Trabajo de investigación sobre el Ébola. Noemy, Irene, Helena.

1. ÉBOLA
Trabajo de investigación
Noemy Rodríguez Sánchez
Irene Calles Sánchez
Helena Rodríguez Pinto
Tutor: Daniel Andrés Hernández Ingelmo
Colegio Esclavas del Sagrado Corazón de Jesús,
Salamanca.

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ÍNDICE
 Introducción ………………………………………………….pág. 3,4,5,6 y 7.
 Sintomatología ……………………………………………….pág. 8 y 9.
 Tratamiento …………………………………………………..pág. 10.
 Técnicas para diagnosticar el virus en la sangre ……………. pág. 11,12,13 Y 14.
 Otros datos de interés ………………………………………...pág. 15

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INTRODUCCIÓN
El virus Ébola pertenece a la familia de los Filoviridae. Su nombre proviene de su
morfología filiforme característica (filo, latín "filamento") y ello ha permitido
identificarlo fácilmente en tejidos y muestras clínicas mediante microscopia electrónica.
Los virus Ébola y Marburg causan fiebres hemorrágicas severas. El Marburg fue
reconocido por primera vez en trabajadores de un laboratorio en Marburg, Alemania, y
en Belgrado, Yugoslavia, en 1967. Estos trabajadores sufrieron exposición a tejidos y
sangre de monos verdes africanos , importados de Uganda. Hubo 25 casos primarios y
seis secundarios en el brote. Siete de los casos primarios murieron.
El virus Ébola, emergió por primera vez en dos importantes brotes que ocurrieron casi
simultáneamente en Zaire y en Sudán en 1976. Se reportaron mas de 500 casos, con
índices de mortalidad del 88% en Zaire y de 53% en Sudán. Un caso aislado fue
confirmado mediante aislamiento del virus en Zaire en 1977 y en 1979, la fiebre
hemorrágica por Ébola apareció de nuevo en Sudán en el mismo sitio de 1976. Además
de estos episodios confirmados mediante el aislamiento del virus, dos casos fatales más,
y dos no letales han sido reportados. Ninguna asociación con monos puede ser atribuida
a los brotes.
Un tercer filovirus, serológicamente relacionado con los virus Ébola fue aislado de
monos Cynomolgus (Macaca fascicularis) provenientes de las Filipinas. De acuerdo con
los datos disponibles, este virus llamado Ébola Reston, es capaz de infectar humanos
pero no parece causar enfermedad seria.
Recientemente se aisló otro filovirus de monos cynomolgus importados de las Filipinas
a Italia. El agente aislado parece ser el virus Reston. No se observaron casos de
infección en humanos durante este brote.
Algunos científicos e historiadores creen que el tercer filovirus estaría relacionado con
los virus Ébola fue aislado de monos Cynomolgus provenientes de las Filipinas. De
acuerdo con los datos disponibles, este virus llamado Ébola Reston, es capaz de infectar
humanos pero no parece causar enfermedad seria.
Recientemente se aisló otro filovirus de monos cynomolgus importados de las Filipinas
a Italia. El agente aislado parece ser el virus Reston . No se observaron casos de
infección en humanos durante este brote.
Algunos científicos e historiadores creen que una gran plaga ocurrida entre los años
430-425 antes de Cristo y que mató a 300,000 personas fue un brote de Ébola.
El brote más reciente ha ocurrido en Gulu, Distrito de Uganda en África, en Octubre del
año 2000; al parecer es la variedad Sudán, de la que no se tenía noticia desde hace 21
años.
Algunas personas se preguntan por qué este virus no se esparce a otros lugares de África
o del mundo cada vez que surge un brote; la razón es que, además de las medidas de

