El documento resume la historia de la ingeniería genética y la biotecnología desde 1919 hasta 2003, destacando hitos clave como la primera lectura de un gen completo en 1965, la creación de la primera compañía de biotecnología Genentech en 1976, el nacimiento del primer bebé probeta en 1978, y el completamiento del proyecto del genoma humano en 2003. Describe técnicas fundamentales como la tecnología del ADN recombinante, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), y la secuenciación del ADN.

1. INGENIERÍA
GENÉTICA
Y
BIOTECNOLOGÍA

2. Historia
1919: Karl Ereky, ingeniero húngaro, utiliza por primera vez la palabra
biotecnología.
1965: El biólogo norteamericano R. W. Holley «leyó» por primera vez la
información total de un gen de la levadura compuesta por 77 bases, lo que
le valió el Premio Nobel.
1970: el científico estadounidense Har Khorana consiguió reconstruir en el
laboratorio todo un gen.
1973: Se desarrolla la tecnología de recombinación del ADN por Stanley
Cohen, y Herbert Boyer.
1976: Har Khorana sintetiza una molécula de ácido nucleico compuesta por
206 bases.
1976: Robert Swanson y Herbert Boyer crean Genentech, la primera compañía
de biotecnología.
1978: Nace Baby Louise, el primer bebé concebido mediante fecundación in
vitro.
1981: Primer diagnóstico prenatal de una enfermedad humana por medio del
análisis del ADN.
1982: Se crea el primer ratón transgénico (el "superratón"), insertando el gen
de la hormona del crecimiento de la rata en óvulos de ratona fecundados.

3. 1982: Se produce insulina para humanos, la primera droga derivada de la
biotecnología.
1983: Se aprueban los alimentos transgénicos producidos por Calgene. Es la
primera vez que se autorizan alimentos transgénicos en Estados Unidos.
1983: Se inventa la técnica PCR, que permite replicar (copiar) genes
específicos con gran rapidez.
1985: se utiliza por primera vez la "huella genética" en una investigación
judicial.
1986: Se autorizan las pruebas clínicas de la vacuna contra la hepatitis B
obtenida mediante ingeniería genética.
1990: primer tratamiento con éxito mediante terapia génica en niños con
trastornos inmunológicos ("niños burbuja").
1990: fundación del Proyecto Genoma Humano.
1996: se completa la secuencia del genoma de un organismo eucariótico, la
levadura cervecera "Saccharomyces cerevisiae".
1997: Clonación del primer mamífero, una oveja llamada "Dolly".
2003: Cincuenta años después del descubrimiento de la estructura del ADN,
se completa la secuencia del genoma humano.

4. • La ingeniería genética puede definirse como
un conjunto de técnicas, nacidas de la Biología
molecular, que permiten manipular el genoma
de un ser vivo.
• La ingeniería genética es una técnica que
consiste en la manipulación, modificación e
introducción de genes en el genoma de un
individuo que carece de ellos.

5. La ingeniería genética incluye un conjunto de
biotécnicas, entre las que destacan:
1. la tecnología del ADN recombinante: con la que es
posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un
organismo para introducirlo en otro.
2. la reacción en cadena de la polimerasa (PCR): con la
que se consigue aumentar el número de copias de un
fragmento determinado de ADN, por lo tanto, con una
mínima cantidad de muestra de ADN, se puede
conseguir toda la que se necesite para un determinado
estudio.
3. La secuenciación del ADN: Técnica que permite saber
el orden o secuencia de los nucleótidos que forman
parte de un gen.

6. TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA
A) TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTEA) TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE: permite aislar un fragmento
de ADN de un organismo (transgén) e insertarlo en el ADN de otro
organismo que puede ser de otra especie.
• Esta técnica permite la obtención de transgénicos: organismos que portan
genes de otra especie
Molécula A Molécula B
Digestión de ambas moléculas con la
misma enzima de restricción, BamHI
Mezclar
Tratar con ADN-ligasa
ADN recombinante
Extremos
cohesivos

