1. Identificación de Staphylococcus aureusy Staphylococcus
coagulasa-negativa en un caso de Otitis Externa en canino
C.Cabrera1, K. Jiménez1, C. Noriega1, X. Olivares1
1
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Pedro de Valdivia, La Serena, Chile.
RESUMEN: La otitis externa es causada
comúnmente por infecciones de la flora bacteriana
normal cuando se sobrepasan las barras de defensa.
A partir de un canino de 10 años con episodios
intermitentes de OE, se realiza una toma de
muestras, siembra, aislamiento para poder identificar
el agente patógeno implicado.
Se realizó tinción de Gram y se aplicaron las
siguientes pruebas bioquímicas: Catalasa, O-F,
Coagulasa,
Voges
Proskauer,
Oxidasa,
Antibiograma. El análisis revela la presencia de
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasanegativa en la muestra.
PALABRAS CLAVE: Staphylococcus aureus,
Staphylococcus coagulasa-negativa, Otitis Externa,
Canino.
ABSTRACT: The External Otitis is commonly caused
by infection of normal bacterial flora when exceed the
defend barrier. From a 10 years dog, with constant
episodes of OE, we take a simple sowing isolation of
pathogen agent involved.
Gram staining was performed and applied the
following biochemical test: Catalase, O-F, Coagulase,
Voges Proskauer, Oxidase, Antibiogram. The
analysis reveals the presence of Staphylococcus
aureus and Coagulase-negative Staphylococcus in
the sampling.
KEY WORDS: Staphylococcus aureus, Coagulasenegative Staphylococcus, Otitis Externa, Canid.
Introducción
La Otitis Externa (OE), comúnmente
conocida como “infección del oído”, es
una condición caracterizada por
inflamación del canal exterior. Las
infecciones de oído representan una de
las principales razones por la que los
perros se presentan al veterinario, y
puede afectar alrededor del 20% de
ellos (Carlotti, 1991 c.p. Lozina, 2010).
Es una de las enfermedades más
comunes que afectan perros de
diferente género, edad y raza. Se ha
observado que los machos son más
susceptibles a la OE que las hembras.
(Lozina et al, 2010).
Al igual que toda la piel, el conducto
auditivo externo tiene una flora
bacteriana normal y permanece libre de
la infección si no se interrumpen sus
defensas. Cuando se produce la
interrupción, esta flora patógena (antes
normal) se desarrolla (Sander, 2001).
Las formas de otitis externa según
Pérez (1995) normalmente son de
origen bacteriano, siendo los gérmenes
patógenos
más
comúnmente
observados
Pseudomonas,
Staphylococcus
y
Proteus.
Sin
embargo, puede encontrarse hongos
como aspergillus
y cándida. Los
factores ambientales como altas
temperaturas y humedad pueden
influenciar la incidencia de OE en
perros (Carlotti, 1991).

2. Lozina en su experiencia en 2010
encontró que los microorganismos más
frecuentes aislados en medios de
cultivo
fueron:
Malassezia
pachydermatis
(54.2%),
Staphylococcus
aureus
(43.8%),
Staphylococcus
coagulasa-negativa
(25.0%), Pseudomonas aeruginosa
(20.8%), Candida albicans (18.8%),
Proteus
mirabilis
(16.7%),
Streptococcus
spp.
(16.7%),
Enteroccocus
faecalis
(12.5%),
Escherichia
coli
(12.5%),
Staphylococcus intermedius (6.3%),
Klebsiella spp. (4.2%), y Candida
glabrata (2.1%).
Aunque la flora microbiana de la
oreja de perros se ha estudiado y
algunos autores intentado correlacionar
los signos de la enfermedad con un
agente etiológico, la identificación en
laboratorio del agente es generalmente
aceptada (Kowalski, 1988 c.p. Silva,
2001).
A partir de un canino de 10 años de
edad
que
presenta
cuadros
intermitentes de OE caracterizada por
eritema y descamación del pabellón
auricular sin exudado y rascado
frecuente de la oreja, se extrajeron
muestras
para
realizar
siembra,
aislamiento e identificación bacteriana.
Material y método
Se realizó la toma de muestras con dos
tórulas estériles desde el pabellón
auricular enrojecido de un can de 10
años (Figura 1) que ha presentado en
el pasado episodios de otitis. Las
tórulas fueron colocadas en Medio de
Transporte AMIES sin/con carbón
activado (para G -) y Cary Blair (G+).
Estos medios semisólidos tienen un ph
regulado y son esencialmente una
mezcla de sustancias tamponadas que
carecen de factores de crecimiento.
Alrededor de 4 hrs más tarde, se realizó
una siembra desde Cary Bair en estría
en Agar Triptona y Soja (TSA), y desde
AMIES en TSA y Agar McConkey
(MCK).
Figura 1: Toma de muestra desde pabellón y
conducto externo de canino
24 hrs más tarde, se evidenció
crecimiento sólo de la siembra
realizada
desde
Cary
Blair,
Presumiendo la presencia de bacterias
gram positivas, se realiza una siembra
por agotamiento en Agar Sangre (AS)
para aislar la bacteria.
Después de 24 hrs de incubación, se
realizó tinción de Gram (Cristal Violeta
1’, Lugol 1’, Alcohol-acetona 5”,
Safranina 30”) desde el medio AS. Se
visualizó la muestra en microscopio,
determinándose la presencia de
Staphylococcus. Luego, de acuerdo a
las instrucciones del Manual de

