1. Metodología para los cultivos comunes: Tipos de cultivo en
microbiología clínica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo,
tracto respiratorio, genital, SNC, piel y heridas. Antibiograma.
Definición. Procesamiento.
Universidad Nacional de Trujillo
Facultad de Farmacia y Bioquímica- Dpto. Bioquímica Cátedra
de Bioquímica-Asignatura Análisis Clínicos
Docente:
MSc. Anabel González Siccha
Trujillo, 10 de Abril de 2014

2. Cultivos
 Son medios esenciales para determinar la
identidad, cantidad y patogenicidad de un
microorganismo.
 Secreción: es el proceso por el que una célula o
un ser vivo vierte al exterior sustancias de
cualquier clase. También se llama secreción a
la sustancia liberada. El acto de verter una
secreción se llama secretar.
 Ejemplo :
Secreción de heridas
Urocultivo

3. UROCULTIVO
•Es la determinación de elementos anormales,
observación del sedimento urinario y cultivos en medios
selectivos y diferenciales
RECOMENDACIONES
•El paciente no debe haber recibido antibióticos por lo
menos cinco días antes del examen.
•El recolector puede estar como máximo 30’ instalado,
mas tiempo, la muestra se considera contaminada.
MATERIALES
Muestra de orina ( torunda de algodón, Sol salina, frasco
recolector), Microscopio, Placas de Agar, agar-sangre,
Asa de siembra.

4. UROCULTIVO
Determinación
Volumen
(ml)
Comentarios
BACTERIAS 0.5-1
PRIMERA ORINA DE LA
MAÑANA
HONGOS > 20
PRIMERA ORINA DE LA
MAÑANA
MICOBACTERIAS > 20
PRIMERA ORINA DE DIAS
CONSECUTIVOS
ANAEROBIOS 1
ASPIRADO SUPRAPÚBICO,
ENVIAR EN UN SISTEMA DE
TRANSPORTE PARA
ANAEROBIOS
PARÁSITOS ORINA DE 24 HORAS

5. UROCULTIVO
 METODO
 Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra
calibrada, es decir q cada asada suministre 0,01 o
0,001 ml de orina.
 Sembrar la orina por dispersión-agotamiento con una
asa de siembra, sobre una placa de agar sangre y otra
sobre una placa de agar Mac Conkey.
 Rotular e incubar a 37ºC.

6. UROCULTIVO
Lectura e Interpretación
Detallar las características de las colonias en el
medio
Seleccionar colonias y resembrar en los medios de
diferenciación bioquímica (citrato, urea)
Se interpreta de acuerdo a las Rx bioquímicas
Para conocer el número de microorganismos en 1
ml de orina, se cuentan las colonias y el resultado
se multiplica x 100, si se uso asa de 0,01 ml.
(0,001ml x 1000).
Si el # de colonias sobrepasa el # de 100 000
bacterias/ ml de orina, al informar no interesa
precisar el # exacto de bacterias, sólo debe

7. Negativo
(contaminación)
De 0 – 10 000 bacterias por ml
de orina
Dudoso, discutible ( debido al
tiempo de envío de la muestra
al laboratorio)
De 10 000 – 100 000 bacterias
/ ml de orina
Positivo: Indica infección
urinaria
Recuento superior a 100 000
bacterias/ ml de orina
Lectura e Interpretación
En la orina infectada puede encontrarse:
•E. coli, P. aeruginosa, Enterococo, Citrobacter, Klebsiella
•Se acepta un recuento superior de 100,000 bacterias/ ml de
orina, indica infección de las vías urinarias.

8. COPROCULTIVO
•Se toma muestra para identificar parásitos y otros
microorganismos que causan diarrea, para valorar la
función intestinal y para investigar la posibilidad de
sangre oculta.
•Recomendaciones
•Se el análisis cuando presenta prurito anal, dolor
abdominal y diarreas.
•Cada muestra debe contener por lo menos 4 ml (
necesaria para facilitar la detección de parásitos cuando
se encuentran pocos concentrados). Los niños que
controlan su evacuación deben orinar y luego defecar
en el recipiente.
•No se debe dejar las muestras expuestas al aire en
recipientes sin tapa. No dejar muestras para

9. COPROCULTIVO
• MATERIALES :
• Recipientes
indicados, hisopo
rectal estéril, cinta
adhesiva
transparente 12 x 1
cm (huevos oxiuros)
• METODO
• 1) Examen
parasitológico: Test
de Graham