7. Las enzimas de
restricción son
ENDONUCLEASAS
(tijeras moleculares).
Cortan el ADN:
– Cada enzima reconoce
una secuencia de
nucleótidos y corta en
ese punto cada cadena
de ADN.
– Los extremos libres son
pegajosos porque
pueden unirse a otros
fragmentos cortados por
las mismas enzimas de
restricción
Las enzimas de restricción son capaces de "cortar"
el ADN en puntos concretos.
La unión del ADN procedente
de dos orígenes distintos
produce una molécula de
ADN recombinante

9. La síntesis de insulina humana a partir de bacterias o
levaduras, para ello se incorpora a estos microorganismos el
gen humano que codifica la síntesis de esta proteína

10. B) REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA, TÉCNICA PCRB) REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA, TÉCNICA PCR
• Permite obtener grandes cantidades de ADN a partir de una muestra muy pequeña
Aplicaciones:
• Obtención de cantidad suficiente de ADN para su secuenciación (leer el
orden de las bases nitrogenadas) y poder determinar si existe alguna
mutación o simplemente conocer la disposición normal de las bases (se
utiliza en el estudio de los genomas)
• Análisis de ADN fósil
• Estudios de parentesco evolutivo: el grado de similitud en el ADN permite
establecer relaciones de parentesco entre especies
• Identificación de especies
• Determinación de huellas genéticas, permite obtener suficiente cantidad de
ADN a partir de muestras pequeñas (gotas de sangre, semen, bulbo de
cabello, restos de piel) para poder realizar estudios comparativos
(investigaciones policiales, medicina forense, pruebas de paternidad)

11. Es un proceso cíclicoEs un proceso cíclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)(cada ciclo consta de 3 pasos)
94ºC desnaturalización (separación94ºC desnaturalización (separación
de las dos hebras dede las dos hebras de ADNADN))
50ºC Anillamiento de "cebadores"50ºC Anillamiento de "cebadores"
72ºC copia de cada una de las72ºC copia de cada una de las
hebras dehebras de ADNADN por lapor la ADNADN
polimerasapolimerasa
En 1983 Kary Mullis da a conocer esta técnica y en 1993
recibió el Premio Nobel de Química por este
descubrimiento

12. UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
Así se realiza la técnica PCR
Enfriamiento
Enfriamiento
Calentamiento
Calentamiento
ADN polimerasa
Nucleótidos
Nucleótidos
ADN polimerasa
El fragmento de ADN que se
desea amplificar se calienta
para que las dos hebras se
separen.
Las hebras separadas se
enfrían y se tratan con
ADN polimerasa y
nucleótidos para formar las
cadenas complementarias
de cada hebra de ADN.
Se inicia un nuevo
ciclo en el que los
fragmentos de
partida son los dos
fragmentos de ADN
formados en el ciclo.
Se forman las
cadenas
complementarias de
ADN de las hebras
separadas. Después de 20 ciclos de este proceso, se logra
disponer de más de un millón de copias de la
molécula.

13. C) SECUENCIACIÓNC) SECUENCIACIÓN
• Consiste en poder determinar la secuencia de nucleótidos (de bases
nitrogenadas) de un fragmento de ADN
• Permite identificar posibles mutaciones diagnosticar enfermedades
asociadas a estas mutaciones: DIAGNÓSTICO MOLECULARDIAGNÓSTICO MOLECULAR
• El diagnóstico molecular permite diagnosticar la enfermedad antes de que
se manifieste clínicamente lo cual puede permitir un mejor control de la
misma.
• Se utiliza en el diagnóstico prenatal, en el consejo genético y en la
selección de embriones para evitar enfermedades hereditarias
• En investigación forense, por ejemplo, identificación de individuos o en
pruebas de paternidad.
• En medio ambiente, por ejemplo, para la identificación de especies
animales y vegetales, la conservación de recursos genéticos animales, la
identificación de organismos genéticamente modificados, la identificación de
especies bacterianas