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control tomadas por los organismos Nacionales e Internacionales de Salud, el Ébola
mata muy rápido y no hay tiempo de que se extienda demasiado. plaga ocurrida entre
los años 430-425 antes de Cristo y que mató a 300,000 personas fue un brote de Ébola.
TIPOS DE ÉBOLA
La familia Filoviridae se compone del virus Marburg y de los virus Ébola, del cual
existen cuatro subtipos identificados hasta ahora que han causado enfermedad en los
humanos: Ébola-Zaire, Ébola-Sudán, y Ébola-Costa de Marfil. El cuarto, Ébola-Reston,
ha causado la enfermedad en los primates, pero no en humanos.
BROTE ACTUAL
El actual brote de Guinea se corresponde con la variedad ébola-Zaire, la más virulenta,
y asociada con una tasa de mortalidad de hasta el 90%. Además, es la primera ocasión
en la que este virus aparece en el Oeste del continente africano, según el doctor Juan
García Costa, miembro del ENIVD (Red Europea para el Diagnóstico de Enfermedades
Virales, un organismo encargado de estudiar, controlar y prevenir las enfermedades
virales de importación.
Según las organizaciones humanitarias que están sobre el terreno, una serie de
circunstancias se convirtieron en el caldo de cultivo ideal para la gran extensión de esta
epidemia, como el trasiego incesante de personas, la aparición de la infección en zonas
remotas y de difícil acceso, el desconocimiento de la población y la debilidad de los
sistemas sanitarios.
Un estudio publicado a finales de agosto en la revista «Science» analizaba el genoma
del virus que se extendió por Sierra Leona y Guinea durante los meses de mayo y abril.
Según los investigadores, estos avances podrían servir para mejorar el diagnóstico y el
diseño de armas contra la infección.
DIAGNÓSTICO
Se realiza en Laboratorios especializados para estudiar microorganismos de nivel 4 de
Bioseguridad detectando los antígenos o anticuerpos específicos y/o aislando el virus.
La presencia de trombocitopenia y leucopenia con aminotransferasas elevadas (AST
ALT) es característica de los filovirus y algunas otras fiebres hemorrágicas virales, pero
una evolución progresiva grave con dolor abdominal y diarrea debe conducir a la
sospecha de un filovirus. La erupción no se observa con otras fiebres hemorrágicas
virales.
Los viriones son profusos y característicos en los casos graves. Las tinciones negativas
de suero y cortes finos de capa leucocitaria o tejido fijado (hígado, riñón) son útiles,
pero es necesario la medición cuidadosa de los viriones putativos y su estructura interna
para establecer el diagnóstico.

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Debido a que el virus Ébola es altamente virulento, deben tomarse precauciones
especiales en la recolección de los especímenes. El aislamiento del virus de suero de
fase aguda en celulares es el mejor método de diagnóstico. Los tejidos útiles para el
aislamiento del virus son hígado, bazo, nódulos linfáticos, riñón y corazón obtenidos
durante necropsia. Durante la viremia, pueden visualizarse las partículas mediante
microscopía electrónica. Los títulos de anticuerpos en suero se determinan mediante
inmunofluorescencia indirecta y ELISA. Un caso positivo debe confirmarse mediante
radio inmunoprecipitación o análisis de Western Blot. También se emplean técnicas de
PCR. El suero de pacientes sospechosos debe inactivarse mediante radiación gamma
antes de manejarse. No se pueden realizar tests de neutralización para filovirus. La
confirmación por laboratorio de los casos iniciales es necesaria cuando se sospecha una
epidemia de FHE. Una vez que el brote se ha confirmado, no es necesario colectar
especímenes para estudio de cada paciente, especialmente sin las condiciones de
seguridad adecuadas y el soporte de laboratorio necesario.
CONTAGIADOS

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CASOS EN EE.UU
Kent Brantly y Nancy Writebol, dos misioneros cristianos de origen estadounidense,
resultaron infectados por el virus al estar trabajando como cooperantes de la
organización Samaritan's Purse en Monrovia. Fueron trasladados al Hospital de la
Emory University en Atlanta para su tratamiento. Después de ser tratados con fármacos
experimentales y remitidos a unidades de aislamiento, ambos se recuperaron totalmente.
Contagios
El 30 de septiembre el CDC confirmó el primer caso de Ébola en los Estados Unidos,
Thomas Eric Duncan, el infectado estaba de viaje en Liberia donde se infectó,
regresando el día 19 de septiembre a la ciudad de Dallas, Texas siendo recluido en el
Hospital Texas Health Presbyterian. Falleció el 6 de octubre. A raíz de los cuidados de
este ciudadano, dos miembros del personal sanitario del hospital se contagiaron del
virus
CASOS EN EUROPA
España realizó tres repatriaciones de tres misioneros y una cooperante que se
encontraban trabajando en la zona del brote. Durante el tratamiento recibido por uno de
los enfermos, una auxiliar de enfermería del hospital sufrió un contagio, el primero en la
historia que se producía fuera de África
En el Reino Unido, una enfermera cooperante en Sierra Leona tuvo que ser trasladada la
Londres tras infectarse de ébola. Otra enfermera dio positivo en Glasgow tras volver de
viaje del mimo país africano.
Repatriaciones en Alemania
El 27 de agosto un epidemiólogo senegalés que trabajaba en Sierra Leona, fue tratado
en el Centro médico de la Universidad de Hamburg-Eppendorf, donde previamente se
Paises con casos iniciales y muertes,
contagios y evacuaciónes
Países con contagio generalizado
Países con contagio localizado y muertes Países con casos iniciales, sin muertes
Países con evacuados fallecidos Países con evacuados y contacto
localizado sin muertes
Países con evacuados que sobreviven Países de contagio localizado de otra
cepa, con muertes

