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1. Daniel Salazar Osorio.
Thalía Ramírez Montoya.

2. INTRODUCTION
The International Commission on Microbiological
Specifications for Foods classified Cronobacter as
pathogenic organisms to a restricted population,
endangering their lives and causing serious long-
term consequences.
Among premature neonates and
immunocompromised infants, these infections
can be life-threatening. The neurological sequelae
can be permanent and the mortality rate can be
as high as 40–80 %

3. • The majority of bacteremia cases were patients >15 years in age. from a
survey of >45,000 patients from two hospitals sampled from 2005 to 2011 .
• The majority of Cronobacter spp. isolates were from throat swabs, followed
by urine, tracheal aspirates, Broncho alveolar lavage, cannulae and sputum
samples.
• To date, over 1000 Cronobacter strains have been genotyped according to
MLST . This genotyping has revealed a prevalence of C. sakazakii clonal
complex 4 with neonatal meningitis cases and C. malonaticus clonal
complex 7 with adult infections.

4. CRONOBACTER
- Es un género de anaerobios facultativos, bacterias Gram-
negativos que hace parte de la familia Enterobacteriaceae.
( viven en la flora intestinal)
- Presentes naturalmente en el ambiente.
- Pueden sobrevivir en condiciones muy secas.
- se han encontrado en alimentos secos o deshidratados, como
la leche maternizada en polvo, la leche en polvo, los tés de
hierbas y los almidones. También se han encontrado en aguas
residuales.

5. Especies:
1. C sakazakii
2. C. malonaticus
3. C.muytjensii
4. C.turicensis
5. C. dublinensis
6. C. universalis
7. C. Condimenti

6. • C. sakazakii
- Transmisión al organismo es vía oral, por contacto directo o a
través de los alimentos
- Relacionado con brotes de meningitis o enteritis, en especial
en los lactantes.
- Especie más agresiva en individuos hipersensibles
- Grupos de población más afectados recién nacidos y adultos
mayores

7. GENOTIPIFICACION
• Procedimiento mediante el cual se obtiene el genotipo de un
organismo. Estas técnicas moleculares utilizan el ADN de un
organismo, el cual es el material hereditario de los seres vivos,
que se encuentra en todas las células nucleadas del y
normalmente se mantiene conservado durante toda la vida
del animal. Su análisis permite conocer el material genético
que un individuo ha heredado de sus padres biológicos.

8. • PCR - RAPD - REP-PCR - ERIC-PCR - BOX-PCR
• PCR-RFLP
• RFLP-Hibridación
• PFGE
• AFLP
• VNTR / MLVA
• MLST
Cambios genéticos en un
corto período de tiempo
Cambios genéticos en
período de tiempo largo

10. INMUNOCOMPROMISO
• Aquella en las cual las cifra de células inmunes disminuye de
manera sustancial, impidiendo la defensa adecuada de la
persona que la tiene, se debe a múltiples causas, una de las
mas conocidas es el SIDA, pero también en una persona con
tratamiento oncológico o bien con medicamentos
inmunosupresores en enfermedades.

11. Los principales defectos inmunológicos son:
• neutropenia (deficiencia del componente fagocitario)
• Agamma/hipogammaglobulinemia (deficiencia de la
inmunidad humoral)
• Linfopenia T4 (deficiencia de la inmunidad celular)

12. Los principales microorganismos en la deficiencia de la
inmunidad humoral son las bacterias encapsuladas: neumococo,
menigococo y Haemophilus influenzae, y Cryptococcus
neoformans (hongo encapsulado)

13. GENERAL PURPOSE
• This study aimed to address this lack of knowledge using the
collection of 51 clinical Cronobacter strains, which included
those from the study by Holý et al. These strains were
speciated and genotyped using 7-loci MLST, rpoB gene
sequence analysis, O-antigen typing and pulsed-field gel
electrophoresis.

14. METODOS Y MATERIALES
• Cepas y cultivos
• Fenotipificacion
• PFGE de aislamiento cronobacter
• Serotipificación molecular de Cronobacter
• Extracción de DNA
• Análisis de la secuencia del alelo rpo B
• MLST

15. CEPAS Y CULTIVOS
• 51 cepas de Cronobacter clínicos.
• Recogidos en una encuesta de Cronobacter por pacientes de
dos hospitales, desde mayo de 2007 hasta agosto de 2013.

16. FENOTIPICACION
• Aislamientos de Cronobacter fueron fenotipificados usando el
32E ID kit.

17. PRGE
- Enzimas de restricción XbaI y Spel
- Se analizaron los perfiles de banda de ADN con el uso de
software BioNumerics.

18. PRGE
• Electroforesis en campos pulsantes
- Se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de
separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través
de una matriz gelatinosa.
- Separación de grandes fragmentos de DNA induciendo su
reorientación mediante cambios periódicos en el campo
eléctrico

19. - Duración determina el intervalo de tamaños que se pueden
separar (cuanto mayor sea el tamaño de los fragmentos a
separar, mayor ha de ser la duración de los campos aplicados).

20. APLICACIONES
- Epidemiologia molecular

21. Serotipificación molecular de
Cronobacter
• Serotipos Cronobacter se determinaron utilizando el multiplex
reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

22. PCR
• Reacción en cadena de polimerasa
Técnica de amplificación enzimática de secuencias especificas de
ADN. Consiste en aumentar un segmento especifico de ADN,
usando polimerasa , obteniéndose miles o millones de copias

23. PRINCIPIO DEL METODO:
- Desnaturalización del ADN.
- Hibridación especifica de la hebra sencilla con un
oligonucleótido ( primer)
- Replicación de la hebra sencilla por una DNA Pol a partir del
oligonucleótido anterior como cebador.
APLICACIONES

25. EXTRACCION DEL DNA
• Se extrajo el ADN de las cepas diana
• La concentración de ADN se confirmó
• el ADN se almacenaron a -20 ° C durante 6 meses.

