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Objetivo
El presente documento se elaboró para describir las técnicas de análisis clínicos
realizadas durante el periodo de prácticas profesionales y servicio social que se llevaron a
cavo con la finalidad de poner en práctica todo lo aprendido durante la preparación
escolar, de tal modo que se pudiesen reafirmar habilidades así como destrezas en la
formación del técnico laboratorista clínico.
Además, el servicio social sirve para fomentar valores como la solidaridad al
realizar el servicio social en la comunidad al desempeñarse profesionalmente en el área
del sector salud. Esto es parte de los requisitos que por normatividad exige el
departamento de Servicio Social y Titulación de la D.G.T.I. como parte del trámite para la
certificación profesional.
Justificación
La presente experiencia de prácticas profesionales tuvo lugar en el área de
laboratorio clínico del Hospital General ISSSTE de Torreón colonia Centro, ubicado en
las calles Allende y Donato Guerra en la ciudad de Torreón, Coahuila.
El mencionado hospital ofrece servicios de salud diversos, de carácter privado y
asistencial, tales como consulta externa, consulta de especialidad, área de urgencias,
cirugía, medicina interna, hemodiálisis, hemodinamia, pediatría, neonatología, ginecología
y obstetricia, tococirugía, radiología y radiodiagnóstico, salud pública, laboratorio clínico y
banco de sangre.
El laboratorio clínico de dicha institución se divide en áreas para ofrecer los
diversos servicios que lo conforman entre ellas área de Hematología (Biometría
hemática, recuento de plaquetas, recuento de reticulocitos, velocidad de sedimentación
globular, grupo y Rh, prueba de Coombs directa e indirecta), Química clínica ( Química
sanguínea (glucosa, urea, creatinina, acido úrico), electrolitos séricos (Na, Cl, K, Ca, Mg,
PO), perfil hepático (TGO, TGP, fosfatasa alcalina, Bilirrubina total, Bilirrubina directa,
Bilirrubina indirecta, LDH, FA), perfil de lípidos (Colesterol total, HDL, LDL, VLDL,
triglicéridos), proteínas, enzimas cardiacas (CK, CK-MB) ), Serología (reacciones febriles,
ASTO, Proteína C reactiva, VDRL) Microbiología ( examen general de orina,
coproparasitoscopico , parasitoscopico, diversidad de cultivos, BAAR, etc...) Banco de
sangre (pruebas cruzadas) entre otros.
2
Aquí se maneja una gran diversidad de muestras en las diferentes áreas,
destacando como muestra principal sangre venosa periférica en sus diferentes derivados
del fraccionamiento (suero, plasma, elementos formes).
En México la cifra de enfermedades que necesitan de un análisis clínico a
aumentado considerablemente por lo que la nación necesita tanto de químicos como
técnicos laboratoristas capaces de realizar su trabajo en tiempo y forma; demostrando
sus capacidades y aptitudes, no solo laborales sino humanísticas, ya que se tiene que
trabajar con honradez, tolerancia, empatía y gusto por el trabajo que se realiza.
Realicé mis prácticas profesionales y servicio social con la finalidad de poder
aplicar las bases teóricas adquiridas en clases al ámbito práctico y laboral. También es
importante mencionar el deseo de obtener la experiencia suficiente en esta área de
trabajo para que al momento de competir por un puesto a nivel privado o institucional
tener las armas necesarias para esto. Otras razones importantes es el introducirme en el
ambiente con los compañeros de trabajo, conocer las bases administrativas y sindicales
de los laboratorios clínicos, conocer el grado de responsabilidad y compromiso que se
requieren en el área de servicios de la salud.
Tal periodo de trabajo consistió en la realización de diferentes procedimientos, análisis y
mediciones clínicas que se enlistan a continuación:
o Toma de muestra de sangre periférica venosa
Hematología:
o Biometría hemática en aparato automatizado que permite obtener resultados
de formula roja (Hemoglobina, Hematocrito), así como el cálculo de los índices
eritrocitarios (VGM, HGM, CHGM); fórmula blanca (recuento leucocitario,
recuento diferencial); y plaquetas.
o Velocidad de sedimentación globular (VSG), Recuento de Reticulocitos, Grupo
y Rh.
o Tiempos de coagulación.
o Coombs directo e indirecto
o Pruebas cruzadas
Química Clínica
o Medición de electrolitos en suero y orina.
o PFH
o Perfil de lípidos
o Enzimas cardiacas
o Proteínas urinarias
o Química Sanguínea
Serología
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o Reacciones febriles
o VDRL
o Factor Reumatoide
o Prueba Inmunológica de Embarazo (PIE)
o HIV, VHC y VHb
Microbiología
o Examen general de Orina (EGO)
A continuación explicaré en qué consisten las técnicas de toma de muestra y análisis que
realicé durante mi estancia en dicho laboratorio.
Introducción
El laboratorio clínico es el lugar donde los técnicos y profesionales en análisis
clínicos, analizan muestras biológicas humanas que contribuyen al estudio,
prevención, diagnóstico y tratamiento de las enfermedades. Utiliza las metodologías de
diversas disciplinas como la química clínica, hematología, inmunología y microbiología. En
el laboratorio clínico se obtienen y se estudian muestras biológicas diversas, como
sangre, orina, heces, líquido sinovial (articulaciones), líquido cefalorraquídeo, exudados
faríngeos y vaginales, entre otros tipos de muestras.
Los laboratorios son de gran ayuda tanto para pacientes que se encuentran
hospitalizados como para los pacientes externos, es por eso que su ubicación debe ser en
la planta baja, con fácil acceso a la sección de recepción del Archivo Clínico y en menor
grado con el departamento de Consulta Externa.
Las áreas que componen al laboratorio clínico son: Sala de Espera y Recepción.
Donde los pacientes esperarán cómodamente a ser atendidos; Cubículos de Toma de
Muestras. En este punto se obtienen las muestras para luego ser distribuidas a las
diversas secciones del laboratorio.
4
Secciones de Laboratorio:
Hematología: En este sección se efectúa el Hemograma y diversas pruebas para
evaluar el sistema de Coagulación
Bioquímica clínica: Aquí se realizan análisis que se clasifican de la siguiente
forma:
 Química sanguínea de rutina, lo que abarca multiples parámetros
como la determinación de Glucosa, Colesterol, etc.
 Exámenes generales de orina
 Determinación de gases en sangre ( Presión parcial de oxígeno, de
anhidrido carbónico, reserva de bicarbonato, pH, etc.)
Microbiología: Las diversas labores que se realizan aquí pueden clasificarse en la
siguiente forma:
 Coproparasitología: Tiene por objeto investigar la presencia
de parásitos en materias fecales.
 Bacteriología: Consiste en examinar directa o indirectamente la
presencia o actividad de organismos microscópicos
en sangre, orina, materia fecal, jugo gástrico yexudados orgánicos.
Inmunología: En esta sección se hacen determinaciones de Anticuerpos y otras
determinaciones con el fin de evaluar el Sistema inmunitario.
En esencia, el laboratorio clínico es una herramienta fundamental para el sector salud,
ayudando al diagnostico de enfermedades de un paciente afectado; los resultados de los
análisis clínicos van más allá del horizonte sintomatológico, y ayudan al médico a realizar
un diagnostico acertado y por consecuencia un correcto tratamiento.
5
1.- Departamento de hematología
La sangre es un tejido en circulación continua, que desempeña innumerables
funciones vitales da su paso por todo el cuerpo. De máxima importancia es su capacidad
de transportar oxigeno ligado a la hemoglobina de los eritrocitos, desde los pulmones a
los tejidos corporales ,y devolver el bióxido de carbono que se genera en los tejidos ,hasta
los pulmones .También produce y distribuye anticuerpos formados por los plasmacitos y
los linfocitos, transporta granulositos y monocitos que neutralizan y destruyen los
patógenos por medio de la fagocitosis, y suministra complemento. Otra función es
conservar la hemostasia con plaquetas y factores de la coagulación, que permite la
reparación de lesiones tisulares y evita hemorragia. Regular la temperatura corporal y el
estado de equilibrio ácido-básico e hídrico; desplazar nutrimentos y hormonas regulatoria
tejidos corporales
El alcance de la hematología clínica
La hematología clínica tiene por objeto el estudio de las perturbaciones y
enfermedades de la sangre y de los órganos hematopoyéticos.
Al señalar que los padecimientos de los órganos hematopoyéticos también conciernen
a la hematología clínica, debe quedar implícito que algunos de ellos no dan lugar a
cambios en la sangre propiamente dicha.
Si se desea fijar de una vez por todas el alcance de la hematología, debe aclararse
que ella incluye, además de las enfermedades del sistema hemático propiamente dicho,
las de tejido linfático y las del llamado sistema reticuloendotelial, ya sea que las
alteraciones principales se observen en los elementos circulantes, o en los órganos o
sitios donde estos tienen origen .normalmente existe un estado de equilibrio entre la
formación y la destrucción de los elementos figurados de la sangre, lo que se refleja en su
composición celular, que es prácticamente constante .Si la producción de células es
insuficiente, o su destrucción excesiva, ello se traducirá por un cuadro hematológico
transitorio, o más o menos permanente .
1.1 Sala de toma de muestra
Este espacio es el que se brinda para obtener las muestras de sangre requeridas
en el laboratorio para los análisis que posteriormente se realizaran. Si la muestra de
sangre no se recoge con una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad del
examen hematológico sufre.
Para casi todos los análisis se necesita una muestra de sangre venosa. La punción
en una vena, aunque es un método bastante sencillo, debe hacerse con cuidado para
evitar hemólisis o hemoconcentración de la muestra, que se forme un hematoma, y que
las venas sufran lesión. Los hematomas o las equímosis suelen poner de manifiesto una
técnica o criterio deficiente de la persona que la efectúa. Unas palabras bien elegidas
servirán para tranquilizar al paciente. La auto confianza y seguridad del técnico,
contribuirían a establecer una relación adecuada. Es necesario mantener un buen control
de la identificación de las muestras para evitar confusiones que afecten gravemente la
situación.
6
1.2 Punción venosa
Significado clínico
Para las técnicas hematológicas, es fundamental obtener muestras de sangre
adecuadas, ateniéndose a una técnica muy precisa .si la muestra de sangre no se recoge
con una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad del examen hematológico
sufre. Casi todas las muestras de sangre se obtienen por punción venosa; es el método
más fácil y adecuado para obtener volumen de sangre suficiente para llevar a cabo un
gran número de pruebas.
Fundamento
La muestra puede dividirse y tratarse conforme a las necesidades del caso; puede
mezclarse con anticoagulante para obtener plasma, sangre completa; o pude dejarse
coagular para obtener suero.
Muestra Tipo de tubo Anticoagulante Pruebas
Suero
Activador de
coagulo.
Determinaciones en suero para
bioquímica, microbiología,
inmunología, TDM.
Suero con gel
Activador de
coagulo y gel
separador.
Determinaciones en suero para
bioquímica, microbiología,
inmunología, TDM.
Suero con
gránulos
Activador de
coágulos y
gránulos
Determinaciones en suero para
bioquímica, microbiología,
inmunología, TDM.
Suero para
pruebas
cruzadas
Activador de
coágulo.
Determinaciones en suero para
análisis de pruebas cruzadas de
histocompatibilidad.
Plasma Heparina Sódica.
Determinaciones en plasma
heparinizado para bioquímica.
Plasma
Heparina de litio
Heparina amónica
Determinaciones en plasma
heparinizado para bioquímica.
Plasma con
gel
Heparina de litio y
gel separador.
Determinaciones en plasma
heparinizado para bioquímica.
Sangre total
K2 EDTA
K3 EDTA
Determinación en sangre total con
EDTA para hematología.
Sangre total K3 EDTA
Determinaciones en sangre total
con EDTA para análisis de
pruebas cruzadas de
histocompatibilidad.
Sangre total
EDTA K2 Y gel
separador
Determinaciones en sangre total
con EDTA para identificar virus,
parásitos y bacterias en biología
molecular.
Plasma
Citrato sódico
(3.2%)
Citrato sódico
(3.8%)
Determinación en plasma con
citrato para análisis de coagulo.
7
Plasma CTAD (3.2%)
Determinación en plasma con
citrato para análisis de
coagulación cuando se intenta
evitar la aparición de factores
plaquetarios en la sangre.
Sangre total
Anticoagulante
inhibidor de
glicolisis.
Determinación en sangre total
anticoagulada y estabilizada o
plasma para determinación de
glucosa y lactato.
Suero/Plasma
Activador de
coagulo
Heparina sódica
Determinación en suero/plasma
heparinizado para análisis de
traza de metales.
Sangre total
ACD-A
ACD-B
CPDA
Determinación en sangre total con
ACD/CPDA para análisis del
grupo sanguíneo.
Procedimiento: Sistema de tubos al vacío
7.-Desechar el material punzo cortante y el infeccioso en sus respectivos depósitos.
8
1.3 Biometría hemática o hemograma
El hemograma consiste, básicamente, en el conteo de los diferentes tipos de
células que se encuentran en sangre periférica. Bajo el nombre de hemograma se
agrupan dos conceptos:
(1) Cuantitativo, que comprende los recuentos de eritrocitos, leucocitos y
plaquetas, cuantificación de hemoglobina, medición de hematocrito y en cálculo de
índices eritrocitarios,
(2) otro cualitativo (fórmula leucocitaria), que es la identificación microscópica o
automatizada de los diferentes tipos de leucocitos y su expresión en valores porcentuales
y absolutos.
Este examen, en la actualidad, constituye uno de los más ampliamente utilizados,
en el reconocimiento inicial de pacientes que consultan por patologías diversas. Además
representa una herramienta insustituible, en el monitoreo de evolución de patología
hematológica y control terapéutico.
En este contexto, la automatización del hemograma, una combinación de
metodologías de colorimetría, impedancia eléctrica e informática (Celldyn 1400) ha
permitido obtener un método confiable y rápido para enfrentar la demanda creciente por el
perfil hematológico.
Analizador hematológico CELLDYN 1400
El analizador hematológico CELLDYN 1400 proporciona información de 12
parámetros obtenidos, a partir de muestra de sangre total anticoagulada con EDTA, de la
manera siguiente:
Medición directa de:
 Glóbulos rojos (RBC).
 Glóbulos blancos (RBC).
 Plaquetas (PLT).
 Concentración de hemoglobina (HGB).
Parámetros derivados, obtenidos de histogramas:
 Porcentaje de Linfocitos (% L)
 Porcentaje de Granulocitos (%G)
 Volumen corpuscular medio (MCV)
Parámetros calculados de los datos medidos y derivados:
 Número total de Linfocitos (LYN)
 Número total de Granulocitos (GRAN)
 Hematocrito (HCT)
 Hemoglobina corpuscular media (MCH)
 Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
9
Principio del método
El CELLDYN 1400 utiliza el principio de la IMPEDANCIA O RESISTENCIA ELECTRICA
para el recuento y clasificación por tamaño de las células sanguíneas.
La célula, al pasar a través de un orificio en el que hay una diferencia de potencial
conocida, induce un pulso eléctrico que es directamente proporcional al volumen celular,
lo que es aprovechado (por la diferencia de tamaño de los linfocitos, y granulocitos), para
realizar una fórmula de dos parámetros.
Para esto la muestra es diluida, automáticamente, con una solución de
conductividad fija.
Luego esta muestra es conducida, unidireccionalmente, a través de una apertura u
orificio de tamaño determinado.
La no devolución de la muestra está asegurada por el transductor de Von Behrens
que impide la recirculación de la misma.
Una corriente eléctrica constante pasa entre electrodos ubicados a cada lado de la
apertura determinando una zona de censado a lo largo de toda la pertura.
Durante el ciclo de medición, cada célula que atraviesa la zona de censado,
interrumpe el flujo de corriente constante generando un pulso eléctrico cuya amplitud es
directamente proporcional al tamaño de la célula.
El número de pulsos generados durante cada medición corresponde al número de
células censadas.
Los pulsos eléctricos generados son primero amplificados y luego comparados con
voltajes en canales de referencia que han sido previamente calibrados para aceptar sólo
señales con una amplitud predeterminada.
Dos o más células pueden coincidir simultáneamente en la zona de censado
durante el ciclo de medición. En cuyo caso se obtiene un pulso de gran amplitud, el cual
es reconocido y rechazado, produciéndose una pérdida de pulsos aceptables. Esta
pérdida se puede predecir estadísticamente, de manera que los recuentos celulares son
corregidos automáticamente.
El CELLDYN 1400 realiza MEDICION DE HEMOGLOBINA utilizando el
método de la formación de cianometahemoglobina, que se determina con
espectrofotómetro a 540 nm.
Para esto, a una muestra diluida 1:250 se le adiciona un agente lisante, cuya
función es romper los glóbulos rojos y liberar la hemoglobina.
Después de la medición el instrumento se lava con el reactivo detergente
quedando listo para otro ciclo de medición.
10
Especificaciones de ejecución
SENSIBILIDAD
Las lecturas son confiables en el siguiente rango
Leucocitos 1.000 - 100.000 mm3 (1 - 100 K/uL
Hematíes 1.0 - 7.0 millones/mm3 (1 - 7 M/uL)
Hemoglobina 2.5 - 24,0 g/dl
Plaquetas 10 - 999 k/UL
BACKGROUND NORMAL (RECUENTO DE FONDO)
Una vez realizado el ciclo de limpieza (mantenimiento diario) los recuentos del
backgraund no deben exceder los siguientes limites:
Leucocitos menor o igual a 500 /mm3 (0.5 K/uL)
Hematíes menor o igual a 0.05 millones/mm3 (0.05 M/uL
Hemoglobina menor o igual a 0.2 g/dl
Plaquetas menor o igual a 10.000 /mm3 (10 K/uL)
IMPRESIÓN DE LISTADO DE RESULTADOS (RESUMEN)
El equipo almacena, en memoria constantemente, los registros de las últimas 320
muestras procesadas.
Por lo tanto, antes de alcanzar esta cifra, se debe imprimir y archivar el listado de
resultados a modo de registro de resultados de examen:
TIPO Y RECOLECCION DE MUESTRA
La muestra corresponde a sangre venosa, obtenida por venopunción, recogida en
tubos con anticoagulante EDTA/ K3
EQUIPO REACTIVOS REQUERIDOS
Contador hematológico CELL DYN
1400.
Agitador de muestras mecánico.
Reactivo Detergente para Celldyn
1400.
Reactivo Diluyente para Celldyn 1400.
Reactivo Lisante para Celldyn 1400.
Estos reactivos no deben exponerse a la luz directa del sol.
11
No deben mezclarse.
No adicionar restos de uno en otro nuevo.
