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 Du gène à la protéine Histidine Rich Protein II (HRP-II) Expression Séquence Plasmodium Lactate Deshydrogenase (pLDH...
Gène: Un gène est une séquence d‘Acide DésoxyriboNucléique(ADN) qui spécifie la synthèse dune chaîne de polypeptideADN ARN...
 Utilisation fréquente de HRP-II et pLDH en Test de DiagnosticRapide (TDR) du paludisme:Immunocapture des antigènes circu...
 Expression (Howard J. 1986, Mayxay M. 2001) :Spécifique de Plasmodium falciparumProtéine abondanteExpression à tous les ...
 Expression (Makler M.T. et al. 1998, Berwal R. et al. 2008):Pan- spécifiqueEnzyme abondanteDemi-vie courte (2,5 jours en...
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 Evidence 1: Baker J. et al. 2005Collecte de 75 échantillons provenant de 19 pays.Extraction, amplification et génotypage...
 Evidence 2: Lee N. et al. 200646 échantillons provenant de 4 pays,8 souches de P. falciparumEvaluation de 4 anticorpsmon...
F1:Séquence de réference FCCI/HNF:Seuence des isolats P. falciparumM:Sequence des isolats de P. .malariaeO1:Séquence des i...
Polymorphisme HRP-II: faux-négatifs Criblage des régions conservées, épitopes universellement connus,synthèse d’anticorps...
 pLDH très conservée et élimination rapideCouplage avec HRP-II pour une meilleure sensibilité Développement d’une nouvel...
 Il en ressort que le polymorphisme est l’un des facteurscontribuant à la sensibilité des test, il est donc nécessaire de...
 Baker J. et al. Genetic diversity of P. falciparum Histidine Rich Protein –II(PfHRP-II) and its effect on the performanc...
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Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium

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Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium - Présentation de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Ravaoarisoa Elisabeth et Tabue Ngomdjum Raymond

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Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium

  1. 1. Raymond TABUEEntomologiste MédicalPNLP CamerounElisabeth RAVAOARISOAInstitut Pasteur de Madagascar27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009EVALUATIONpar les FACILITATEURS
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  4. 4.  Du gène à la protéine Histidine Rich Protein II (HRP-II) Expression Séquence Plasmodium Lactate Deshydrogenase (pLDH) Expression Séquence Polymorphisme intra-spécifique de HRP-II Polymorphisme inter-spécifique de pLDH ConclusionMots clés: Gène, polymorphisme, HRP-II, pLDH, diagnostic, espèce27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  5. 5. Gène: Un gène est une séquence d‘Acide DésoxyriboNucléique(ADN) qui spécifie la synthèse dune chaîne de polypeptideADN ARNm ProtéineTranscription TraductionInactivation de laprotéineAugmentation del’efficacité de laprotéineADNMutation(Insertion,Délétion,Substitution)Phase de lecture respectéeDécalage de phase de lectureMutation silencieuse Mutation non silencieuse27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  6. 6.  Utilisation fréquente de HRP-II et pLDH en Test de DiagnosticRapide (TDR) du paludisme:Immunocapture des antigènes circulantsSystème anticorps capture- révélation TDR d’une grande utilité dans la prise en charge du paludismedans les zones rurales sans microscopie. Polymorphisme des antigènes cibles affecte la sensibilité des tests?27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  7. 7.  Expression (Howard J. 1986, Mayxay M. 2001) :Spécifique de Plasmodium falciparumProtéine abondanteExpression à tous les stades asexuésDemi-vie élevée (environ 10 jours) Séquence (N° accession Swiss-Prot: sp|P05227|HRP1_PLAFA ):Poids moléculaire 72 Kda35% Histidine, 40% Alanine et 12% Aspartate27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  8. 8.  Expression (Makler M.T. et al. 1998, Berwal R. et al. 2008):Pan- spécifiqueEnzyme abondanteDemi-vie courte (2,5 jours environ) SéquenceLDH présent chez l’hommepLDH diffère de la LDH humaine: épitope unique, utilisationcofacteur APAD (Pyridine Adénine Dinucléotide)296-310 acides aminés selon l’espèce plasmodialeRégion C-terminale très conservée.N d’accession Swiss-ProtQ76NM3|Q76NM3_PLAF7 P. falciparumQ6JH30|Q6JH30_PLAVI P. vivaxQ6JH31|Q6JH31_PLAMA P. malariaeQ6JH32|Q6JH32_9APIC P. ovale27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  9. 9. 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  10. 10.  Evidence 1: Baker J. et al. 2005Collecte de 75 échantillons provenant de 19 pays.Extraction, amplification et génotypage, évaluation du nombre 14 séquences répétitivesde Pf HRP-IIEtude comparative avec les TDR actuelsLe nombre des répétitions affecte la sensibilité des tests basés avecHRP-IIDiversité génétique varie d’une région à une autre27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  11. 11.  Evidence 2: Lee N. et al. 200646 échantillons provenant de 4 pays,8 souches de P. falciparumEvaluation de 4 anticorpsmonoclonauxExtraction d’antigène des isolats(analyse par Dot et Western blot,épitope mapping par ELISA)Substitution au niveau des épitopes, diminution de la reconnaissancedes anticorpsLa fréquence des épitopes diffère d’un pays à un autre27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  12. 12. F1:Séquence de réference FCCI/HNF:Seuence des isolats P. falciparumM:Sequence des isolats de P. .malariaeO1:Séquence des isolats de P. ovaleO2 et O3: Séquences des isolats de P. ovaleV: Séquence de la souche de référence de P. vivaxY: Séquence de la souche de référence de P. bergheiC: Séquence de la souche de référence de P. chabaudiCollection des 8 espècesplasmodiales de part le mondeExtraction, amplification, Nested-PCR et génotypageVariabilité intra-spécifique n’affecte pas l’efficacité des TDR pan-spécifiques Evidence: Talman A. et al. 200727/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  13. 13. Polymorphisme HRP-II: faux-négatifs Criblage des régions conservées, épitopes universellement connus,synthèse d’anticorps monoclonaux spécifiques à ces épitopes Ou utilisation d’anticorps monoclonaux qui ne sont pas affectéspar la variation génétique Combinaison des anticorps reconnaissant différents épitopes27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  14. 14.  pLDH très conservée et élimination rapideCouplage avec HRP-II pour une meilleure sensibilité Développement d’une nouvelle génération de TDR basé surpLDH spécifique de P. vivax couplé avec pLDH spécifique de P.falciparumFiabilité du diagnostic différentiel?Epitope(s) cible(s)?Zone géographique cible?27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  15. 15.  Il en ressort que le polymorphisme est l’un des facteurscontribuant à la sensibilité des test, il est donc nécessaire de:- Développer des tests de TDR sensibles à toutes les régions- Améliorer la bonne stabilité des TDR à la température- Améliorer les bonnes pratiques de laboratoire Avec le programme de lutte visant l’élimination du paludisme (P.falciparum), il convient de:- Développer des tests différentiels de P. vivax (meilleureprise en charge, limitation des résistances et diminution du risquede recrudescence à P. vivax )27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  16. 16.  Baker J. et al. Genetic diversity of P. falciparum Histidine Rich Protein –II(PfHRP-II) and its effect on the performance of PfHRP-II based RapidDiagnostic Test. The Journal of infectious diseases 2005,192: 870-877. Berwal R. et al. Plasmodium falciparum: Enchanced soluble expression,purification and biochemical characterization of lactate dehydrogenase.Experimental Parasitology 2008, 120: 135-141. Howard J.R. et al. Secretion of a Malarial Histidine Rich Protein (PfHRP-II)from P. falciparum infected erythrocytes. The Journal of Cell Biology 1986, 103: 1269-1277. Makler M.T. et al. Lactate dehydrogenase and the diagnosis of malaria.Parasitology Today 1998, 14: 376-377. Mayxay M. et al. Persistence of Plasmodium falciparum HRP-2 in successfullytreated acute falciparum malaria Transactions of The Royal Society Of Tropical MedicineAnd Hygiene 2001, 9 5: 179-182. Lee N. et al. Effect of sequence variation in P. falciparum Histidine Rich ProteinII on binding of specific monoclonal antibodies: implication of Rapid DiagnosticTests for Malaria. Journal of Clinical Microbiology 2006, 2773-2778. Talman A.M. et al. Evaluation of the intra-and inter-specific genetic variabilityof Plasmodium Lactate déhydrogenase. Malaria Journal 2007, 6: 140-146.27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009
  17. 17. 27/03/2009Atelier paludisme 7è édition 2009

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