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había establecido una sala de aislamiento con capacidad para seis pacientes. Mientras
que un médico ugandés que trabajaba en Sierra Leona para una ONG italiana fue
trasladado a Frankfurt. Un empleado de la ONU en Liberia, de origen sudanés, fue a la
clínica St. Georg de Leipzig donde falleció.
Repatriación en Francia
Una enfermera francesa, voluntaria de Médicos Sin Fronteras en Liberia, fue trasladada
al Hospital Militar Bégin de Saint-Mande, cerca de París, el 18 de septiembre. La
ministra de sanidad, Marisol Touraine, informó de que recibirá un tratamiento
experimental. Fue dada de alta el 4 de octubre. La empresa Fujifilm aseguró que la
enfermera fue tratada con su medicamento experimental Favipiravir, aunque no fue
confirmado por las autoridades sanitarias francesas.
Repatriaciones en Suiza
El 22 de septiembre, un trabajador sanitario suizo fue repatriado por una compañía aérea
privada de Ginebra. El enfermero fue mordido por un niño infectado de ébola, el 20 de
septiembre en Sierra Leona. El sanitario permanecerá en aislamiento durante 21 días en
el Hospital Universitario de Ginebra. El ministerio de Sanidad comunicó que es poco
probable que esté infectado, pero se le vigila como paciente potencial de ébola hasta que
el período de incubación de la enfermedad haya acabado.
Repatriación en Noruega
El 6 de octubre se anunció que una ciudadana noruega trabajando para Médicos Sin
Fronteras en Sierra Leona iba a ser trasladada a su país natal para su tratamiento en el
Hospital Universitario de Oslo. El 9 de octubre se realizó el traslado en un avión
medicalizado, al que Portugal y Marruecos no dieron permiso de aterrizaje para
repostar, haciéndolo en el aeropuerto de Gran Canaria tras autorización del Gobierno
español. Recibió un tratamiento experimental y fue dada de alta el 20 de octubre.

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SINTOMATOLOGÍA
Tras la infección por el virus Ébola, después del contacto con un enfermo y sus
secreciones, sangre, vómito, semen, etc., también a través del contacto con un animal
huésped infectado vivo o muerto (monos, murciélagos, antílopes…) y por el contacto
con equipo médico contaminado, tales como agujas. Se produce un periodo de
incubación variable de 2 a 21 días según unos autores y de 5-10 días según otras
observaciones. Posteriormente, aparecen las primeras manifestaciones de la enfermedad
que son:
 Cefaleas.
 Inflamación de garganta
 Fiebre alta y repentina y quebrantamiento general.
 Tras ese período, aparecen mialgias, epístaxis y un signo muy prematuro que es el
sangrado abundante por el orificio de un pinchazo por una aguja de inyección
hipodérmica.
 Seguidamente aparece un sarpullido o "rash" generalizado, petequias (micro
hemorragias subepidérmicas).
 Náuseas, vómitos y diarreas sanguinolentas.
 Sigue una rápida afectación del hígado, bazo, intestinos (con dolores abdominales) y
riñones, con hemorragias por todos los orificios naturales con vómitos
sanguinolentos.
 Los ojos se ponen rojos y sale sangre por los lagrimales (los enfermos lloran sangre)
pudiendo sobrevenir ceguera. La deshidratación es muy rápida con la postración
consiguiente.
 El enfermo sangra por todos los poros. Hasta los pezones sangran.
 Molestias en las articulaciones y fuertes dolores musculares.
 Las encías y las glándulas salivales sangran, la lengua pierde su cubierta y sangra
también haciéndose muy dolorosa.
En los varones:
 Los testículos se ven pronto afectados adquiriendo el escroto un color violáceo y
aspecto tumefacto.
En las mujeres:
 Hay emisión de sangre por la vagina.
El virus ataca al tejido conectivo con gran ferocidad. En la piel aparecen vejigas
blanquecinas mezcladas con las manchas rojas petequiales (rash máculo-papular).
Siguen laceraciones espontáneas de estas vejigas y hemorragias numerosas por los
poros de las roturas. Las manchas rojas se extienden y toda la piel se convierte en una
pulpa que se deshace.

