1. Ministério da Educação
Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Campus de Curitiba
Gerência de Ensino e Pesquisa
Departamento Acadêmico de Química e Biologia
Prática no
02 _
Cromatografia em Papel (CP) e Cromatografia em Camada Fina (TLC)
Disciplina: Síntese Orgânica 1 Prof. Dr. Paulo Roberto de Oliveira
Materiais e Reagentes
- 1 Lápis (Aluno e MP)
- 1 Régua (Aluno e MP)
- 1 caneta azul, preta, vermelha,
verde, roxa, marrom. (Aluno e MP)
- 1 Rolo de Fita Adesiva. (MP)
- 1 Espátula (MP)
- 1 Proveta de 25 mL
- 1 Proveta de 100 mL
- 1 Cuba Cromatográfica de 500 mL
- 2 Bequer de 100 mL
- 1 Faca (MP)
- Folhas de Papel Sulfite (MP)
- 1 placa de petri de 5 cm
- 1 placa de petri de 10 cm
- 1 Rolo de Papel Alumínio (MP)
- Papel filtro (MP)
- 1 Funil Simples
- 1 Tesoura (Aluno e MP)
- 1 Balança Semi-Analítica (MP)
- 1 Almofariz com Pistilo Grande
- 3 Erlenmeyers de 125 mL
- 1 Funil de Separação de 125 mL
- 1 Suporte Universal
- 1 Argola para Funil de Separação
- 400 mL de hexano (MP)
- 500 mL de Etanol 92% (MP)
- 200 mL de Acetona
- 50g de Sulfato de Sódio Anidro(MP)
- 10g de Iodo (I2) (MP)
- 1 Dessecador (MP)
- 4 Chapas de Aquecimento (Capela)
- 4 Barras Magnética (Peixinho)
- Capilares (MP)
- Placas cromatográficas (MP)
- 1 Bastão de Vidro
- 1 Pinça Metálica (MP)
1 – Objetivos
Estudar o comportamento de substâncias orgânicas em termos da partição cromatográfica -
estrutura química versus fenômeno adsorção cromatográfica.
Utilizar o Rf na identificação de compostos orgânicos usualmente presentes em diversas
formulações farmacêuticas.
Verificar as cores que compõem as tintas de caneta e os pigmentos que compõem os
pimentões verdes, amarelos e vermelhos.
2 – Introdução
Entre os métodos modernos de análise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque
devido a sua facilidade em efetuar a separação, identificação e quantificação das espécies
químicas, por si mesma ou em conjunto com outras técnicas instrumentais de análise, como, por
exemplo, a espectrofotometria ou a espectrometria de massas.
A cromatografia (grego "chrom"=cor e "graphe"=escrever) é um método físico-químico de
separação dos componentes de uma mistura, realizada através da distribuição destes
componentes entre duas fases, que estão em contacto íntimo. Uma das fases permanece
estacionária enquanto que a outra se move através dela. A cromatografia em camada delgada
(CCD) consiste na separação dos componentes de uma mistura através da migração diferencial
sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfície plana. O processo de
separação está fundamentado, principalmente no fenômeno de adsorção.
O grande desenvolvimento desta técnica é consequência natural das múltiplas vantagens
que ela oferece, tais como: fácil compreensão e execução, separações em breve espaço de
tempo, versatilidade, grande reprodutibilidade e baixo custo.
Na CCD uma fina camada de adsorvente é espalhada sobre uma placa (em geral de vidro,
mas outros materiais podem ser usados). Na extremidade desta placa recoberta pelo adsorvente e
seca, chamada cromatoplaca, a amostra é aplicada repetidas vezes com o auxílio de um capilar,
obtendo-se pequenas manchas.
Os principais fenômenos que governam a separação cromatográfica são adsorção e
absorção (partição). A adsorção ocorre com fase estacionária (FE) sólida, geralmente sílicagel
(SiO2
.xH2
O) ou alumina (Al2
O3
). O grau de adsorção depende da quantidade de água presente na

2. fase sólida (esta será mais reativa quanto menos água estiver presente), da estrutura do composto
(presença de grupos funcionais polares, capacidade de formar ligações hidrogênio, etc.), da
adsorção do solvente ao ocupar os sítios ativos da fase sólida e da força atrativa entre o soluto e o
solvente (Figura 1).
N
Al2O3
HH
R
O Al
O
O H O
R
C
R
R
O
O Al
C
O
OR HOAl
δδ
δ δ
Figura 1. Algumas formas de visualizar as interações entre a alumina e os componentes orgânicos
de uma amostra. Estruturas similares podem ser escritas para a sílicagel.
