1. TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE “TRANSFORMACIÓN, PLÁSMIDOS Y ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN”.

3. Purificar el ADN plasmídico con altos rendimientos.

4. Descubrimiento y la purificación de las enzimas de restricción. Con estos tres sencillos procedimientos puede llevarse a cabo la ingeniería genética.

5. Transformación Se ha descrito en muchas especies de bacterias que tienen la capacidad de fijar ADN en forma natural. Sólo un pequeño porcentaje de una población bacteriana tiene ésta capacidad, y se dice que éstas pocas células son competentes.

6. En E. Coli, las células competentes no existen en forma natural, sino que tienen que fabricarse por tratamiento con soluciones de CaCL2 en frío. Después de éste tratamiento, las células se mezclan con el ADN que va a introducirse, se les somete a un ligero choque térmico y se les permite que se recuperen.

7. No se conoce el mecanismo preciso por el cual entra el ADN en la bacteria. El proceso no es muy eficiente, pero puede lograrse una transformación de 10^7 bacterias por organismo de ADN, que es suficiente para los objetivos de la ingeniería genética

8. Plásmidos Son moléculas de ADN que se mantienen en forma autónoma y que se encuentran con frecuencia en bacterias y en algunos eucariontes inferiores.

9. No son esenciales para el crecimiento, pero confieren algunas propiedades poco usuales a las células que los albergan. Los plásmidos se replican independientemente del cromosoma y algunas veces se les describe como ADN extracromosómico. La mayoría de los plásmidos son moléculas circulares de ADN, aunque se han encontrado modelos lineales.

10. Las propiedades que confieren los plásmidos son extremadamente variadas. El primer plásmido que se identificó en E. Coli confiere la habilidad de participar en el intercambio conyugal simple de formación genética

11. Éste plásmido se conoce como factor F (De Fertilidad). El factor F es bastante grande, del orden de 96 000 pares de bases. También es transmisible, es decir, que tiene la capacidad de promover el acto de conjugación o transferirse de una célula bacteriana a otra

12. Otros plásmidos que son similares y que en algunos casos están relacionados con el factor F, son los factores R ( resistencia). Éstos confieren resistencia a los antibióticos y también son transmisibles y provocan graves problemas clínicos.

13. Algunos plásmidos proporcionan propiedades poco usuales a las bacterias huésped por ejemplo los plásmidos TOL permiten que Pseudomonas sp degraden el tolueno y lo utilice como fuente de carbono Fig. Pseudonomassp

14. Todos los plásmidos que se han descrito hasta ahora son grandes, algunos plásmidos como el Rhizobium tiene hasta 300 Kb de longitud y solo existen una o dos copias por cada célula. La purificación de estos plásmidos es difícil y en general los rendimientos son bajos

15. Sin embargo también se conocen muchos tipos de plásmidos pequeños de menos de 0 Kb. Éstos por lo general no son transmisibles y con frecuencia sólo confieren un fenotipo simple a la bacteria huésped. .Existen de 20 a 40 copias por célula y pueden purificarse con facilidad.

16. Uno de los primeros de estos plásmidos que se caracterizó se aisló de E. Coli y se le llamó ColE1 . Produce una proteína llamada colicina E1 que destruye otras cepas de E. Coli. Sin embargo las bacterias que contienen éste plásmidos son resistentes a la colicina E1

17. Integrantes: *Alvarado Muñoz Carlos Enrique *Balam Villarreal Wendy L. *Montero Espinosa Leopoldo *Ortega Morales Claudia Margarita