10. COPROCULTIVO
2) Examen bacteriológico
 Usar un recipiente estéril para la muestra.
 Se debe recolectar antes de la administración de
cualquier antibiótico
 En niños y en paciente con problemas, se usa un
hisopo embebido en el medio de transporte y se
introduce en el recto en unos 3 cm, se toma la
muestra rotando y por movimiento circular para
arrastrar la deposición.
 Se coloca la muestra en un tubo estéril con medio
de transporte y se corta la porción sobrante del
palo del hisopo y se ajusta fuertemente la tapa del

11. COPROCULTIVO
Lectura e Interpretación
Se puede identificar: helmintos, huevos o
larvas de helmintos, protozoarios , quistes de
flagelados y ciliados ( Giardia lamblia,
Balantidium coli)
En estado primario de la enfermedad
(salmonella y shiguella) se encuentran el  cc
en período agudo.
En heces con moco: Giardia lamblia.
Los coprocultivos se piden en toda diarrea
desinteriforme, máxime si cursa con respuesta
inflamatoria sistémica o si hay pus o sangre

12. HUEVO DE ASCARIS EN
HECES
HUEVO DE TENIA EN
HECES
HUEVO DE TRICHURIS
TRICHURA
ADULTO DE ECHINOCOCCUS

13. HEMOCULTIVO
•Es la prueba más útil y más frecuentemente usada para
demostrar la presencia de microorganismos en la sangre.
•Consiste en obtener sangre en asepsia y añadirla a un
frasco q contiene un medio de cultivo elegido para aislar
un determinado microorganismo.
Recomendaciones
•Deben obtenerse, antes que el paciente reciba terapia
antimicrobiana.
•Tomar la muestra cuando el paciente esta con T elevada.
•Se requiere un mínimo de tres hemocultivos seriados por
pacientes antes de considerar el caso como negativo.
•El medio: corazón cerebro con agar (aerobias y
anaerobias), tioglicolato (b. anaerobias)

14. HEMOCULTIVO
 METODO
 Se extrae sangre del pliegue del codo en forma
aséptica
 Sembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantidad
posible)
 El medio de elección se calienta a 37ºC en una
estufa de cultivo, y se flamea el tapón para destruir
los microorganismos contaminantes en la
superficie.
 Para llevar el frasco a la cabecera del paciente se
cubre el tapón con un algodón con alcohol.
 Obtenida la muestra de sangre, se retira el algodón

15. HEMOCULTIVO
Lectura e Interpretación
Examinar el frasco diariamente durante la primera
semana para detectar la aparición de turbidez en el
medio, hemólisis, signos de producción de gas o
crecimiento de colonias directamente encima de la
sangre.
Si los cultivos son negativos deben seguir en
observación hasta por 21 días antes de informarse
como negativos.
Los hemocultivos “visualmente positivos” (turbidez)
deben teñirse por el método de Gram y subcultivarse
(resiembra)
Retirar un gota del hemocultivo utilizando una

16. Las secreciones que pueden determinarse son
entre otras:
• Tracto Respiratorio:
• Óticas: conducto auditivo externo
• Vaginal : conducto cervical
• Uretral
• Exudados etc.
Materiales:
Hisopos de algodón estéril
Tubos de ensayos con medio de cultivo
Asa bacteriológica estéril de alambre delgado
Tubo como medio de transporte
Solución fisiológica
Secreciones

17. Tracto Respiratorio: Muestras
Tracto
Respiratorio
Superior
Tracto Respiratorio
Inferior
MUESTRAS
EXTRAPULMONAR
ES
Faringo-
amigdalino
Esputo, Esputo inducido Líquido pleural
Nasofaringe Aspirado
traqueobronquial
Biopsia pleural
Nasal:
Staphylococcus aureus.
Punción transtraqueal Hemocultivo
Senos
paranasales
Muestras obtenidas a
través de
fibrobroncoscopia

18. Tracto Respiratorio
Método
•Se obtiene la
secreción faríngea.
•Paciente sentado, abre
la boca, baja la lengua
y dice Ahhh.
•Introduce el hisopo
evitando tocar la
lengua, úvula
•Introduce el hisopo con
la secreción en el
medio de cultivo
Ejemplo:

