1. TRABAJO FINAL DE ANALISIS INSTRUMENTAL INTEGRANTES: Adrián Rodríguez Diego Guamán Ángel Núñez TEMA: CROMATOGRAFIA HPLC Dr. Juan Marcelo Ramos Riobamba - Ecuador

2. INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA DEFINICION: La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil. La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentes velocidades con que se mueve cada una de ellas a través de un medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento.

6. Adsorción superficial

7. Partición

8. Intercambio iónico

10. La separación se logra por las diferencias en solubilidad (en fase móvil) y de retención por absorción (en fase estacionaria) de la mezcla de solutos.

11. Sílice (90%) y alúmina (10%) son las fases estacionarias más comunes.

13. La migración se produce por diferencias de solubilidad.

15. La separación se basa en el tamaño molecular. Como fase estacionaria se emplean sustancias porosas de un tamaño determinado. Se denomina también cromatografía de permeabilidad. Exclusión por Tamaño

16. ECUACIONES FUNDAMENTALES Constante de distribución: En general, los equilibrios de distribución implicados en cromatografía se describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de una analito entre las fases estacionaria y la móvil. Así, para el soluto A, se puede escribir: A movil A estacionario

17. La constante de equilibrio K para este proceso se denomina constante de distribución y mide la distribución del analito entre la fase móvil y la estacionaria Entonces tenemos: Donde: CS : Es la concentración molar del soluto en la fase estacionaria CM : Es la concentración molar del soluto en la fase móvil.

18. La resolución cromatográfica de una columna es una medida cuantitativa de su capacidad para separar sus analitos. Se la define como: Donde: WA y WB son la anchura de los picos A y B en el cromatógrafo TR: Es el tiempo que tarda en aparecer el máximo de un pico A partir de esto se deduce que si R> 1,5 la separación de los componentes es completa, no será así si R<1,5. -

19. PROCEDIMIENTO PARA UN ANALISIS CROMATOGRAFICO HPLC Parámetros a seguir:

20. 1.- El compuesto pasa por la columna cromatográfica a través de la fase estacionaria mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna.

21. 2.- La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna.(El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil.)

22. 3.- Después los componentes pasan por un detector que genera una señal (dependiendo de la concentración y del tipo de compuesto)

23. 4.- Se utilizará una bomba para impulsar a la fase móvil con velocidad y presión constante.

24. 5.- Luego llegan a las columnas en donde hay unos detectores que no hacen mas que indicar el momento de aparición de los distintos componentes que constituyen la muestra.

25. CARACTERISTICAS QUE DEBE TENER UNA FASE MOVIL (SOLVENTE)

26. BOMBAS UTILIZADAS EN UNA CROMATOGRAFIA HPLC Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar según su funcionamiento y diseño en:

27. REQUISITOS QUE DEBE TENER UNA BOMBA PARA UNA CROMATOGRAFIA HPLC

28. VENTAJAS de una cromatografía hplc La mas importante es la diversidad de sus aplicaciones, tanto en compuestos orgánicos como inorgánicos, Además:

29. DESVENTAJAS de una cromatografía hplc

30. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA HPLC La cromatografía líquida de alta presión a pesar de ser una técnica relativamente nueva, tiene numerosas aplicaciones en la química. En la mayoría de los casos, éstas consisten en determinaciones de sustancias cuyo análisis por otra técnica cromatografía resulta muy difícil.

31. Compuestos iónicos: como aminoácidos, sales inorgánicas, ácidos orgánicos, etc. Compuestos de alto peso molecular: como polímeros, hidrocarburos polinucleares, productos naturales, etc. Compuestos no volátiles: como vitaminas, pesticidas, esteroides, plastificantes, drogas y una parte muy grande de otros productos farmacéuticos.

33. Recomendaciones para adquirir un Sistema HPLC Dependerá de cuántas muestras y tipos de ensayos deban ser analizados. La facilidad para reemplazar los sellos de las bombas (mantenimiento). La exactitudes y precisión del sistema de bombas La suavidad y reproducibilidad de la mezcla

34. GRACIAS POR SU ATENCION