Patologia molecular no câncer de mama
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O documento discute os métodos de patologia molecular utilizados no diagnóstico do câncer de mama, incluindo imuno-histoquímica, FISH, PCR e sequenciamento de DNA. Essas técnicas permitem a classificação molecular dos tumores e a identificação de marcadores-alvo para terapias específicas. A patologista também destaca a importância do controle de qualidade nos exames e da produção científica realizada pelo laboratório Fonte MD.
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- 3. Patologia mamária Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Imuno-histoquímica Hibridização “in situ” Fluorescente - FISH Cromogênica – CISH e SISH Reação em cadeia da polimerase – PCR Sequenciamento gênico / DNA microarray
- 4. Patologia molecular no câncer de mama Patologia cirúrgica Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Exame anatomo- patológico é ATO MÉDICO! macroscopia clivagem processamento inclusão - parafina coloração desparafinização microtomia bloco lâminas microscopia laudo histopatológico Exame Histopatológico
- 5. Patologia molecular Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Formaldeído (formol, formalina) • Fixador coagulativo utilizado rotineiramente - altera a estrutura terciária das proteínas por causar ligações cruzadas estáveis entre proteínas, que podem ser revertidas. A fixação ideal é obtida com solução de formol tamponado a 10% por 24-48 horas. Uma fixação mais prolongada ou com pH muito ácido pode diminuir a imuno-reatividade do material e até causar resultado falso-negativo. A demora em colocar o tecido no formol ou a fixação de fragmentos muito grandes também pode ter o mesmo efeito, além de prejudicar a histopatologia devido à autólise. • Se não for possível o preparo de formol tamponado, utilize pelo menos a solução de formol-salina a 10%: 100 ml formaldeído p.a. (37-40%) 900 ml de solução fisiológica 0,9%
- 6. Patologia molecular Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Imuno-histoquímica Antígeno celular pesquisado= proteína Anticorpo primário Complexo anticorpo secundário + polímero Cromógeno + substrato Carcinoma de mama - IHQ HER2 3+
- 7. Patologia molecular Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Hibridização “in situ” Fluorescente - FISH Cromogênica – CISH e SISH http://mydbio.com http://histotox.fr/media FISHHER2exibindoamplificaçãogênica –relaçãoHER2:CEN17>2.2cópiaspor célula.Examesrealizadosnolaboratório FonteMD. Marcador fluorescente Sonda marcada Anticorpo secundário Anticorpo primário Marcador cromogênico Sonda marcada
- 8. Patologia molecular Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Reação em cadeia da polimerase – PCR http://www.genome.gov/dmd/ http://www.mun.ca/biology/ http://corporatelaw.jdsupra.com/
- 9. Patologia molecular Métodos Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Sequenciamento gênico e microarray de DNA http://www.genome.gov/dmd/
- 10. Patologia molecular no câncer de mama Classificação molecular por Imuno-histoquímica Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Receptores hormonais, HER2/c-erbB-2 e Ki-67 – permitem a CLASSIFICAÇÃO MOLECULAR
- 11. Patologia molecular no câncer de mama Classificação molecular por Imuno-histoquímica Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires
- 12. Patologia molecular no câncer de mama Classificação molecular por Imuno-histoquímica Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Boa resposta com hormonioterapia Pior resposta com hormonioterapia, relacionado a recidiva tumoral Boa resposta com imunoterapia Pior prognóstico, sem alvo terapêutico específico LUMINAL A RE e/ou RP positivo HER2 negativo Ki-67 menor que 14% LUMINAL B RE e/ou RP positivo HER2 positivo Ki-67 maior que 14% HER2 RE negativo HER2 positivo Ki-67 variável BASAL RE e RP negativos HER2 negativo CK basal positiva OU
- 13. Patologia molecular no câncer de mama Classificação molecular por Imuno-histoquímica: HER2 duvidoso= 2+ Andréa Rodrigues Cordovil Pires Patologia molecular no câncer de mama HER2 negativo= 1+ HER2 duvidoso= 2+ HER2 positivo= 3+ Amostra da paciente (histo ou cito) imuno- terapia FISH HER2 negativo FISH HER2 positivo
- 14. Patologia molecular no câncer de mama Hibridização “in situ” fluorescente – FISH para HER2 Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Padrão-ouro: o SISH e o CISH, quando comparados ao FISH possuem possibilidade de resultados falso-negativos em 2 a 5% dos casos Determina número de cópias do gene HER2 e do cromossomo 17 • relação HER2:CEN17 maior que 2.2= amplificação • relação HER2:CEN17 menor ou igual a 2= sem amplificação • relação HER2:CEN17 entre 2 e 2.2= duvidoso Amplificação indica imunoterapia Exame de alto custo: necessidade de microscópio com lâmpadas, filtros, câmera e software específicos; equipamentos e reagentes de alto custo; controle de qualidade internacional
- 15. Patologia molecular no câncer de mama Receptor do Fator de crescimento epidérmico humano - HER2 / c-erbB-2 / Her2-neu Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Tumor: associa-se a proliferação celular, apoptose, adesão, migração e diferenciação Carcinomas HER2+: pior prognóstico e doença mais agressiva Mama: 15-25% amplificação ou superexpressão HER2
- 16. Patologia molecular no câncer de mama Receptor do Fator de crescimento epidérmico humano - HER2 / c-erbB-2 / Her2-neu Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires Tumor: associa-se a proliferação celular, apoptose, adesão, migração e diferenciação Carcinomas HER2+: pior prognóstico e doença mais agressiva Mama: 15-25% amplificação ou superexpressão HER2
- 17. FISH – Hibridização “in situ” fluorescente Técnica • XXX FISH - Hibridização "in situ" fluorescente Andréa Rodrigues Cordovil Pires http://www.dako.com/br/index/knowledgecenter/kc_publications/kc_publications_connection/kc_publications_connection13- 2.htm/28828_2009_conn13_dual_color_cish_and_fish_to_cish_conversion_henriksen_muller_and_schonau.pdf
- 18. Patologia molecular no câncer de mama Hibridização “in situ” fluorescente - FISH para HER2 Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires FISH HER2 exibindo amplificação gênica – relação HER2:CEN17 > 2.2 cópias por célula. Exames realizados no laboratório Fonte MD.
- 19. Patologia molecular no câncer de mama Hibridização “in situ” fluorescente - FISH para HER2 Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires FISH HER2 sem amplificação gênica – relação HER2:CEN17 < 2.2 cópias por célula. Exames realizados no laboratório Fonte MD.
- 20. Patologia molecular no câncer de mama Hibridização “in situ” cromogênica - CISH para HER2 Patologia molecular no câncer de mama Andréa Rodrigues Cordovil Pires http://www.nanoprobes.com/
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