3. Microbiología de Medicina Veterinaria,
se realizaron las siguientes pruebas
bioquímicas de resultados inmediatos:
Catalasa, Coagulasa; y OF.
24 hrs más tarde, se recopilaron los
resultados de las pruebas realizadas el
dia anterior. Luego, se procedió a la
realización de Antibiograma a través del
Método de Kirby-Bauer, realizándose
para esto una siembra en Müller Hinton
Broth (MHB) con una concentración de
bacterias según estándar 0,5 Mac
Farland. Seguidamente, se realizó un
césped microbiano desde MHB con una
tórula. Luego, se procedió a colocar los
sensidiscos con correspondientes a los
antibióticos Novobiocina (NO5) y
Bacitracina (B10). También se realizó la
prueba de la Ureasa.
Los resultados se recopilaron 24 hrs
más tarde (Tabla 1) y se realizó
resiembra en AS.
72 hrs más tarde, ante la presunción
de
contaminación,
se
realizó
nuevamente siembra por aislamiento en
AS. 24 hrs después, a partir de una
colonia aislada en AS, se realizó tinción
de Gram, prueba de la Ureasa y
Antibiograma con Novobiocina (NO5),
Bacitracina (B10) y Vancomicina
(VA30). Finalmente, se realizó cultivo
en RMVP y 72 hrs después se realizó la
prueba de Voges Proskauer.
Resultados
Después del aislamiento de la
bacteria en medio AS, la observación
de la muestra en microscopio teñida
con Gram reveló bacterias azules de
forma esférica, agrupadas en racimo, y
algunas agrupadas como diplococos
(Figura 2). El crecimiento de éstas en
AS fue en forma de colonias esféricas
que presentaron β-hemolisis, que con el
pasar de los días se hacía más notoria
y se pigmentaba de color amarillo
(Figura 3).
Figura 2: Observación de la muestra con tinción de
Gram al microscopio
En
cuanto
a
las
pruebas
bioquímicas, la se observó la formación
inmediata de burbujas durante la
prueba
de
la
catalasa;
óxidofermentación positiva en tubo abierto
como el sellado con vaselina estéril,
evidenciando la presencia de una
bacteria
anaerobia
facultativa;
Coagulasa negativa; Ureasa positiva
débil (color anaranjado) luego de 24 hrs
de incubación y positivo a las 48 hrs,
(color magenta). El antibiograma arrojó
halos de inhibición de 16 mm (S) y 10
mm (S) de diámetro para Novobiocina y
Bacitracina
respectivamente.
Los
resultados
de
estas
pruebas
bioquímicas se resumen en la “Tabla
1”.

4. Tabla 1: Resultados de Pruebas Bioquímicas n°1
Prueba
Prueba de la
Catalasa
OxidoFermentación de
la Glucosa
Prueba de la
Coagulasa
Ureasa
Figura 3: Observación de hemólisis en medio AS con
48 hrs de incubación
Las segundas pruebas se realizaron
presumiendo la no obtención de un
cultivo aislado: la prueba de la OxidoFermentación arrojó como resultado
negativa para ambos tubos; en la
Coagulasa no se observó formación de
coagulo propiamente tal, sin embargo,
se observó cierta formación extraña;
Ureasa negativa, evidenciada por la
coloración amarilla del tubo. El
Antibiograma arrojó halos de inhibición
de 26 mm (S), 16 mm (S) y 17 mm (S)
de
diámetro
para
Novobiocina,
Bacitracina
y
Vancomicina
respectivamente. Los resultados de
estas pruebas se resumen en la “Tabla
2”.
Antibiograma
Resultado
Catalasa +
ÓxidoFermentación
positiva
Coagulasa 24 hrs: Positivo
débil
48 hrs: Positiva
NO5: 16 mm
B10: 10 mm