Estos reactivos deben mantenerse y utilizarse dentro de un rango de temperatura entre
los 15 y 30 ° C para asegurar su conductividad.
PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACION.
El funcionamiento del equipo se chequea diariamente, en base al programa de
control de calidad interno del laboratorio.
Cuando el control aconseje calibrar el instrumento, se puede seguir una de las tres
formas de calibración siguientes:
Calibración con calibrador comercial.
Calibración con sangre fresca.
Calibración mediante entrada de factor.
Procedimiento de calibración.
1. Presionar MAIN.
2. Presionar CALIBRATION.
3. Seleccionar FRESH BLOOD o CALIBRATOR.
4. Seleccionar el o los parámetros a calibrar e ingrese los valores de referencia de la
muestra o calibrador.
Si se utiliza muestra de sangre fresca, esta debe tener menos de 4 horas de
recolectada.
Nota: Los valores de referencia aceptables, para calibración con sangre fresca, deben
ajustarse a límites establecidos para el equipo.
Calibración mediante entrada de factor:
1. Presionar Calibration.
2. Presionar ENTER FACTOR
3. Con el cursor posicionarse en la entrada de factor correspondiente e ingresar
nuevo factor.
Esta opción permite ingresar directamente los valores de factores de calibración.
La calibración es programable cuando se introduce un factor de 1.00
Ejemplo: Si los recuentos de leucocitos estás aumentados en un 2%, el operador puede
ingresar como factor 0,98 para disminuir los recuentos en un 2%.
PASOS DEL PROCEDIMIENTO
Como muestra se utiliza sangre venosa recogida en EDTA (tubo tapa Lila).
La muestra debe agitarse por inversión, cuidando no someterla a excesiva agitación que
pueda destrozar los elementos o alterar el volumen celular.
La muestra debe invertirse de 10 a 15 minutos si se hace a mano.
En agitador mecánico: de 5 a 15 minutos.
Nunca agitarlas más de 30 minutos.
12
Muestras procesadas hasta 8 horas de la recolección dan resultados confiables.
La muestra puede diluirse, previo a la medición, utilizando diluyente para
CELLDYN o suero fisiológico. La dilución 1:10 es suficiente en la mayoría de las
situaciones de parámetros elevados más allá del limite superior de lectura.
1. Para su proceso, colocar el tubo con la muestra debajo de la sonda de aspiración.
2. Precionar la palanca que está detrás. Automáticamente la sonda aspirará 30 ul de
muestra. Espere el beep de término de aspiración del equipo antes de retirar el
tubo. En este momento la muestra aspirada será automáticamente diluida,
repartida en diferentes circuitos, incubada con reactivos específicos (lisis,
hemoglobinometría) y leída por los dispositivos correspondientes.
3. Ingresar identificación del examen (digitar número de folio del examen). Presionar
ENTER.
PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD
El programa de control de calidad del examen, se realiza en base a dos
elementos:
-Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Lab.Central.
-Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno del
equipo. (Programa de la media X - B)
Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del
Laboratorio Central.
Consiste en analizar diariamente una muestra de sangre proporcionada por la
sección de hematología del Laboratorio Central. Esta muestra es procesada como una
muestra más de la rutina. Los resultados son remitidos a la sección de hematología para
su análisis.
Esta muestra de control es procesada, en sección hematología, en dos auto
analizadores hematológicos (Celldyn 3500 y Micros ABX) y comparados sus resultados
entre los tres analizadores y con la medición del hematocrito procesado manualmente.
El análisis de calidad de los resultados de la muestra control, se relaciona con la
reproducibilidad de resultados entre los distintos equipos, considerando el hematocrito
manual y la verificación microscópica de la muestra.
La comparación de resultados de muestras de control, con resultados de equipos de
sección de hematología, se basa en la calibración de estos con calibradores comerciales
y controles comerciales.
Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control
interno del equipo. Programa de la media X – B.
Permite revisar los valores para VCM, HCM y CHCM calculados según el método
Levey-Jennings para grupos de 20 muestras. La impresión del reporte proporciona una
gráfica de los resultados.
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INTERFERENCIAS
Los resultados del examen pueden verse interferidos por la presencia de
diferentes elementos de la siguiente forma:
WBC: falso incremento por crioglobulinas, heparina, proteínas
monoclonales, eritroblastos, agregados plaquetarios, falso descenso por
coágulos, células atípicas, uremia + inmunosupresores.
RBC: falso incremento por crioglobulinas, macroplaquetas, hemólisis, policitemia,
falso descenso por crioaglutininas, microcoágulos, células microcíticas.
HGB: falso incremento por crioglobulina, carboxihemoglobina, hemólisis,
hiperbilirrubinemia, lipemia severa, falso descenso por microcoágulos.
Hematocrito: falso incremento por crioglobulina, macroplaquetas, hiperglicemia
(600 mg/dl), falso descenso por coágulos, hemólisis.
PLT: falso incremento por crioglobulinas, hemólisis, hematíes microcíticos, falso
descenso por macroplaquetas, heparina, agregados plaquetarios.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR RESULTADOS
El equipo realiza la medición directa, por impedancia y colorimetría de:
Glóbulos rojos (RBC).
Glóbulos blancos (WBC).
Plaquetas (PLT).
Concentración de hemoglobina (HGB).
Los resultados para Parámetros derivados, se obtienen de datos de distribución de
elementos medidos (histogramas):
Porcentaje de Linfocitos (% L)
Porcentaje de Granulocitos (%G)
Volumen corpuscular medio (MCV)
Los Parámetros calculados de los datos medidos y derivados son:
Número total de Linfocitos (LYN)
Número total de Granulocitos (GRAN)
Hematocrito (HCT)
Hemoglobina corpuscular media (MCH)
Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
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Cálculo de Hematocrito: Es la razón de eritrocitos en un volumen de plasma y se
expresa como porcentaje del volumen de sangre total.
HCT = RBC x VCM
10
Cálculo de hemoglobina corpuscular media: Expresa el contenido medio de Hb que
hay los hematíes. Se expresa en picogramos.
HCM = Hb (gr/lt ) x 10
RBC
Cálculo de concentración de Hb corpuscular media: Es la razón entre la hemoglobina
respecto al hematocrito. Indica la concentración de Hb en el promedio de los eritrocitos.
CHCM = Hb x 100
HCT
REPORTE E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El reporte incluye los siguientes parámetros:
1.- Número de hematíes: por medición directa se obtiene el número de GR por volumen.
2.- Concentración de Hb: por medición directa por espectrofotometría (método de la
cianmetahemoglobina). El valor puede estar falsamente aumentado en hiperleucocitosis.
Se utiliza para la valoración de anemia.
3.- Volumen corpuscular medio (VCM): derivado de histograma de distribución, representa
la media del volumen de los hematíes. Define la micro-normo-macrocitosis.
4.- Hematocrito: es la relación entre el volumen de los hematíes respecto a la sangre total.
Se obtiene de multiplicar el VCM por el número de hematíes. Es discretamente inferior al
obtenido por centrifugación. Se utiliza como indicador de anemia, hemorragia,
hemoconcentración, etc.
5.- Hemoglobina corpuscular media (HCM): resulta de dividir la concentración de Hb por el
número de hematíes. Se usa como marcador hipocromía.
6.- Concentración de Hb corpuscular media (CHCM): es la cantidad de hemoglobina que
hay en un decilitro de hematíes. Su valor normal es 34 y la desviación standard de 2 %.
La CHCM es el método más útil para detectar la deshidratación del eritrocito. En la
microesferocitosis familiar está sobre 36 (mg/dl) en el 50% de los casos. La CHCM
15
disminuida bajo 30 %, se considera marcador de hipocromía y se ve en condiciones que
llevan a una síntesis insuficiente de Hb.
7.- Número de plaquetas: se mide directamente el número de plaquetas por volumen.
8.- Número de leucocitos: es el conteo de células de determinado tamaño que resisten el
procedimiento de lisis específica para los hematíes. Se mide directamente.
9.- Fórmula leucocitaria: Derivado de histograma, corresponde al porcentaje de linfocitos y
granulocitos.
Neutrófilos elevados, acompañado de fiebre, indica probabilidad de infección por
bacterias. Neutrófilos disminuidos pueden deberse a infección severa, reacción a drogas,
irradiación o acompañar ciertos tipos de anemia.
Linfocitos elevados se asocia más frecuentemente con infección viral. Pero
también esta elevación se observa en cuadros hematológicos como la Leucemia de tipo
linfoide.
Una correcta interpretación del examen, en función de los hallazgos clínicos,
permite una orientación diagnóstica en muchos casos, también constituye en otros, un
importante elemento en el pronóstico y tratamiento.
La concentración de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en la sangre varía con la
edad y sexo.
En clínica pueden observarse aumentos o disminuciones patológicas de los
niveles de estos elementos que no siempre obedecen a enfermedades del sistema
hematopoyético. También se observan fluctuaciones de orden fisiológico como en el
embarazo, el ejercicio, stress o ritmo circadiano.
El aumento de la concentración de eritrocitos, de contenido hemoglobínico normal,
suele acompañarse del aumento de la concentración de hemoglobina y se denomina
poliglobulia. Cuando el aumento de la concentración de eritrocitos se acompaña de
disminución del contenido hemoglobínico, se habla de pseudo- poliglobulia. La pseudo-
poliglobulia puede acompañarse de microcitosis e incluso anemia, como por ejemplo en la
talasemia, anemia ferropénica (pseudopoliglobulia microcítica).
El descenso de la concentración de eritrocitos en sangre se acompaña siempre de
la disminución de la concentración de Hemoglobina (anemia) y puede obedecer a una
pérdida por hemorragia, a hemólisis o a una falta en su formación a nivel de la médula
ósea.
El aumento de la concentración de leucocitos se denomina Leucocitosis y puede
obedecer a muchas causas, entre las que destacan los procesos infecciosos e
inflamatorios agudos y crónicos. Cuando se utilizan sistemas automatizados de recuento,
debe tenerse presente que estos no diferencian entre eritroblastos y leucocitos (debido a
que ambas células tienen núcleo), por lo que si en la observación microscópica del frotis
se aprecia una cifra de eritroblastos superior al 10 % se debe proceder a una corrección
del recuento leucocitario:
16
Leucocitos reales = Leucocitos contados x 100
Eb (por 100 leucocitos) + 100
Donde Eb: eritroblastos
La disminución de concentración de leucocitos se denomina leucopenia y en caso
de insuficiencia medular grave (aplasia medular) se acompaña casi siempre de anemia y
trombocitopenia. La leucopenia afecta siempre la totalidad de los leucocitos circulantes,
en especial los más abundantes (neutrófilos y linfocitos).
La disminución selectiva de granulocitos neutrófilos se llama agranulocitosis o
neutropenia y la de linfocitos, linfopenia. Debe descartarse que una leucopenia aislada de
evolución prolongada sea el primer signo de una enfermedad hematológica grave
(leucemia, linfoma o anemia refractaria).
El aumento de la concentración de plaquetas se denomina trombocitosis, mientras
que su disminución se denomina trombopenia.
Utilidad clínica de los índices eritrocitarios:
Anemia microcítica: VCM < 80 fL
Anemia macrocítica: VCM > 100 fL
Anemia normocítica: VCM = 80 – 100 fL
Anemia hipocrómica HCM < 30 pg
Causas de anemia microcítica-hipocrómica:
Ferropenia o carencia de hierro, talasemia.
Causas de anemia macrocítica:
Déficit de vitamina B12 o acido fólico, hepatopatías crónicas, alcoholismo,
tabaquismo.
La determinación de CHCM es útil para detectar aumentos de la concentración
hemoglobínica intraeritrocitaria, ya que en este caso es siempre superior a 35 g/dL. El
aumento de la CHCM nunca obedece a un aumento de la síntesis de Hb, sino siempre a
una alteración de la membrana o del contenido acuoso del eritrocito: disminución de la
relación entre la superficie y volumen eritrocitario (esferocitosis) o pérdida de agua
deshidratación eritrocitaria (xerocitosis).
17
VALORES DE REFERENCIA
EDAD
WBC
(K/Ul)
RBC
(M/uL)
HGB
(g/dl)
Hto
(%)
VCM
(fL)
HCM
(pg)
CHCM
(g/dl)
Plaq
(K/uL)
0-2 sem
9.0-30.0 4.1-6.1 14.5-24.5 44-64 98-112 34-40 33-37 150-450
2-8 sem 5.0-21.0 4.0-6.0 12.5-20.5 39-59 98-112 30-36 32-36 150-450
2-6 mes
5.0-19.0 3.8-5.6 10.7-17.3 35-49 83-97 27-33 31-35 150-400
6m-1a
5.0-19.0 3.8-5.2 9.9-14.5 29-43 73-87 24-30 32-36 150-400
1- 6 a
5.0-19.0
3.9-5.3 9.5-14.1 30-40 70-84 23-29 31-35 150-400
6-16 a
4.8-10.8
4.0-5.2 10.3-14.9 32-42 73-87 24-30 32-36 150-400
16-18 a
4.8-10.8
4.2-5.4 11.1-15.7 34-44 75-89 25-31 32-36 150-400
>18 a h
5.0-10.0
4.5-5.5 14.0-17.4 42-52 84-96 28-34 32-36 140-400
>18 a m
5.0-10.0
4.0-5.0 12.0-16.0 36-48 84-96 28-34 32-36 140-400
FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD
Temperaturas sobre 30 grados Celsius pueden concentrar los reactivos,
por evaporación alterando los resultados. Temperaturas menores de 15 grados pueden
precipitar o inactivar los reactivos.
Voltaje red eléctrica. El equipo trabaja con 220 voltios y 50 Hertz. Grandes
oscilaciones de voltaje de la red pueden alterar los recuentos.
Equipos de rayos X. fotocopiadoras, computadoras, centrífugas no deben ser
instaladas cerca del CELLDYN para prevenir interferencias.
NOTAS ADICIONALES
En caso de pérdida de presión de vacío del sistema, descubrir el panel frontal y
llenar manualmente la copa de dilución con reactivo diluyente (15 ml aprox.), luego pulsar
Run.
18
1.4 Frotis sanguíneo; recuento diferencial de leucocitos
Significado clínico
Evalúa la distribución y la morfología de los glóbulos blancos y, de este modo,
aporta información más específica respecto al sistema inmunitario de los pacientes. Es el
número relativo de leucocitos de cada tipo, en la sangre. Al multiplicar la cifra porcentual
de cada tipo por el recuento total, el investigador obtiene el número absoluto de leucocitos
de cada especie celular. Preferentemente se utiliza el colorante de Wright y una solución
amortiguadora un pH de 6.8.
Fundamento
Consiste en que el colorante de Wright, que tiene un carácter ácido base que
permite teñir todas las células blancas y distinguirlas mediante el color que toma cada una
de ellas.
Procedimiento
19
1.5 Grupo sanguíneo y Rh
Significado clínico
Los eritrocitos del hombre, poseen más de 100 antígenos que se encuentran en la
membrana celular, estos antígenos constituyen lo que se llama grupos sanguíneos, los
cuales están determinados por numerosos loci genéticos.
Los sistemas ABO y Rh tienen mayor importancia como causa de reacciones
transfucionales.
Sistema ABO: El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la
sangre humana, basado en los componentes antigénicos de los hematíes. Fue el primero
en conocerse gracias a los trabajos de clásicos de Landesteiner quien definió los primeros
isoantígenos .Los antígenos presentes en los eritrocitos se denominan aglutinógenos y
son de los tipos Ay B ,los cuales se heredan de alguna manera que originan diferentes
grupos, esto es, una persona puede tener uno de ellos los dos simultáneamente ,o
ninguno. La expresión en el eritrocito de los antígenos ABO está constituida por un solo
gen con tres alelos (A, B y O).
20
Sistema Rh: Los antígenos Rh recibieron este nombre, por haberse identificado
inicialmente en los eritrocitos del mono Macacus Rhessius. Fisher y Race sugirieron que
los antígenos Rh están determinados por tres genes: C, D y E con pares de alelos que
codifican para cinco determinantes antigénicos .El más importante de estos loci se
denomino D: Antígeno D, este es el que determina que una persona sea Rh positivo o Rh
negativo, las personas con genotipo DD o Dd son del tipo Rh positivo, en tanto que los
individuos con genotipo dd pertenece al tipo Rh negativo.
Fundamento: Los antígenos de los eritrocitos lavados de la muestra de sangre
reaccionaran con los anticuerpos de los sueros tipificadores A, B, AB, D. Por medio de
una aglutinación visible.
Procedimiento; método en tubo
INTERPRETACIÓN
Grupo Anti – A ANTI – B Anti AB - Rh
A + - + +/-
B - + + +/
AB + + + +/
O - - - +/
21
1.6 Determinación de la variedad Du
Significado clínico
Después de los antígenos A y B del sistema de grupos sanguíneos el D es el
antígeno de grupo sanguíneo más importante de la rutina de banco de sangre. La prueba
de la antiglobulina fue introducida por Coombs, Mourant y Race en 1945 como método
para detección de anticuerpos incompletos, denominado así porque no puede causar
aglutinación en un medio salino, aún en presencia de sus antígenos eritrocitarios
específicos .Este es el caso de anticuerpo Rh, que si une al antígeno Rh presente en la
superficie del eritrocito, pero es incapaz de producir una reacción de aglutinación visible.
El fenotipo D- negativo se presenta con una incidencia de aproximadamente 15%
en la raza blanca y de 9 a 10% en raza negra .El término DU
fue originalmente utilizado
para descubrir la reactividad variable de ciertas sangres con sueros que contienen Anti-D
salino reactivo. Este término ha sido reemplazado por el término D débil para descubrir las
formas del antígeno D se determina mediante las pruebas de los glóbulos rojos y el Anti-
D. En ocasiones, los hematíes de algunas personas Rh-positivas reaccionan débilmente
en la prueba de tipificación Rh estándar (D débil, o Du
, positivo), pero siguen
considerándose Rh-positivas.
Fundamento: La albúmina funciona para detectar anticuerpos del sistema Rh (C,D,E,c,e)
y el suero de coombs detecta anticuerpos incompletos IgG del sistema Rh .Esto sirve
para que sea visible la aglutinación en caso de que haya reacción de Ag-Ac.
Procedimiento:
22
INTERPRETACIÓN
Si hay aglutinación Rh + positivo
Si no hay aglutinación Rh -negativo
1.7 Tiempos de coagulación
La hemostasia (interrupción de la salida de sangre de un vaso) está regulada por
mecanismos extravasculares (músculo, piel y tejido subcutáneo), vasculares (vasos
sanguíneos) e intravasculares (adhesión plaquetaria, retracción del coagulo y cuagulación
de la sangre)
La Comisión internacional para la Nomenclatura de los Factores de la Coagulación
de la Sangre ha designado numéricamente los factores de la coagulación de la sangre;
El fibrinógeno y los factores V y VII están ausentes en el suero sanguíneo normal
como consecuencia del proceso de coagulación. La interacción de los factores de la
coagulación puede desencadenarse a través de las vías intrínseca o extrínseca.
