Diagnostic biologique du paludismeparMarie-Ange Rason, MD7ème édition du cours international “Atelier Paludisme”25 Mars 20...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCycle biologique de Plasmodium sp
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Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter• Diagnostic microscopique (frottis mince et goutte épaisse)• Bandelette réactive• Bi...
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Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDiagnostic Biologique du paludismeLes étapes1- Prélèvement du malade2- Préparation et...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterConfection de la goutte épaissePiqûre au bout du doigt (avec une lancette stérile, à ...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter Confection de l’étalement sanguin :frottis mincePiqûre au bout du doigt (avec une la...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterMéthodes de coloration Coloration de May Grunwald-Giemsa Coloration de Giemsa Colo...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium sp infectant l’hommeP. falciparumP. malariae P. ovaleP. vivax
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium knowlesi(www.cdc.gov/eid) False-colour electron micrograph of a rhesus red...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIdentification des espèces plasmodialessur un frottis mince Aspect de l’hématie para...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIdentification des espèces plasmodialessur un frottis mince
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterExamen defrottis minceExamen degoutte épaissePlasmodium falciparum
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium vivaxExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium ovaleExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium malariaeExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCalcul de la densité parasitaireSur la goutte épaisse 8000 globules blancs (leucocyt...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCalcul de la densité parasitaireSur le frottis mince: Compter le nombre d’hématies p...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterAutres méthodes de diagnosticBiologique du Paludisme
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDétection des antigènes de plasmodies par immuno-chromatographique migration d’un pr...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterTest de Diagnostic Rapide: illustration(http://www.diamedchina.com)
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPolymerase Chain Reaction (PCR)• Amplification d’un segment de l’ADN par la réactione...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPolymerase Chain Reaction (PCR)PCR Classique- Préparation du mix- Amplification du mi...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIllustration : résultat de diagnosticd’espèce par PCR classiqueM 1 2 3 4 5100pb200pbL...
Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter Illustration d’un diagnostic d’espèce parRT-PCRCourbed’amplification Températuredefu...
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Rason marie ange

  1. 1. Diagnostic biologique du paludismeparMarie-Ange Rason, MD7ème édition du cours international “Atelier Paludisme”25 Mars 2009 – Institut Pasteur de Madagascar
  2. 2. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCycle biologique de Plasmodium sp
  3. 3. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCycle biologique de Plasmodium sp
  4. 4. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter• Diagnostic microscopique (frottis mince et goutte épaisse)• Bandelette réactive• Biologie moléculaire (en milieu de recherche principalement)• Quantitative Buffy Coat malaria-test ou QBC testPrincipaux moyens de diagnosticbiologique du paludisme
  5. 5. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDiagnostic Biologique duPaludisme par Microscopie
  6. 6. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDiagnostic microscopique : technique deréférence• frottis mince et goutte épaisse• diagnostic d’urgence• objectivant un parasite (forme asexuée / forme sexuée)– identifier l’espèce plasmodiale– évaluer la parasitémie
  7. 7. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDiagnostic Biologique du paludismeLes étapes1- Prélèvement du malade2- Préparation et coloration des frottis sanguins3- Examen microscopique des frottis sanguins à la recherchedes plasmodies– négatif : confirmation– Positif : suivre l’étapes suivantes4- Identification d’espèces de Plasmodium5- Estimation de la densité parasitaire
  8. 8. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterConfection de la goutte épaissePiqûre au bout du doigt (avec une lancette stérile, à usage unique)Confection d’une goutte épaisse