5. Tabla 2: Resultados de Pruebas Bioquímicas n°2
Prueba
OxidoFermentación de la
Glucosa
Prueba de la
Coagulasa
Ureasa
Antibiograma
Resultado
ÓxidoFermentación
negativa
Coagulasa 24 hrs: negativa
48 hrs: negativa
NO5: 26 mm
B10: 16 mm
VA30: 17 mm
Discusión
Los cocos gram positivos son un
grupo heterogéneo de bacterias. Las
características que tienen en común
son su forma esférica, su reacción a la
tinción de Gram.
requiere una
disrupción de las
barreras del huésped para penetrar.
El cultivo rara vez produce falsos
negativos en las infecciones por
estafilococos. Ante cualquier caso de
sospecha, se debe incluir
el
antibiograma
para
guiar
el
tratamiento si es necesario. Presenta
colonias de 1 a 3 mm de diámetro,
lisas, levemente elevadas, de bordes
enteros,
levemente
convexas
y
generalmente pigmentadas con un
color crema-amarillo. La producción de
pigmento se ve favorecida si se incuban
los cultivos por 24-48 hrs. adicionales a
temperatura ambiente. S. epidermidis
presenta colonias generalmente de
menor tamaño y estas no presentan
pigmentación.
Si un aislamiento se identifica como
una especie de estafilococo o se
sospecha con firmeza que esa es su
identidad, se realiza una prueba para
determinar la producción de coagulasa
a fin de diferenciar S. aureus de las
otras especies que reciben el nombre
colectivo de estafilococos coagulasanegativa o “no productores de
coagulasa” (Forbes, 2009).
Pottumarthy et. al. (2004) indica que
Staphylococcus intermedius exhibe
propiedades fenotípicas propias de S.
aureus y S. epidermidis, “intermedias”.
Es coagulasa-positivo y presenta βhemolisis. Descartamos la presencia de
este estafilococo dado el resultado de
la prueba de Vogues Proskauer que
sirve para diferenciar S. aureus
(positiva) de S. intermedius y S. hycus
(negativo).
El Staphylococus aureus es uno
de los gérmenes que puede verse
como agente etiológico de la OE. Su
principal
característica
para
identificación es ser coagulasa positivo
y
presentar
β-hemólisis.
Según
Sardiñas y col. (2006), sólo es
infeccioso cuando se encuentran en
gran
número
y
habitualmente
Los papeles desempeñados por los
diferentes microorganismos patógenos
y saprófitos implicados en la otitis
externa son claros (Silva, 2001). Sin
embargo, hay pocos informes acerca
de la importancia de los estafilococos
coagulasa negativos en otitis y lesiones
cutáneas caninas (Acosta et al., 1992
c.p. Silva, 2001).Los estafilococos

6. coagulasa negativos son las bacterias
más comúnmente aisladas en los
laboratorios microbiológicos. Entre ellos
S. epidermidis, que se caracteriza por
ser coagulasa negativo y Novobiocina
sensible. Al ser un comensal habitual
de la piel, la distinción entre infección y
contaminación puede resultar en
ocasiones difícil.
Lilenbaum et al. (2000), c.p.Lozina
(2010) reportan que los Staphylococcus
coagulasa-negativos son las bacterias
aisladas más comunes en exudados de
oído de perros con OE, pero el can en
observación no presentaba tal estadio
avanzado de otitis.
Presumimos
que
el resultado
negativo para la prueba de la
Coagulasa se debe a la contaminación
del cultivo con algún Staphyloccoccus
coagulasa-negativo. Esto se apoya con
el resultado de los Antibiogramas, dado
que S. epidermidis es sensible a la
Novobiocina, en cambio S. aureus
presenta resistencia para ésta, pero es
sensible a la Bacitracina.
Algunos estafilococos son ureasa
positivos, incluidos S. epidermidis
(coagulasa-negativo), S. intermedius y
la mayoría de las cepas de S.
saprophyticus (Winn et. al., 2008).
celulitis, que se limitan a una pequeña
área de la piel. Los estafilococos
coagulasa negativos son un grupo de
microorganismos frecuentes en la piel,
causa de infecciones nosocomiales
sobre todo en recién nacidos de bajo
peso
y
pacientes
inmunocomprometidos.
La causa específica de la otitis
externa puede determinarse por cultivo
de material obtenido del conducto
auditivo afectado; no obstante, debe
tenerse en cuenta que la contaminación
superficial y la flora cutánea normal
pueden originar cultivos mixtos que son
origen de confusión.
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La presencia de S. aureus en
cultivos es común. Pertenece a la flora
nativa del cuerpo y eventualmente
puede causar infecciones en la piel,
como foliculitis, forúnculos, impétigo y
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