23
En el sistema intrínseco se encuentran presentes todos los factores en la sangre,
mientras que en el sistema extrínseco está activado por la liberación de tromboplastina
tisular.
Aunque la naturaleza exacta de las secuencias enzimáticas del proceso de
coagulación no es clara, se trata sin duda de un proceso de amplificación biológica que
comienza a partir de la pequeña reacción que implica el contacto tisular a la rápida
conversión de fibrinógeno en fibrina.
Las pruebas de coagulación de rutina efectuadas en el laboratorio son indicadores
de la función vascular (fase vascular y adhesión plaquetaria) o de mecanismos de
coagulación intrínsecos.
1.7.1 Tiempo de protrombina
Significado clínico
Es una determinación analítica que se efectúa antes de una intervención quirúrgica
para determinar problemas hemorrágicos potenciales, el TP es la determinación más
usada para controlar la terapia con anticoagulantes orales al ser sensible a los factores VII
y X. Las prolongaciones pueden deberse a deficiencias de los factores que integran la vía
extrínseca clásica. Factores V, II, X, VII y fibrinógeno a una combinación de dichos
factores o a la presencia de un inhibidor.
24
Fundamento: Se realiza añadiendo una fuente de extracto hístico al plasma citrado,
incorporando un exceso de calcio y midiendo el tiempo que tarda en producirse la
formación del coágulo.
Procedimiento
Valores Normales: 8 - 15 segundos
1.7.2 Tiempo parcial de tromboplastina activada
Significado clínico
Se efectúa en plasma citratado mediante la activación de los factores de contacto;
la incorporación de un preparado fosfolípido estándar como sustituto de las plaquetas y la
medición del tiempo de formación del coágulo tras la adición de un exceso de calcio. Se
prolonga cuando existe una deficiencia de los factores que intervienen en la vía intrínseca
clásica – precalicreína, CEPM, factores XII, XI, IX, VIII, XV, II y fibrinógeno – o por la
presencia de inhibidores contra los factores o complejos de dicha vía.
Fundamento: APTT es un reactivo de factor plaquetario 3, conteniendo un
activador particulado y un tampón apropiado. Al mezclarse APTT con el plasma, se
obtiene un nivel óptimo de factor plaquetario 3 y una activación uniforme de la muestra.
Después de un determinado periodo de incubación a 37 ° C, la reacción se inicia
añadiendo solución de cloruro de calcio, midiéndose el tiempo, en segundos, que
transcurre hasta la formación del coagulo.
Procedimiento
25
Valores Normales: 25 – 43 segundos.
26
1.8 Velocidad de sedimentación globular (VSG)
La velocidad de sedimentación globular es la velocidad a la cual los eritrocitos se
asientan de sangre coagulada en una hora.
La velocidad de asentamiento depende de:
 La composición de proteínas del plasma.
 El tamaño y forma de los eritrocitos.
 La concentración de los eritrocitos.
El incremento de los valores de las proteínas del plasma
(principalmente fibrinógeno) resulta en una disminución del potencial
zeta (carga negativa) que rodea a los eritrocitos pueden unirse en
formación de pila de moneda y asentarse en el plasma a una
velocidad más rápida.
De igual manera el tamaño y la forma de los eritrocitos afectan la velocidad de
sedimentación. Los macrocitos se asientan más rápidamente que los eritrocitos
normales y los microcitos de manera más lenta .Debido a su forma irregular, los
poiquilocitos no pueden formar pilas de monedas y se asientan a una velocidad más
lenta.
La concentración de eritrocitos afecta directamente a la VSG y mientras mayor sea
la concentración de eritrocitos menor es a VSG.
El material que se utiliza para esta prueba es el siguiente: Tubo de Wintrobe,
pipeta de Wintrobe o Pasteur.
Procedimiento
1.- Realizar toma demuestra en un tubo con EDTA.
2.-Antes de empezar la determinación invierta el tubo con muestra suavemente 30 o 40
veces para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante.
3.-Enseguida tome sangre del tubo con una pipeta Pasteur, transfiérela a un tubo de
Wintrobe y llénelo hasta la marca de “0” 0 “10”. Debe procurar que al vaciar la pipeta
la punta de ésta quede al fondo del tubo e ir vaciando la sangre suavemente, al
mismo tiempo que se va retirando la pipeta del fondo.
4.-Lleve el tubo de Wintrobe a la gradilla e inicie el conteo de tiempo, dejando reposar la
muestra durante una hora.
5.- Transcurrida una hora, mida el espacio que ocupa el sobrenadante desde la superficie
hasta el borde superior de los eritrocitos sedimentados, haga la lectura en mm.
6.- Reporte sus resultados mm/Hora.
Valores de referencia
 Hombres menores de 50 años; 0 – 15 mm/hora
 Hombres mayores de 50 años; 0 – 20 mm/hora
 Mujeres menores de 50 años: 0 – 25 mm/hora
 Mujeres mayores de 50 años: 0 – 30 mm/hora
27
1.9 Recuento de reticulocitos
Significado clínico
La cuantificación de los reticulocitos presentes en sangre periférica proporciona un
método para evaluar la actividad eritropoyética de la medula ósea, la cual se usa en el
diagnostico diferencial de anemias y en la vigilancia de la respuesta eritropoyética de un
paciente en tratamiento.
Fundamento: Los reticulocitos son eritrocitos, inmaduros no
nucleados que contienen RNA residual, que en condiciones
normales se encuentran en menos del 1% en el torrente
sanguíneo, incrementándose éste valor en procesos donde el
aporte de oxígeno no es el adecuado.
Este tipo de eritrocitos es evidenciado Con el uso de un
colorante supravital (nuevo azul de metileno o azul de crecilo
brillante) se precipita el ARN ribosómico residual dentro de los
reticulocitos.
Un eritrocito que contiene dos o más partículas de material teñido de azul es un
reticulocito.
Procedimiento
1.- Se obtiene la muestra de sangre con EDTA o sangre capilar.
2.- Mezclar la muestra adecuadamente invirtiendo el tubo suavemente 30 o 40 veces
para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante.
3.- De la muestra se añaden dos o tres gotas de sangre en un tubo de ensaye seco y
limpio.
4.- En el mismo tubo se le agregan de igual manera dos o tres gotas de colorante azul de
cresilo al 1%.
5.- Se mezcla y se incuba a 37ºC durante 15 a 20 minutos .No se debe pasar de este
tiempo.
6.- Se vuelve a mezclar y de la suspensión se hacen dos frotis en portaobjetos en la
forma habitual, quizá un poco más delgados.
7.- Realizar el recuento de reticulocitos al microscopio de la siguiente manera:
- Se escoge una zona del frotis en donde no haya superposición de glóbulos.
- Es útil contar con un ocular provisto de diafragma ajustable.
- Los reticulocitos son de color azul pálido y contienen un retículo o material granular azul
oscuro, y los glóbulos rojos se tiñen de color azul pálido o verde azulado.
- Contar el número de reticulocitos por 1,00 glóbulos y expréselo como el número de
reticulocitos por 100 glóbulos rojos.
Valores normales
De 0.5 a 1.5 %
Recién nacidos hasta 2.5 %
28
1.10 Prueba de coombs
El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de una
reacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisis
inducidas por drogas, y enfermedad hemolítica del recién nacido.
El Coombs indirecto se realiza a pacientes politransfundidos, embarazadas.
El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes
politransfundidos, pacientes con antecedentes de reacción post transfusional
hemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible.
Material Reactivos
Centrífuga para tubos de mesa
- Aglutinoscopio.
- Tubos de ensayo de13x100
- Gradillas para tubos de ensayo
- Jeringuillas de 10 o 20 mL
- Agujas 20 o 21
- Torundas
- Ligaduras
- Aplicadores de madera.
Anticoagulante EDTA o heparina
- Alcohol al 70% o hibitane alcohólico
- Suero de Coombs poliespecífico
- Suero de Coombs monoespecífico anti
IgG y anti C3d.
-Solución salina
1.10.1 Coombs indirecto y cruzado
1. Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y decántelo
en un tubo debidamente identificado.
2. Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes O y en el caso del
Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la
suspensión.
3. En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de la
suspensión y mezcle bien.
4. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de la
suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien
5. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos
6. Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último
lavado.
7. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.
8. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.
9. Lea desprendiendo suavemente el botón en la lámpara aglutinoscopio.
Interpretación de los resultados
• Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinación esto indica presencia de
anticuerpos y /o complemento unidos a los hematíes in vivo, repita nuevamente el
procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.
Patrones de reacción
Reactivos monoespecíficos 1 2 3 4
_____________________________________________________
Anti Ig G + + - -
Anti C3 - + + -
29
1.10.2 Coombs directo
Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un
segundo anticuerpo, que es una antiglobulina. Se basa en el principio de los
ateroanticuerpos contra componentes del suero humano según la descrita por Mareschi y
los principios de la aglutinación publicados por Landsteiner. Los eritrocitos humanos en
presencia de un anticuerpos dirigido contra un antígeno que posean, pueden ser
sensibilizadas para no lograr la aglutinación por la naturaleza misma del anticuerpo o el
antígeno en cuestión.
El suero antihumano, reaccionará contra la gamma globulina que han sensibilizado
a componentes del complemente humano y propiciará la aglutinación de los eritrocitos.
El suero antiglobulina humana (de Coombs) permite reconocer estos glóbulos rojos
sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulinicos que ya cubren su superficie,
con lo cual se produce la aglutinación. Puesto que el suero contiene globulinas que
neutralizan muy rápidamente los anticuerpos antigobulinas humanas (de Coombs), es
evidente que para identificar los glóbulos sensibilizados es absolutamente necesario
remover la totalidad del suero de los glóbulos mediante lavados repetidos (tres cuando
menos) con grandes volúmenes (50 a 100 veces el volumen de los glóbulos rojos) de
suero fisiológico estéril.
 Procedimiento
La muestra empleada es suero del paciente.
1. Preparar glóbulos rojos del grupo O Rh positivos, lavados y resuspendidos al 5%.
2. Agregar en un tubo 2 gotas de suero del paciente y 1 gota de glóbulos rojos del
grupo O Rh positivos al 5%.
3. Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm.
4. Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de albúmina.
5. Agregar dos gotas de albúmina (potenciador) al tubo de la reacción negativa.
6. Incubar 30 minutos a 37° C y centrifugar durante 15 segundos a 3400 rpm.
li>Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de Coombs.
7. Lavar esta mezcla tres veces con solución salina.
8. Agregar 2 gotas de suero de coombs a cada tubo. Centrifugar y leer.
9. Comprobar las pruebas negativas con células control de coombs.
Interpretación de los resultados
Si la prueba con las células control de coombs es positiva:
 Demuestra que la técnica de lavado fue correcta y que el reactivo de antiglobulina
tiene actividad anti IgG y por lo tanto la prueba es válida.
 Si la prueba de control es negativa la prueba queda inválida y debe repetirse.
 Células control de coombs: 4 gotas de anti D + 4 gotas de solución salina + 4
gotas de glóbulos rojos Grupo O Rh positivo. Incubar 1 hora a 37 ° C. Lavar 4
veces con solución salina. Reconstituir con 2ml de solución salina
30
2.- Departamento de serología e inmunología
La inmunología se inicio como una rama de la microbiología medica, relacionada
con el estudio de la resistencia a las enfermedades infecciosas. En la actualidad, empero,
se le reconoce por meritos propios como un campo de la investigación biomédica, sin
limitarla de ninguna manera a la zona de las infecciones .En realidad el termino
inmunidad, tal como lo usan los inmunólogos, ya no implica necesariamente una
respuesta que resulte protectora para el individuo.
Puede considerarse a la inmunidad como un estado de respuesta alterada ante
una sustancia especifica, a causa de un contacto anterior con dicha sustancia.
El sistema inmunitario normal tiene como fusión la vigilancia fisiológica
ininterrumpida. Protege al cuerpo de la invasión de microorganismos y conserva la
homeostasia al regir la degradación celular normal y la eliminación de células lesionadas.
También identifica y elimina células anormales que surgen continuamente en el interior
del cuerpo.
Los estudios de disfunción inmunitaria poseen enorme importancia clínica. El
numero de estudios inmunológicos para estudiar reacciones antígeno-anticuerpo ha
aumentado rápidamente desde 1975, hasta nuestros días. Las pruebas existentes se
modificaron o fueron substituidas por otras que reflejan nuevos datos y técnicas .Los
estudios recientes de la respuesta inmunitaria mediada por células y sus componentes se
crearon con base en la aplicación de la inmunopotenciación, inmunosupresión e
inmunomodulación, en la terapéutica clínica. Los mecanismos de defensa inespecíficos y
específicos protegen al cuerpo contra el ataque de elementos “no propios”.
La determinación de este tipo de pruebas son de utilidad para diagnostico de
enfermedades de transmisión sexual, problemas de articulación, infecciones por
microorganismos, y la detección de embarazo. Se cuenta con personal capacitado y con
experiencia para la realización de todas estas pruebas.
31
2.1 Factor reumatoide
Significado clínico
El factor reumatoide es el termino para describir el grupo de autoanticuerpos con actividad
anti-IgG; aproximadamente, el 80%-90% de los pacientes con artritis reumatoide tienen
anticuerpos IgG. Estos anticuerpos, llamados factor reumatoide (anti.IgG), también se ven
en la endocarditis bacteriana, quistosomiasis, lepra, osteomielitis, y otras infecciones
crónicas.
- También se encuentra en algunos pacientes con otras enfermedades del tejido
conectivo.
- Aunque la presencia de este anticuerpo en el suero no causa la enfermedad, el
factor reumatoide, locamente producido en las articulaciones, puede producir
efectos y formación de complejos inmunes, pudiendo provocar una respuesta
inflamatoria.
Un 80% de los pacientes con artritis reumatoide tiene un factor reumatoide en su sangre.
Fundamento: el factor reumatoide es un anticuerpo circulante que reacciona con algunos
componentes de inmunoglobulinas, generalmente es un anticuerpo IgM (19 S) que
reacciona con inmunoglobulinas de origen animal, humano o autólogas (las propias IgG
del paciente). La prueba de aglutinación con partículas de latex es el método más común,
en donde la gamma globulina agregada es absorbida sobre partículas de latex que se
aglutinan en presencia de factor reumatoide; esta no es una prueba muy especifica pero
si es muy sensible.
Procedimiento; prueba cualitativa
1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Preparar una dilución 2:20 del suero problema, diluyendo 0.05 ml del suero con 1
ml de solución amortiguadora.
3. Poner una gota (aprox. 0.05 ml) del suero diluido en las áreas marcadas de la
laminilla.
4. Añadir una gota del reactivo de látex al suero problema.
5. Mezclar con un aplicador.
6. Agitar durante 2 minutos.
7. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa.
Interpretación
-Positivo; Aglutinacion visible de las partículas de latex.
-Negativo; No aglutinación o una ligera granulosidad que no excede a la
observada en el control negativo.
Nota;
- Si hay aglutinación realizar las siguientes diluciones: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:34 y
multiplicar (2.5) (Dilucion)=Resultado verificado por duplicado.
- Si no hay aglutinación reportar: < 2.5 ul/ml
32
2.2 Proteína C reactiva
Significado clínico
Durante las infecciones se incrementa la concentración sérica de ciertas proteínas,
llamadas proteínas de fase aguda. Una de éstas es la proteína C reactiva (PCR) llamada
así porque se une a la proteína C de los neumococos. La PCR fue descrita por primera
vez en 1931 por Tillet y Francis, quienes reportaron una reacción de presipitacion que
podía ser demostrada en el suero de pacientes que padecían neumonía lobular por cepas
de neumococos.
El extracto de neumocóccico era un carbohidrato denominado C, y la proteína
humana selectiva capaz de precipitar se le denomino proteína C reactiva.
Independientemente de le neumonía lobular, la PCR se ha asociado a una gran variedad
de enfermedades infecciosas, a procesos inflamatorios no infecciosos y a ciertos
padecimientos malignos.
Fundamento: la prueba es usada frecuentemente para monitorear la actividad en
pacientes con fiebre reumática y artritis reumatoide. La prueba de PCR látex consiste en
usar moléculas inertes biológicamente de poliestireno látex que son sencibilizadas con
anti-PCR de origen animal. La PCR presente en el suero del paciente sirve como antígeno
y cuando se mezcla con el reactivo de látex sensibilizado se produce una aglutinación
detectable macroscópicamente.
Procedimiento; Método cualitativo en placa.
1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Depositar 0.95 ml de diluyente glicina salina diluido (de acuerdo a las instrucciones
del fabricante) en un tubo de ensaye.
3. Añadir a este tubo 0.05 ml del suero problema para asi obtener una dilución 1:20 y
estará lista para su uso.
4. En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido.
5. Mezclar el reactivo PCR látex hasta tener una suspensión homogénea y añadir
una gota del reactivo de látex a cada suero.
6. Mezclar con un aplicador diferente para cada muestra.
7. Agitar la placa durante dos minutos.
8. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa.
Interpretación
-Positiva: aglutinación visible en las partículas de látex similar a la del suero
control positivo.
-Negativo: No aglutinación o una ligera granulosidad que no exceda a la
observada e en el control negativo.
2.3 Prueba de V.D.R.L.
Significado clínico
La prueba VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) es una reacción de
floculación que utiliza cardiolipina para revelar la presencia de anticuerpos anti-
Treponemas,y hacer el diagnóstico de la sífilis. Sin embargo, la prueba VDRL no es
específica para demostrar la presencia de anticuerpos anti-Treponemas, puesto que la
cardiolipina se obtiene del corazón de bovinos. A pesar de que la prueba solo permite el
33
diagnóstico de un 75% de los casos de sífilis primaria y de que puede dar reacciones
falsas positivas con los anticuerpos anti-DNA, la cardiolipina continua siendo un reactivo
útil para el diagnostico de la sífilis por las dificultades que existen para cultivar in vitro el
Treponema Pallidum.
Fundamento: Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se
detectan en suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado.
Si la muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación
visible en microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno
altamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de la técnica USR
(Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.
Procedimiento
Tanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes de
realizar la prueba.
I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO O PLASMA
1. En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar:
 Muestra; 50 ul
Con gotero provisto colocar:
 Antígeno; 1 gota
Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. Observar inmediatamente
en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).
II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO O PLASMA
1. Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solución fisiológica
y realizar para cada dilución la prueba como se describe en I.
III- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR
1. Diluir el Antígeno 1:2 con solución de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro de
las 2 horas de preparación.
2. En cada sector delimitado de la placa colocar:
 Muestra 50 ul
Con aguja calibre 6 agregar:
 Antígeno diluido 1 gota (10 ul)
3. Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante 8 minutos a 180 rpm.
4. Leer los resultados en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).
Interpretación de los resultados
-Reactivo: presencia de floculación.
-No reactivo: ausencia completa de floculación.
Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la inversa de la última dilución
que se observe reactiva. Leer atentamente las LIMITACIONES DEL
PROCEDIMIENTO.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Para controlar la calidad del sistema procesar un Control Positivo (suero
seguramente reactivo) y un Control Negativo (suero seguramente no reactivo)
utilizándolos de la misma forma que las muestras.
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LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Resultados falsamente
positivos pueden ser observados en individuos con cuadros patológicos diversos como
hepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma, tuberculosis, cáncer, diabetes y
enfermedades autoinmunes.
Estos casos no son muy comunes y generalmente presentan reacciones con
títulos bajos y una historia clínica que no coincide con las características de sífilis. Es
imprescindible por estos motivos ante toda prueba cualitativa reactiva realizar la prueba
semicuantitativa.
Resultados falsamente negativos pueden observarse cuando se presenta el
fenómeno de prozona. Por este motivo se recomienda repetir la prueba en suero diluido
1:5 con solución fisiológica para verificar el resultado. Si en estas condiciones se observa
floculación la muestra es reactiva.
A pesar de las ventajas de este método, sus resultados al igual que los de
cualquier prueba serológica, sólo constituyen un dato auxiliar de diagnóstico que debe
corroborarse con la historia clínica del paciente.
2.4 Reacciones febriles
Significado clínico
La infección causada por microorganismos de diversas especies produce entre
otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebre
tifoidea causada por Salmonella typhi, S. Enteritis, así como las paratifoideas causadas
por S. Paratyphi A y B; y el Tifo causado por el género Rickettsias .La infección por estos
microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de
anticuerpos que pueden ser detectados por el antígeno especifico.
Fundamento: La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos
séricos y el antígeno correspondiente como lo son el Tífico “O” (somático), Tífico “H”
(flagelar), Paratífico “A”, Paratífico “B”, Proteus OX-19; produciendo una reacción de
aglutinación macroscópica.
Procedimiento: Método Cuantitativo
1.- Obtener la muestra de sangre sin anticoagulante y separar el suero
que este bien identificada.
2.- Llevar los reactivos correspondientes a temperatura ambiente y
marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que
este usando (“O”, “H”, “A”, “B”, Proteus OX-19).
3.- Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades
de suero a probar: 0.04 ml, 0.02 ml ,0.01ml, 0.005 ml.
4.- Agitar el antígeno a utilizar y añadir una gota de la suspensión a
cada una de las diferentes cantidades de suero.
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5.- Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las
cantidades de suero.
6.- Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante dos
minutos.
7.- Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación
macroscópica. Reportar de acuerdo a la dilución que haya llegado.
Interpretación de los resultados
El grado de aglutinación se registra como sigue:
El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una
aglutinación del 50 % de organismos (2+)
Valores Normales: Negativos
2.5 Rosa de bengala
Significado clínico
Es una prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de
aglutininas especificas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis).
Fundamento: Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 acidificado regulado y
teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas
especificas de Brucella.
Procedimiento:
1.- Obtener la muestra de sangre y separar el suero.
2.- Utilizando una pipeta automática adicione 30 l de la muestra del paciente en un
círculo de la placa.
3.- Mezcle bien el antígeno después coloque una gota sobre el suero y mezcle con un
aplicador.
4+ Aglutinación del 100% de los organismos
3+ Aglutinación del 75% de los organismos
2+ Aglutinación del 50% de los organismos
1+ Aglutinación del 25% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos
Volumen del suero Titulo
0.08 ml 1:20
0.04 ml 1:40
0.02 ml 1:80
0.01 ml 1:160
0.005 ml 1:320
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4.- Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. Y con la ayuda de una fuente
de luz directa lea el resultado.
Interpretación de resultados.
La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de
que se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio
para la observación de ciertas aglutininas que se revelen lentamente y que de otra
manera se pueden omitir.
Si hay cualquier cantidad de aglutinación es positiva.
Si no hay aglutinación es negativa.
Valores Normales: Negativo
2.6 Prueba inmunológica de embarazo por inmunoensayo
cromatográfico con partículas de oro coloidal para detección de
beta hcg en orina o suero.
Significado clínico
La gonadotropina coriónoica humana (hCG) es secretada normalmente por la
placenta .En el embarazo, la secreción aumenta tiempo después .La hCG se excreta por
la orina y se alcanzan niveles relativamente altos, lo que permite la utilización de técnicas
rápidas y simples para la determinación del embarazo
Durante el tiempo de atraso del último periodo menstrual, los niveles de hCG es
suero son de 100mlU/ ml con niveles pico de 100,000 a 200,000 mlU/ ml observados al
final del primer trimestre.
Fundamento: El ensayo utiliza una combinación única de anticuerpos monoclonales y
policlonales, reactivos que detectan selectivamente niveles bajos de hCG en la muestra.
La prueba se lleva a cabo mediante la adición de muestra en la zona de prueba, seguido
de la formación de líneas coloridas en las zonas de la muestra y de control. La muestra
migra por acción capilar a lo largo de la membrana y reacciona con los conjugados
coloridos.
Procedimiento:
1.- Obténgase la muestra de sangre y separe el suero. O también muestra de orina.
2.- Remueva el dispositivo de prueba de su bolsa protectora y
póngalo sobre una superficie plana .Identifique el dispositivo con los
datos del paciente.
3.- Sosteniendo el gotero desechable e forma vertical, vierta cinco gotas de suero u orina
(aproximadamente 0.2 ml) dentro del orificio de muestra.
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4.- Lea a los 3 minutos muestras de orina y a los 5 minutos muestras de suero.
NOTA: Dependiendo de la concentración de HCG, un resultado positivo pude ser
observado en tan solo 40 segundos. Sin embargo, para confirmar un resultado negativo,
se requiere de esperar 5 minutos.
No se deben interpretar los resultados después de 5 minutos.
INTERPRETACIÓN
Negativo. Únicamente aparecerá una banda de color rosa en la zona de control (C).
No aparece banda sobre la región del paciente (T).
Positivo. En adición a la banda de control, deberá aparecer una segunda banda de
color rosa en la zona del test (T)
No valido. Una total ausencia de color en ambas regiones.
2.7 Determinación de HIV y HCV
Significado clínico
La Prueba Rápida de Anticuerpos HIV y HCV detecta cualitativamente la presencia
de anticuerpos VIH y HCV en muestras de suero, plasma o sangre completa. Cualquier
persona expuesta al VIH o HCV producirá los anticuerpos que son indicadores de la
infección. La detección de dichos anticuerpos, representa un resultado positivo (indicando
que el individuo está infectado). La ausencia de anticuerpos al momento de la prueba
(indicando que el individuo no está infectado) es indicativo de un resultado negativo, sin
embargo no descarta totalmente una infección de VIH o HCV. Puede llevar hasta tres
meses, tras la exposición al VIH o HCV, el desarrollo de estos anticuerpos.
Fundamento. La prueba se basa en poner en contacto una muestra de suero con un
conjugado de Ag viral-oro coloidal (VIH o HCV) embebido en el pocillo de muestra el cual
reacciona con los Ac presentes en la muestra formando un complejo Ac-Ag-conjugado, la
mezcla emigra a lo largo de la tira de prueba el cual es captado por un Ag de VIH
recombinante inmovilizado en una membrana y formando una banda colorida en la región
de prueba.
Una muestra negativa no produce una banda colorida debido a la ausencia del
complejo conjugado de oro coloidal/anticuerpos (anti-VIH o anti-HCV).
Los Ag utilizados en la prueba de conjugado son proteínas recombinantes altamente
inmunoreactivas de VIH-1 y VIH-2.
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Una banda coloreada en la región control aparece al final de la prueba sin
considerar el resultado de la prueba. Esta banda control es el resultado de la unión del
conjugado de oro coloidal al anticuerpo viral (VIH o VIH) inmovilizado en la membrana. La
banda control indica que el conjugado de oro coloidal es funcional.
Procedimiento
1.- No abrir los sobres sellados hasta que se esté listo para la prueba.
Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente.
2.- Sacar el cartucho de su sobre y colocarlo en una superficie seca.
3.- Identificar los cartuchos para cada muestra o control.
4.- Colocar una gota de muestra o control (con el gotero proporcionado) en el pocillo S.
5.- Posteriormente agregar 1 gota del diluyente en el pocillo S (para prueba de VIH) y en
el pocillo D (para prueba de HCV).
INTERPRETACION:
 POSITIVO: Tanto la banda de prueba como la banda control se colorea de rojo
púrpura.
 NEGATIVO: Solo la banda control aparece de color rojo púrpura en la membrana.
 INVALIDO: siempre tendrá que haber una banda color rojo púrpura en la región
de control independientemente del resultado de la prueba. Si la banda control no
se observa la prueba se considera inválida. Repetir la prueba empleando un nuevo
cartucho.
C C C C C
T T T T T
Positivo Negativo Inválido
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3.- Departamento de orinas
Desde hace mucho tiempo se reconoce
que las propiedades físicas y químicas de la orina
constituyen indicadores importantes del estado de
salud.
El análisis de orina incluye el examen del
color, del aspecto, de la densidad, del pH, la
detección de proteínas, glucosa, cetonas, sangre
oculta, bilirrubinas, nitrito urobilinógeno, así como
el examen microscópico del sedimento.
Los principales constituyentes de la orina son agua, urea, ácido úrico, creatinina,
sodio, potasio, cloro, calcio, magnesio, fosfatos, sulfatos y amoniaco. En 24 horas el
organismo excreta aproximadamente 60g de material disuelto, la mitad de la cual esta
constituida por urea. En algunos procesos patológicos aparecen en gran cantidad,
sustancias tales como cuerpos cetónicos, proteínas, glucosa, porfirinas y bilirrubina. La
orina también puede contener estructuras como cilindros, cristales, células sanguíneas y
células epiteliales.
Entre las enfermedades urológicas que el análisis de orina ayuda a diagnosticar
pueden mencionarse la cistitis (inflamación de la vejiga), la nefritis (inflamación del riñón
que puede presentarse con infección bacteriana, pielonefritis o sin ella, glomerulonefritis)
y la nefrosis (degeneración del riñón sin inflamación).
Significado clínico
La orina es un material que permite obtener una considerable información, de
forma rápida y económica. Los análisis de orina deben realizarse de forma cuidadosa y
perfectamente controlada. El estudio de la orina puede plantearse desde dos puntos de
vista: diagnostico de enfermedades renales o de tracto urinario y para la detección de
enfermedades metabólicas o sistémicas no directamente relacionadas con el sistema
urinario.
Fundamento: La orina es una solución acuosa de sustancias orgánicas e inorgánicas, de
las cuales la mayor parte, son de desecho del metabolismo celular .Las tiras reactivas
Ames –Bayer para uroanalisis son bases plásticas en las que hay adheridas diversas
áreas reactivas para determinar glucosa, bilirrubina, cetona, gravedad, pH, leucos, etc.
Los resultados obtenidos proporcionan información referente al metabolismo de
carbohidratos, función hepática, y renal, balance ácido base e infecciones del tracto
urinario.
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3.1 Recolección de la muestra de orina
La muestra deberá recolectarse en un recipiente estéril, limpio y seco, de
preferencia deberá ser la primera de la mañana por ser la más concentrada y a
mitad de chorro, a fin de evitar su contaminación por alguna descarga
hemorrágica.
El análisis de la orina recolectada en 24 hrs. Y adecuadamente conservada,
proporciona una medida cuantitativa más exacta de la excreción de proteína y
otros constituyentes.
La cateterización se considera como un procedimiento innecesariamente
peligroso, debido a riesgo de que cause infecciones genitourinarias y pielonefritis.
A veces puede ser necesario taponar la vagina, pero las muestras de orina
libremente emitidas son preferibles.
La orina debe examinarse siempre fresca, de ser posible, dentro de los 30
minutos siguientes a su emisión y a una temperatura no menor de 20 ° C.
Evitar la presencia de conservadores o diluyentes, rotular con los datos
completos del paciente.
3.2 Examen físico de la orina
El examen físico se debe realizar en la muestra previamente agitada y sin
centrifugar.
Color
La orina normal presenta una amplia gama de colores, lo cual está determinado
por su concentración. El color puede variar de un color amarillo pálido a un ámbar oscuro,
según la concentración de los pigmentos urocrómicos.
Sin embargo existen muchos factores y constituyentes que pueden alterar el color
normal de la orina, incluyendo medicamentos así como productos químicos. En el
siguiente cuadro se presentan algunas sustancias que pueden influir en el color.
SUSTANCIAS QUE PUEDEN COLOREAR LA ORINA
COLOR PATOLÓGICAS NO PATOLÓGICAS
Blanco Quilo
Pus (muchos leucocitos)
Fosfatos
Amarillo a anaranjado Bilirrubina
Urobilina
Acriflavina
Azo-Ganstrisin
Colorantes de alimentos
Nitrofurantonina
Orina concentrada
Pyridium
Quinacrina
Riboflavina
Ribarbo
Sena
Serotonina
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Rosado a rojo Eritrocitos
Hemoglobina
Mioglobina
Porfobilina
Porfirinas
Aminopirina
Antipirina
Bromosulftaleina
Cascara
Colorantes de alimentos
Fenacetina
Fenolftaleina
Metildopa
Remolacha
Rojo a castaño a púrpura Porfobilina
Porfobilinogeno
Uroporfirina
Castaño a negro Ácido homogentisico
Bilirrubina
Fenol
Melanina
Metahemoglobina
Mioglobina
Porfirinas
Compuestos de hierro
Cloroquina
Hidroquinona
Levodopa
Metildopa
Nitroforantoina
Quinina
Resorcinol
Azul a verde Biliverdina
Infección por pseudomonas
Acriflavina
Amitriptilina
Azul de Evans
Azul de metileno
Azur A
Complejo de vitamina B
Creosota
Fenil salicilato
Timol
Tolonio
Triampireno
Si bien algunos laboratorios ya no informan mas sobre el color de la orina, no
deben subestimarse las pistas dadas por las características físicas. Debería informarse
siempre sobre todo color muy anormal, como negro o castaño, así como también la
presencia de orinas rojas con lectura negativa para sangre oculta.
Aspecto
La orina habitualmente es clara pero puede tornarse turbia por precipitación de
partículas de fosfato amorfo en orinas ácidas. La orina puede ser turbia por presencia de
leucocitos o de células epiteliales. Las bacterias pueden causar turbidez. El moco puede
dar a la orina un aspecto brumoso.
Olor
Existen solo unas pocas sustancias donde el olor de la orina tiene importancia. Las
cetonas pueden concebirle un olor dulce o a frutas. Una muestra contaminada con
bacterias puede tener un olor picante. Se dice que la orina de un lactante con
fenilcetonuria tiene un olor “rancio” o “a ratón”. El olor de orina que se asemeja al de “pies
sudados” se encuentra en la acidemia isovalerica o en individuos que presentan
cantidades excesivas de ácido butírico o hexanoico. La hipermetioninemia a sido asociada
con un olor a “manteca rancia” o a “pescado”.
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Peso especifico
El peso especifico es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y
el peso del mismo volumen de agua destilada medidos a una temperatura constante.
Constituye un índice de la concentración del material disuelto en la orina. El peso
específico se utiliza para medir el poder concentrador y diluyente del riñón en su esfuerzo
por mantener la homeostasis en el organismo.
El intervalo normal para una muestra tomada al azar es de 1.003 – 1.035 aunque
en casos de hidratación excesiva la lectura puede llegar a 1.001 (el valor del agua es 1).
El valor varía enormemente según el estado de hidratación y el volumen urinario. El rango
para la muestra de 24 hrs. es de 1.015 – 1.025.
3.3 Examen químico de la orina
El análisis de orina incluye pruebas químicas para pH, proteínas, glucosa, cetonas,
sangre oculta, bilirrubinas, nitrito y urobilinógeno. Estos procedimientos pueden ser
mediciones cualitativas (positivos o negativos) o semicuantitativas (por ejemplo, de trazas
de 4+).
Desde la introducción de tiras reactivas simples y múltiples el examen químico de
la orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rápido. Actual mente es posible
analizar hasta 9 pruebas diferentes en menos de 60 segundos.
Una tira reactiva es esencialmente una banda angosta de plástico con pequeños
tacos adheridos. Cada taco contiene reactivos para una reacción diferente.
El procedimiento para usar las tiras reactivas es el siguiente:
1) Sumergir completamente las áreas de prueba de la tira en orina fresca, bien
mezclada y sin centrifugar y retirar la tira en forma inmediata.
2) Eliminar el exceso de orina en la tira.
3) Comparar las áreas reactiva con la correspondiente carta de colores del envase.
pH URINARIO
El pH de la orina esta determinado por la concentración de H+
libre.
Como el pH es la reciproca de la concentración de ion hidrogeno (H+
), a medida
que la concentración de este ion aumenta, el pH disminuye y viceversa. El pH de la orina
puede variar entre 4.6 y 8, pero en promedio se encuentra alrededor de 6.
Tiras reactivas
Utilizan dos indicadores, el rojo de metilo y el azul de bromotimol, que cubren la
escala de pH entre 5 y 8, 5 o 9. Los colores van del anaranjado al amarillo y del verde al
azul.
PROTEINAS
En el riñón normal solo una pequeña cantidad de proteínas de bajo peso molecular
se filtra en el glomérulo. La mayor parte de la proteína filtrada se reabsorbe en lo túbulos;
se excretan <150 mg/24h (o 20mg/dl) de proteína. En el niño la excreción normal es de
100mg/m2
/24h.
Puede observarse que existen dos mecanismos principales que pueden dar lugar
a una proteinuria: el daño glomerular o un defecto en el proceso de reabsorcion a nivel
tubular.
43
Tiras reactivas
Esta prueba está basada en el principio conocido como indicadores de error de
proteína. A un pH constante, el desarrollo de cualquier color verde es debido a la
presencia de proteínas. Los colores formados van desde amarillo verdoso y verde hasta
azul verdoso para las pruebas positivas.
GLUCOSA
La cantidad de glucosa que aparece en la orina depende del nivel de la glucemia,
de la velocidad de filtración glomerular y del grado de reabsorción tubular. Por lo general
no existe glucosa en la orina hasta que en nivel de glucosa en sangre no supera los 160 –
180 mg/dl cifra que es el umbral renal normal para la glucosa. Cuando el nivel de la
glucemia supera el umbral renal, los túbulos no pueden reabsorber toda la glucosa filtrada
y se produce glucosuria.
