STABILITAS GLUKOSA

Uji banding Penggunaan Serum Separator
Tube (SST) dan Plus Plastic Tube (PPT)
terhadap Stabilitas Glukosa Serum
(Penelitian Pendahuluan)

Oleh: I Nyoman Wande, dr
Pembimbing:
Dr. Sidarti Soehita SFHS, dr,MS.,SpPK(K)
1

I. Pendahuluan
Latar Belakang
 Pemeriksaan Glukosa merupakan
pemeriksaan yang sering di lakukan.
 Bisa diperiksa pada darah utuh, serum atau
plasma.
 World Health Organization (WHO) 
pemakaian sampel plasma untuk diagnosis
diabetes melitus
2

 Penurunan glukosa serum 5-7%/jam (5-10
mg/dl) jika didiamkan membeku tanpa di
sentrifuse pada suhu kamar.
 Penurunan glukosa serum 2 mg/dl/jam jika
didiamkan pada suhu 4 C.
 Boyanton BL dan Blick: serum/ plasma
yang lama kontak dengan sel pada suhu
kamar  konsentrasi glukosa menurun
cepat sampai jam ke 24.

3

 Serum yang tidak hemolisis dan bebas dari
kontaminasi bakteri  glukosa stabil
sampai 8 jam (suhu kamar) dan 72 jam
(suhu 4 C).
 Leukositosis atau kontaminasi bakteri 
Glikolisis invitro lebih tinggi
 Pemisahan serum dari sel  dilakukan
dalam 30 menit sesudah pengambilan darah.

4

 Di RSU Dr. Soetomo: transpor spesimen
berkisar antara 2-4 jam setelah sampling
dari ruangan.
 Lamanya pemisahan serum dengan sel
setelah di sentrifuse (rata-rata 60 menit).
 Serum yang diperiksa  masuk alat
pemeriksaan akan tertunda ( 1,5 jam
setelah disentrifus).

5

 Serum Separator Tube (SST) terdiri dari:
 Aktivator bekuan
 Gel separator (gel polimer) dengan BJ: 1,04

 SST diperkirakan dapat mengurangi
perubahan metabolik akibat kontak dengan
sel darah.
 Tabung ini belum lazim digunakan di
Laboratorium Klinik.

6

 Plus Plastic Tube (PPT): tabung yang
sering digunakan pada laboratorium
klinik
 Mengandung aktivator pembekuan.
 Masih ada kontak antara sel darah
dengan serum.
 Serum perlu dilakukan pemindahan ke
tabung lain.

7

Rumusan Masalah

 Apakah kadar glukosa serum dalam tabung
SST lebih stabil dibandingkan dalam tabung
PPT?

8

Tujuan Penelitian
 Umum: mengetahui stabilitas glukosa serum
dalam tabung SST dan tabung PPT.
 Khusus.
a. Stabilitas glukosa serum dalam tabung SST
dan PPT pada jam ke-1,2,3, dan ke-4 yang
disentrifus 30 menit setelah pengambilan
darah.
b. Stabilitas glukosa serum pada tabung SST
dan PPT yang disentrifus 3 jam setelah
pengambilan darah.
9

Manfaat Penelitian
 Dapat memberi asupan mengenai stabilitas
glukosa serum dalam SST dan PPT,
sehubungan dengan usaha mengatasi
masalah penurunan kadar glukosa darah
dalam sampel yang mengalami penundaan
pemeriksaan pasca pengambilan darah.

10

II. TINJAUAN PUSTAKA
 Glukosa dan Metabolisme Glukosa
 Glukosa merupakan sumber energi primer
untuk tubuh.
 Glukosa berasal dari asupan karbohidrat dan
konversi glikogen menjadi glukosa oleh hati.
 Hormon yang meningkatkan glukosa
darah:Insulin
 Hormon yang menurunkan glukosa darah:
Glukagon, ACTH, cortisol, epinefrin, dan
tiroksin.