14. Secuenciación de ADN: método Sanger
1. Este método utiliza didesoxirribonucleótidos,
cuya incorporación a la secuencia de ADN
provoca la terminación de la cadena, ya que no
se puede añadir ningún ribonucleótido más al
extremo en el que se incorporan.
2. Como primer requisito se necesita un gran
cantidad de la muestra, por lo que es necesario
clonar el fragmento de ADN seleccionado. A
continuación, se desnaturaliza el ADN y se
obtienen cadenas simples que se incuban en un
tubo de ensayo junto con el resto del material.
3. Se inicia la síntesis de nuevas cadenas de ADN que utilizan
como molde el ADN que se quiere secuenciar. Las cadenas
incorporan un desoxirribonucleótido por azar e interrumpen su
síntesis. Al realizar miles de copias se obtienen múltiples cadenas
de longitud variable, que se diferencian en un nucleótido.
Al identificar los
desoxirribonucleótidos
terminales de las
cadenas se puede “leer”
la secuencia de
nucleótidos del fragmento
de ADN analizado.

15. Cuatro tubos diferentes con:
Polimerasa
dATP, dCTP, dTTP y dGTP
Un solo didesoxi marcado
(ddATP)
Se forman fragmentos de distinto
tamaño terminados en A
Los fragmentos de ADN obtenidos se separan por tamaños con electroforesis
Cada una de las cuatro muestras se insertan en un carril diferente del gel

17. Clonación.
Clonar es hacer una copia idéntica de un
organismo.
Clonar es hacer una copia idéntica de un
organismo.
Se hace con fines
ReproductivosReproductivos TerapéuticosTerapéuticos
Tiene como
finalidad obtener
organismos
idénticos
Tiene como
objetivo curar
enfermedades y
regenerar tejidos

18. Clonación reproductiva: Dolly
El equipo de Ian Wilmut, del Instituto Roslin de Edimburgo
comunicó en 1997 que habían logrado una oveja por
clonación a partir de una célula diferenciada de un adulto.
Esencialmente el método (que aún presenta una alta tasa de
fracasos) consiste en obtener un óvulo de oveja, eliminarle
su núcleo, sustituirlo por un núcleo de célula de oveja adulta
(en este caso, de las mamas), e implantarlo en una tercera
oveja que sirve como “madre de alquiler” para llevar el
embarazo. Así pues, Dolly carece de padre y es el producto
de tres "madres": la donadora del óvulo contribuye con el
citoplasma (que contiene, además mitocondrias que llevan
un poco de material genético), la donadora del núcleo (que
es la que aporta la inmensa mayoría del ADN), y la que
parió, que genéticamente no aporta nada.

19. célula de ubre de la
oveja A
óvulo no fecundado de
la oveja donante
eliminación del núcleo ( ADN)
del óvulo
fusión entre la célula de la
oveja A y el óvulo no
fecundado sin núcleo
desarrollo del embrión (in vitro)
implante del embrión
en el útero de una
oveja receptora
Dolly (clon de A)
Oveja adulta A Oveja adulta donante
Oveja adulta receptora
Clonación de animales

20. 1. Los investigadores cogieron
células de la glándula mamaria
de una oveja adulta.
2. Cogieron óvulos no fertilizados
de otra oveja y les extrajeron en
núcleo.
3. Insertaron 277 núcleos de la
células adultas en otros tantos
óvulos. Sólo 29 sobrevivieron.
4. Los 29 óvulos se implantaron en
el útero de 13 ovejas nodrizas.
Sólo una quedo preñada y parió
a Dolly

21. Dolly (1997-2003), la
primera oveja obtenida
por clonación a partir de
células adultas

22. Un laboratorio de Texas clona al primer animal doméstico
"Copycat" es el primer gatito nacido mediante clonación"
El experimento abre las puertas de la clonación
masiva de animales domésticos, un fin sin
explorar cuya sola posibilidad había
desencadenado ya el almacenamiento de células
de mascotas por parte de sus ricos propietarios
En España se clona al primer toro de lidia

23. a) Aplicaciones médicas
– Producción de sustancias con efecto terapéutico.
- Técnicas de diagnóstico clínico.
- Terapia génica.
- Trasplantes de órganos.
b) Aplicaciones agropecuarias.
– Plantas transgénicas. Alimentos transgénicos.
– Animales transgénicos.
c) Otras
– Aplicaciones de la PCR y otras técnicas para clonar genes,
hacer estudios evolutivos, arqueológicos, forenses...
– Industria alimentaria:aditivos alimentarios,
– En el medio ambientedetección de fraudes, elaboración de
productos lácteos y vinos...
Aplicaciones de la ingeniería genética