Tiras reactivas
Esta prueba está basada en una reacción enzimática secuencial doble. Una
enzima, la glucosa oxidaza, cataliza la formación de ácido gluconico y peróxido de
hidrogeno a partir de la oxidación de la glucosa. Una segunda enzima, la peroxidaza,
cataliza la reacción entre él peróxido de hidrogeno y el cromógeno yoduro de potasio para
oxidar al cromógeno y producir colores que van de verde a café.
CETONAS
Los cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos grasos.
Cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es superada,
el exceso se excreta en la orina.
Tiras reactivas
Esta prueba esta basada en la reacción que se produce entre el ácido
acetoacetico y el nitroprusido. Los colores formados van desde un rosa moderado, para
las lecturas negativas, hasta un color púrpura.
SANGRE OCULTA
Los métodos químicos que se utilizan en el examen de orina para detección de
sangre (Hematuria: presencia d sangre o de hematíe intactos en la orina), también
detectan hemoglobina libre (Hemoglobinuria: presencia de hemoglobina libre en la orina
como consecuencia de hemolisis intravascular) y mioglobina (Mioglobinuria: aparece en
procesos en los cuales hay destrucción muscular).
Los glóbulos rojos pueden entrar en la orina en cualquier sitio, desde el glomérulo
hasta la uretra.
Tiras reactivas
Esta prueba está basada en la acción de la hemoglobina, que mimetiza, la acción
de la peroxidaza, catalizando la reacción entre el hidroparoxido de cumeno y la 3, 3´,5, 5´
tetrametilbenziolina. Los hematíes intactos de la orina se hemolisan al contacto con el
taco reactivo. La hemoglobina liberada reacciona con el reactivo dando puntos verdes
sobre el fondo amarillo o anaranjado. Entonces, la presencia de hematíes intactos da una
reacción de color verde punteado, mientras que la hemoglobina libre y la mioglobina da
una coloración uniforme de color verde o del verde al azul oscuro.
44
BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
La bilirrubina se forma a partir de la degradación de la hemoglobina en el sistema
reticuloendotelial; unida a la albumina, es transportada por la sangre hasta el hígado. Esta
bilirrubina libre o no conjugada es insoluble en agua y no puede filtrar a través del
glomérulo. En el hígado es captada por las células parenquimatosas y conjugadas con
ácido glucurónico para formar diglucuronido de bilirrubina. Esta bilirrubina conjugada es
hidrosoluble y se excreta por el hígado a través del conducto biliar hacia el duodeno.
Normalmente, cantidades muy pequeñas de bilirrubina conjugada siguen el camino
inverso (regurgitación) desde el conducto biliar hacia el sistema sanguíneo. En
consecuencia pueden encontrarse cantidades muy pequeñas de bilirrubina en plasma.
Como la bilirrubina conjugada no esta unida a las proteínas filtra fácilmente a través de los
glomérulos y es excretada en la orina toda vez que aumenta el nivel plasmático.
En el intestino, las enzimas bacterianas, convierten la bilirrubina en diversos
compuestos relacionados que se denominan en forma colectiva “urobilinógeno”. La mayor
parte del urobilinógeno se pierde con las heces. Aproximadamente el 10 – 15% del
urobilinógeno es reabsorbido, pasa al torrente sanguíneo, retorna al hígado y es
excretado hacia el intestino. Una pequeña cantidad de este urobilinógeno se excreta
también por los riñones, y en la orina existe un nivel normal de aproximadamente 1 – 4
mg/24h.
Tiras reactivas
Bilirrubina: Esta prueba esta basada en el acoplamiento de la bilirrubina con la
dicloroanilina diasotizada en un medio fuertemente ácido.
Urobilinógeno: Esta prueba esta basada en la reacción de Ehrlich, el la cual el
p-dimetilaminobenzaldeido reacciona con el urobilinógeno en un medio fuerte mente ácido
para producir un color rosa.
NITRITOS
La prueba para detección de nitrito es un método rápido, indirecto, para el
diagnostico temprano de bacteriuria significativa y asintomática. Los organismos comunes
que causan infección del tracto urinario, como la Escherichia Coli, el Citrobacter, la
Klebsiella y las especies de Proteus, contienen enzimas que reducen el nitrato de la orina
a nitrito.
Tiras reactivas
Esta prueba depende de la conversión de nitrato a nitrito por la acción de bacterias
Gram-negativas presentes en la orina. El nitrito reacciona con el ácido p-arsanilico en un
medio ácido para formar un compuesto de diazonio. El compuesto de diazonio a su vez se
acopla con la 1, 2, 3, 4 - tetrahidrobenzoquinolina para producir un color rosa.
3.4 Examen microscópico de la orina
El examen microscópico del sedimento constituye una parte vital del análisis de
orina. Es una herramienta diagnostica valiosa para detección y evaluación de trastornos
renales y del tracto urinario, así como de otras enfermedades sistémicas.
45
PREPARACIÓN DEL SEDIMENTO
El examen microscópico debe hacerse en una muestra centrifugada. Se mezcla la
muestra y se colocan aproximadamente 10 – 5ml de orina en un tubo de centrifugación.
Se centrifuga a 2000 rpm durante 5 minutos. Se elimina el liquido sobrante y se suspende
el sedimento en la orina que baja por las caras del tubo. Se dan golpecitos en la parte
inferior del tubo para mezclar el sedimento. Se coloca una gota de este en un portaobjetos
limpio. Se cubre con un cubreobjetos y se examina inmediatamente.
CÉLULAS
Entre las células que pueden estar presentes en la orina se encuentran eritrocitos,
leucocitos y células epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario, o como
contaminantes procedentes de vagina o vulva.
Eritrocitos. Los hematíes presentes en la orina pueden provenir de cualquier punto del
tracto urinario, desde el glomérulo hasta el meato urinario, y en la mujer constituyen a
veces contaminación menstrual.
Normalmente no aparecen hematíes en la orina; sin embargo, la presencia de 1 – 2
hematíes/campo por lo general no se considera anormal. El mecanismo por el cual los
hematíes entran en la orina no esta aclarado totalmente.
Hematuria es una presencia de un numero elevado de hematíes en la orina.
Leucocitos. Los glóbulos blancos pueden entrar en cualquier punto del tracto urinario
desde el glomérulo hasta la uretra. En promedio, la orina normal puede contener hasta 2
glóbulos blancos / campo.
Pueden aparecer en forma aislada o en acúmulos. La mayoría de los leucocitos de la
orina son neutrofilos.
El aumento de leucocitos en la orina esta asociado con procesos inflamatorios en el
tracto urinario o en sus adyacencias.
Células epiteliales. Las células epiteliales presentes en la orina pueden provenir de
cualquier sitio del tracto urinario, desde los túbulos contorneados proximales hasta la
uretra, o de la vagina. Normalmente pueden encontrarse algunas células epiteliales en la
orina como consecuencia del desprendimiento normal de células viejas. Un incremento
marcado indica una inflamación de la porción del tracto urinario de donde procede
CRISTALES
Por lo general no se encuentran cristales en la orina recién emitida, pero aparecen
dejándola reposar durante un tiempo. Cuando la orina esta sobresaturada con un
compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de este se
encuentran alteradas, el resultado es la formación de cristales.
Cristales de ácido úrico. Pueden aparecer con muy diversas formas, como el
diamante o prisma romboico y la roseta. En ocasiones pueden tener seis caras. Tienen
color amarillo o rojo – castaño.
Los estados patológicos en los cuales se observan cristales de ácido úrico en la orina
son la gota, el metabolismo de las piurias aumentado, enfermedades febriles agudas,
nefritis crónica y el síndrome de Lesch – Nyhan.
46
Cristales de oxalato de calcio. Son incoloros, de forma octaédrica o de “sobre”,
parecen cuadrados pequeños cruzados por líneas diagonales que se interceptan. Al
encontrar un típico cristal de oxalato de calcio el observador ve la “X” del cristal
sobresaliendo en el campo.
Pueden existir normalmente en la orina, en especial después de ingerir diferentes
alimentos ricos en oxalato, como tomate, ruibarbo, ajo, naranjas y espárragos.
Los estados patológicos en los que puede existir oxalato de calcio en la orina en
cantidad aumentada son la intoxicación con etilenglicol, diabetes mellitus, enfermedad
hepática y enfermedad renal crónica grave.
Urato amorfo.Con frecuencia hay en la orina sales de urato (de sodio, potasio,
magnesio y calcio) en una forma no cristalina, amorfa. Estos uratos amorfos tienen
aspecto granular y color amarillo-rojo. Carecen de significación clínica.
Cristales de Ácido Hipúrico. Son prismas o placas enlongadas amarillo castaño o
incoloras. Pueden ser tan delgadas que parecen agujas, y con frecuencia esta
agrupados. Carecen de significación clínica.
Uratos de sodio. Son agujas o prismas delgados, incoloros o amarillentos que se
presentan en grupos o racimos. Carecen de significación clínica.
Cristales de Sulfato de calcio. Son agujas o prismas largas, delgadas e incoloras.
Carecen de significación clínica.
Cristales de Cistina. Son placas hexagonales, refringentes e incoloras, cuyos lados
pueden ser iguales o no. Aparecen en pacientes con cistinosis o cistinuria congénita y
pueden formar cálculos.
Leucina. Son esferoides oleosos, altamente refractarios de color amarillo o castaño
con estriaciones radiales y concéntricas. Se encuentran en orina de pacientes con la
enfermedad de la orina en jarabe de arce, con síndrome de Smith y Strang y con
enfermedades hepáticas graves como cirrosis terminal, hepatitis viral grave y atrofia
amarilla del hígado.
Tirosina. Son agujas muy finas, altamente refringentes que aparecen en grupos o
acúmulos. Los cúmulos de agujas con frecuencia aparecen de color negro, sobretodo en
el centro, pero pueden tomar una coloración amarilla en presencia de bilirrubina.
Los cristales de tirosina aparecen en enfermedades hepáticas graves, en la tirosinosis
y en el síndrome de Smith y Strang.
Colesterol. Son placas de gran tamaño, planas y transparentes, con ángulos mellados.
La presencia de placas de colesterol en la orina es índice de una excesiva destrucción
tisular; estos cristales se observan en cuadros nefríticos y nefróticos y también en caso de
quiluria.
Fosfato triple. Son prismas incoloros de tres o seis caras que con frecuencia tienen
extremos oblicuos. Aparecen en pielitis crónica, cistitis crónica, hipertrofia de próstata.
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Fosfato amorfo. Las sales de fosfato con frecuencia están presentes en la orina en
forma no cristalina, es decir, como sustancias amorfas. Se distingue de urato amorfo por
el pH. Carece de significación clínica.
Biurato de amonio. Son cuerpos esféricos de color amarillo castaño, con espiculas
largas e irregulares. Constituyen una anormalidad solo si se encuentran en orinas recién
emitidas.
CRISTALES OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIO
CILINDROS
Cilindros Hialinos. Son incoloros, homogéneos y transparentes y por lo general tienen
extremos redondeados.
Cilindros eritrocitarios. Los cilindros eritrocitarios pueden tener color castaño o ser
casi incoloros. Pueden estar formados por unos pocos glóbulos rojos en una matriz
proteica, o bien por muchas células aglomeradas sin matriz visible.
Cilindros leucocitarios. La mayoría de los leucocitos que aparecen en los cilindros
son neutrofilos polimorfonucleares. En el cilindro puede haber unos pocos leucocitos o
bien puede estar formado por muchas células aglomeradas.
Cilindros granulosos. Pueden formarse a partir de la degradación de cilindros
celulares, o bien por la agregación directa de proteínas séricas en una matriz de
mucoproteinas de Tamm-Horsfall.
Cilindros de células epiteliales. Se forman como consecuencia de las estacas
urinarias y de la descamación de células del epitelio tubular. Pueden estar ordenadas en
hileras paralelas o carecer de ordenación.
CILINDROS OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIO
48
ESTRUCTURAS DIVERSAS
Bacterias. Normal mente en la orina a nivel renal y vesical no existen bacterias, pero
puede contaminarse por bacterias presentes en la uretra, en la vagina o procedentes de
fuentes externas. Cuando una muestra de orina correctamente recolectada contiene gran
numero de bacterias, por lo general es índice de infección del tracto urinario.
Hongos. Las células micóticas son uniformes, incoloras por lo general de forma ovoide
con pared de doble refringencia. Pueden tener diferente tamaño y con frecuencia
muestran gemación.
Espermatozoides. Pueden existir espermatozoides en la orina masculina después de
convulsiones epilépticas, poluciones nocturnas, enfermedades de órganos genitales y en
la espermatorrea. En ambos sexos después del coito.
Filamento de moco. Son estructuras de forma acintada, largas, delgadas y ondulantes
que pueden mostrar tenues estriaciones longitudinales.
Parásitos. Ocasionalmente pueden encontrarse parásitos en la orina, sea porque
ocupan el tracto urinario, sea como resultado de contaminación fecal o vaginal.
La Trichomonas vaginalis es el parásito que más a menudo se observa en la orina.
Pueden encontrarse huevos y en ocasiones el adulto o hembra de Enterobius
vermicularis.
Valores Normales:
Volumen: Variable (ml) Sedimento:
Color: Amarillo I Leucocitos: Menos de
10/campo
Aspecto: Transparente Eritrocitos: No se observan
Densidad: 1.010- 1.025 Cilindros: No se observan
PH: 4.5 –8.0 Filamento mucoso: Negativo
Glucosa: Negativo Levaduras: Negativo
Cetona: Negativo Cristales: Negativo.
Proteínas: Negativo
Bilirrubinas Negativo
Urobilinogeno: Negativo
Nitritos: Negativo
Sangre: Negativo
Leucocitos: Negativo
49
4.- Departamento de Química clínica
En este departamento se encarga de
evaluar a los pacientes con síntomas de deficiencia
o alteración respecto a cantidades de las distintas
sustancias en el cuerpo humano normal,
determinados mediante la evaluación de una gran
muestra de sujetos supuestamente sanos. Los
valores normales se expresan en rangos numéricos
y pueden variar de un laboratorio a otro. Aquí se
evalúan las moléculas de carbohidratos, enzimas,
proteínas y electrolitos.
Los grupos principales que se evalúan son:
química sanguínea, pruebas funcionales hepáticas,
enzimas cardiacas, enzimas pancreáticas, y
electrolitos.
Las enzimas son proteínas de uso repetitivo que catalizan las innumerables
reacciones químicas necesarias para conservar a las células vivas, y con sus funciones
.Aceleran y controlan la rapidez de las reacciones sin ser destruidas por sí mismas en el
proceso .Los diferentes tipos de células producen enzimas distintas, y casi todos los
tejidos contienen sustancias de muy diversa índole d esta categoría. Los análisis pueden
revelar la magnitud del daño e indicar la evolución de la curación.
Las proteínas del suero, que son los compuestos que más abundan en dicho
líquido, tienen funciones muy diferentes de las proteínas tisulares. Poseen enorme
importancia en el diagnostico, por sus funciones vitales y heterogéneas, por su acción
neutralizadora, y servir como fuente de reserva de elementos nutritivos para los tejidos,
entre otras cosas.
50
4.1 Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250.
Analizador de química clínica y electrolitos, que supera todas las expectativas de
los laboratorios relativas a innovación, rapidez y eficiencia con la incorporación de la
tecnología de la química seca.
Figura 5. Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250.
Características del vitros 250.
- 1 a 6 pruebas diferentes con 50 ul de muestra.
- Procesamiento de 250 pruebas por hora.
- Dos tipos de lectura en forma simultanea, reflectometria y potenciometria.
- 7 a 30 pruebas diferentes con 150ul de muestra.
- Mínimas instalaciones especiales, pues no requiere del suministro de agua tratada.
- Amplio menú de pruebas; 43 directas y 14 calculadas, en un mismo analizador.
- Mantenimiento diario mínimo de 5 &ndash; 10 minutos.
- Mínimo espacio para el almacenamiento de los reactivos
- Tres calibraciones al año para todas las pruebas incluidas los electrolitos y las pruebas
especiales, equivalente a menor gasto de reactivos.
- Control de calidad una vez al día en un solo turno de trabajo, equivalente a optimizar los
recursos del laboratorio pormenor gasto de reactivo.
- Eficiencia superior al 80%.
- Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Neonatal.
- Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Delta.
- Identificación de pacientes y programación de pruebas por código de barras ya que
permite ser conectado en red.
- Comunicación bidireccional.
- Eliminación de cambio de electrodos.
- Detección de coágulos de fibrina previo al dispensado de reactivos.
- Reactivos listos para usar, no requiere de la preparación de soluciones de trabajo y
elimina errores de reconstitución.
- Eliminación de contaminación por arrastre de reactivo y/o muestras.
- Capacidad de procesar perfiles de pruebas y programación de pacientes de urgencias
(Stat).
- Menor manejo de inventario de pruebas.
- Almacenamiento en memoria de 5000 pacientes, con hasta 30 pruebas por paciente.
- Capacidad de generar estadísticas de carga de trabajo por prueba.
- Dilución Automatica con puntas individuales,listo multiplicado por factor de dilución.
51
MENU DE PRUEBAS
DROGAS
ACETAMINOFENO
ALCOHOL
AMONIO
CARBAMAZEPINA
DIGOXINA
FENOBARBITAL
FENITOINA
SALICILATOS
TEOFILINA
RUTINA
ACIDO URICO
ALBUMINA
ALKP
ALT
AST
BILIRRUBINA TOTAL
BILIRRUBINA CONJUGADA Y NO
CONJUGADA
BILIRRUBINA NEONATAL
BUN / UREA
COLESTEROL
CREATININA
GLUCOSA
HDLC
PROTEIINA C REACTIVA
PROTEINAS URINARIAS
PROTEINAS TOTALES
PROTEINAS LCR
TRIGLICERIDOS
ELECTROLITOS
SODIO
POTASIO
CLORO
LITIO
MAGNESIO
ESPECIALES
ACTIVIDAD CK-MB
CK
AMILASA
CALCIO
COLINESTERASA
DIOXIDO DE CARBONO
FOSFORO
GGT
GLOBULINA
HEMOGLOBINA
HIERRO
TIBC
LACTATO
LDH
LDL (DIRECTO)
LIPASA
COLINESTERASA
FOSFATASA ALCALINA
DERIVADAS
ALBUMINA / GLOBULINA
BUN / CREATININA
CK-MB / CK
COLESTROL / HDL
OSMOLARIDAD
PORCENTAJE DE SATURACION ANION
GAP CON POTASIO
ANION GAP SIN POTASIO
BILIRRUBINA DELTA
BILIRRUBINA DIRECTA
VLDL
52
Valores de referencia.