11

 Jenispemeriksaan glukosa darah 
waktu pemeriksaan:
 Glukosa darah puasa (fasting blood
glucose)
 Glukosa darah acak (random blood
glucose)
 Glukosa darah 2 jam setelah makan (2
hour postprandial blood glucose)

12

 Lokasi pengambilan sampel darah:
vena mediana cubiti, kapiler jari tangan.

 Jenis sampel:
Plasma, serum dan whole blood (darah
utuh).

13

 Pengolahan sampel
 Proses sebelum sampel dianalisis
 Plasma/ serum segera dipisahkan sebelum
1 jam (30 menit)
 Jika sampel tidak segera dapat diperiksa 
disimpan pada suhu 4 C.
 Penggunaan sodium fluoride (NaF) sampel
darah dapat mencegah glikolisis dan
bersifat antikoagulan lemah.

14

 Penambahan NaF pada sampel darah 
glukosa bisa stabil selama 3 hari pada suhu
kamar.
 2 mg potasium oxalate (K2C2O4) + 2 mg
NaF per ml darah antiglikolisis dan
antikoagulan.
 NaF  antikoagulan: dosis 3-4 kali lebih
besar.

15

 Whole blood: penuruna glukosa 5-10% (
0,6 mmol/L; 10 mg/dl)
 Glukosa serum yang dipisahkan dari sel
stabil:
suhu kamar (8 jam)
suhu 2-4 C (48 jam)
 Setelah 48 jam sebaiknya serum ditaruh
pada suhu -20 C dalam tabung aliquot.

16

 Cara lain untuk menjaga stabilitas glukosa/
mencegah glikolisis  mencegah kontak
antara serum dengan sel darah.
 Hal ini dapat dilakukan:
Segera memisahkan serum dengan sel darah.
Menggunakan tabung Serum Separator Tube
(SST)

17

 SST mengandung gel separator dan aktivator
pembekuan (partikel silika).
 Tabung plastik (PPT)  hanya mengandung
aktivator pembekuan (micronized silica
particles).
 Kedua tabung terbuat dari PET (polyethylene
terephthalate)

18

Jenis tabung untuk memperoleh serum
No. Jenis tabung Warna tutup Kandungan Kegunaan
tabung

1 Serum Gold Gel Chemistry, serologi
Separator Tube separator, (HIV, hepatitis,
(SST) aktivator antibody testing)
pembekuan
2 Plain Plastic Red Aktivator Hepatitis, HIV, blood
tube = pembekuan drug screens,
Plus Plastic therapeutic drug
Tube (PPT) monitoring

3 Plain Glass Red Tanpa Jika penggunaan SST
Tube (PGT) aditive tidak memungkinkan
atau sering digunakan
untuk blood banking.
19

III. KERANGKA KONSEPTUAL DAN
HIPOTESIS PENELITIAN
Kerangka konseptual
Penggunaan PPT Penggunaan SST

Barier mekanis (-) Barier mekanis (+)

Kontak antara sel darah
Serum terpisah dari
dengan serum seiring
sel darah
dengan lamanya kontak

Konsumsi glukosa
Glikolisis dan pemakaian
oleh sel dihambat
glukosa serum

Penurunan kadar Glukosa serum stabil
glukosa serum
20

Hipotesis Penelitian
1. Terdapat penurunan stabilitas glukosa
pada PPT yang serumnya tidak
dipindahkan  diamati pada jam ke 1,2,3
dan ke 4 setelah disentrifus.
2. Tidak terdapat penurunan stabilitas
glukosa pada SST yang serumnya tidak
dipindahkan diamati pada jam ke 1,2,3
dan ke 4 setelah disentrifus.

21

3. Terdapat penurunan kadar glukosa pada
SST yang disentrifus setelah 3 jam
pengambilan darah.
4. Terdapat penurunan kadar glukosa pada
PPT yang disentrifus setelah 3 jam
pengambilan darah.

