z
456 et 457.
Analyse MALDI-MS
! Absence du
profil isotopique
du Pt
! LA-ICP MS permet la détection du Pt résiduel des
traitements antérieurs par chimiothérapie.
Analyse Histologique
Cellules tumorales
difficilement identifiables
42°C
Prélèvement de tissus à t= 0 et 30min de bain CHIP
Coupe fixée
Analyse MALDI-MS
Oxaliplatine 460mg/m²
NH2
NH2
O
O
Pt
O
O
Coupe Cryotome 8µm , -20°C
Coupe congelée
Analyse LA-ICP MS Analyse Histologique
CHIP
Séchée au Speedvac
Tissus fixé au fomaldéhyde
et inclus dans paraffine
Coupe Cryotome 8µm , -20°C
Profil isotopique caractéristique du Pt
MALDI ToF ToF 4800 Plus (Apllied Biosystem)
Matrice CHCA déposée par sprayer
Fréquence de tir : 750
Mode reflectron positif
Suivi des masses m/z 456 et 457 caractéristiques
du massif isotopique du complexe Oxaliplatine-
Methione
Coloration à Hematoxylin /eosine