A partição ocorre com FE líquidas (que são imobilizadas sobre suportes sólidos). Os
componentes da mistura adsorvem-se com as partículas de sólido devido à interação de diversas
forças intermoleculares. O composto terá uma maior ou menor adsorção, dependendo das forças
de interação, que variam na seguinte ordem: formação de sais > coordenação > ligações de
hidrogênio > dipolo-dipolo > Van der Waals. O processo de absorção (interfacial) é governado pela
partição e ocorre devido a diferença de solubilidade dos componentes na FE líquida.
Dependendo da natureza das duas fases envolvidas (estacionária e móvel) têm-se diversos
tipos de cromatografia:
- sólido-líquido (CC, TLC);
- líquido-líquido (HPLC, CP);
- gás-líquido (CG).
Na cromatografia em papel (CP), a fase estacionária é o papel colocado em um frasco. A
fase móvel é o eluente que sobe pelo papel carregando as substâncias que compõem as misturas
(no experimento, as substâncias que compõem as tintas das canetas). As diferentes substâncias
sobem com velocidades diferentes, porque interagem de forma diferente com o eluente e com o
papel. As substâncias que têm mais afinidade pelo eluente sobem mais rápidamente, enquanto as
que têm grande afinidade pelo papel são arrastadas mais lentamente pelo eluente. Dessa forma,
ocorre a separação, sendo possível visualizar os diferentes componentes de cada tinta. A
cromatografia em papel (CP) é uma técnica de partição líquido-líquido, estando um deles fixado a
um suporte sólido. Este método, embora menos eficiente que a cromatografia em camada delgada
(CCD), é muito útil para a separação de compostos polares.
Na Cromatografia em Camada Fina (TLC) uma pequena quantidade de uma amostra
orgânica é colocada em um ponto da placa, sendo adsorvida pela fase sólida (Figura 2a). A placa
cromatográfica é colocada em uma câmara fechada contendo um eluente que percorre a fase fixa
em movimento ascendente por ação capilar, carregando consigo a amostra orgânica (Figura 2b). A
visualização dos componentes da mistura pode ser feita a olho nu (se os componentes forem
coloridos) através de luz ultravioleta, por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas
radiações (cuidado!) e por vapores de iodo, em recipiente fechado (Figura 2c).
Figura 2. (a) Aplicação da amostra na cromatoplaca (b) Eluição de uma placa cromatográfica; (c) Revelação
de uma placa cromatográfica em cuba de iodo
Este procedimento é especialmente útil no caso de compostos que são sensíveis ao calor
ou não são voláteis, ou seja, no caso de compostos que não são apropriados à determinação de

3. ponto de ebulição ou à cromatografia em fase gasosa. A distância percorrida por cada composto
em uma amostra, dividido pela distância percorrida pelo solvente é conhecido como o Rf (fator de
retenção). Comparações do valor de Rf da amostra com o de um padrão é um método qualitativo
usado na identificação de um composto.
Para o cálculo de valor de Rf mede-se a distância que a substância deslocou a partir do
ponto de aplicação (ds), considerando-se para efeito de medida o centro de gravidade da mancha,
e divide-se pela distância percorrida pela frente do solvente a partir do ponto original da amostra
(dm). A Figura 3 ilustra o cálculo do Rf para os componente de uma amostra.
Distância percorrida pela mancha desde a origem (ds)
Rf = -----------------------------------------------------------------------------------
Distância percorrida pelo solvente desde a origem (dm)
Figura 3. Determinação de Rf no cromatograma em camada fina.3
Quando as condições de medida são completamente especificadas, o valor do Rf é constante
para uma dada substância, e corresponde a uma propriedade física daquele composto. O valor de Rf
pode, então, ser usado para identificar um composto desconhecido, mas como muitas substâncias
podem ter o mesmo valor de Rf, assim com podem ter o mesmo ponto de fusão, métodos adicionais
devem ser utilizados para identificação inequívoca do composto.
Existem várias técnicas cromatográficas que vão das mais simples como cromatografia de
coluna e camada fina até as mais sofisticadas e computadorizadas, como a cromatografia líquida
de alta eficiência (CLAE). De modo geral, entre os métodos modernos de análises, as técnicas
cromatográficas, ocupam um lugar de destaque na química e bioquímica, na pesquisa e na
indústria, devido a sua facilidade em efetuar a separação, identificação e quantificação das
espécies químicas presentes em uma amostra, mesmo em misturas muito complexas.
Aplicações da CCD em Química Orgânica
- Estabelecer a identidade dos compostos;
- Determinar o número de componentes de uma mistura;
- Determinar o solvente apropriado para a separação por cromatografia em coluna;
- Monitorar uma separação realizada por cromatografia em coluna;
- Verificar a eficiência de uma separação;
- Monitorar o andamento de uma reação.

4. 3 – PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 3.1. Cromatografia em Papel.
3.1.1. Preparar uma cuba cromatográfica colocando uma tira de papel de filtro (sulfite) de
10x15 cm e tampar com uma placa de petri.
3.1.2. A partir de um papel sulfite, cortar, uma tira de 5 cm de largura e 21 cm de
comprimento.
3.1.3. Com um lápis, traçar em uma das extremidade do papel, uma linha de 1,5 cm acima da
extremidade inferior.
3.1.4. Fazer, nessa linha, quatro marcas a lápis, com distância de 1 cm de cada uma, e nas
extremidades deixar 0,5 cm de distância de cada margem.
3.1.5. Escrever o número 1 sob a primeira marca, o 2 sob a segunda,e assim por diante, até o
número 4.
3.1.6. Nas marcas com os números 1, 2, 3 e 4 aplicar a tinta das canetas preta, roxa, rosa,
verde, verde ou azul, de tal forma que o circula tenha um diâmetros de 0,5 cm.
3.1.7. Uma mancha não deve invadir a outra, e entre cada uma deve ficar um espaço de pelo
menos 0,5 cm.
3.1.8. Cortar a extremidade superior do papel em um comprimento tal que sua extremidade
inferior fique a aproximadamente 0,5 cm do fundo da cuba cromatográfica (vidro de
Nescafé).
3.1.9. Dobre a parte que sobra do papel e recorte de tal forma a deixar 1 cm de papel
sobrando.
3.1.10. Colocar um pedaço de fita adesiva na parte superior dobrada do papel sulfite e prender
o papel na boca da cuba cromatográfica.
3.1.11. Para obter o eluente, misturar 7 mL de etanol 92º e 7 mL de água.
3.1.12. Colocar o eluente na cuba cromatográfica até atingir 1 cm de altura.
3.1.13. Colocar a tira de papel preparada na cuba cromatográfica tomando o cuidado para que
a camada de eluente fique próxima, mas não molhe inicialmente as manchas de tinta.
Se isso ocorrer, retire um pouco do eluente do frasco, até que o nível no frasco não
alcance as manchas.
3.1.14. Prender o papel no topo da cuba cromatográfica com a ajuda da fita adesiva.
3.1.15. Tampar o frasco de vidro com a placa de petri.
3.1.16. Esperar até que o eluente suba até o topo do papel.
3.1.17. Retirar a tira de papel do frasco de vidro, esperar secar e verificar o que ocorreu com as
cores. Anotar as observações e calcular o Rf de cada macha. Anexar o cromatograma
no relatório.
3.1.18. O professor irá fazer uma análise cromatográfica utilizando um papel filtro aberto e uma
tampa contendo o eluente.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL – 3.2. Cromatografia em Camada Fina (TLC)
3.2a) Preparação do extrato
3.2a1) Cortar em pedaços pequenos os pimentões verdes, amarelos e vermelhos (Figura 4a).
3.2a2) Pesar cerca de 30 g dos pedaços de cada pimentão em béqueres diferentes.
3.2a3) Adicionar 10 mL de acetona e 50 mL de hexano (Figura 4b).
3.2a4) Transferir cada mistura, separadamente, para um almofariz com pistilo e macerar até
obter uma pasta homogênea.
3.2a5) Deixar em repouso por 1 hora (Figura 4c).
3.2a6) Filtrar para um funil de separação utilizando um funil comum, com papel de filtro
pregueado, adicionar a solução lentamente para que o hexano seja filtrado primeiro.
3.2a7) Separar a fase aquosa.
3.2a8) Adicionar, 15 mL de água. Girar lentamente o funil, pois a agitação brusca pode causar
a formação de emulsão.

5. 3.2a9) Separar e descartar a fase aquosa. Repetir esta operação de lavagem, por mais uma
vez.
3.2a10) Descartar a fase aquosa e transferir a fase orgânica (extrato) para um erlenmeyer de
125 mL (Figura 4d).