19. •El frotis faríngeo es un importante test para
diagnosticar y tratar con una gran precisión las
infecciones que causan los dolores de garganta,
además puede prevenir la transmisión de estas
enfermedades de una persona a otra.
•Por ejemplo:
•Coco gram(+) Streptococcus beta-hemolítico (S.
pyogenes). (Agar sangre-azida)
•Neisseria gonorrhoeae, A. haemolyticum, C. diphteriae
y H. influenzae (Epiglotitis (Agar Chapman)
•Enterobacterias: Agar Mc Conkey
•Levaduras.
Tracto Respiratorio

20. Secreción Ótica
Método:
•Si la pus sale al exterior,
es preferible eliminarlo
con algodón estéril.
•Introduce el hisopo en el
CAE, en dirección
oblicua de atrás hacia
delante y de abajo hacia
arriba.
•Introduce el hisopo con
la muestra en el tubo
estéril.

21. Secreción Vaginal
Método:
•La muestra es tomada del C.
cervical.
•En gonorrea: antes o inmediat
después de la menstruación.
•Coloca al paciente en posición
ginecológica, entreabrir la
vulva
•Introducir el espéculo
humedecido en agua tibia en
la vagina, no usar lubricante.
•Visualizar el cuello uterino•Introducir el hisopo estéril dentro del canal cervical
rotándolo suavemente y en un tiempo de 10 a 30 seg,
retirar y colocar en el tubo estéril.

22. Secreción Uretral
Método:
•Se toma la muestra a primera hora de
la mañana, antes q el paciente haya
orinado
•Limpiar el meato con algodón
humedecido en sol. salina estéril.
•Aplicar al pene una ligera presión
desde atrás, de manera que salga una
gota de secreción (pus) por el meato.•Si la gota no aparece, introducir el hiposo estéril en el C.
uretral anterior hasta una profundidad de 2,5 cm aprox.
para obtener la muestra. Tomar la pus con el hisopo o asa
e introducir en el tubo con medio de transporte.
Ejem:Neiseria (Agar Thayer-Martin), Levadura (Agar-

23. Exudados y/o heridas
Método:
1)Muestra de Fluidos
•Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón
•Pápula/alcohol/agua oxigenada/sol fisiológica
•Inyectar, aspirar el contenido, y retirar la jeringa
•Se inocula II a III gotas del material aspirado en
tubos de medio de cultivo.
2)Muestra de Frotis
•Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón,
desinfectar alcohol
•Presionar con firmeza los bordes de la lesión hasta q
palidezca: en el borde interno, hacer una incisión con
bisturí, levantando la piel, secar la sangre y raspar el

24. Líquido Cefalorraquídeo
 El LCR es un líquido producido en los ventrículos,
que son los espacios que hay dentro del SNC.
 En los ventrículos hay una estructura especializada
que son los Plexos Coroideos donde se produce el
LCR.
 Circula en el espacio que rodea a la médula espinal y
el encéfalo
 Se produce y se reabsorbe continuamente a una
velocidad de 500 mL / día. Su volumen permanece
constante en situaciones fisiológicas.

25. Estudio químico del líquido
cefalorraquídeo
 El estudio de química del LCR identifica químicos,
tales como las proteínas y los niveles de glucosa, que
pueden ayudar a diagnosticar ciertos trastornos y
enfermedades.
 Llamado también Química del LCR.

26. Forma en que se realiza el examen
 Una punción lumbar (espinal) es el medio más
común para recolectar una muestra de LCR y
generalmente se realiza de la siguiente manera: se
le solicita al paciente que se acueste de lado con las
rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla
pegada al tórax.
 Se inyecta anestesia local en la parte inferior de la
columna. Se inserta la aguja espinal generalmente
entre la tercera y cuarta vertebra lumbar y se extrae
el líquido para evaluarlo.
 El paciente debe permanecer en posición horizontal
o casi horizontal durante por lo menos seis u ocho
horas después del examen.