  9. 9. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter Confection de l’étalement sanguin :frottis mincePiqûre au bout du doigt (avec une lancette stérile, à usage unique)Confection d’un frottis minceOUINON123
  10. 10. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterMéthodes de coloration Coloration de May Grunwald-Giemsa Coloration de Giemsa Coloration rapide ou panoptique(kit commercial type Kit Ral® ou Dade®)
  11. 11. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium sp infectant l’hommeP. falciparumP. malariae P. ovaleP. vivax
  12. 12. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium knowlesi(www.cdc.gov/eid) False-colour electron micrograph of a rhesus red bloodcell infected with a mature segmented schizont-stage P.knowlesi malaria parasite, which is about to release itsinvasive merozoite stages.A thin blood smear stained with Giesma from afatal human case of P. knowlesi malaria
  13. 13. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIdentification des espèces plasmodialessur un frottis mince Aspect de l’hématie parasitée(taille de l’hématie parasitée) Aspect du parasite(noyau et cytoplasme) Aspect du cytoplasme de l’hématie parasitée(tâches, granulations)
  14. 14. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIdentification des espèces plasmodialessur un frottis mince
  15. 15. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterExamen defrottis minceExamen degoutte épaissePlasmodium falciparum
  16. 16. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium vivaxExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
  17. 17. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium ovaleExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
  18. 18. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPlasmodium malariaeExamen defrottis minceExamen degoutte épaisse
  19. 19. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCalcul de la densité parasitaireSur la goutte épaisse 8000 globules blancs (leucocytes) par µl de sang Compter les parasites (forme asexuée) pour 500 leucocytesNb parasites relevés X 8000Nb de leucocytes comptésNb parasites/µl de sang =
  20. 20. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterCalcul de la densité parasitaireSur le frottis mince: Compter le nombre d’hématies parasitées dans 100 champsde bonne qualité sans chevauchement des hématies, sansespace libre entre les hématies, au niveau de la queue dufrottis Estimer le % d’hématies parasitées Ramener la densité par µl de sang si nécessaire (Supposeravoir 5 000 000 d’hématies par µl de sang)
  21. 21. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterAutres méthodes de diagnosticBiologique du Paludisme
  22. 22. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterDétection des antigènes de plasmodies par immuno-chromatographique migration d’un prélèvement de sang sur une membrane Antigènes capturés par des anticorps monoclonaux fixéssur la membrane révélation par de nouveaux anticorps monoclonauxcouplés à un particule colorée révélatrice.Bandelette réactive
  23. 23. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterTest de Diagnostic Rapide: illustration(http://www.diamedchina.com)
  24. 24. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPolymerase Chain Reaction (PCR)• Amplification d’un segment de l’ADN par la réactionenzymatique répétée (PCR endpoint ou PCR en temps réel)Avec besoin en :• Équipement (thermocycleur …)• Personnel formé• …
  25. 25. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterPolymerase Chain Reaction (PCR)PCR Classique- Préparation du mix- Amplification du mix- Migration sur gel agarose- Prise en photos du gel- Interprétation des résultatssuivant la taille des bandesattenduesPCR en temps réel(RT-PCR)- Sonde fluorescente- Quantification et caractérisationde l’amplicon formé à chaquecycle- Préparation du mix- Amplification- Interprétation des résultatssuivant la température de fusion(http://www.ens-lyon.fr/RELIE/PCR/principe/principe.htm)Mangold K. et all,2005. Real time PCR for Detection and Identification ofPlasmodium spp. J. Clin. Microbiol, 5: 2435-2440.
  26. 26. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiterIllustration : résultat de diagnosticd’espèce par PCR classiqueM 1 2 3 4 5100pb200pbLégendes: M: marqueur moléculaire, 1: témoin négatif ; 2 et 4: P. falciparum(176 pb); 3 et 5: P. vivax (120 pb); 5: P. malariae (145 pb); pour P.ovale(780pb) non figuré.
  27. 27. Paludisme:diagnostiqueravantdetraiter Illustration d’un diagnostic d’espèce parRT-PCRCourbed’amplification Températuredefusion(°C) ContrôlespositifsPrésente 74,8+/-0,1 P.falciparumPrésente 73,2+/-0,2 PmalariaePrésente 76,5+/-0,1 P.ovalePrésente 77,7+/-0,2 P.vivax
  28. 28. Diagnostic biologique du paludismeparMarie-Ange Rason, MD7ème édition du cours international “Atelier Paludisme”25 Mars 2009 – Institut Pasteur de Madagascar

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