24. Microorganismos transgénicos
Producción de alimentos
Eliminación de basuras
Obtención de materias primas para la industria
Descontaminar lo que las industrias han contaminado
Animales de granja
(cerdos, ovejas, borregos)
"biorreactores“ de proteínas terapéuticas humanas en
su leche (antitripsina, factor VIII de coagulación…)
Plantas transgénicas "nueva revolución verde“
Resistentes a sequías, a herbicidas o a plagas de insectos,
Maduración tardía o con características para mantener el color y
sabor después de congelación
Ejemplos : algodón, la soja, la papa, el tomate y al maíz
ORGANISMOS TRANSGÉNICOS

25. UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
Obtención de medicamentos por ingeniería genética
UNIDAD
4
Plásmido
con gen
insertado
Células
embrionarias
Vaca receptora Vaca transgénica Vaca transgénicaEl gen del factor VIII, procedente
de células humanas, se inserta
en un plásmido.
El plásmido se
inserta en células
embrionarias de
una vaca.
Los embriones se
implantan en una
vaca receptora.
Tras el desarrollo del embrión, nacerá
una vaca transgénica que portará el
gen del factor VIII en sus células.
Cuando la cría
crezca, de su leche
se podrá obtener el
factor VIII.

26. Mansa (nació en 2002)
Primera ternera clonada y transgénica. Produce
la hormona de crecimiento humana en la leche

27. Terneros clonados y manipulados genéticamente (fábrica de anticuerpos humanos)
Clonan terneros en EE UU para producir anticuerpos humanos
Clonan cerdos destinados a trasplantar sus órganos a humanos
La empresa escocesa PPL Therapeutics
logra retirar de los cerditos el gen que
provoca el rechazo en transplantes a
humanos "alfa 1,3 galactosil transferasa"

29. Un Ingeniero Genético natural , un vector natural es:
Agrobacterium tumefaciens
Esta bacteria, presente en el suelo, es patógena
de muchas plantas a las que produce un tumor
conocido como "agalla de cuello". Penetra en los
tejidos vegetales causando una proliferación
celular.

30. Durante el contacto con
las células vegetales la
bacteria transfiere a las
células vegetales un
plásmido llamado Ti
(inductor de tumores).
Este plásmido se integra
en el ADN del
cromosoma de la célula
vegetal.
Si en el plásmido Ti se eliminan artificialmente los genes onc
de la Región vir y se sustituyen por otros genes que interés
para clonar, se habrá obtenido un sistema muy eficaz para
introducir ADN interesante a la planta, al mismo tiempo que se
habrá evitado la aparición de la enfermedad.

31. • Obtención de alimentos medicamento
mejora vegetal
• Resistencia al glifosfato herbicida no selectivo, con
gen de E. coli resistente, clonado e incorporado
• Resistencia a plagas, con toxina de Bacillus turingiensis
• Resistencia a virus, con proteínas de la cápsida de
dicho virus

32. • Mejora del producto (alimentos)
• Arroz transgénico –arroz dorado- con
βcaroteno (vit A)

33. LA BIOTECNOLOGÍA Y LAS ENFERMEDADES GENÉTICAS
Enfermedades
genéticas
hereditarias
Cromosómicas: Se producen por un cambio que
afecta a cromosomas completos o a fragmentos
Síndrome de Down (trisomía 21)Síndrome de Down (trisomía 21)
Pueden ser heredadas o causadas por problemas en la
formación de gametos
Pueden ser heredadas o causadas por problemas en la
formación de gametos
Monogénicas: Los cambios están en un único
gen que se hereda como cualquier característica
Fibrosis quística: Alelo mutante
recesivo en el cromosoma 7
Fibrosis quística: Alelo mutante
recesivo en el cromosoma 7

34. APLICACIONES
Obtención de productos
farmacéuticos
Medicina forense
Diagnóstico de
enfermedades
Terapia génica
Insulina
Interferón
H. De crecimiento
Factor VIII
Marcadores genéticos
Huella genética
Detección en personas o
fetos enfermedades
hereditarias por técnicas
de ADN recombinante
Inserción de genes funcionales
para corregir un defecto genético
En células somáticas
En células germinales