β Albúmina: 3.9 a 5.0 mg/dL
β Fosfatasa alcalina: 44 a 147 UI/L
β ALT (alanina transaminasa): 8 a 37 UI/L
β AST (aspartato de aminotransferasa): 10 a 34 UI/L
β BUN (urea en la sangre): 7 a 20 mg/dL
β Calcio en suero: 8.5 a 10.9 mg/dL
β Cloruro en suero: 101 a 111 mmol/L
β CO2 (dióxido de carbono): 20 a 29 mmol/L
β Creatinina: 0.8 a 1.4 mg/dL **
β Bilirrubina directa: 0.0 a 0.3 mg/dL
β Gama GT (gamma-glutamiltranspeptidasa): 0 a 51 UI/L
β Examen de glucosa: 64 a 128 mg/dL
β DHL (lactato de deshidrogenasa): 105 a 333 UI/L
β Fósforo en suero: 2.4 a 4.1 mg/dL
β Examen de potasio: 3.7 a 5.2 mEq/L
β Sodio en suero: 136 a 144 mEq/L
β Bilirrubina total: 0.2 a 1.9 mg/dL
β Colesterol total: 100 a 240 mg/dL
β Proteína total: 6.3 a 7.9 g/dL
β Ácido úrico: 4.1 a 8.8 mg/dL
**Nota: los valores normales o "saludables" para la creatinina pueden variar con la edad.
Puede haber disminución en la función renal y en la masa muscular con la edad o niveles
muy altos de masa muscular en un atleta joven. El médico puede interpretar y explicarle
estos valores a la persona.
Clave para las abreviaciones:
UI = unidades internacionales
L = litro
dL = decilitro = 0.1 litro
g/dL = gramos por decilitro
mg = miligramos
mmol = milimoles
mEq = miliequivalentes
Electrolitos:
Los iones cargados positivamente (cationes) son, entre otros, sodio, potasio, calcio
y magnesio.
Los iones cargados negativamente (aniones) son, entre otros, los iones de cloruro,
bicarbonato (esencialmente el mismo del CO2), proteína, fósforo, SO4 y ácidos
orgánicos.
Cuando se hace un examen de electrolitos, los iones medidos por lo general
incluyen sodio, potasio, cloruro y bicarbonato; además, los niveles de calcio y magnesio
se obtienen en muchas instituciones como parte de este examen.
Consideraciones especiales
Las venas y las arterias varían de tamaño de un paciente a otro y de una parte del
cuerpo a otra, por tal razón obtener una muestra de sangre de una persona puede ser
más difícil que de otras.
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  • 1. 1 Objetivo El presente documento se elaboró para describir las técnicas de análisis clínicos realizadas durante el periodo de prácticas profesionales y servicio social que se llevaron a cavo con la finalidad de poner en práctica todo lo aprendido durante la preparación escolar, de tal modo que se pudiesen reafirmar habilidades así como destrezas en la formación del técnico laboratorista clínico. Además, el servicio social sirve para fomentar valores como la solidaridad al realizar el servicio social en la comunidad al desempeñarse profesionalmente en el área del sector salud. Esto es parte de los requisitos que por normatividad exige el departamento de Servicio Social y Titulación de la D.G.T.I. como parte del trámite para la certificación profesional. Justificación La presente experiencia de prácticas profesionales tuvo lugar en el área de laboratorio clínico del Hospital General ISSSTE de Torreón colonia Centro, ubicado en las calles Allende y Donato Guerra en la ciudad de Torreón, Coahuila. El mencionado hospital ofrece servicios de salud diversos, de carácter privado y asistencial, tales como consulta externa, consulta de especialidad, área de urgencias, cirugía, medicina interna, hemodiálisis, hemodinamia, pediatría, neonatología, ginecología y obstetricia, tococirugía, radiología y radiodiagnóstico, salud pública, laboratorio clínico y banco de sangre. El laboratorio clínico de dicha institución se divide en áreas para ofrecer los diversos servicios que lo conforman entre ellas área de Hematología (Biometría hemática, recuento de plaquetas, recuento de reticulocitos, velocidad de sedimentación globular, grupo y Rh, prueba de Coombs directa e indirecta), Química clínica ( Química sanguínea (glucosa, urea, creatinina, acido úrico), electrolitos séricos (Na, Cl, K, Ca, Mg, PO), perfil hepático (TGO, TGP, fosfatasa alcalina, Bilirrubina total, Bilirrubina directa, Bilirrubina indirecta, LDH, FA), perfil de lípidos (Colesterol total, HDL, LDL, VLDL, triglicéridos), proteínas, enzimas cardiacas (CK, CK-MB) ), Serología (reacciones febriles, ASTO, Proteína C reactiva, VDRL) Microbiología ( examen general de orina, coproparasitoscopico , parasitoscopico, diversidad de cultivos, BAAR, etc...) Banco de sangre (pruebas cruzadas) entre otros.
  • 2. 2 Aquí se maneja una gran diversidad de muestras en las diferentes áreas, destacando como muestra principal sangre venosa periférica en sus diferentes derivados del fraccionamiento (suero, plasma, elementos formes). En México la cifra de enfermedades que necesitan de un análisis clínico a aumentado considerablemente por lo que la nación necesita tanto de químicos como técnicos laboratoristas capaces de realizar su trabajo en tiempo y forma; demostrando sus capacidades y aptitudes, no solo laborales sino humanísticas, ya que se tiene que trabajar con honradez, tolerancia, empatía y gusto por el trabajo que se realiza. Realicé mis prácticas profesionales y servicio social con la finalidad de poder aplicar las bases teóricas adquiridas en clases al ámbito práctico y laboral. También es importante mencionar el deseo de obtener la experiencia suficiente en esta área de trabajo para que al momento de competir por un puesto a nivel privado o institucional tener las armas necesarias para esto. Otras razones importantes es el introducirme en el ambiente con los compañeros de trabajo, conocer las bases administrativas y sindicales de los laboratorios clínicos, conocer el grado de responsabilidad y compromiso que se requieren en el área de servicios de la salud. Tal periodo de trabajo consistió en la realización de diferentes procedimientos, análisis y mediciones clínicas que se enlistan a continuación: o Toma de muestra de sangre periférica venosa Hematología: o Biometría hemática en aparato automatizado que permite obtener resultados de formula roja (Hemoglobina, Hematocrito), así como el cálculo de los índices eritrocitarios (VGM, HGM, CHGM); fórmula blanca (recuento leucocitario, recuento diferencial); y plaquetas. o Velocidad de sedimentación globular (VSG), Recuento de Reticulocitos, Grupo y Rh. o Tiempos de coagulación. o Coombs directo e indirecto o Pruebas cruzadas Química Clínica o Medición de electrolitos en suero y orina. o PFH o Perfil de lípidos o Enzimas cardiacas o Proteínas urinarias o Química Sanguínea Serología
  • 3. 3 o Reacciones febriles o VDRL o Factor Reumatoide o Prueba Inmunológica de Embarazo (PIE) o HIV, VHC y VHb Microbiología o Examen general de Orina (EGO) A continuación explicaré en qué consisten las técnicas de toma de muestra y análisis que realicé durante mi estancia en dicho laboratorio. Introducción El laboratorio clínico es el lugar donde los técnicos y profesionales en análisis clínicos, analizan muestras biológicas humanas que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y tratamiento de las enfermedades. Utiliza las metodologías de diversas disciplinas como la química clínica, hematología, inmunología y microbiología. En el laboratorio clínico se obtienen y se estudian muestras biológicas diversas, como sangre, orina, heces, líquido sinovial (articulaciones), líquido cefalorraquídeo, exudados faríngeos y vaginales, entre otros tipos de muestras. Los laboratorios son de gran ayuda tanto para pacientes que se encuentran hospitalizados como para los pacientes externos, es por eso que su ubicación debe ser en la planta baja, con fácil acceso a la sección de recepción del Archivo Clínico y en menor grado con el departamento de Consulta Externa. Las áreas que componen al laboratorio clínico son: Sala de Espera y Recepción. Donde los pacientes esperarán cómodamente a ser atendidos; Cubículos de Toma de Muestras. En este punto se obtienen las muestras para luego ser distribuidas a las diversas secciones del laboratorio.
  • 4. 4 Secciones de Laboratorio: Hematología: En este sección se efectúa el Hemograma y diversas pruebas para evaluar el sistema de Coagulación Bioquímica clínica: Aquí se realizan análisis que se clasifican de la siguiente forma:  Química sanguínea de rutina, lo que abarca multiples parámetros como la determinación de Glucosa, Colesterol, etc.  Exámenes generales de orina  Determinación de gases en sangre ( Presión parcial de oxígeno, de anhidrido carbónico, reserva de bicarbonato, pH, etc.) Microbiología: Las diversas labores que se realizan aquí pueden clasificarse en la siguiente forma:  Coproparasitología: Tiene por objeto investigar la presencia de parásitos en materias fecales.  Bacteriología: Consiste en examinar directa o indirectamente la presencia o actividad de organismos microscópicos en sangre, orina, materia fecal, jugo gástrico yexudados orgánicos. Inmunología: En esta sección se hacen determinaciones de Anticuerpos y otras determinaciones con el fin de evaluar el Sistema inmunitario. En esencia, el laboratorio clínico es una herramienta fundamental para el sector salud, ayudando al diagnostico de enfermedades de un paciente afectado; los resultados de los análisis clínicos van más allá del horizonte sintomatológico, y ayudan al médico a realizar un diagnostico acertado y por consecuencia un correcto tratamiento.
  • 5. 5 1.- Departamento de hematología La sangre es un tejido en circulación continua, que desempeña innumerables funciones vitales da su paso por todo el cuerpo. De máxima importancia es su capacidad de transportar oxigeno ligado a la hemoglobina de los eritrocitos, desde los pulmones a los tejidos corporales ,y devolver el bióxido de carbono que se genera en los tejidos ,hasta los pulmones .También produce y distribuye anticuerpos formados por los plasmacitos y los linfocitos, transporta granulositos y monocitos que neutralizan y destruyen los patógenos por medio de la fagocitosis, y suministra complemento. Otra función es conservar la hemostasia con plaquetas y factores de la coagulación, que permite la reparación de lesiones tisulares y evita hemorragia. Regular la temperatura corporal y el estado de equilibrio ácido-básico e hídrico; desplazar nutrimentos y hormonas regulatoria tejidos corporales El alcance de la hematología clínica La hematología clínica tiene por objeto el estudio de las perturbaciones y enfermedades de la sangre y de los órganos hematopoyéticos. Al señalar que los padecimientos de los órganos hematopoyéticos también conciernen a la hematología clínica, debe quedar implícito que algunos de ellos no dan lugar a cambios en la sangre propiamente dicha. Si se desea fijar de una vez por todas el alcance de la hematología, debe aclararse que ella incluye, además de las enfermedades del sistema hemático propiamente dicho, las de tejido linfático y las del llamado sistema reticuloendotelial, ya sea que las alteraciones principales se observen en los elementos circulantes, o en los órganos o sitios donde estos tienen origen .normalmente existe un estado de equilibrio entre la formación y la destrucción de los elementos figurados de la sangre, lo que se refleja en su composición celular, que es prácticamente constante .Si la producción de células es insuficiente, o su destrucción excesiva, ello se traducirá por un cuadro hematológico transitorio, o más o menos permanente . 1.1 Sala de toma de muestra Este espacio es el que se brinda para obtener las muestras de sangre requeridas en el laboratorio para los análisis que posteriormente se realizaran. Si la muestra de sangre no se recoge con una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad del examen hematológico sufre. Para casi todos los análisis se necesita una muestra de sangre venosa. La punción en una vena, aunque es un método bastante sencillo, debe hacerse con cuidado para evitar hemólisis o hemoconcentración de la muestra, que se forme un hematoma, y que las venas sufran lesión. Los hematomas o las equímosis suelen poner de manifiesto una técnica o criterio deficiente de la persona que la efectúa. Unas palabras bien elegidas servirán para tranquilizar al paciente. La auto confianza y seguridad del técnico, contribuirían a establecer una relación adecuada. Es necesario mantener un buen control de la identificación de las muestras para evitar confusiones que afecten gravemente la situación.
  • 6. 6 1.2 Punción venosa Significado clínico Para las técnicas hematológicas, es fundamental obtener muestras de sangre adecuadas, ateniéndose a una técnica muy precisa .si la muestra de sangre no se recoge con una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad del examen hematológico sufre. Casi todas las muestras de sangre se obtienen por punción venosa; es el método más fácil y adecuado para obtener volumen de sangre suficiente para llevar a cabo un gran número de pruebas. Fundamento La muestra puede dividirse y tratarse conforme a las necesidades del caso; puede mezclarse con anticoagulante para obtener plasma, sangre completa; o pude dejarse coagular para obtener suero. Muestra Tipo de tubo Anticoagulante Pruebas Suero Activador de coagulo. Determinaciones en suero para bioquímica, microbiología, inmunología, TDM. Suero con gel Activador de coagulo y gel separador. Determinaciones en suero para bioquímica, microbiología, inmunología, TDM. Suero con gránulos Activador de coágulos y gránulos Determinaciones en suero para bioquímica, microbiología, inmunología, TDM. Suero para pruebas cruzadas Activador de coágulo. Determinaciones en suero para análisis de pruebas cruzadas de histocompatibilidad. Plasma Heparina Sódica. Determinaciones en plasma heparinizado para bioquímica. Plasma Heparina de litio Heparina amónica Determinaciones en plasma heparinizado para bioquímica. Plasma con gel Heparina de litio y gel separador. Determinaciones en plasma heparinizado para bioquímica. Sangre total K2 EDTA K3 EDTA Determinación en sangre total con EDTA para hematología. Sangre total K3 EDTA Determinaciones en sangre total con EDTA para análisis de pruebas cruzadas de histocompatibilidad. Sangre total EDTA K2 Y gel separador Determinaciones en sangre total con EDTA para identificar virus, parásitos y bacterias en biología molecular. Plasma Citrato sódico (3.2%) Citrato sódico (3.8%) Determinación en plasma con citrato para análisis de coagulo.
  • 7. 7 Plasma CTAD (3.2%) Determinación en plasma con citrato para análisis de coagulación cuando se intenta evitar la aparición de factores plaquetarios en la sangre. Sangre total Anticoagulante inhibidor de glicolisis. Determinación en sangre total anticoagulada y estabilizada o plasma para determinación de glucosa y lactato. Suero/Plasma Activador de coagulo Heparina sódica Determinación en suero/plasma heparinizado para análisis de traza de metales. Sangre total ACD-A ACD-B CPDA Determinación en sangre total con ACD/CPDA para análisis del grupo sanguíneo. Procedimiento: Sistema de tubos al vacío 7.-Desechar el material punzo cortante y el infeccioso en sus respectivos depósitos.
  • 8. 8 1.3 Biometría hemática o hemograma El hemograma consiste, básicamente, en el conteo de los diferentes tipos de células que se encuentran en sangre periférica. Bajo el nombre de hemograma se agrupan dos conceptos: (1) Cuantitativo, que comprende los recuentos de eritrocitos, leucocitos y plaquetas, cuantificación de hemoglobina, medición de hematocrito y en cálculo de índices eritrocitarios, (2) otro cualitativo (fórmula leucocitaria), que es la identificación microscópica o automatizada de los diferentes tipos de leucocitos y su expresión en valores porcentuales y absolutos. Este examen, en la actualidad, constituye uno de los más ampliamente utilizados, en el reconocimiento inicial de pacientes que consultan por patologías diversas. Además representa una herramienta insustituible, en el monitoreo de evolución de patología hematológica y control terapéutico. En este contexto, la automatización del hemograma, una combinación de metodologías de colorimetría, impedancia eléctrica e informática (Celldyn 1400) ha permitido obtener un método confiable y rápido para enfrentar la demanda creciente por el perfil hematológico. Analizador hematológico CELLDYN 1400 El analizador hematológico CELLDYN 1400 proporciona información de 12 parámetros obtenidos, a partir de muestra de sangre total anticoagulada con EDTA, de la manera siguiente: Medición directa de:  Glóbulos rojos (RBC).  Glóbulos blancos (RBC).  Plaquetas (PLT).  Concentración de hemoglobina (HGB). Parámetros derivados, obtenidos de histogramas:  Porcentaje de Linfocitos (% L)  Porcentaje de Granulocitos (%G)  Volumen corpuscular medio (MCV) Parámetros calculados de los datos medidos y derivados:  Número total de Linfocitos (LYN)  Número total de Granulocitos (GRAN)  Hematocrito (HCT)  Hemoglobina corpuscular media (MCH)  Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
  • 9. 9 Principio del método El CELLDYN 1400 utiliza el principio de la IMPEDANCIA O RESISTENCIA ELECTRICA para el recuento y clasificación por tamaño de las células sanguíneas. La célula, al pasar a través de un orificio en el que hay una diferencia de potencial conocida, induce un pulso eléctrico que es directamente proporcional al volumen celular, lo que es aprovechado (por la diferencia de tamaño de los linfocitos, y granulocitos), para realizar una fórmula de dos parámetros. Para esto la muestra es diluida, automáticamente, con una solución de conductividad fija. Luego esta muestra es conducida, unidireccionalmente, a través de una apertura u orificio de tamaño determinado. La no devolución de la muestra está asegurada por el transductor de Von Behrens que impide la recirculación de la misma. Una corriente eléctrica constante pasa entre electrodos ubicados a cada lado de la apertura determinando una zona de censado a lo largo de toda la pertura. Durante el ciclo de medición, cada célula que atraviesa la zona de censado, interrumpe el flujo de corriente constante generando un pulso eléctrico cuya amplitud es directamente proporcional al tamaño de la célula. El número de pulsos generados durante cada medición corresponde al número de células censadas. Los pulsos eléctricos generados son primero amplificados y luego comparados con voltajes en canales de referencia que han sido previamente calibrados para aceptar sólo señales con una amplitud predeterminada. Dos o más células pueden coincidir simultáneamente en la zona de censado durante el ciclo de medición. En cuyo caso se obtiene un pulso de gran amplitud, el cual es reconocido y rechazado, produciéndose una pérdida de pulsos aceptables. Esta pérdida se puede predecir estadísticamente, de manera que los recuentos celulares son corregidos automáticamente. El CELLDYN 1400 realiza MEDICION DE HEMOGLOBINA utilizando el método de la formación de cianometahemoglobina, que se determina con espectrofotómetro a 540 nm. Para esto, a una muestra diluida 1:250 se le adiciona un agente lisante, cuya función es romper los glóbulos rojos y liberar la hemoglobina. Después de la medición el instrumento se lava con el reactivo detergente quedando listo para otro ciclo de medición.