22

 Bahan dan alat:
 BD vacutainer®SSTTM dan BD vacutainer®

Plus Plastic Tube (PPT)
 Multi sampling needle dan standart tube holder

 Sentrifus, rak tabung, waterbath

 Photometer 5010 Robert Riele KG

 Reagen Human® Glucose Liquicolor. Catalog
no. 10260.
 Glukosa standar 100 mg/dl. Catalog no. 10123.

 Pipet otomatik 10µl dan 1000 µl beserta tips

 Tabung reaksi ukuran 75x12 mm

23

 Penelitiandilaksanakan di Laboratorium
Patologi Klinik RSU Dr. Soetomo
Surabaya.
 Dilaksanakan selama bulan November
sampai Desember 2006.

24

 Prosedur pengambilan dan pengolahan sampel:
1. Sukarelawan diberikan penjelasan  darah diambil pada
vena mediana cubiti,
2. Darah dimasukkan  2 tabung SST dan 2 tabung PPT 
bolak balik 5x,
3. Biarkan selama 30 menit ( SST1 dan PPT1) dan 3 jam
(SST2 dan PPT2),
4. Disentrifus dengan kecepatan maksimal (1100 RCF) 15
menit,
5. Biarkan serum pada masing-masing tabung,
6. Diperiksa sesuai dengan waktu yang telah ditentukan.

25

Prosedur pemeriksaan glukosa dengan
metode GOD- PAP tanpa deproteinisasi
(Reagen Human®)
10µl serum sampel + 1000µl reagen Glucose
liquicolor
Masukkan kedalam tabung reaksi
Campur dengan menggoyang tabung reaksi,
Inkubasi pada waterbath selama 5 menit (suhu 370C)

Baca absorbance dengan alat photometer 5010
Hasil dalam bentuk print out dengan satuan mg/dl
26

Kerangka alur penelitian
20 sampel darah

SST2 SST1 PPT1 PPT2
(disentrifus 3 (disentrifus 30 (disentrifus 30 (disentrifus 3
jam pasca menit pasca menit pasca jam pasca
pengambilan) pengambilan) pengambilan) pengambilan)

Glukosa 0 Glukosa 0 Glukosa 0 Glukosa 0
jam setelah jam, 1 jam, 2 jam, 1 jam, 2 jam setelah
disentrifus jam, 3 jam jam, 3 jam disentrifus
dan 4 jam dan 4 jam
setelah setelah
disentrifus disentrifus

27

IV. METODE PENELITIAN
 Penelitian observasional longitudinal.
 Populasi  PPDS, karyawan, pasien yang datang
ke Laboratorium PK RSU. Dr. Soetomo.
 Sukarelawan yang mengkonsumsi antikoagulan
dikeluarkan dari penelitian
 Sampel: spesimen darah dari 20 orang yang
bersedia mengikuti penelitian.
 Sampel ditolak Bila:
 Hemolisis.

 Gel tidak dapat memisahkan serum dengan
sel darah (pada tabung SST).
28

 Presisi dan Akurasi pemeriksaan glukosa
dengan alat photometer 5010
 Presisi: memeriksa secara duplikat 20
sampel serum pasien.
 Akurasi: memeriksa secara replikat

assayed sera dari Precinorm U
sebanyak 10 kali.

29

 Analisis data
 Data dianalisis dengan uji normalitas
 tes non parametrik Kolmoskov-
Smirnov (KS)
 Dilanjutkan dengan uji Anova diikuti
LSD (Least Square Different)
 Tingkat kemaknaan  P<0,05

 Dikerjakan dengan SPSS versi 10

30

V. HASIL

 Presisi pemeriksaan glukosa dengan alat fotometer
5010 Robert Riele KG:
Mean: 113 mg/dl; SD= 2,34 mg/dl; CV= 2,07%
 Akurasi pemeriksaan glukosa dengan alat
fotometer 5010 Robert Riele KG :
Range precinorm U : 77,3-104,9 mg/dl
Mean precinorm U : 91,1 mg/dl
Mean hasil Pemeriksaan: 93.9 mg/dl
Inakurasi : 3,07%
 Presisi dan akurasi alat: baik
31