35. Las enfermedades genéticas debidas a un solo gen defectuoso
ascienden a más de 4000, de las cuales 345 afectan al
cromosoma X, por lo que serán transmitidas a los niños
varones, si su madre posee uno de esos defectos genéticos.
La terapia génica está siendo considerada la cuarta revolución
de la medicina (después de las medidas de salud pública, la
anestesia, y las vacunas y antibióticos). Para su aplicación se
siguen dos estrategias:
a) Insertar una copia sana de un gen en las células del
paciente con una enfermedad genética, para compensar el
efecto del gen defectuoso ( esto se consiguió con una niña que
tenía una inmunodeficiencia grave).
b) Introducir un gen especialmente diseñado para que
proporcione una nueva característica a las células (por
ejemplo, introducir en linfocitos un gen que produzca un
inhibidor del virus del sida en pacientes afectados por el VIH).

37. UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7
UNIDAD
7 Las terapias génicas
Transferencia del gen normal in vivo Transferencia del gen normal ex vivo
Vector (virus)
Vector (virus)
Células del paciente
Células del paciente
con el gen deseado
Se cultiva un
vector,
que portará el gen
deseado.
El gen se introduce
directamente a través
de un vector.
Se extraen
células del
paciente.
Se prepara un
vector que portará
el gen deseado.
Las células con el gen
se introducen de nuevo
en el paciente.
El gen se
introduce en
las células del
paciente a través
del vector.

38. 1 Cultivo de blastocisto
Embrión temprano
5 Formación de células
diferenciadas
2 Eliminación de la capa externa
6 Adición de factores
de diferenciación
seleccionados
7 Administración de
células diferenciadas
a tejidos dañados
Fusión de célula somática
y ovulo enucleado
4 Transferencia de los agregados
celulares a un nuevo pozo
3 Adición de sustancias
que disgregan la masa
celular interna
se podría utilizar para curar
a una persona que necesite
el trasplante de células,
tejidos y órganos. El embrión
se utiliza como fuente de
células madre embrionarias
(pluripotentes)

39. La huella genética

42. Bebe B Bebe C Bebe A

44. Un gen de un pez plano del Ártico
que no interrumpe su crecimiento
en invierno
Otro gen del propio salmón modificado
que no interrumpe la producción del
hormona del crecimiento cuando el pez
llega a la madurez
Animales transgénicos
Salmón: Crece entre 6 y 8 veces más que un salmón
normal. Se le han incorporado dos genes.
frankenfish

46. Biorremediación
La naturaleza tiene una cierta capacidad de limpieza de los elementos
contaminantes. Microorganismos como levaduras, hongos o bacterias degradan
una gran cantidad de sustancias tóxicas, reduciendo su carácter nocivo o incluso
volviéndolas inocuas para el medio ambiente y la salud humana.
La biorremediación consiste en acelerar este proceso natural para mitigar la
contaminación ambiental.
Los expertos en ingeniería genética creen
que la utilización de organismos modificados
genéticamente traerá un mayor desarrollo de
la biorremediación.
Los ejemplos son muy variados:
•La introducción de un gen en el organismo
específico para el vertido.
•El desarrollo de cepas biosensoras
luminiscentes, que permitirían monitorizar el
proceso de degradación.
•La creación de plantas transgénicas para
limpiar suelos contaminados.

47. Los alimentos transgénicos

48. Retraso en la
maduración
Producción de
sustancias
Mejora de la
calidad
Los alimentos transgénicos
Tomate Flavr Svr
Café más
aromático y con
menos cafeína
Resistencia a
herbicidas e insectos
Maíz resistente
a insectos
Arroz que produce
provitamina A
Soja resistente a
herbicidas
Patatas que inmunizan
contra enfermedades

49. Algunos tipos de plantas transgénicas
El abanico de estos
cultivos es muy
amplio
Tomates morados, con el gen de
los arándanos, que les aporta
propiedades anticancerígenas
Plantas transgénicas contra
minas antipersona
Tomates
azules,
con
vacunas
Golden rice con vitamina A

