Presentación de Microbiología, Antecedentes y Metodoligia para la práctica de Embrión de Pollo, Fes Zaragoza, UNAM. Cualquier duda, aclaración , comentario y sugerencia favor de dejar su comentario .

1. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA Laboratorio de Microbiología General II Embrión de Pollo INTEGRANTES Luis Islas Jorge Martínez Rojas Hugo Ponce de León VeazNoemi Vargas Cisneros Berenice Vargas Olvera Mireya Equipo 3, 2752

4. Efecto citopático Se denomina efecto citopático a los cambios bioquímicos y moleculares, morfológicos y de viabilidad celular, visibles a microscopía óptica, causados durante el ciclo de replicación viral. Aunque todos los virus líticos producen efecto citopático, puede observarse una gran diversidad de manifestaciones

5. Efecto citopático La mayor parte de las observaciones del ECP se han realizado en células infectadas en cultivo, en las que se aprecia: pérdida de adherencia al sustrato, inhibición por contacto, redondeamiento celular, formación de sincitios, cuerpos de inclusión citosólicos, transformación celular, lisis, etc.

6. Lisis Es la conclusión del conjunto de alteraciones celulares que se producen, secuencial o simultáneamente en la célula infectada, liberando finalmente al medio las nuevas partículas virales.

7. Cuerpos de inclusión Muchos tipos de virus inducen la aparición de estructuras membranosas en el citoplasma, en algunos casos en forma de grandes vacuolas citoplasmáticas o pequeñas.

8. Sincicios Los sincicios son grupos de células fusionadas apreciables como una masa celular multinucleada

9. Transformación celular Es una alteración en el crecimiento normal de las células en cultivo con evidentes manifestaciones morfológicas. Se asocia a una serie de cambio moleculares y está especialmente ligada a virus que insertan su genoma en el de la célula infectada, pudiendo causar mutagénesis insercional al interrumpir antioncogenes o activar pro-oncogenes, o alterando la correcta regulación de la expresión génica celular.

10. Alteraciones bioquímicas Las alteraciones bioquímicas son muy diversas y específicas de cada virus, si bien pueden señalarse las más importantes a nivel general. Algunos virus son capaces de mostrar esta inhibición en etapas tempranas de la infección pero la mayoría de los virus animales lo hacen en etapas tardías. El efecto más drástico suele producirse en la inhibición de la expresión de proteínas celulares por traducción preferente o casi exclusiva de proteínas virales.

11. Alteraciones bioquimicas 1.- Inhibición de la síntesis de proteínas celulares 2.- Inhibición de la síntesis de DNA celular 3.- Inhibición de la síntesis de RNA celular

12. Alteraciones de las membranas celulares Cambios en la actividad de enzimas presentes en las membranas. Modificaciones en la funcionalidad del sistema vesicular. Aumento de la permeabilidad de la membrana plasmática.

13. Técnicas de Cultivo

14. Técnicas para el cultivo de virus Los sistemas celulares utilizados para propagar los virus en el laboratorio son: 1.Animales de experimentación 2.Embriones animales 3.Cultivos celulares artificiales

16. Poco usada

17. Se emplea únicamente cuando se trata de propagar virus cuya replicación en los otros sistemas no es posible.

18. Los animales más utilizados: monos, los cobayos y los ratones lactantes

20. los huevos fecundados se incuban hasta el momento de su inoculación que suele oscilar entre 6 y 14 días.

23. Líneas celulares continuas: Las más utilizadas para el diagnostico. Derivan de un tumor o de células normales que, después de cultivos repetidos, se transforman tanto que actúan como células derivadas de tumor, es decir, poseen un número anormal de cromosomas, Estas células pueden propagarse de manera indefinida.

24. Cultivos de linfocitos: Los linfocitos B se dividen y continúan la división de manera indefinida cuando están infectados por VEB. Esta característica es conocida como inmortalización y se puede aprovechar como marcador del aislamiento de VEB.Los linfocitos T crecen en presencia de una linfocina, IL-2, el descubrimiento de este fenómeno ha sido fundamental para el estudio de los retrovirus humanos (VIH y HTLV) que logran propagarse en cultivos celulares con la formación de células gigantes sincitiales.

26. Importancia La inoculación animal sigue siendo un método de gran valor para estudiar: La oncogénesis viral La patología de los padecimientos virales La respuesta inmune a los virus El efecto de los factores ambientales sobre infecciones virales

27. Cuerpo de Negri. Corpúsculos hallados por Negri en las células del sistema nervioso central de los animales muertos de rabia; son específicos de esta enfermedad. Se trata de reacciones de la célula contra el virus. No se hallan en los animales inoculados con la rabia experimental.

28. Cuerpos de Negri por Rabdovirus El virus de la Rabia en el cerebro de animales infectados produce Cuerpos de Negri de varias formas (menores de 1 micrómetro de diámetro, con masas redondas u ovales, y cintas de 2 a 10 micras de diámetro). Estos son inclusiones eosinofílicas intracitoplasmáticas formadas por agregados de nucleocápside en las neuronas de cerca de 50 a 80% de los humanos infectados.

29. Histopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaHistopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaVVV

32. Embrión de Pollo

33. EMBRIÓN DE POLLO Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).

34. EMBRIÓN DE POLLO Al morir, los vasos se desintegran y este yace fijo al polo superior del huevo. A medida que aumenta de tamaño disminuye el volumen de los líquidos extraembrionarios

35. CULTIVO VIRAL EN HUEVO EMBRIONADO UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación de algunas vacunas virales. Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación, según la vía de inoculación: Membrana corioalantoidea Cavidades alantoidea y amniótica Saco vitelino Intracerebral Endovenosa.

36. TIPOS DE VIRUS QUE SE PUEDEN INOCULAR EN EMBRION DE POLLO

37. Embrión de pollo

38. EMBRIÓN DE POLLO

39. Vías de Inoculación Selectividad que tienen algunos virus por determinados tejidos

40. Inoculación por saco alantoideo Con colorante se observa: liquido alantoideo, albumina y cámara de aire teñidos Liquido alantoideo: virus hemaglutinantes o producción de hemaglutininas Embrión de 9-12 días, inoculo de 0.1-0.2ml

41. Inoculación por saco alantoideo

42. Inoculación en saco amniótico Con colorante: líquido amniótico, cámara de aire Primoaislamiento de cepas de influenza Embrión de 7-15 días, inoculo de 0.1-0.2ml

43. Inoculación en saco amniótico

44. Inoculación en saco vitelino Con colorante: Saco vitelino, Cámara de aire Cultivo de clamidias y ricketsias Embriones de 5-8días, inoculo de 0.2-1ml

45. Inoculación en saco vitelino

46. Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA) Con colorante: membrana corioalantoidea Permite cuantificar aquellos grupos virales que producen lesiones localizadas Embrion de 10-12 días, inoculo de 0.1-0.5ml

47. Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA)

48. Embrión de pollo La infección puede producir una lesión tisular local conocida como pústula (característico de virus) A veces se inyecta el virus directamente en el embrión en desarrollo: IV, intraperitoneal, o intracerebral. Tambien influye: la dilución, la cantidad del inóculo, la temperatura y tiempo de incubación tras la inoculación

51. Metodología

52. Metodología

53. Metodología(Membrana corioalantoidea)

54. Metodología

55. Metodología (saco vitelino)

56. Metodología ( cavidad alantoidea)

57. Metodología (cavidad amniotica)

58. Bibliografía Jean D. Acton. «Virología». Interamerica. Mexico. 1977 pp. 13-17