Hasil Penelitian
 Dua sampel darah tidak memenuhi syarat:
 Hemolisis (2 PPT)

 Serum tidak dapat dipisahkan oleh gel (2
SST)
 20 sampel darah diperiksa kadar glukosa
serum:
 SST1 dan PPT1  jam ke-0,1,2,3 dan
jam ke-4
 SST2 dan PPT2  jam ke-0

32

Tabel 3. Distribusi hasil penelitian stabilitas glukosa
pada tabung SST dan tabung PPT
Kelompok N Mean Standar Standart
(mg/dl) deviasi error
(SD)

SST2, jam ke 0 20 80,60 21,93 4,90
SST1, jam ke 0 20 95,70 24,05 5,38
SST1, jam ke 1 20 93,95 23,97 5,36
SST1, jam ke 2 20 93,05 25,22 5,64
SST1, jam ke 3 20 93,70 25,70 5,75
SST1, jam ke 4 20 94,05 24,61 5,50
PPT2, jam ke 0 20 79,60 22,26 4,98
PPT1, jam ke 0 20 94,60 24,25 5,42
PPT1, jam ke 1 20 88,60 24,85 5,56
PPT1, jam ke 2 20 86,25 22,55 5,04
PPT1, jam ke 3 20 83,65 21,90 4,89
PPT1, jam ke 4 20 78,95 20,47 4,58
33

 Ujinormalitas dengan tes non parametrik
KS  semua kelompok tes berdistribusi
normal.
 Kadar glukosa pada SST1: tidak ada
perbedaan bermakna dengan nilai
baseline jam ke-4 pemeriksaan (P>0,05).
 Kadar glukosa pada SST2 menurun
bermakna terhadap SST1 jam ke-0
(P=0,044).

34

 Kadar glukosa pada PPT1 penurunan
yang tidak bermakna:
 Jam ke-1 (P=0,421)
 Jam ke-2 (P=0,263)

 Jam ke 3 (P=0,143)

 Pada jam ke-4 menurun secara bermakna
(P=0,037).
 Kadar glukosa pada PPT2 menurun
bermakna terhadap PPT1 jam ke-0
(P=0,045).

35

 Kadar glukosa pada PPT2 dan SST2 
perbedaan tidak bermakna (P=0,893).
 Kadar glukosa pada PPT1 dan SST1 jam
ke-0  perbedaan tidak bermakna
(P=0,883).

36

Tabel 4. Perbandingan stabilitas glukosa serum
antar kelompok penelitian.
Kelompok A Kelompok B Mean of Difference P
(A-B)
SST1, jam ke 0 SST2, jam ke 0 15,10 0,044
PPT1, jam ke 0 PPT2, jam ke 0 15,00 0,045
PPT2, jam ke 0 SST2, jam ke 0 -1,00 0,893
PPT1, jam ke 0 SST1, jam ke 0 -1,10 0,883
* Mean of Difference bermakna jika P<0,05 37

100

90
Mean of glukosa

80

70

Kelompok pemeriksaan

Grafik 1. Mean plots pemeriksaan glukosa serum
38

VI. PEMBAHASAN
 Masalah umum  tertundanya setrifugasi
sampel pemeriksaan.
 Plasma/ serum lama kontak dengan sel
darah
 Terjadinya konsumsi/glikolisis oleh sel
darah.
 Glukosa dalam serum/plasma 
stabilitasnya menurun.

39

 Serum Separator Tube (SST):
 Gel polimer (berat jenis 1,04),
 Berfungsi sebagai barier mekanis antara
serum dengan sel darah,
 Glikolisis oleh sel darah dihambat.