50. LOS ALIMENTOS TRANSGÉNICOS
Riesgos de la biotecnología
Pérdida de
diversidad genética
Pérdida de
diversidad genética
Pérdida de diversidad cultivada, invasión
de ecosistemas naturales
Paso de genes
transferidos a
especies silvestres o
tradicionales
Paso de genes
transferidos a
especies silvestres o
tradicionales
Maleza resistente a herbicidas o
bacterias resistentes a antibióticos
Efectos perjudiciales
sobre la salud
Efectos perjudiciales
sobre la salud
Se han descrito problemas alérgicos.
Hay gran desconocimiento
Aumento de la
dependencia de
países en desarrollo
Aumento de la
dependencia de
países en desarrollo

51.
Un notable logro de la
Ciencia
Descubrimiento del ADN
cumple 50 años
El País. Madrid, 26 de Marzo de 2001.
Las multinacionales retiran los alimentos transgénicos del Estado español.
Joaquina Prades, Madrid.
Manipulación genética y controversia
ética.
La Dignidad del Hombre en Juego
El Libro de la vida
Proyecto Genoma Humano
Domingo, 14 de abril de 2002 - 22:58
GMT
Mapa del genoma humano en
2003
Con este mapa los científicos
podrían trabajar en el
descubrimiento de qué genes
son responsables de
enfermedades como el cáncer,
la diabetes y la hipertensión
Proyecto Genoma Humano (PGH)

52. Proyecto genoma humano
• El proyecto genoma humano fue un proyecto
que tenía como objetivo la secuenciación de
todo el ADN de un ser humano.
• Secuenciar un genoma significa determinar el
orden en que se disponen los cuatro nucleótidos
que forman el ADN a lo largo de todas las
moléculas que contiene cada célula.
• El ADN humano contiene 3.000 millones de
nucleótidos lo cual significaba una dura tarea.

53. • 1988. El doctor Watson es nombrado director de la Oficina de
Investigación del Genoma Humano, organismo dependiente
de los Institutos Nacionales de la Salud (NIH) de EEUU.
Afirma que el genoma podrá estar descodificado para el año
2005 y que le costará al Gobierno alrededor de 3.000
millones de dólares.
• 1990. El doctor Craig Venter, un investigador de los NIH,
desarrolla un método más corto para encontrar fragmentos
del genoma humano. Demuestra que, a partir de estos
fragmentos, se puede identificar a los genes completos.
• Mayo 1998. Venter se 'pasa' a una nueva compañía que
pretende secuenciar el genoma humano en tres años, es
decir, dos años antes de la fecha prevista por el proyecto
estatal. La compañía se llamará Celera.
• Junio 2000. En un día que el presidente Clinton califica de
histórico, Venter y Collins aparcan sus diferencias y anuncian
que se ha logrado el primer borrador del genoma humano
secuenciado
• 12 de Febrero de 2001. La empresa Celera publica la
secuenciación del genoma en la revista 'Science'. El
consorcio público hace lo mismo en 'Nature'

56. El proyecto genoma humano ha permitido
conocer muchas cosas:
• Cuantos genes tenemos (30.000)
• Como son de grandes, unos 3.000 nucleótidos
de media.
• Qué proporción de nuestro ADN da lugar a
proteínas (2 %)
• Como se organizan los genes en nuestro ADN
• En que se diferencia nuestro ADN del de otras
especies.
• Que diferencias hay entre los distintos humanos,
el 0’1 %.

57. • Gracias al conocimiento del genoma
humano será posible en el futuro
conocer mejor algunas enfermedades
y:
1.- Diagnosticar mejor
2.- Aplicar un tratamiento adecuado
3.- Prevenir la aparición de estas
enfermedades.

58. Humanos
30,000
genes
Chimpancé
30,000
genes
A. thaliana
25,000
genes
Ratón
30,000
genes
C. elegans
19,000
genes
D. melanogaster
13,000
genes
98% idéntico
70% idéntico
20% idéntico
60% idéntico
De 289 genes
humanos
implicados en
enfermedades,
hay 177
cercanamente
similares a los
genes de
Drosophila.
El genoma humano es 10 veces mas pequeño que el genoma
de la salamandra Bolitoglossa subpalmata y 200 veces menor
que el de la Ameba
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.1%