ABDUL RAHIM muhammad najhan
2ème année DUT CHIMIE
2012/2013
Maître de stage :
LEMASSON Sylvia
Plan
 Introduction de l’électrophorèse
 Principe de l’électrophorèse
 Gliadines
 Déroulement
 Conclusion
Introduction de l’électrophorèse
 Permettre de connaître la
composition d’un
mélange de blé présente
dans le lot.
 Perme...
Principe de
l’électrophorèse
des gliadines
• Basée sur la
migration
différentielle de
particules
chargées
électriquement.
...
 Après extraction dans
l’éthanol, les gliadines en
milieu acide, chargées
positivement.
 Elles vont migrer vers la
catho...
Pourquoi travaillons nous avec les gliadines ?
 Simple à solubiliser et pas de réarrangement.
 Gluténines : poids moléculaires élevés.
: difficiles à séparer.
: tendan...
Déroulement
 Dans une journée, il y a 40 grains à analyser
 Pour simplifier, il faut organiser la journée.
Le schématique d’une journée
Echantillonnage
•Peser grain par grain.
•Ecraser les et mettre
dans les microtubes.
•Ajouter la solution
chloro-2-éthanol....
Mise en place du matériel
•Homogénéiser les
microtubes au vortex et
centrifuger les.
•En attendant, faire le
support de co...
Polymérisation
 Prélever 70 mL de la
solution acrylmide et y
ajouter 330 mL d’eau
oxygénée.
 Couler les gels entre les 2...
Méchanism de la polymérisation
 Polymérisation d’un monomère acrlyamide + un co
monomère, NN-méthylène bisacrylamide résu...
SO4
2- ACRYLAMIDE BISACRYLAMIDE
Initiation
Propagation
Répétition n fois résulte le gel de polyacrylamide
Terminaison
Le dépôt d’extraits des protéines
L’électrophorèse
•Commencer l’électrophorèse
quand tout sera prêt.
•Appliquer la tension 800 volts
pendant la migration.
•...
La coloration des gels
 Dès que, tous les
protéines sont migrées,
arreter l’électrophorèse.
 Démouler les gels et
dispos...
La lecture de diagramme électrophorétique
 Nous observons 20 bandes
protéiques.
 Il y a 4 zones de migrations
bien disti...
Résultat
Exemple
•Sogby, il a 2 types
•Sogby type 1 = 40,4+
•Sogby type 2 = 40,4-
CONCLUSION
MERCI BEAUCOUP 
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  1. 1. ABDUL RAHIM muhammad najhan 2ème année DUT CHIMIE 2012/2013 Maître de stage : LEMASSON Sylvia
  2. 2. Plan  Introduction de l’électrophorèse  Principe de l’électrophorèse  Gliadines  Déroulement  Conclusion
  3. 3. Introduction de l’électrophorèse  Permettre de connaître la composition d’un mélange de blé présente dans le lot.  Permet de savoir si le profil électrophorétique de ces grains est stable ou pas.
  4. 4. Principe de l’électrophorèse des gliadines • Basée sur la migration différentielle de particules chargées électriquement. •Protéines très chargées et de petites tailles migrent vite, et vice versa.
  5. 5.  Après extraction dans l’éthanol, les gliadines en milieu acide, chargées positivement.  Elles vont migrer vers la cathode (pôle -) de la cuve électrophorétique.
  6. 6. Pourquoi travaillons nous avec les gliadines ?
  7. 7.  Simple à solubiliser et pas de réarrangement.  Gluténines : poids moléculaires élevés. : difficiles à séparer. : tendance à se réarranger entre elles.
  8. 8. Déroulement  Dans une journée, il y a 40 grains à analyser  Pour simplifier, il faut organiser la journée.
  9. 9. Le schématique d’une journée
  10. 10. Echantillonnage •Peser grain par grain. •Ecraser les et mettre dans les microtubes. •Ajouter la solution chloro-2-éthanol. •Laisser en contact au moins une journée.
  11. 11. Mise en place du matériel •Homogénéiser les microtubes au vortex et centrifuger les. •En attendant, faire le support de coulage et préparer les matériaux.
  12. 12. Polymérisation  Prélever 70 mL de la solution acrylmide et y ajouter 330 mL d’eau oxygénée.  Couler les gels entre les 2 plaques rapidement.  Atendre 5 minutes pour la polymérisation.
  13. 13. Méchanism de la polymérisation  Polymérisation d’un monomère acrlyamide + un co monomère, NN-méthylène bisacrylamide résulte le gel de polyacrylamide.  Le gel est polymérisé par réaction en chaine.
  14. 14. SO4 2- ACRYLAMIDE BISACRYLAMIDE
  15. 15. Initiation Propagation
  16. 16. Répétition n fois résulte le gel de polyacrylamide Terminaison
  17. 17. Le dépôt d’extraits des protéines
  18. 18. L’électrophorèse •Commencer l’électrophorèse quand tout sera prêt. •Appliquer la tension 800 volts pendant la migration. •Les protéines sont chargées positivement, donc migrent vers la cathode (-).
  19. 19. La coloration des gels  Dès que, tous les protéines sont migrées, arreter l’électrophorèse.  Démouler les gels et disposer séparément.  Ajouter 250 mL la solution colorante.  Laisser agiter au moins 24 heures avant la lecture.  25 mL solution de bleu coomasie + 95 mL acide trichloroacétique + QSP 500 mL l’eau.  Soit, il y a 2 gels différents à chaque synthèse.
  20. 20. La lecture de diagramme électrophorétique  Nous observons 20 bandes protéiques.  Il y a 4 zones de migrations bien distinctes.  ω-gliadines, γ-gliadines, β- gliadines, et ά-gliadines.  Grâces à ces gliadines, la détermination la variété de blé est possible.
  21. 21. Résultat
  22. 22. Exemple •Sogby, il a 2 types •Sogby type 1 = 40,4+ •Sogby type 2 = 40,4-
  23. 23. CONCLUSION
  24. 24. MERCI BEAUCOUP 

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