 Dilapisi dengan partikel silika  berfungsi
sebagai aktivator pembekuan.

40

 Plus Plastic Tube (PPT):
 Sering digunakan di laboratorium

klinik,
 Mengandung aktivator pembekuan,

 Masih ada kontak antara serum dengan
sel darah.

41

 Boyanton BL dan Blick KE, 2002:
 Serum dibiarkan kontak lama dengan sel
darah pada suhu kamar, kadar glukosa
menurun cepat  jam ke-24,
 Kemudian penurunan lebih lambat sampai
jam ke-56.
 Selama 56 jam, total penurunan 3,6
mmol/l (serum) dan 5,6 mmol/l (plasma).
 Lamanya kontak  terjadinya peningkatan
glikolisis oleh sel darah tersebut.

42

Miles RR dkk, 2004:
 Pemisahan komponen serum/plasma dengan
sel sebaiknya dalam waktu 60 menit,
 Stabilitas analit khususnya glukosa dapat
dijaga.
 Kadar glukosa pada plasma lebih rendah
daripada serum,
 Disebabkan adanya perpindahan cairan dari
eritrosit ke cairan plasma yang diakibatkan
oleh antikoagulan.

43

 Graham P dkk, 2003:
 Kadar glukosa  SST stabilitasnya lebih
baik dibandingkan dengan tabung tanpa gel
separator.
 Kadar glukosa stabil selama 3 hari pada SST
yang disimpan pada suhu kamar.
 Plasma separator tube: kadar glukosa stabil
hanya 1 hari.
 Penggunaan tabung dengan gel separator
tidak diperbolehkan disentrifus ulang.

44

 Magee LS, 2005:
 Sentrifus dilakukan segera setelah

darah membeku
 Pemisahan serum maksimal 2 jam
setelah darah diambil
 Glukosa serum stabil:

8 jam (suhu kamar)
48 jam (suhu 2-4 C)

45

 Hasil penelitian ini:
Setrifuse 30 menit setelah pengambilan darah:
 Kadar glukosa pada SST stabil  jam ke-4
pemeriksaan (P>0,05).
 Kadar glukosa pada PPT  penurunan tidak
bermakna sampai jam ke-3 (P>0,05),
 Penurunan bermakna pada jam ke-4
pemeriksaan (P=0,037).

46

Sentrifus 3 jam setelah pengambilan darah:
 Kadar glukosa pada SST maupun PPT
menunjukkan penurunan yang bermakna
terhadap nilai baseline  SST (P=0,044)
dan PPT (P=0,045)
 Semakin lama kontak antara serum

dengan sel darah glikolisis akan
semakin meningkat.

47

KESIMPULAN DAN SARAN
 Kesimpulan:
1. Kadar glukosa pada SST yang disentrifus
setelah 30 menit  stabilitas baik sampai
jam ke-4.
2. Kadar glukosa pada PPT yang disentifus
setelah 30 menit  penurunan tidak
bermakna sampai jam ke-3 dan menurun
bermakna pada jam ke 4 pemeriksaan.

48

3. SST maupun PPT yang disentrifus setelah 3
jam penurunan kadar glukosa yang
bermakna.
4. SST dapat direkomendasikan untuk
mengatasi pemeriksaan glukosa di RSU Dr.
Soetomo  sentrifugasi 30 menit setelah
pengambilan darah.

49

 Saran:
1. Dilakukan penelitian lanjutan stabilitas
glukosa pada SST maupun PPT
disentrifus setelah 1 jam dan 2 jam
pengambilan darah.