  • 10. 10 Especificaciones de ejecución SENSIBILIDAD Las lecturas son confiables en el siguiente rango Leucocitos 1.000 - 100.000 mm3 (1 - 100 K/uL Hematíes 1.0 - 7.0 millones/mm3 (1 - 7 M/uL) Hemoglobina 2.5 - 24,0 g/dl Plaquetas 10 - 999 k/UL BACKGROUND NORMAL (RECUENTO DE FONDO) Una vez realizado el ciclo de limpieza (mantenimiento diario) los recuentos del backgraund no deben exceder los siguientes limites: Leucocitos menor o igual a 500 /mm3 (0.5 K/uL) Hematíes menor o igual a 0.05 millones/mm3 (0.05 M/uL Hemoglobina menor o igual a 0.2 g/dl Plaquetas menor o igual a 10.000 /mm3 (10 K/uL) IMPRESIÓN DE LISTADO DE RESULTADOS (RESUMEN) El equipo almacena, en memoria constantemente, los registros de las últimas 320 muestras procesadas. Por lo tanto, antes de alcanzar esta cifra, se debe imprimir y archivar el listado de resultados a modo de registro de resultados de examen: TIPO Y RECOLECCION DE MUESTRA La muestra corresponde a sangre venosa, obtenida por venopunción, recogida en tubos con anticoagulante EDTA/ K3 EQUIPO REACTIVOS REQUERIDOS Contador hematológico CELL DYN 1400. Agitador de muestras mecánico. Reactivo Detergente para Celldyn 1400. Reactivo Diluyente para Celldyn 1400. Reactivo Lisante para Celldyn 1400. Estos reactivos no deben exponerse a la luz directa del sol.
  • 11. 11 No deben mezclarse. No adicionar restos de uno en otro nuevo. Estos reactivos deben mantenerse y utilizarse dentro de un rango de temperatura entre los 15 y 30 ° C para asegurar su conductividad. PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACION. El funcionamiento del equipo se chequea diariamente, en base al programa de control de calidad interno del laboratorio. Cuando el control aconseje calibrar el instrumento, se puede seguir una de las tres formas de calibración siguientes: Calibración con calibrador comercial. Calibración con sangre fresca. Calibración mediante entrada de factor. Procedimiento de calibración. 1. Presionar MAIN. 2. Presionar CALIBRATION. 3. Seleccionar FRESH BLOOD o CALIBRATOR. 4. Seleccionar el o los parámetros a calibrar e ingrese los valores de referencia de la muestra o calibrador. Si se utiliza muestra de sangre fresca, esta debe tener menos de 4 horas de recolectada. Nota: Los valores de referencia aceptables, para calibración con sangre fresca, deben ajustarse a límites establecidos para el equipo. Calibración mediante entrada de factor: 1. Presionar Calibration. 2. Presionar ENTER FACTOR 3. Con el cursor posicionarse en la entrada de factor correspondiente e ingresar nuevo factor. Esta opción permite ingresar directamente los valores de factores de calibración. La calibración es programable cuando se introduce un factor de 1.00 Ejemplo: Si los recuentos de leucocitos estás aumentados en un 2%, el operador puede ingresar como factor 0,98 para disminuir los recuentos en un 2%. PASOS DEL PROCEDIMIENTO Como muestra se utiliza sangre venosa recogida en EDTA (tubo tapa Lila). La muestra debe agitarse por inversión, cuidando no someterla a excesiva agitación que pueda destrozar los elementos o alterar el volumen celular. La muestra debe invertirse de 10 a 15 minutos si se hace a mano. En agitador mecánico: de 5 a 15 minutos. Nunca agitarlas más de 30 minutos.
  • 12. 12 Muestras procesadas hasta 8 horas de la recolección dan resultados confiables. La muestra puede diluirse, previo a la medición, utilizando diluyente para CELLDYN o suero fisiológico. La dilución 1:10 es suficiente en la mayoría de las situaciones de parámetros elevados más allá del limite superior de lectura. 1. Para su proceso, colocar el tubo con la muestra debajo de la sonda de aspiración. 2. Precionar la palanca que está detrás. Automáticamente la sonda aspirará 30 ul de muestra. Espere el beep de término de aspiración del equipo antes de retirar el tubo. En este momento la muestra aspirada será automáticamente diluida, repartida en diferentes circuitos, incubada con reactivos específicos (lisis, hemoglobinometría) y leída por los dispositivos correspondientes. 3. Ingresar identificación del examen (digitar número de folio del examen). Presionar ENTER. PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD El programa de control de calidad del examen, se realiza en base a dos elementos: -Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Lab.Central. -Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno del equipo. (Programa de la media X - B) Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Laboratorio Central. Consiste en analizar diariamente una muestra de sangre proporcionada por la sección de hematología del Laboratorio Central. Esta muestra es procesada como una muestra más de la rutina. Los resultados son remitidos a la sección de hematología para su análisis. Esta muestra de control es procesada, en sección hematología, en dos auto analizadores hematológicos (Celldyn 3500 y Micros ABX) y comparados sus resultados entre los tres analizadores y con la medición del hematocrito procesado manualmente. El análisis de calidad de los resultados de la muestra control, se relaciona con la reproducibilidad de resultados entre los distintos equipos, considerando el hematocrito manual y la verificación microscópica de la muestra. La comparación de resultados de muestras de control, con resultados de equipos de sección de hematología, se basa en la calibración de estos con calibradores comerciales y controles comerciales. Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno del equipo. Programa de la media X – B. Permite revisar los valores para VCM, HCM y CHCM calculados según el método Levey-Jennings para grupos de 20 muestras. La impresión del reporte proporciona una gráfica de los resultados.
  • 13. 13 INTERFERENCIAS Los resultados del examen pueden verse interferidos por la presencia de diferentes elementos de la siguiente forma: WBC: falso incremento por crioglobulinas, heparina, proteínas monoclonales, eritroblastos, agregados plaquetarios, falso descenso por coágulos, células atípicas, uremia + inmunosupresores. RBC: falso incremento por crioglobulinas, macroplaquetas, hemólisis, policitemia, falso descenso por crioaglutininas, microcoágulos, células microcíticas. HGB: falso incremento por crioglobulina, carboxihemoglobina, hemólisis, hiperbilirrubinemia, lipemia severa, falso descenso por microcoágulos. Hematocrito: falso incremento por crioglobulina, macroplaquetas, hiperglicemia (600 mg/dl), falso descenso por coágulos, hemólisis. PLT: falso incremento por crioglobulinas, hemólisis, hematíes microcíticos, falso descenso por macroplaquetas, heparina, agregados plaquetarios. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR RESULTADOS El equipo realiza la medición directa, por impedancia y colorimetría de: Glóbulos rojos (RBC). Glóbulos blancos (WBC). Plaquetas (PLT). Concentración de hemoglobina (HGB). Los resultados para Parámetros derivados, se obtienen de datos de distribución de elementos medidos (histogramas): Porcentaje de Linfocitos (% L) Porcentaje de Granulocitos (%G) Volumen corpuscular medio (MCV) Los Parámetros calculados de los datos medidos y derivados son: Número total de Linfocitos (LYN) Número total de Granulocitos (GRAN) Hematocrito (HCT) Hemoglobina corpuscular media (MCH) Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
  • 14. 14 Cálculo de Hematocrito: Es la razón de eritrocitos en un volumen de plasma y se expresa como porcentaje del volumen de sangre total. HCT = RBC x VCM 10 Cálculo de hemoglobina corpuscular media: Expresa el contenido medio de Hb que hay los hematíes. Se expresa en picogramos. HCM = Hb (gr/lt ) x 10 RBC Cálculo de concentración de Hb corpuscular media: Es la razón entre la hemoglobina respecto al hematocrito. Indica la concentración de Hb en el promedio de los eritrocitos. CHCM = Hb x 100 HCT REPORTE E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS El reporte incluye los siguientes parámetros: 1.- Número de hematíes: por medición directa se obtiene el número de GR por volumen. 2.- Concentración de Hb: por medición directa por espectrofotometría (método de la cianmetahemoglobina). El valor puede estar falsamente aumentado en hiperleucocitosis. Se utiliza para la valoración de anemia. 3.- Volumen corpuscular medio (VCM): derivado de histograma de distribución, representa la media del volumen de los hematíes. Define la micro-normo-macrocitosis. 4.- Hematocrito: es la relación entre el volumen de los hematíes respecto a la sangre total. Se obtiene de multiplicar el VCM por el número de hematíes. Es discretamente inferior al obtenido por centrifugación. Se utiliza como indicador de anemia, hemorragia, hemoconcentración, etc. 5.- Hemoglobina corpuscular media (HCM): resulta de dividir la concentración de Hb por el número de hematíes. Se usa como marcador hipocromía. 6.- Concentración de Hb corpuscular media (CHCM): es la cantidad de hemoglobina que hay en un decilitro de hematíes. Su valor normal es 34 y la desviación standard de 2 %. La CHCM es el método más útil para detectar la deshidratación del eritrocito. En la microesferocitosis familiar está sobre 36 (mg/dl) en el 50% de los casos. La CHCM
  • 15. 15 disminuida bajo 30 %, se considera marcador de hipocromía y se ve en condiciones que llevan a una síntesis insuficiente de Hb. 7.- Número de plaquetas: se mide directamente el número de plaquetas por volumen. 8.- Número de leucocitos: es el conteo de células de determinado tamaño que resisten el procedimiento de lisis específica para los hematíes. Se mide directamente. 9.- Fórmula leucocitaria: Derivado de histograma, corresponde al porcentaje de linfocitos y granulocitos. Neutrófilos elevados, acompañado de fiebre, indica probabilidad de infección por bacterias. Neutrófilos disminuidos pueden deberse a infección severa, reacción a drogas, irradiación o acompañar ciertos tipos de anemia. Linfocitos elevados se asocia más frecuentemente con infección viral. Pero también esta elevación se observa en cuadros hematológicos como la Leucemia de tipo linfoide. Una correcta interpretación del examen, en función de los hallazgos clínicos, permite una orientación diagnóstica en muchos casos, también constituye en otros, un importante elemento en el pronóstico y tratamiento. La concentración de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en la sangre varía con la edad y sexo. En clínica pueden observarse aumentos o disminuciones patológicas de los niveles de estos elementos que no siempre obedecen a enfermedades del sistema hematopoyético. También se observan fluctuaciones de orden fisiológico como en el embarazo, el ejercicio, stress o ritmo circadiano. El aumento de la concentración de eritrocitos, de contenido hemoglobínico normal, suele acompañarse del aumento de la concentración de hemoglobina y se denomina poliglobulia. Cuando el aumento de la concentración de eritrocitos se acompaña de disminución del contenido hemoglobínico, se habla de pseudo- poliglobulia. La pseudo- poliglobulia puede acompañarse de microcitosis e incluso anemia, como por ejemplo en la talasemia, anemia ferropénica (pseudopoliglobulia microcítica). El descenso de la concentración de eritrocitos en sangre se acompaña siempre de la disminución de la concentración de Hemoglobina (anemia) y puede obedecer a una pérdida por hemorragia, a hemólisis o a una falta en su formación a nivel de la médula ósea. El aumento de la concentración de leucocitos se denomina Leucocitosis y puede obedecer a muchas causas, entre las que destacan los procesos infecciosos e inflamatorios agudos y crónicos. Cuando se utilizan sistemas automatizados de recuento, debe tenerse presente que estos no diferencian entre eritroblastos y leucocitos (debido a que ambas células tienen núcleo), por lo que si en la observación microscópica del frotis se aprecia una cifra de eritroblastos superior al 10 % se debe proceder a una corrección del recuento leucocitario:
  • 16. 16 Leucocitos reales = Leucocitos contados x 100 Eb (por 100 leucocitos) + 100 Donde Eb: eritroblastos La disminución de concentración de leucocitos se denomina leucopenia y en caso de insuficiencia medular grave (aplasia medular) se acompaña casi siempre de anemia y trombocitopenia. La leucopenia afecta siempre la totalidad de los leucocitos circulantes, en especial los más abundantes (neutrófilos y linfocitos). La disminución selectiva de granulocitos neutrófilos se llama agranulocitosis o neutropenia y la de linfocitos, linfopenia. Debe descartarse que una leucopenia aislada de evolución prolongada sea el primer signo de una enfermedad hematológica grave (leucemia, linfoma o anemia refractaria). El aumento de la concentración de plaquetas se denomina trombocitosis, mientras que su disminución se denomina trombopenia. Utilidad clínica de los índices eritrocitarios: Anemia microcítica: VCM < 80 fL Anemia macrocítica: VCM > 100 fL Anemia normocítica: VCM = 80 – 100 fL Anemia hipocrómica HCM < 30 pg Causas de anemia microcítica-hipocrómica: Ferropenia o carencia de hierro, talasemia. Causas de anemia macrocítica: Déficit de vitamina B12 o acido fólico, hepatopatías crónicas, alcoholismo, tabaquismo. La determinación de CHCM es útil para detectar aumentos de la concentración hemoglobínica intraeritrocitaria, ya que en este caso es siempre superior a 35 g/dL. El aumento de la CHCM nunca obedece a un aumento de la síntesis de Hb, sino siempre a una alteración de la membrana o del contenido acuoso del eritrocito: disminución de la relación entre la superficie y volumen eritrocitario (esferocitosis) o pérdida de agua deshidratación eritrocitaria (xerocitosis).
  • 17. 17 VALORES DE REFERENCIA EDAD WBC (K/Ul) RBC (M/uL) HGB (g/dl) Hto (%) VCM (fL) HCM (pg) CHCM (g/dl) Plaq (K/uL) 0-2 sem 9.0-30.0 4.1-6.1 14.5-24.5 44-64 98-112 34-40 33-37 150-450 2-8 sem 5.0-21.0 4.0-6.0 12.5-20.5 39-59 98-112 30-36 32-36 150-450 2-6 mes 5.0-19.0 3.8-5.6 10.7-17.3 35-49 83-97 27-33 31-35 150-400 6m-1a 5.0-19.0 3.8-5.2 9.9-14.5 29-43 73-87 24-30 32-36 150-400 1- 6 a 5.0-19.0 3.9-5.3 9.5-14.1 30-40 70-84 23-29 31-35 150-400 6-16 a 4.8-10.8 4.0-5.2 10.3-14.9 32-42 73-87 24-30 32-36 150-400 16-18 a 4.8-10.8 4.2-5.4 11.1-15.7 34-44 75-89 25-31 32-36 150-400 >18 a h 5.0-10.0 4.5-5.5 14.0-17.4 42-52 84-96 28-34 32-36 140-400 >18 a m 5.0-10.0 4.0-5.0 12.0-16.0 36-48 84-96 28-34 32-36 140-400 FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD Temperaturas sobre 30 grados Celsius pueden concentrar los reactivos, por evaporación alterando los resultados. Temperaturas menores de 15 grados pueden precipitar o inactivar los reactivos. Voltaje red eléctrica. El equipo trabaja con 220 voltios y 50 Hertz. Grandes oscilaciones de voltaje de la red pueden alterar los recuentos. Equipos de rayos X. fotocopiadoras, computadoras, centrífugas no deben ser instaladas cerca del CELLDYN para prevenir interferencias. NOTAS ADICIONALES En caso de pérdida de presión de vacío del sistema, descubrir el panel frontal y llenar manualmente la copa de dilución con reactivo diluyente (15 ml aprox.), luego pulsar Run.
  • 18. 18 1.4 Frotis sanguíneo; recuento diferencial de leucocitos Significado clínico Evalúa la distribución y la morfología de los glóbulos blancos y, de este modo, aporta información más específica respecto al sistema inmunitario de los pacientes. Es el número relativo de leucocitos de cada tipo, en la sangre. Al multiplicar la cifra porcentual de cada tipo por el recuento total, el investigador obtiene el número absoluto de leucocitos de cada especie celular. Preferentemente se utiliza el colorante de Wright y una solución amortiguadora un pH de 6.8. Fundamento Consiste en que el colorante de Wright, que tiene un carácter ácido base que permite teñir todas las células blancas y distinguirlas mediante el color que toma cada una de ellas. Procedimiento
  • 19. 19 1.5 Grupo sanguíneo y Rh Significado clínico Los eritrocitos del hombre, poseen más de 100 antígenos que se encuentran en la membrana celular, estos antígenos constituyen lo que se llama grupos sanguíneos, los cuales están determinados por numerosos loci genéticos. Los sistemas ABO y Rh tienen mayor importancia como causa de reacciones transfucionales. Sistema ABO: El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la sangre humana, basado en los componentes antigénicos de los hematíes. Fue el primero en conocerse gracias a los trabajos de clásicos de Landesteiner quien definió los primeros isoantígenos .Los antígenos presentes en los eritrocitos se denominan aglutinógenos y son de los tipos Ay B ,los cuales se heredan de alguna manera que originan diferentes grupos, esto es, una persona puede tener uno de ellos los dos simultáneamente ,o ninguno. La expresión en el eritrocito de los antígenos ABO está constituida por un solo gen con tres alelos (A, B y O).