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En el interior de los vasos sanguíneos aparecen múltiples coagulitos de sangre que se
adhieren al endotelio vascular pavimentándolo como un mosaico. Muchos trombos se
desprenden, y van al cerebro y al corazón, donde producen necrosis.
El fallo renal es una de las primeras grandes complicaciones, produciéndose la uremia
consiguiente. El bazo se convierte en una bola del tamaño de una pelota de baseball,
como si fuese un coágulo único. Los intestinos se llenan de sangre. Las lesiones
cerebrales producen reblandecimiento en diversas áreas pudiendo originarse hemiplejia
o convulsiones epilépticas que ayudan a la difusión por toda la habitación o sala donde
se encuentre el enfermo de la sangre y las secreciones contaminadas que salen de su
cuerpo.

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TRATAMIENTO
En la actualidad no existe ningún medicamento dirigido a combatir el virus del Ébola,
sino dos vacunas en proceso de experimentación, por lo tanto solo se puede realizar
tratamiento sintomático o medidas de apoyo.
Entre ellas tenemos:
- para la fiebre, administrar Acetaminofén, nunca tomar Aspirina por el riesgo que
existe de manifestaciones hemorrágicas; también se debe ingerir abundantes líquidos
para evitar la deshidratación y guardar reposo en cama.
- Si el paciente tiene manifestaciones hemorrágicas requerirá la administración por vía
endovenosa de líquidos, así como concentrado de plaquetas, factores de coagulación
o de transfusiones de sangre si existen pérdidas importantes.
- Igualmente, dentro del tratamiento del ébola, es necesario llevar un control estricto
de los signos vitales como la frecuencia cardiaca, el pulso y la presión arterial con el
fin de poder determinar cualquier signo indicativo de shock.
Se está procediendo a tratar a algunos pacientes con un suero experimental conocido
como ZMapp. Mientras, a algunos enfermos se les está administrando, con resultados
positivos en algunos casos, suero hiperinmune (plasma sanguíneo) obtenido de
pacientes que han conseguido superar la enfermedad, por lo que su sangre ha generado
anticuerpos para combatir la infección. Otras compañías farmacéuticas trabajan a
contrarreloj para dar con la cura o una vacuna efectiva para luchar frente este virus.

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TÉCNICAS PARA DIAGNOSTICAR EL VIRUS EN LA SANGRE
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica "in vitro" que imita la
habilidad natural de la célula de duplicar el ADN.
Se trata de una técnica usada para crear un gran número de copias de un segmento de
ADN, que utiliza ciclos de desnaturalización, apareamiento con cebadores y extensión
por una ADN polimerasa termoresistente. (Se utiliza la ADN-polimerasa de una
bacteria que vive en aguas termales, Thermus aquaticus, así la enzima puede trabajar a
altas temperaturas).
Hasta la década de 1980, el único método para obtener grandes cantidades de un
fragmento de ADN era clonándolo en vectores adecuados e introduciéndolo y
multiplicándolo en bacterias. En el año 1985, un investigador norteamericano, Kary
Mullis (acreedor del Premio Nobel en Química 1993 por este aporte), desarrolló un
método que permite, a partir de una muestra muy pequeña de ADN, obtener millones de
copias de ADN in vitro, en unas pocas horas y sin necesidad de usar células vivas. Esta
técnica, llamada reacción en cadena de la polimerasa (PCR), requiere conocer la
secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento que se quiere amplificar. Estas
secuencias se usan para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de ADN
complementarios a una porción de cada una de las dos cadenas de la doble hélice, que
actúan como cebadores.
La mezcla de reacción contiene la secuencia de DNA que se quiere amplificar, dos
oligonucleótidos sintéticos (P1 y P2) que servirán como cebadores, una DNA
polimerasa termoestable (Taq) y los cuatro desoxirribonucleótidos trifosfato –dATP,
dGTP, dCTP y dTTP–.
Proceso:
La mezcla de reacción se somete a ciclos sucesivos, cada uno correspondiente a una
fase de desnaturalización, una de hibridación o alineación y una de elongación.