3.2a11) Adicionar 2g de sulfato de sódio anidro a fase orgânica e deixar em repouso por 15
minutos.
3.2a12) Filtrar em um béquer de 50 mL e concentrar os extratos até o volume de 1 mL, com
aquecimento em banho-maria a 70 ºC e sob agitação.
Figura 4. Etapas da preparação dos extratos de pimentão.5
3.2b) Aplicação da amostra na placa
3.2b1. Utilizando um capilar, aplicar duas porções da solução de
pigmentos sobre uma placa de sílica (2,5 x 7,5 cm) a 1,0 cm de uma
das extremidades.
Evitar a difusão da mancha de forma que seu diâmetro não deva
ultrapassar a 2 mm durante a aplicação da amostra.
3.2b2.
Deixar o solvente evaporar.3.2b3.
3.2c) Desenvolvimento do cromatograma
3.2c1. Preparar uma cuba colocando uma tira de papel de filtro de 4x5
cm, hexano com 5% de acetona. Tampe com uma placa de petri.
Esperar o tempo suficiente para que ocorra a completa saturação.3.2c2.
Colocar cuidadosamente a placa na cuba, evitando que o ponto
de aplicação da amostra mergulhe no solvente.
3.2c3.
Quando o solvente atingir cerca de 0,5 cm do topo da placa,
remover a placa e marcar a frente do solvente (linha de chegada
da fase móvel).
3.2c4.
Deixar secar ao ar por 5 minutos e observar o número de
manchas coloridas. Caso seja necessário insira a placa na cuba
contendo um pouco de iodo sólido e coberto com uma placa de
petri. Espera-se o surgimento de manchas na placa.
3.2c5.
Copiar a placa com as substâncias separadas (cromatograma),
obedecendo fielmente a distância entre o ponto de aplicação e a
frente do solvente, bem como a distância percorrida por cada
substância, iniciando pelo ponto de aplicação até o centro de
maior concentração da mancha.
3.2c6.
Anotar as observações e calcular o Rf de cada macha. Identificar
as manchas através de dados da literatura.
3.2c7.
Fazer uma análise cromatográfica utilizando papel filtro ou sulfite.3.2c8.
4 – Questões
4.1. Qual é o estado físico da fase móvel e da fase estacionária na cromatografia em camada
delgada (CCD)?
4.2. Com que finalidade a solução de pigmentos é lavada com água?
4.3. Por que o sulfato de sódio anidro é adicionado à solução de pigmentos?
4.4. Que se entende por fator de retenção (Rf)?

6. 4.5. Dois componentes A e B, foram separados por CCD. Quando a frente do solvente atingiu,
6,5 cm, acima do ponto de aplicação da amostra, a mancha de A, estava a 5 cm, a de B a
3,6 cm. Calcular o Rf de A e de B. Desenhar esta placa, obedecendo o mais fielmente
possível as distâncias fornecidas. O que se pode concluir sobre a resolução das manchas,
nesta separação?
4.6. Descreva detalhadamente o que você observou à medida que o eluente subia pelo papel
e ao final do experimento.
4.7. Com base nas informações fornecidas na teoria e nas observações do experimento, quais
são os componentes das tintas mais atraídos pelo eluente? E quais os mais atraídos pelo
papel? Explique
4.8. Por que a cromatografia utilizando hexano com 5% de acetona é mais rápida que a
cromatografia utilizando etanol - água 1:1?
5 – Bibliografia
1. ROBERTS, R. M.; GILBERT, J. C.; RODEWALD, L. B. WINGROVE, A. S., Modern
experimental organic chemistry, 4th
ed, Phyladelphia Saunders College Publishing,1985.
2. DEGANI, A. L. G., CASS, Q. B.; VIEIRA, P. C. Química Nova na Escola, 1998. 7, 21.
3. PALOSCHI, R.; ZENI, M.; RIVEROS, R. Experimentos Cromatográficos. Química Nova na
Escola, n. 7, p. 35-41, 1998.
4. COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; PIERINA, S. B. Introdução a métodos cromatográficos. 4
ed., Campinas: Editora da Unicamp, 1995.
5. RIBEIRO, N. M.; NUNES, C. R. Análise de Pigmentos de Pimentões por Cromatografia em
Papel. Química Nova na Escola, n.29, 34-37, 2008.
6. NÚBIA, D. S.; Instrumentação para o Ensino de Química, Série: Experiências
Demonstrativas – Cromatografia. UNIOESTE, Curso de Química.