28. Forma en que se realiza el examen
 Si el paciente presenta un problema como deformidad lumbar
o infección, imposibilita la punción lumbar o hacerla no
confiable.
 La punción cisternal implica la inserción de una aguja
debajo del hueso occipital (parte posterior del cráneo). Esto
puede ser peligroso porque la aguja se inserta cerca del
tronco encefálico.
 La punción ventricular es aún menos común, pero se puede
recomendar cuando es necesario obtener la muestra de LCR
en personas con posible hernia cerebral inminente. Se realiza
generalmente en el quirófano. Se perfora un orificio en el
cráneo y se inserta una aguja directamente en el ventrículo
lateral del cerebro.
 Posteriormente se lleva el LCR al laboratorio para su

29. Conteo de células de LCR
 Valores normales
 El valor normal de glóbulos blancos está entre 0 y 5.
 El valor normal de glóbulos rojos es 0.
 Significado de los resultados anormales
 Un aumento en el conteo de leucocitos indica infección,
inflamación o sangrado dentro del líquido cefalorraquídeo.
Algunas de las causas son:
 Absceso ,Infección aguda, Encefalitis , Hemorragia,,Esclerosis
Múltiple, Meningitis, ACV hemorrágico, Tumor,
 Afecciones adicionales que este examen puede ayudar a Dx
abarcan:
 Malformaciones arteriovenosa (cerebral), Delirio, Aneurisma
cerebral, Demencia,
 Sindrome de Guillain-Barré, Epilepsia, Neurosífilis, Linfoma

30. Cultivo de LCR
 Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos en el
LCR causantes de infección.
 El LCR es un líquido claro que transporta productos de
neurosecreciones (químicos liberados por el tejido neural),
nutrientes, químicos en las células y cambios químicos en las
mismas.
 El LCR generalmente se obtiene a través de una punción
lumbar (espinal).
 El cultivo se realiza en el laboratorio.
 El microbiólogo lo examina todos los días y en caso de
presentarse crecimiento (un "cultivo positivo"), se identifican los
microorganismos y se verifica la susceptibilidad a los
antibióticos, permitiendo la mejor selección de éstos.
 Valores normales: Es normal la ausencia de crecimiento de

31. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Meningitis bacteriana

32. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

33. ANTIBIOGRAMA
Definición:
•Es el procedimiento por el cual se determina el grado de
resistencia de una bacteria al antibiótico.
•Consiste en poner en contacto al germen que hemos
cultivado con distintos antibióticos para ver cual de ellos
es el que mejor va con el tratamiento (selección del mejor
antibiótico).
•Se cultivan en “discos” los cuales son unos receptáculos
circulares con sustancias que favorecen el crecimiento de
los microorganismos, pero al mismo tiempo contienen
cada uno de ellos, un antibiótico conocido.
•En resumen:
•Se hace un antibiograma para ver que microorganismo
ha provocado la enfermedad y como podremos

34. Método:
•Se distribuye sobre una placa el
microorganismo previamente cultivado, en
forma uniforme y abundante con una asa de
siembra.
•Colocar los discos sobre este medio sólido
con pinzas estériles, dejando 2 cm entre
cada uno de ellos.
•Llevar a la estufa e incubar a 37ºC durante
12 – 18 horas.
ANTIBIOGRAMA

35. Antibiograma. Técnica del disco en medio sólido

36. Lectura:
•Se observan las zonas de inhibición ( donde no
crecen los microorganismos) alrededor de los
discos ( halo claro) que deben ser medidas con una
regla en mm, en la parte exterior y reversa de la
placa
•Una zona de inhibición indicará sensibilidad o
resistencia del antibiótico, según las medidas
obtenidas en mm.
•Se utilizan discos para determinados
microorganismos, según sean muestras de:
hemocultivo, urocultivo , coprocultivo y/ o
ANTIBIOGRAMA

37. Modo de acción Antibióticos
Inhibición de síntesis de la
pared
Penicilina,Bacitracina,
Novobiocina
Cicloserina,,Vancomicina,
Ristocetna,Grriseofulvina
Acción sobre la membrana Polipéptidicos básicos:
Polimixinas, Bacitracina
Tirotricina
Replicación del DNA Mitomicina, Acido nalidixico
Transcripción del DNA Actinomicina, Novobiocina
Traducción del RNAm
(síntesis de proteínas)
Inhibición de la síntesis
anomalías en la lectura del
código
Macrolidas, Sinergistina,
Lincomicina
Tetraciclina,Cloranfenicol etc.

39. Referencias Bibliográficas
 GAW A, COWAN RA, O’REILLY D, STEWART MJ Y
SHEPHERD J. (2006): Bioquímica Clínica. 2ª Ed.
Editorial Harcourt - Elsevier, España.
 http://perso.wanadoo.es/sergioram1/Microbiologia.htm
Muchas Gracias