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Identificación y medición de laIdentificación y medición de la
respuesta inmunerespuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS
§ SOLUBLE
§ PARTICULADO
§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO
PRECIPITACIÓN
AGLUTINACIÓN
FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO
La prueba a realizar depende de las
características del Ag
Comparación precipitación - aglutinación
Antígeno
SOLUBLE
Antígeno
PARTICULADO
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Formación de “retículo” “Amontonamiento”
Y
YY
Y
PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN
Anticuerpo
PRECIPITACIÓN
Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación
Ag/mg
Precipitación
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y Y
Y Y
Y
Exceso de AC
Proporciones
óptimas
Exceso de Ag
YY
AC ESPECÍFICO
Ag SOLUBLE
MEDIO
PROPORCIÓN
YY
Y
Y
Y
Y
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Y
Y
Y
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Y
Y
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RETÍCULO
SOLUBLE
MEDIO
LÍQUIDO SÓLIDO
• DIFUSIÓN DOBLE
• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
Test de Ascoli - Valente
CARBUNCLO
DIFUSIÓN DOBLE
Fundamento: empleando el medio adecuado (agar
gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible
Inmunodifusión en Gel de Agar
Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE
Test de Coggins para AIE
Placa de Petri
1. Agar gel 1
26
7
5
4
3
2.Sacabocados
3. Suero problema
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(reactivo)
2 4 6 5. Antígeno específico
(reactivo)
7
1
26
7
5
4
3
26
7
4
26
7
4
6.Cámara húmeda
48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
A
C B
A. NEGATIVO
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26
7
4
D
F E
G
I H
APLICACIONES EN VETERINARIA
§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
§ PIROPLASMOSIS EQUINA
§ LEUCOSIS BOVINA
§ BRUCELOSIS OVINA
§ BRUCELOSIS CANINA
AGLUTINACIÓN
Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:
bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.
Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN PASIVA
COAGLUTINACIÓN
HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.
A
G
L
U
T
I
N
A
C
I
Ó
N
Antígeno
particulado
(reactivo)
+
YY
YY Y
Suero problema
Proporción
Medio
Y
Y
Y
YY
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN
En PLACA En TUBO
BrucellaSalmonella Micoplasma
BPA
Brucella
SAT+2-ME PAL
Aglutinación en placa: BPA
1. Suero problema 2. Antígeno específico
(reactivo)
Aglutinoscopio + placa de
vidrio
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado
3. Mezclar
8 MINUTOS
LECTURA E
INTERPRETACIÓN
Con GRUMOS Sin GRUMOS
AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa
Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME
SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Ig M Ig G
2- ME (2- Mercaptoetanol)
Se realizan en
simultáneo
En TUBO: SAT + 2- ME
SUERO
BPA (+)
1. Suero problema
Título
SAT
2-ME
37ºC-48 hs
2. Solución fisiológica fenicada (SFF)
2. Solución 2-ME
3. Antígeno
60 MINUTOS
1/25 1/50 1/100 1/200
LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-48 hs
POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA
Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra
un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata
1. Leche problema
2. Antígeno (reactivo)
37ºC-1 hora
LECTURA e INTERPRETACIÓN
+ ++ +++ ++++
PAL
APLICACIONES EN R. A.
BRUCELOSIS BOVINA
PAL - ELISA IVIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA
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SAT + 2-ME – FPA
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Prueba
v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN
v IN VIVO PROTECCIÓN
PRUEBAS TERCIARIAS
NEUTRALIZACIÓN
Fundamento: estimación de la capacidad de una
anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro
PROTECCIÓN
Fundamento: forma de análisis de neutralización
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específico frente a su antígeno
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  • 1. Identificación y medición de laIdentificación y medición de la respuesta inmunerespuesta inmune PRUEBAS SECUNDARIAS
  • 2. § SOLUBLE § PARTICULADO § SUPERFICIE + COMPLEMENTO PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN FIJACIÓN DE COMPLEMENTO La prueba a realizar depende de las características del Ag
  • 3. Comparación precipitación - aglutinación Antígeno SOLUBLE Antígeno PARTICULADO Y Y Y Y Y Y Formación de “retículo” “Amontonamiento” Y YY Y PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN Anticuerpo
  • 4. PRECIPITACIÓN Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación
  • 5. Ag/mg Precipitación Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Exceso de AC Proporciones óptimas Exceso de Ag YY AC ESPECÍFICO Ag SOLUBLE MEDIO PROPORCIÓN YY Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y RETÍCULO SOLUBLE
  • 6. MEDIO LÍQUIDO SÓLIDO • DIFUSIÓN DOBLE • INMUNOELECTROFORESIS (IEF) • INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) • CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF) Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO
  • 7. DIFUSIÓN DOBLE Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible Inmunodifusión en Gel de Agar Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE
  • 8. Test de Coggins para AIE Placa de Petri 1. Agar gel 1 26 7 5 4 3 2.Sacabocados 3. Suero problema 1 3 5 4. Suero testigo (+) (reactivo) 2 4 6 5. Antígeno específico (reactivo) 7 1 26 7 5 4 3 26 7 4 26 7 4
  • 9. 6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN A C B A. NEGATIVO B. POSITIVO C. Débilmente POSITIVO D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO F. POSITIVO G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA 26 7 4 D F E G I H
  • 10. APLICACIONES EN VETERINARIA § ANEMIA INFECCIOSA EQUINA § PIROPLASMOSIS EQUINA § LEUCOSIS BOVINA § BRUCELOSIS OVINA § BRUCELOSIS CANINA
  • 11. AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.
  • 12. Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos. FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
  • 15. AGLUTINACIÓN En PLACA En TUBO BrucellaSalmonella Micoplasma BPA Brucella SAT+2-ME PAL
  • 16. Aglutinación en placa: BPA 1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo) Aglutinoscopio + placa de vidrio Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado
  • 17. 3. Mezclar 8 MINUTOS LECTURA E INTERPRETACIÓN Con GRUMOS Sin GRUMOS AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa
  • 18. Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME SAT (Seroaglutinación en Tubo) Ig M Ig G 2- ME (2- Mercaptoetanol) Se realizan en simultáneo
  • 19. En TUBO: SAT + 2- ME SUERO BPA (+) 1. Suero problema Título SAT 2-ME 37ºC-48 hs 2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 2. Solución 2-ME 3. Antígeno 60 MINUTOS 1/25 1/50 1/100 1/200
  • 20. LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-48 hs POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA
  • 21. Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata
  • 22. 1. Leche problema 2. Antígeno (reactivo) 37ºC-1 hora LECTURA e INTERPRETACIÓN + ++ +++ ++++ PAL
  • 23. APLICACIONES EN R. A. BRUCELOSIS BOVINA PAL - ELISA IVIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA FCDEFINITORIA SAT + 2-ME – FPA ELISA C COMPLEMENTARIAS BPA – ELISA ITAMIZ Prueba
  • 24. v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN v IN VIVO PROTECCIÓN PRUEBAS TERCIARIAS
  • 25. NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro
  • 26. PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno
  • 27. RESPUESTA INMUNE CELULAR v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS