Este documento proporciona instrucciones para evaluar bacterias en el agua. Explica que las bacterias coliformes, E. coli y E. coli O157: H7 son indicadores de contaminación fecal. Describe cómo recolectar muestras de agua, preparar placas de Petri, incubarlas y contar colonias para determinar los recuentos bacterianos. Los resultados se interpretan en comparación con los estándares de calidad del agua para consumo humano.

1. Evaluación Bacterial del Agua
Adaptación de las
Instrucciones del
Departamento de Recursos
Naturales, Estado de Iowa

2. Introducción
• Las bacterias son organismos microscópicos,
organismos unicelulares que son frecuentes en
todo el medio ambiente.
• Las bacterias viven en todas partes, en el aire, el
suelo, el agua, y en plantas y animales. Las
bacterias pueden ser tanto beneficiosas como
perjudiciales.
• Algunas bacterias, sin embargo, son perjudiciales
y pueden causar problemas de salud humana. Los
que se producen enfermedades se conocen como
agentes patógenos.

3. Relación entre los coliformes totales,
fecales, E. coli, y E. coli O157: H7.
El total de bacterias
coliformes son parte de la
familia Enterobacteriaceae
y se encuentran
comúnmente en el
ambiente, incluyendo en el
material vegetal y animal y
en el suelo.
Bacterias coliformes fecales son un subgrupo de bacterias
coliformes totales que están presentes en el intestino y las heces
de los animales de sangre caliente como los seres humanos,
ganado y fauna silvestre.

4. • Escherichia coli (E. coli)
es un subgrupo de
bacterias coliformes
fecales. Si bien la
mayoría son inofensivas,
algunas pueden causar enfermedades y causar diarrea. La
presencia de la bacteria E. coli en el agua sirve como un
marcador o indicador de la contaminación del agua y
• Aunque la mayoría de las bacterias E. coli las cepas son
inocuas y parte de las bacterias normales que se
encuentran en los intestinos de los animales de sangre
caliente, una forma de E. coli bacteria E. coli O157: H7 es
una de las cepas que pueden causar una enfermedad grave.
La presencia de la bacteria E. coli no significa
necesariamente que la E. coli O157: H7 está presente.

5. ¿Cómo entran las bacterias en
cuerpos de agua?
• El escurrimiento de corrales de engorde de ganado que
contienen estiércol
• La escorrentía de las tierras de cultivo con las
aplicaciones de estiércol
• Los animales directamente descargando residuos
fecales en el cuerpo de agua
• sistemas sépticos de viviendas particulares o empresas
que están vinculadas a las líneas de drenaje que
descargan a cuerpos de agua cercanos
• agua de escorrentía de tormentas de las zonas urbanas
que lleva desechos de nuestras mascotas
• El escurrimiento de estiércol de animales salvajes

6. Antes de ir al campo, asegúrese de
tomar el siguiente con usted:
• pipetas estériles u otro recipiente de recogida estéril (1
por sitio)
• botella (s) de Coliscan ® Easygel ® medio de cultivo,
descongelado (3 por página)
• marcador permanente para marcar las botellas de la
media de cultivo
• nevera portátil con hielo para mantener la muestra(s) a
dicha temperatura hasta volver a casa
• hoja de campo Evaluación Química / Física / Bacterial
del Agua
• química / física equipo de pruebas de campo (opcional)

7. Recogida de Muestras
Si recolecta una muestra para llevar a clase en
vez de probar el agua en el campo, a primero:
• Encuentra un contenedor a lo menos medio
litro en tamaño.
• Lava el frasco o botella y tapa con habon.
• Enjuaga el contenedor del habon.
• Enjuaga otra vez con agua purificada.
• O vacía una botella nueva del agua purificada.

8. Recogida de Muestras
• Con una pipeta estéril
(cuentagotas), recoge
una muestra de agua
de su muestra o
directamente de la
fuente del agua. Para la
mayoría de las
muestras, un ml (1 ml)
de agua se recomienda.

9. Como Usar una Pipeta
• ¡No toque nada con el punto o eje de la
pipeta estéril!
• Antes de poner el punto en la muestra,
aprete el bulbo un poco para expresar aire.
• Sumergir la punta en la muestra y liberar
lentamente la presión sobre el bulbo.
• Aspirar el agua lentamente en el tubo de la
pipeta hasta que alcanza la marca deseada.
• Si usted comete un error: levantar la pipeta
y luego vaciarla antes de empezar de nuevo.
• Quitar el punto del agua, manteniendo
constante el bulbo.
• Exprimir el agua en la botella de Coliscan,
asegurándose de no tocar el lado de la
botella ni el medio del interior.

10. Recogida de Muestras
• Coloque la muestra de
agua directamente en
la botella de Coliscan ®
Easygel ® medio de
cultivo. Invierta la
botella un par de
veces. Esta es la
muestra #1.

11. Recogida de Muestras
• Utilizando la misma pipeta, repita los pasos 1 y 2
del procedimiento de recogida de muestras para
la muestra 2 y muestra 3. El mismo volumen de
agua tiene que ser recogido para todas las
muestras; se sugiere 1,0 ml por muestra.
• Si usted es incapaz de preparar las muestras para
la incubación al regresar a casa, es posible
almacenar el agua durante 24 horas. Para ello, se
debe recoger una muestra de agua en un
recipiente estéril.

12. Al volver del campo, asegúrese de tener lo siguiente
para preparar las muestras para la incubación:
• Pre-tratadas platos de Petri de los Laboratorios
Micrología (3 por sitio)
• Marcador permanente para marcar los platos de
Petri
• espuma de poliestireno hielera (incubadora),
termómetro, bombilla de luz, y cable de
extensión.
• cinta adhesiva para sujetar las tapas de caja de
Petri.
• La forma Evaluación Química / Física / Bacterial
del Agua para recordar datos

13. Preparación de Muestras
• Prepare la incubadora mediante la activación
de la bombilla de luz y la inserción del
termómetro de carne a través de la tapa (o
ponerlo adentro).
• Si falta bombilla,
ponga botella de
agua caliente en la
caja y renueve 2-3
veces por día.

14. Preparación de Muestras
• ¡No abre el plato estéril! Marcar la parte
inferior (menor de las dos piezas) de tres
platos de Petri en el borde con un marcador
permanente. Esta etiqueta debe incluir sus
iniciales, el número de la fuente, fecha y hora
de la recogida de muestras, el volumen de
agua en el plato, y repetición de la muestra
(que estará recolectando tres muestras por
sitio, así que la etiqueta de ejemplo 1, ejemplo
2, ejemplo 3).

15. Preparación de Muestras
• Adjuntar con cinta la tapa del plato de Petri a
la parte inferior en cualquier ubicación, la
creación de una bisagra. Poner los platos de
lado por el momento.

16. ¡Nota!
Si ya ha añadido la muestra a la
botella de medio de cultivo en el
campo, usted está listo para
agregar el contenido de la botella a
la placa de Petri. Si usted trajo la
muestra de agua en la aula, es
necesario añadir la muestra al
medio de cultivo ANTES de agregar
el contenido de la botella al plato.

17. • Agite suavemente
la Coliscan ®
Easygel ® botellas
para mezclar el
contenido de cada botella y vierta en el ya
etiquetado plato de Petri. En la mesa agite
suavemente la mezcla en el plato de Petri,
hacer una figura de ocho encima de la mesa
con el plato unos minutos, hasta que la
mezcla se distribuye uniformemente. Tenga
cuidado de no salpicar por el costado o en
la tapa.