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a) Durante la desnaturalización, que se realiza por
calentamiento de la mezcla a 95ºC, se separan las dos cadenas
del ADN molde.
b) Durante la hibridación, la temperatura de incubación se reduce para permitir el
apareamiento de las bases de ambos cebadores en el sitio donde encuentran una
secuencia complementaria.
c) Durante la fase de elongación, la mezcla se calienta a 72ºC y la enzima Taq ADN
polimerasa se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el
proceso de extensión de la cadena complementaria a partir del extremo 3’ de los
cebadores. Al finalizar cada ciclo, la cantidad de ADN molde disponible para el ciclo
siguiente aumenta al doble.
Las cadenas recién formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro nuevo
ciclo de copias. Estos ciclos se repiten hasta que se obtiene el número de copias deseado
APLICACIONES DE LA PCR
1. Secuenciación
Una de las razones más comunes para el uso de la PCR es la formación de
suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciación. Es mucho más
sencillo y rápido que la clonación en células.
2. Estudios evolutivos
Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos,
como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes
con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir árboles
filogenéticos. La PCR también se ha utilizado para conseguir el mapa del
genoma humano.
3. Huellas dactilares del ADN.
La determinación de las huellas dactilares genéticas constituye una de las
aplicaciones más interesantes de la PCR. Mediante esta técnica es posible

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comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo
individuo o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta técnica se aplica
actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de
identificar individuos a partir de muestras biológicas, como sangre, semen, piel
o cabellos. También se utiliza en las pruebas de paternidad.
4. Detección precoz o prenatal de enfermedades genéticas así como la
detección de infecciones virales latentes
La técnica de la PCR se realiza de forma automática en un aparato como se ve en la
fotografía, con lo que se consigue un clonaje rápido en un sistema libre de células.
PCR a partir de ARN.
El genoma de muchos virus de importancia clínica está compuesto de ARN en lugar de
ADN, los más sobresalientes son el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), el
Virus de la Hepatitis C (HCV), la familia de Enterovirus (EV) y el virus que nos ocupa
en esta investigación: el virus del Ébola de la familia Filoviridae.
En estos casos es necesario hacer una transcripción reversa previa antes de realizar la
PCR.
El proceso es el siguiente:
Transcripción Reversa- PCR (RT-PCR).
Dado que el ARN usualmente es de una sola hebra y es sensible al calor, es necesario
hacer una transcripción reversa (RT) antes de iniciar la amplificación por PCR. La
transcripción reversa genera una copia de la hebra de RNA, pero esta copia es ADN
complementario (cADN) el cual es estable al calor y puede resistir la metodología PCR.

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Los pasos de la RT-PCR son:
1. Transcripción reversa: Unión del partidor a la secuencia de ARN objetivo.
2. Transcripción reversa: La polimerasa rTth cataliza la extensión del partidor
mediante la incorporación de nucleótidos complementarios.
3. Fin de transcripción reversa, se obtiene la hebra del cADN complementario al
ARN.
4. PCR.
INVESTIGACIÓN
Nos fuimos a informar más detenidamente yendo al campus de la Universidad, en el
Servicio de Secuenciación DNA, Genómica y Proteómica de la Universidad de
Salamanca, para que nos enseñaran más concretamente la técnica de la PCR empleada
para averiguar si se encuentra el virus a través del ADN.
Nos mostraron el sistema de secuenciación masiva Genome Sequencer FLX 454 Life
Sciences de Roche Diagnostics S. L., una de las tecnologías más avanzadas para
descifrar el ADN de todo tipo de organismos y es único en Castilla y León.
Para ello tomamos las siguientes fotos.

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OTROS DATOS DE INTERÉS
Para acercarnos más a la realidad, pedimos a un personal sanitario de un hospital de
Sevilla que nos mandara el protocolo oficial que tienen que seguir sin tuvieran un
posible caso de Ébola, que lo adjuntamos en otra carpeta.
También ofrecimos una charla a un grupo de primaria, concretamente a Sexto B, en
nuestro colegio, para darles a conocer la enfermedad, De esta actividad tomamos unos
vídeos y fotos que añadimos en otra carpeta junto los videos y junto el material que
empleamos para explicarlo.