Traducción al Español del articulo "Isolation of Artemisinin (Qinghaosu) from Artemisia Annua Growing in the United States", de los siguientes autores; Daniel l. Klayman,* Aij. Lin. Nancy Acton, John P. Scovill, James m. Hoch, Wilbur k. Milhous, Anthony D. Theoharide and Arthur S. Dobek

1. Aislamiento de Artemisinina(Qinghaosu)de Artemisia
Annua Cultivadaen los Estados Unidos
Daniel l. Klayman,* Aij. Lin. Nancy Acton, John P. Scovill, Jamesm. Hoch,
Wilbur k. Milhous, Anthony D. Theoharide
Division of Experimental Therapeutics , Walter Reed Army Institute of Research
and Arthur S. Dobek
Department of Clinical Investigation. Walter Reed Army Medical Center, Warhingron,
DC 20307
La hierba, Artemisia annua L., un miembro de la familia Compositae, se ha utilizado
durante muchos siglos en la medicina tradicional china. Ge Hong en el año 340 y Li
Shizhen en 1596 recomendaron la toma de una infusión acuosa de la planta para aliviar los
escalofríos y la fiebre de la malaria. En 1967, se inició una búsqueda en China de nuevos
medicamentos antimaláricos que pudieran obtenerse a partir de los remedios
tradicionales. Según estudios preliminares, el uso de las extracciones de A. annua con H2O
caliente o EtOH, no confirmaron las propiedades curativas de la planta. Después, sin
embargo, la extracción con Et2O proporcionó una fracción neutra que poseía una buena
actividad antimalárica en ratones infectados con Plasmodium berghei y en monos
infectados con Plasmodium cynomolgi. En 1972, el constituyente activo cristalino se aisló
de las partes aéreas de la planta con un rendimiento de 0,01 a ,5% en un procedimiento
aún no publicado. En 1979, se informó de su estructura (1), y al compuesto se le dio varios
nombres por los investigadores chinos, "artemisinina", "qinghaosu" (es decir, el principio
activo de qinghao), y "arteannuin". Esta lactona sesquiterpeno tiene una función peróxido,
la destrucción de lo cual elimina las propiedades antimalaricas del compuesto. La
artemisinina se ha utilizado para curar a más de 2000 pacientes de malaria infectados con
Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum y se dice que es eficaz contra el resistente a
la cloroquina P. falciparumal igual que la malaria cerebral. Muchos derivados de 1 han
sido preparados, algunos de los cuales superan los precursores en potencia antimalárica.
La síntesis de la artemisinina ha sido descrita recientemente.
1
Existe cierta confusión en cuanto al nombre chino correcto para A. annua. La mayor parte
de la literatura china actual se refiere a la planta como qinghao (hierba verde); Sin
embargo, Read y Ju-ch'iang denominaron a la A. annua, huang hua hao (hierba de flor
amarilla), mientras a la Artemisia apiacea se le denomina chin hao. Zhang, en 1981,
expresó su conformidad con los últimos nombres y declaró que es engañoso llamar a la A.
annua, "qinghao". Otra fuente se refiere a la Artemisia dracunculus como ch'ing hao.
Como la artemisinina tiene una estructura totalmente diferente de los antimaláricos
existentes, estábamos solicitando determinar hasta qué punto la A. annua que se
encuentra en los Estados Unidos contiene este constituyente. Por lo tanto, la planta, que
crece cerca como una mala hierba, se recogió y se secó con aire. Varios disolventes de bajo

