Un pequeño resumen sobre la técnica de electroforesis

1. Universidad Autónoma de Nayarit
Unidad Académica de Agricultura
Programa Académico de Biología
Docente: Sergio Francisco Jaubert Garibay
TÓPICOS SELECTOS: BIOFÍSICA
AVANZADA

2. Presentado por: Andres Prieto Pineda
ELECTROFORESIS

3. "Técnica para la separación de moléculas
(típicamente proteínas o ácidos nucleicos)
sobre la base de su velocidad de migración
a través de un medio poroso cuando se
somete a un fuerte campo eléctrico."
(Alberts et al, 2008)

4. • La gran variedad de funciones y estructuras de las proteínas ha
estimulado varias técnicas para facilitar su estudio.
• La electroforesis se aprovecha de que muchas biomoléculas
existen como iones o pueden ser modificadas para asociarse a
moléculas iónicas.
• Existen varios tipos de electroforesis, pero todos utilizan una
corriente eléctrica para separar las moléculas.
• Durante el proceso, las moléculas iónicas migran hacia la carga
opuesta y su velocidad de migración dependerá del tamaño de
las moléculas.
(Prischmann, 2010)

5. TEORÍA DE LA ELECTROFORESIS
• El concepto es similar al de la centrifugación, es decir, las
moléculas son sometidas a una fuerza que las empuja en una
dirección.
• En este caso, la fuerza involucrada es un campo eléctrico que
actúa sobre las cargas de las moléculas
• Se puede representar como: F = EQ
• Donde F es la fuerza, E el campo eléctrico y Q es la carga.
• Por lo tanto, entre más grande sea la carga más grande será la
fuerza; esto significa que entre dos moléculas del mismo tamaño la
molécula con la carga más alta viajará más rápido por el campo
eléctrico.
(Woodbury, 2000)

6. • Generalmente, las moléculas con mayor masa
son de mayor tamaño y por lo tanto viajaron
por el medio con una velocidad menor a
comparación de moléculas con menor tamaño y
masa.
• Esto se debe a la fricción generada mientras las
moléculas viajan por el medio (solución o gel).
• La movilidad electroforética de una molécula
depende de su relación de carga a masa.
(Woodbury, 2000)

7. Medios Utilizados en la Electroforesis
Medio Condiciones Usos Principales
Papel de Filtro Papel de filtro
humedecido con
solución buffer, se
coloca entre dos
electrodos
Moléculas pequeñas:
amino ácidos,
nucleótidos
Gel de Poliacrilamida Moldeado en tubos o
placas; reticulado
Proteínas y ácidos
nucleicos
Gel de Agarosa Moldeado en tubos o
placas; poros más
grandes que el
poliacrilamida
Proteínas muy
grandes, ácidos
nucleicos,
nucleoproteínas, etc.
(Ali-ul-Qadir, 2013)

8. TIPOS DE ELECTROFORESIS
• Existen varias técnicas de electroforesis especializadas para la
característica que se desea utilizar para apartar a las proteínas.
• Las técnicas más comunes son las que utilizan geles y se clasifican
como:
• Una Dimensión
• Dos Dimensiones
• La electroforesis de una dimensión separa a las proteínas por una
sola propiedad, en cambio, la de dos dimensiones toma en cuenta
dos propiedades.
(Ali-ul-Qadir, 2013)

9. ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA CON DODECIL
SULFATO DE SODIO (SDS-PAGE)
• Este método separa a las proteínas
por masa
• El SDS es un detergente que rompe
los puentes di-sulfúricos de las
proteínas y al unirse a la proteína,
enmascara su carga y la convierte
uniformemente negativa
(Alberts et al, 2008)
(Ali-ul-Qadir, 2013)

10. • Al aplicarse la corriente eléctrica, las proteínas (ahora con una
carga negativa) comenzaran a viajar hacia al polo positivo.
• Las proteínas pequeñas podrán viajarán más rápido que las
proteínas de mayor masa y tamaño.
• Después de un tiempo, las proteínas quedaran agrupadas por su
tamaño.
(Ali-ul-Qadir, 2013)

11. ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA (PAGE) NATIVA
• Se lleva a cabo sin alguna sustancia que desnaturalice las
proteínas.
• Se separan de acuerdo a la diferencia en sus densidades de carga.
• Muchas proteínas se han demostrado seguir enzimáticamente
activas después del procedimiento, por lo tanto se utiliza
principalmente para la preparación de proteínas activas.
(Ali-ul-Qadir, 2013)

12. ENFOQUE ISOELÉCTRICO (IEF)
• Esta técnica se utiliza para separar a
las moléculas por las diferencias en
sus cargas eléctricas.
• Se genera un gradiente de pH basado
en el punto isoeléctrico de las
moléculas.
• El punto isoeléctrico se refiere al pH
en donde la molécula no posee una
carga eléctrica.
• Al final del procedimiento, las
moléculas en su punto isoeléctrico
formaran una banda fuerte.
(Ali-ul-Qadir, 2013)

13. BIBLIOGRAFÍA
• Alberts B., A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, P. Walter.
2008. Molecular Biology of The Cell, Fifh Edition. New York.
Garland Science Group.
• Ali-ul-Qadir S. 2013. Electrophoresis. Recuperado el 30 de mayo
del 2014 en: http://chem-
fuuast.weebly.com/uploads/1/2/8/9/12894433/presentation_on_
electrophoresis_by_dr_shah_ali-ul-qadir.pdf
• Prischmann J. 2010. Basics and Theory of Electrophoresis.
Recuperado el 9 de junio del 2014 en:
http://www.seedtechnology.net/docs/ELBasics2010.pdf
• Woodbury N. 2000. Electrophoresis. Recuperado el 9 de junio del
2014 en:
http://www.public.asu.edu/~laserweb/woodbury/classes/chm467
/bioanalytical/Electrophoresis.html