26. ANÁLISIS DE LA SECUENCIA DEL
ALELO RPO B
• El producto de PCR (637 pb) era secuenciado y alineada con
las secuencias adicionales de la Base de datos de Cronobacter.

27. SECUENCIACION DE ADN
• conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es
la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en
un oligonucleótido de ADN.
• APLICACIONES:
- Procesos biologicos fundamentales
- Investigación forense
- Mutaciones somáticas
- Proyecto genoma humano
TIPOS
• Secuenciación por terminador fluorescente
• Secuenciación alelo-específica por bisulfito

28. MLST
• Siete genes de limpieza amplificados fueron:
ATP sintasa cadena beta (TPAT), factor de elongación G (Fusa),
glutaminyltRNA sintetasa (GLN), glutamato sintasa subunidad
grande(gltB), ADN girasa subunidad B (gyrB), la traducción inicio
factor IF-2 (INFB) y sintasa fosfoenolpiruvato (PSA).

29. MLST
• Tipificación multilocus de secuencias
- caracterización taxonómica de bacterias y microorganismos.
- caracteriza muestras de especies microbianas mediante
la secuenciación de ADN de fragmentos internos de varios
genes de mantenimiento.
- Cada muestra se caracteriza por las secuencias únicas de
alelos en cada uno de los siete loci , lo cual constituye su perfil
alélico o tipo de secuencia

30. Principio la técnica:
- Mide directamente los cambios en la secuencia de una serie de
genes de mantenimiento y caracteriza cepas mediante sus
perfiles alélicos únicos
- consiste en amplificación mediante PCR seguida de
la secuenciación del ADN. Se pueden rastrear las diferencias en
nucleótidos entre cepas en un número variable de genes en
función del nivel de discriminación que se desee

31. • APLICACIONES

32. RESULTADOS

33. 51 sepas fueron caracterizadas genotípica mediante fusA y
MLST, además fenotípicamente mediante ID32E, la cual no
tiene la capacidad de identificar genero bacteriano por
esto las sepas obtenidas como predominantes fueron
distintas a las obtenidas mediante el fus A genotípico, el
cual reconocido el porcentaje de c sakasakii de 63%, de c
melanoticus 33%, c muytjensii de 2%.

34. Se encontró una relación
fuerte entre los serotipos y
varios tipos de secuencias.

35. • PFGE se uso para comparar si las cepas pueden ser usadas
para elaborar el perfil en los dos diferente hospitales.

36. Usando enzimas de restricción, se lograron separar de
12 a 17 fragmentos de C. sakazakii y de 8 a 10
fragmentos de C. melanoticus.

37. • Cepas del mismo tipo fueron secuenciadas y diferenciadas con
mas detalle permitiendo un mejor estudio de ellas.

38. PATRICK ME
VS
ARTICLE
There was no apparent
relatedness between the
age or sex of the patintent
and the cronobacter
species isolated.

39. AUTOR
JOSEPH S, SONBOL H
VS
VS PATRICK ME,
PETRZELOVA
Despite the greater
discrimination of strains
using PFGE than MLST.
Disagree,PFGE profiles
differentiated strains with
each sequence type into
15 pulsotypes. There was
almost complete
agrement between MLST
and rpoB

40. AUTOR
PETRZELOVA
VS
HOLI O
The carriage of the
organism by adults and
the high incidens of urinal
tract infections
indicate that the
exposure routes to this
bacterium still require
elucidation

41. AUTOR
VAN ACKER J,D SMET F
VS
ARTICLE
Reporter cronobacter
infections have primary
concerned infans,
especially premature
neonates whit clinical
presentations of
necrotising enterocolitis.
The article is disagree
with that afirmation
because In the first part of
it, the autors write that
the neonates are a one
type of poblation that
have many incidence of
cronobateris but that the
principal group is grown
people.

42. CONCLUSIONES

43. Usingtwodiferent restictionenzymes(spelandxbal)isexpected
thattheygettwodiferentspatronsofelectroforesisallowinga
betterdefferentiation

44. The pulsotype is independent of the sequences types.

45. Exist more facility to take the isolates of sputum than other tipe
of sources.

46. The51strinscanbeclusteredinfeveteenpulsotypes,ninecsakasakii,five
cmelanoticusandonemuytjensii.

47. Thalia Ramirez.

48. THE SPECIATION AND
GENOTYPIN OF
CRONOBACTER ISOLATES
FROM HOSPITALISED
PATIENTS
Is taken 51
cronobacterias strains,
from different classes of
hospitalized patients
They were genotyped and
speciated using methods such
as,
PFGE MLST
ID 3E RPOB
Teniendo en cuenta otro
anteriormente realizados
They nowledged strain
how csakasakii (master),c
malaticus c muytjasii
cause of infections in
children (neurosis
meningitis, enterocolitis,
death) and in adults
(malignancy, underlying
conditions)
A Better identifying of
these bacterias, the
patologys and the
insidencia, will be posible
make better treatments
Daniel Salazar.

49. BIBLIOGRAFIA
• http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717
-75182015000100011
• http://www.elika.eus/datos/pdfs_agrupados/Documento88/C
opia%20de%2010.Cronobacter.pdf
• http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v24n2/v24n2r2.pdf
• http://www.cdc.gov/spanish/especialesCDC/Cronobacter/
• http://es.slideshare.net/hrmorales71/electroforesis-en-
campos-pulsantes