2. punto de ebullición (por ejemplo, CH2C12, CHCI3, Et2O, Me2CO) extrajeron 1 fácilmente;
Sin embargo, el éter de petróleo (30-60 °) fue más selectivo y, por tanto, fue considerado
como el disolvente de elección. El tratamiento con CH3CN del extracto de éter de petróleo
eliminó gran parte de las ceras adjuntas, y además el fraccionamiento del extracto en gel de
sílice dio 1. En tanto que los hojas y/o flores secas cedieron 0,06% de artemisinina, los
tallos de la planta resultaron estar desprovistos del compuesto. Los chinos informaron que
un estudio de otras 30 especies de Artemisia (no identificado) no pudo descubrir ninguna
con propiedades antimaláricas. Examinamos diez especies que crecen en los Estados
Unidos por el procedimiento de extracción descrito anteriormente y de manera similar no
se encontró que ninguna contenga 1. A la vista de los informes anteriores de falta de
detección de actividad antimalárica en extractos de A. annua en EtOH, se analizó la
estabilidad de 1 hervida en este disolvente durante 48 horas. Se estima por tlc que aprox
20% de la muestra fue destruida por dicho tratamiento, como se indica por la aparición de
una nueva mancha en el origen. Además, hubo un ensanchamiento del pico de carbonilo a
1745 cm-1. El tratamiento de 1 con isoPrOH a temperatura de reflujo durante 48 horas, sin
embargo, condujo a la recuperación de material de partida sin cambios. La artemisinina se
ensayó en un sistema in vitro para actividad antimalárica contra cepas de P. falciparum
susceptibles a la cloroquina y resistentes a la cloroquina y mostraron una potente actividad
inhibidora comparable a la de metanol quinolina, mefloquina. En una pantalla
antibacterial, la artemisinina no ninguna actividad inhibidora hacia alguno de los
organismos Gram-positivos o Gram-negativos.
PARTE EXPERIMENTAL
GENERALIDADES DE LOS PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
Los puntos de fusión se determinaron en un aparato de punto de fusión Thomas Hoover y
están sin corregir. Los espectros IR se ejecutan en un espectrofotómetro Perkin-Elmer
Modelo 283 con pastillas de KBr. Los espectros pmr y cmr se ejecutan en CDCI, en un
espectrómetro JEOL FX90Q. La rotación óptica se determinó en un polarímetro Perkin-
Elmer Modelo 241MC. Los espectros de masas se obtuvieron en un Finnigan Modelo 3
Lood GC / MS funcionando en modo CI (CH4) utilizando la sonda sólida.
MATERIAL DE LA PLANTA
Las partes sobre el suelo de A. annua utilizados en este estudio se obtuvieron en Virginia,
Maryland y el Distrito de Columbia durante los meses de agosto y septiembre de 1983, y
fueron identificados por el Prof. Ted Bradley, George Mason University , Fairfax, Virginia.
El material adicional fue donado por la Sra Holly Shimizu del National Herb Garden, US
National Arboretum, Washington, DC. Las hojas y tallos fueron secadas con aire y se
extrajeron por separado. Las muestras de las especie Artemisia, es decir, A. pontica, A.
abrotanum, A. pychnocephala, A. versicolor, A. schmidtiana, A. absinthium, y A.
ludoviciana también fueron proporcionados por el US National Arboretum. A. tridentata
var. tridentata, A. tridentata var. vaseyana, y A. arbuscula fueron suministradas por el
Sr. Robert Fuller, Bureau of Indian Affairs, Fort Duchesne, Utah. Las muestras de A.
vulgaric se obtuvieron en Maryland en septiembre de 1983, y A. dracunculus fue
comprada localmente.
EXTRACCIÓN Y FRACCIONAMIENTO
Hojas secadas al aire de A. annua (200g) recogidas a principios de agosto de 1983, se
extrajeron con éter de petróleo hirviendo (punto de ebullición 30-60°) durante 48 horas.
La eliminación al vacío del disolvente dio un jarabe de color marrón oscuro que se disolvió
en 20 ml de CHCl3 y a esta solución se le añadió 180 ml de CH3CN. Se retiró el material
insoluble, y el filtrado se evaporó a presión reducida dando 4,5 g de residuo gomoso.

3. SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
El residuo se sometió a cromatografía sobre 200 g de gel de sílice de malla 70-230 usando
7,5% de EtOAc en CHCl3 como eluyente. El fraccionamiento se inició tras el paso de 200
ml de eluyente y las las alícuotas fueron controladas por TLC (placas de gel de sílice; 7,5%
de EtOAc en CHCl3; detección de 1 por vapor de I2; Rf = 0,66). La artemisinina apareció
después de la recolección de aproximadamente 300 ml de eluyente y se obtuvo (0,12 g,
rendimiento 0,06%) como cristales blancos finos, p.f 153-154° [p.f lit. 156-157°], después
de la recristalización en ciclohexano. La identidad de 1 fue confirmada por p.f comparativo,
espectro IR superponible, con una muestra auténtica de artemisinina. los espectros PMR y
CMR, y {α}D eran idénticos a los reportados. Espectro de masas m/z 283 (M+1); Calculado
(C15H22O5) 282. Una mezcla de hojas y flores de A. annua recogidos a principios de
septiembre 1983 secadas al aire, cuando se trataron de la manera descrita anteriormente,
también arrojaron 0,06% de 1.
La actividad antimalárica intrínseca de la artemisinina se evaluó cuantitativamente in vitro
utilizando la técnica de microdilución semiautomatizado esencialmente la de Desjardins y
col. En base a la concentración inhibitoria calculada del 50% (IC50), el compuesto 1 se
encontró que era igualmente eficaz (media IC50<3,4 ng/ml) contra aislados de P.
falciparum susceptibles a la cloroquina (Camp) y resistentes a la cloroquina (Smith).
Tenga en cuenta que la mefloquina presenta un IC50 medio de 3,5 ng/ml en la primera cepa
y 2,5 ng/ml en la segundo, mientras que la cloroquina, un IC50 de 7,6 ng / ml contra las
cepas Camp y un IC50 de 60 ng/ml frente a cepas Smith. La actividad antibacteriana de 1
contra organismos clínicamente relevantes se evaluó usando placas de microtitulación con
un procedimiento de microdilución en caldo Mueller-Hinton. En el tamiz fueron incluidos
los siguientes organismos Gram-positivos [número de cepas]: Staphylococcus aureus[5],
Streptococcus faecalis[5]; y los siguientes organismos Gram-negativos: Klebsiella
Enterobacter[7], Shigella dysenteriae[4], Escherichia coli[5], Serratia marcescens[8] y
Proteus spp[8]. La concentración mínima inhibitoria (MIC) en cada caso fue > 32µg/ml.
En el ensayo de Neisseria meningitidis[5], otro género Gram-negativo, el MIC fue > 1
µg/ml. N. gonorrhoeae[25], probado con un procedimiento de dilución en agar GC
suplementado, también tenía una CIM >1 µg/ml. La artemisinina parece fomentar el
crecimiento de N. gonorrhoeae.