50

Faktor yang dapat meningkatkan atau
menurunkan kadar glukosa darah:

a. Peningkatan glukosa darah:
Steroid dan diuretik
Kehamilan
Tindakan pembedahan dan anestesi
Obesitas
Mendapatkan glukosa parenteral
Perokok berat
b. Penurunan Glukosa darah:
Hematokrit >55%
latihan berat
Dosis toksik aspirin dan acetaminofen
obat: etanol, quinine dan haloperidol 52

Tahap pemeriksaan glukosa darah

Ada 3 tahap:
1. Tahap preanalitik
2. Tahap analitik
3. Tahap pasca analitik

53

1. Tahap Pre analitik

Persiapan pasien faktor fisiologik dan
patofisiologik yang mempengaruhi:
makanan keadaan klinis demam
kopi puasa
merokok kerja/ latihan jasmani
alkohol stress mental
obat-obatan ketaatan pasien

54

2. Tahap Analitik
Metode yang digunakan dalam mengukur
konsentrasi glukosa dalam darah:
 Benedict’s (copper reduction)
 Glucose Oxidase (oxigen consumption)
 Glucose oxidase coupled with enzymatic reaction
(“Trinder”)
 Hexokinase coupled with enzymatic reaction
 Glucose dehydrogenase

3. Tahap pasca analitik
mencakup pencatatan dan pelaporan suatu hasil
pemeriksaan laboratorium.
55

Cara memperoleh serum dengan menggunakan
tabung SST

1.Darah dimasukkan kedalam tabung  bolak-
balik tabung 5x
2.Biarkan membeku minimal 30 menit dalam
posisi vertikal
3.Sentrifus pada kecepatan maksimal (antara
1100 dan 1300 RCF) 10 menit (swing
head) atau 15 menit (fixed angle) dengan
tabung balance dalam sentrifus.
4.Transport tabung yang sudah disentrifus ke
laboratorium.

56

Cara memperoleh serum dengan menggunakan
tabung PPT

1.Darah dimasukkan kedalam tabung  bolak-
balik tabung 5x
2.Biarkan membeku minimal 30 menit dalam
posisi vertikal
3.Sentrifuse pada kecepatan maksimal (1000 RCF)
 10 menit (swing head) atau 15 menit (fixed
angle) dengan tabung balance dalam sentrifus.
4.Serum harus segera dipindahkan kedalam tabung
yang lain.

57

Gambar 1. Cara memperoleh serum dengan tabung SST.
58

Disentrifus setelah 3
jam Disentrifus setelah 30 menit
No sampel
SST PPT SST PPT
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
jam jam jam jam jam jam jam jam jam jam
1 83 75 90 90 82 81 85 100 85 77 77 79

2 35 33 71 64 51 58 52 60 60 46 44 49
3 68 66 95 94 94 92 93 99 79 83 82 89
4 54 49 71 72 72 70 72 67 40 56 48 50
5 120 119 165 163 165 164 154 156 148 126 117 81

6 80 85 102 113 104 111 104 105 102 102 104 97

7 109 108 128 115 120 129 129 123 121 120 114 121

8 65 66 82 81 83 82 89 82 80 80 83 80
9 129 125 138 134 136 134 137 142 134 136 133 131

10 65 60 71 68 70 67 68 73 71 70 69 70
11 95 92 102 99 98 98 96 101 94 96 94 92

12 72 70 85 82 83 83 82 81 78 75 74 68
13 78 76 81 81 80 81 80 81 78 73 75 68
14 81 81 90 89 94 87 89 90 88 83 79 77
15 74 78 84 81 82 82 82 88 85 79 72 65
16 61 61 71 66 68 67 66 63 60 63 62 56
17 84 93 94 91 89 86 98 88 86 88 84 83
18 94 94 105 104 106 112 110 104 100 101 96 94

19 89 87 98 102 95 96 105 95 93 91 89 77

20 76 74 91 90 89 94 90 94 90 80 77 5976

STABILITAS GLUKOSA

Recommandé

Recommandé

Contenu connexe

Tendances

Tendances (20)

Similaire à STABILITAS GLUKOSA

Similaire à STABILITAS GLUKOSA (20)

Plus de andreei

Plus de andreei (20)

STABILITAS GLUKOSA