18. Incubación de Muestras
• Coloque los platos de Petri en una superficie
plana fuera de la luz solar directa durante un
máximo de 45 - 60 minutos. La mezcla se
solidifique en la parte inferior del plato de
Petri. Evitar el movimiento de los platos hasta
que se han solidificado.
• Luego adjunte el otro lado de la tapa de la
parte inferior del plato de Petri.

19. Incubación de Muestras
• Compruebe la incubadora para asegurarse de que la
temperatura está entre 29-36 ° C. Si la temperatura es
demasiado alta, abra la tapa de la hielera un poco.
• Una vez que la mezcla está sólido, incubar los platos de
Petri a 29-36 ° C durante 48 horas. Platos de Petri se
pueden apilar en la incubadora. Platos de Petri deben
ser colocados boca abajo con la tapa hacia abajo para
evitar la condensación en la tapa. Coloque los platos
Petri frente a la fuente de luz, dejando espacio entre
los platos de Petri y los lados de la incubadora. Evite
colocar el termómetro al lado de la luz.

20. Incubación de Muestras
• Monitorear la temperatura de la incubadora durante
la primera hora después de la colocación de los platos
de Petri en el mismo. Manteniendo la temperatura
entre 29 y 36 C es muy importante. Si es necesario,
la temperatura puede
bajar por la apertura de la
tapa de la incubadora un
poquito. Si la temperatura
no es alcanzar el mínimo
del 27 C, coloque una luz
de noche adicional en la
incubadora.

22. Muestra Conde
• Al contar las bacterias, utilice la rejilla
laminada. Coloque la rejilla debajo del plato
de Petri para usar como una guía en conteo.
Sólo tiene que contar hasta 100.
Si hay más de 100
colonias están
presentes, registrar el
recuento de colonias
como "100."

23. Muestra Conde
• Contar todos los puntos de color rosa, o
"colonias," en el plato de Petri con los
métodos descritos
anteriormente. Registrar
el recuento de colonias
sobre el seguimiento
bacterias hoja de datos
en "Las bacterias
coliformes generales."

24. Muestra Conde (cont.)
• Después del período de incubación (48 horas), cuente todos
los de color azul oscuro o morados, "colonias," en el plato de
Petri. Registrar el recuento de colonias de bacterias
en la forma campo
"Las bacterias E. coli."
Utilice la
"Interpretación de los
platos" ("Interpreting
the Plates") guía para
ayudar a determinar
cuáles colonias de
bacterias se cuente
como E. coli.

25. Muestra Conde (cont.)
• Repita el procedimiento anterior para otras
dos platos de Petri de esta muestra.
• Registra en la hoja de datos el volumen de
agua recogida para cada muestra, el tiempo
de incubación o período y la temperatura de
incubación.

26. Muestra eliminación
• Con cuidado, coloque aproximadamente una
cucharadita de lejía directamente sobre la
superficie de la Coliscan ® Easygel ® de cada
plato.
• Deje reposar por lo menos cinco minutos.
• Coloque en una bolsa hermética y desechar en la
basura normal.
• Deje que el enfriador se seque al aire antes de
guardarlo. Evite el uso de esta nevera para otros
usos. Una solución diluida de cloro se puede
utilizar para limpiar el refrigerador.

27. Interpretación de resultados
• Un concepto importante de entender es que las heces están
siempre presentes en nuestro entorno. Simplemente
encontrar que bacterias indicadoras de contaminación están
presentes en el agua no justifica por sí mismo una mayor
investigación.
• Según NORMA Oficial Mexicana NOM-179-SSA1-1998
(publicado en 1999), Vigilancia y evaluación del control de
calidad del agua para uso y consumo humano, los
organismos coliformes totales no deben ser detectables en
ninguna muestra de 100 ml;
• en sistemas de abastecimiento de localidades con una
población mayor de 50 000 habitantes, estos organismos,
deberán estar ausentes en el 95% de las muestras tomadas
en un mismo sitio de la red de distribución

28. Coliformes por Municipio
(Antes del tratamiento) Julia Pacheco Ávila et al., 2004