  • 20. 20 Sistema Rh: Los antígenos Rh recibieron este nombre, por haberse identificado inicialmente en los eritrocitos del mono Macacus Rhessius. Fisher y Race sugirieron que los antígenos Rh están determinados por tres genes: C, D y E con pares de alelos que codifican para cinco determinantes antigénicos .El más importante de estos loci se denomino D: Antígeno D, este es el que determina que una persona sea Rh positivo o Rh negativo, las personas con genotipo DD o Dd son del tipo Rh positivo, en tanto que los individuos con genotipo dd pertenece al tipo Rh negativo. Fundamento: Los antígenos de los eritrocitos lavados de la muestra de sangre reaccionaran con los anticuerpos de los sueros tipificadores A, B, AB, D. Por medio de una aglutinación visible. Procedimiento; método en tubo INTERPRETACIÓN Grupo Anti – A ANTI – B Anti AB - Rh A + - + +/- B - + + +/ AB + + + +/ O - - - +/
  • 21. 21 1.6 Determinación de la variedad Du Significado clínico Después de los antígenos A y B del sistema de grupos sanguíneos el D es el antígeno de grupo sanguíneo más importante de la rutina de banco de sangre. La prueba de la antiglobulina fue introducida por Coombs, Mourant y Race en 1945 como método para detección de anticuerpos incompletos, denominado así porque no puede causar aglutinación en un medio salino, aún en presencia de sus antígenos eritrocitarios específicos .Este es el caso de anticuerpo Rh, que si une al antígeno Rh presente en la superficie del eritrocito, pero es incapaz de producir una reacción de aglutinación visible. El fenotipo D- negativo se presenta con una incidencia de aproximadamente 15% en la raza blanca y de 9 a 10% en raza negra .El término DU fue originalmente utilizado para descubrir la reactividad variable de ciertas sangres con sueros que contienen Anti-D salino reactivo. Este término ha sido reemplazado por el término D débil para descubrir las formas del antígeno D se determina mediante las pruebas de los glóbulos rojos y el Anti- D. En ocasiones, los hematíes de algunas personas Rh-positivas reaccionan débilmente en la prueba de tipificación Rh estándar (D débil, o Du , positivo), pero siguen considerándose Rh-positivas. Fundamento: La albúmina funciona para detectar anticuerpos del sistema Rh (C,D,E,c,e) y el suero de coombs detecta anticuerpos incompletos IgG del sistema Rh .Esto sirve para que sea visible la aglutinación en caso de que haya reacción de Ag-Ac. Procedimiento:
  • 22. 22 INTERPRETACIÓN Si hay aglutinación Rh + positivo Si no hay aglutinación Rh -negativo 1.7 Tiempos de coagulación La hemostasia (interrupción de la salida de sangre de un vaso) está regulada por mecanismos extravasculares (músculo, piel y tejido subcutáneo), vasculares (vasos sanguíneos) e intravasculares (adhesión plaquetaria, retracción del coagulo y cuagulación de la sangre) La Comisión internacional para la Nomenclatura de los Factores de la Coagulación de la Sangre ha designado numéricamente los factores de la coagulación de la sangre; El fibrinógeno y los factores V y VII están ausentes en el suero sanguíneo normal como consecuencia del proceso de coagulación. La interacción de los factores de la coagulación puede desencadenarse a través de las vías intrínseca o extrínseca.
  • 23. 23 En el sistema intrínseco se encuentran presentes todos los factores en la sangre, mientras que en el sistema extrínseco está activado por la liberación de tromboplastina tisular. Aunque la naturaleza exacta de las secuencias enzimáticas del proceso de coagulación no es clara, se trata sin duda de un proceso de amplificación biológica que comienza a partir de la pequeña reacción que implica el contacto tisular a la rápida conversión de fibrinógeno en fibrina. Las pruebas de coagulación de rutina efectuadas en el laboratorio son indicadores de la función vascular (fase vascular y adhesión plaquetaria) o de mecanismos de coagulación intrínsecos. 1.7.1 Tiempo de protrombina Significado clínico Es una determinación analítica que se efectúa antes de una intervención quirúrgica para determinar problemas hemorrágicos potenciales, el TP es la determinación más usada para controlar la terapia con anticoagulantes orales al ser sensible a los factores VII y X. Las prolongaciones pueden deberse a deficiencias de los factores que integran la vía extrínseca clásica. Factores V, II, X, VII y fibrinógeno a una combinación de dichos factores o a la presencia de un inhibidor.
  • 24. 24 Fundamento: Se realiza añadiendo una fuente de extracto hístico al plasma citrado, incorporando un exceso de calcio y midiendo el tiempo que tarda en producirse la formación del coágulo. Procedimiento Valores Normales: 8 - 15 segundos 1.7.2 Tiempo parcial de tromboplastina activada Significado clínico Se efectúa en plasma citratado mediante la activación de los factores de contacto; la incorporación de un preparado fosfolípido estándar como sustituto de las plaquetas y la medición del tiempo de formación del coágulo tras la adición de un exceso de calcio. Se prolonga cuando existe una deficiencia de los factores que intervienen en la vía intrínseca clásica – precalicreína, CEPM, factores XII, XI, IX, VIII, XV, II y fibrinógeno – o por la presencia de inhibidores contra los factores o complejos de dicha vía. Fundamento: APTT es un reactivo de factor plaquetario 3, conteniendo un activador particulado y un tampón apropiado. Al mezclarse APTT con el plasma, se obtiene un nivel óptimo de factor plaquetario 3 y una activación uniforme de la muestra. Después de un determinado periodo de incubación a 37 ° C, la reacción se inicia añadiendo solución de cloruro de calcio, midiéndose el tiempo, en segundos, que transcurre hasta la formación del coagulo. Procedimiento
  • 25. 25 Valores Normales: 25 – 43 segundos.
  • 26. 26 1.8 Velocidad de sedimentación globular (VSG) La velocidad de sedimentación globular es la velocidad a la cual los eritrocitos se asientan de sangre coagulada en una hora. La velocidad de asentamiento depende de:  La composición de proteínas del plasma.  El tamaño y forma de los eritrocitos.  La concentración de los eritrocitos. El incremento de los valores de las proteínas del plasma (principalmente fibrinógeno) resulta en una disminución del potencial zeta (carga negativa) que rodea a los eritrocitos pueden unirse en formación de pila de moneda y asentarse en el plasma a una velocidad más rápida. De igual manera el tamaño y la forma de los eritrocitos afectan la velocidad de sedimentación. Los macrocitos se asientan más rápidamente que los eritrocitos normales y los microcitos de manera más lenta .Debido a su forma irregular, los poiquilocitos no pueden formar pilas de monedas y se asientan a una velocidad más lenta. La concentración de eritrocitos afecta directamente a la VSG y mientras mayor sea la concentración de eritrocitos menor es a VSG. El material que se utiliza para esta prueba es el siguiente: Tubo de Wintrobe, pipeta de Wintrobe o Pasteur. Procedimiento 1.- Realizar toma demuestra en un tubo con EDTA. 2.-Antes de empezar la determinación invierta el tubo con muestra suavemente 30 o 40 veces para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante. 3.-Enseguida tome sangre del tubo con una pipeta Pasteur, transfiérela a un tubo de Wintrobe y llénelo hasta la marca de “0” 0 “10”. Debe procurar que al vaciar la pipeta la punta de ésta quede al fondo del tubo e ir vaciando la sangre suavemente, al mismo tiempo que se va retirando la pipeta del fondo. 4.-Lleve el tubo de Wintrobe a la gradilla e inicie el conteo de tiempo, dejando reposar la muestra durante una hora. 5.- Transcurrida una hora, mida el espacio que ocupa el sobrenadante desde la superficie hasta el borde superior de los eritrocitos sedimentados, haga la lectura en mm. 6.- Reporte sus resultados mm/Hora. Valores de referencia  Hombres menores de 50 años; 0 – 15 mm/hora  Hombres mayores de 50 años; 0 – 20 mm/hora  Mujeres menores de 50 años: 0 – 25 mm/hora  Mujeres mayores de 50 años: 0 – 30 mm/hora
  • 27. 27 1.9 Recuento de reticulocitos Significado clínico La cuantificación de los reticulocitos presentes en sangre periférica proporciona un método para evaluar la actividad eritropoyética de la medula ósea, la cual se usa en el diagnostico diferencial de anemias y en la vigilancia de la respuesta eritropoyética de un paciente en tratamiento. Fundamento: Los reticulocitos son eritrocitos, inmaduros no nucleados que contienen RNA residual, que en condiciones normales se encuentran en menos del 1% en el torrente sanguíneo, incrementándose éste valor en procesos donde el aporte de oxígeno no es el adecuado. Este tipo de eritrocitos es evidenciado Con el uso de un colorante supravital (nuevo azul de metileno o azul de crecilo brillante) se precipita el ARN ribosómico residual dentro de los reticulocitos. Un eritrocito que contiene dos o más partículas de material teñido de azul es un reticulocito. Procedimiento 1.- Se obtiene la muestra de sangre con EDTA o sangre capilar. 2.- Mezclar la muestra adecuadamente invirtiendo el tubo suavemente 30 o 40 veces para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante. 3.- De la muestra se añaden dos o tres gotas de sangre en un tubo de ensaye seco y limpio. 4.- En el mismo tubo se le agregan de igual manera dos o tres gotas de colorante azul de cresilo al 1%. 5.- Se mezcla y se incuba a 37ºC durante 15 a 20 minutos .No se debe pasar de este tiempo. 6.- Se vuelve a mezclar y de la suspensión se hacen dos frotis en portaobjetos en la forma habitual, quizá un poco más delgados. 7.- Realizar el recuento de reticulocitos al microscopio de la siguiente manera: - Se escoge una zona del frotis en donde no haya superposición de glóbulos. - Es útil contar con un ocular provisto de diafragma ajustable. - Los reticulocitos son de color azul pálido y contienen un retículo o material granular azul oscuro, y los glóbulos rojos se tiñen de color azul pálido o verde azulado. - Contar el número de reticulocitos por 1,00 glóbulos y expréselo como el número de reticulocitos por 100 glóbulos rojos. Valores normales De 0.5 a 1.5 % Recién nacidos hasta 2.5 %
  • 28. 28 1.10 Prueba de coombs El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de una reacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisis inducidas por drogas, y enfermedad hemolítica del recién nacido. El Coombs indirecto se realiza a pacientes politransfundidos, embarazadas. El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes politransfundidos, pacientes con antecedentes de reacción post transfusional hemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible. Material Reactivos Centrífuga para tubos de mesa - Aglutinoscopio. - Tubos de ensayo de13x100 - Gradillas para tubos de ensayo - Jeringuillas de 10 o 20 mL - Agujas 20 o 21 - Torundas - Ligaduras - Aplicadores de madera. Anticoagulante EDTA o heparina - Alcohol al 70% o hibitane alcohólico - Suero de Coombs poliespecífico - Suero de Coombs monoespecífico anti IgG y anti C3d. -Solución salina 1.10.1 Coombs indirecto y cruzado 1. Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y decántelo en un tubo debidamente identificado. 2. Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes O y en el caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensión. 3. En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensión y mezcle bien. 4. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de la suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien 5. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos 6. Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último lavado. 7. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo. 8. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm. 9. Lea desprendiendo suavemente el botón en la lámpara aglutinoscopio. Interpretación de los resultados • Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinación esto indica presencia de anticuerpos y /o complemento unidos a los hematíes in vivo, repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d. Patrones de reacción Reactivos monoespecíficos 1 2 3 4 _____________________________________________________ Anti Ig G + + - - Anti C3 - + + -
  • 29. 29 1.10.2 Coombs directo Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina. Se basa en el principio de los ateroanticuerpos contra componentes del suero humano según la descrita por Mareschi y los principios de la aglutinación publicados por Landsteiner. Los eritrocitos humanos en presencia de un anticuerpos dirigido contra un antígeno que posean, pueden ser sensibilizadas para no lograr la aglutinación por la naturaleza misma del anticuerpo o el antígeno en cuestión. El suero antihumano, reaccionará contra la gamma globulina que han sensibilizado a componentes del complemente humano y propiciará la aglutinación de los eritrocitos. El suero antiglobulina humana (de Coombs) permite reconocer estos glóbulos rojos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulinicos que ya cubren su superficie, con lo cual se produce la aglutinación. Puesto que el suero contiene globulinas que neutralizan muy rápidamente los anticuerpos antigobulinas humanas (de Coombs), es evidente que para identificar los glóbulos sensibilizados es absolutamente necesario remover la totalidad del suero de los glóbulos mediante lavados repetidos (tres cuando menos) con grandes volúmenes (50 a 100 veces el volumen de los glóbulos rojos) de suero fisiológico estéril.  Procedimiento La muestra empleada es suero del paciente. 1. Preparar glóbulos rojos del grupo O Rh positivos, lavados y resuspendidos al 5%. 2. Agregar en un tubo 2 gotas de suero del paciente y 1 gota de glóbulos rojos del grupo O Rh positivos al 5%. 3. Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm. 4. Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de albúmina. 5. Agregar dos gotas de albúmina (potenciador) al tubo de la reacción negativa. 6. Incubar 30 minutos a 37° C y centrifugar durante 15 segundos a 3400 rpm. li>Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de Coombs. 7. Lavar esta mezcla tres veces con solución salina. 8. Agregar 2 gotas de suero de coombs a cada tubo. Centrifugar y leer. 9. Comprobar las pruebas negativas con células control de coombs. Interpretación de los resultados Si la prueba con las células control de coombs es positiva:  Demuestra que la técnica de lavado fue correcta y que el reactivo de antiglobulina tiene actividad anti IgG y por lo tanto la prueba es válida.  Si la prueba de control es negativa la prueba queda inválida y debe repetirse.  Células control de coombs: 4 gotas de anti D + 4 gotas de solución salina + 4 gotas de glóbulos rojos Grupo O Rh positivo. Incubar 1 hora a 37 ° C. Lavar 4 veces con solución salina. Reconstituir con 2ml de solución salina
  • 30. 30 2.- Departamento de serología e inmunología La inmunología se inicio como una rama de la microbiología medica, relacionada con el estudio de la resistencia a las enfermedades infecciosas. En la actualidad, empero, se le reconoce por meritos propios como un campo de la investigación biomédica, sin limitarla de ninguna manera a la zona de las infecciones .En realidad el termino inmunidad, tal como lo usan los inmunólogos, ya no implica necesariamente una respuesta que resulte protectora para el individuo. Puede considerarse a la inmunidad como un estado de respuesta alterada ante una sustancia especifica, a causa de un contacto anterior con dicha sustancia. El sistema inmunitario normal tiene como fusión la vigilancia fisiológica ininterrumpida. Protege al cuerpo de la invasión de microorganismos y conserva la homeostasia al regir la degradación celular normal y la eliminación de células lesionadas. También identifica y elimina células anormales que surgen continuamente en el interior del cuerpo. Los estudios de disfunción inmunitaria poseen enorme importancia clínica. El numero de estudios inmunológicos para estudiar reacciones antígeno-anticuerpo ha aumentado rápidamente desde 1975, hasta nuestros días. Las pruebas existentes se modificaron o fueron substituidas por otras que reflejan nuevos datos y técnicas .Los estudios recientes de la respuesta inmunitaria mediada por células y sus componentes se crearon con base en la aplicación de la inmunopotenciación, inmunosupresión e inmunomodulación, en la terapéutica clínica. Los mecanismos de defensa inespecíficos y específicos protegen al cuerpo contra el ataque de elementos “no propios”. La determinación de este tipo de pruebas son de utilidad para diagnostico de enfermedades de transmisión sexual, problemas de articulación, infecciones por microorganismos, y la detección de embarazo. Se cuenta con personal capacitado y con experiencia para la realización de todas estas pruebas.
  • 31. 31 2.1 Factor reumatoide Significado clínico El factor reumatoide es el termino para describir el grupo de autoanticuerpos con actividad anti-IgG; aproximadamente, el 80%-90% de los pacientes con artritis reumatoide tienen anticuerpos IgG. Estos anticuerpos, llamados factor reumatoide (anti.IgG), también se ven en la endocarditis bacteriana, quistosomiasis, lepra, osteomielitis, y otras infecciones crónicas. - También se encuentra en algunos pacientes con otras enfermedades del tejido conectivo. - Aunque la presencia de este anticuerpo en el suero no causa la enfermedad, el factor reumatoide, locamente producido en las articulaciones, puede producir efectos y formación de complejos inmunes, pudiendo provocar una respuesta inflamatoria. Un 80% de los pacientes con artritis reumatoide tiene un factor reumatoide en su sangre. Fundamento: el factor reumatoide es un anticuerpo circulante que reacciona con algunos componentes de inmunoglobulinas, generalmente es un anticuerpo IgM (19 S) que reacciona con inmunoglobulinas de origen animal, humano o autólogas (las propias IgG del paciente). La prueba de aglutinación con partículas de latex es el método más común, en donde la gamma globulina agregada es absorbida sobre partículas de latex que se aglutinan en presencia de factor reumatoide; esta no es una prueba muy especifica pero si es muy sensible. Procedimiento; prueba cualitativa 1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente. 2. Preparar una dilución 2:20 del suero problema, diluyendo 0.05 ml del suero con 1 ml de solución amortiguadora. 3. Poner una gota (aprox. 0.05 ml) del suero diluido en las áreas marcadas de la laminilla. 4. Añadir una gota del reactivo de látex al suero problema. 5. Mezclar con un aplicador. 6. Agitar durante 2 minutos. 7. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa. Interpretación -Positivo; Aglutinacion visible de las partículas de latex. -Negativo; No aglutinación o una ligera granulosidad que no excede a la observada en el control negativo. Nota; - Si hay aglutinación realizar las siguientes diluciones: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:34 y multiplicar (2.5) (Dilucion)=Resultado verificado por duplicado. - Si no hay aglutinación reportar: < 2.5 ul/ml
  • 32. 32 2.2 Proteína C reactiva Significado clínico Durante las infecciones se incrementa la concentración sérica de ciertas proteínas, llamadas proteínas de fase aguda. Una de éstas es la proteína C reactiva (PCR) llamada así porque se une a la proteína C de los neumococos. La PCR fue descrita por primera vez en 1931 por Tillet y Francis, quienes reportaron una reacción de presipitacion que podía ser demostrada en el suero de pacientes que padecían neumonía lobular por cepas de neumococos. El extracto de neumocóccico era un carbohidrato denominado C, y la proteína humana selectiva capaz de precipitar se le denomino proteína C reactiva. Independientemente de le neumonía lobular, la PCR se ha asociado a una gran variedad de enfermedades infecciosas, a procesos inflamatorios no infecciosos y a ciertos padecimientos malignos. Fundamento: la prueba es usada frecuentemente para monitorear la actividad en pacientes con fiebre reumática y artritis reumatoide. La prueba de PCR látex consiste en usar moléculas inertes biológicamente de poliestireno látex que son sencibilizadas con anti-PCR de origen animal. La PCR presente en el suero del paciente sirve como antígeno y cuando se mezcla con el reactivo de látex sensibilizado se produce una aglutinación detectable macroscópicamente. Procedimiento; Método cualitativo en placa. 1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente. 2. Depositar 0.95 ml de diluyente glicina salina diluido (de acuerdo a las instrucciones del fabricante) en un tubo de ensaye. 3. Añadir a este tubo 0.05 ml del suero problema para asi obtener una dilución 1:20 y estará lista para su uso. 4. En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido. 5. Mezclar el reactivo PCR látex hasta tener una suspensión homogénea y añadir una gota del reactivo de látex a cada suero. 6. Mezclar con un aplicador diferente para cada muestra. 7. Agitar la placa durante dos minutos. 8. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa. Interpretación -Positiva: aglutinación visible en las partículas de látex similar a la del suero control positivo. -Negativo: No aglutinación o una ligera granulosidad que no exceda a la observada e en el control negativo. 2.3 Prueba de V.D.R.L. Significado clínico La prueba VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) es una reacción de floculación que utiliza cardiolipina para revelar la presencia de anticuerpos anti- Treponemas,y hacer el diagnóstico de la sífilis. Sin embargo, la prueba VDRL no es específica para demostrar la presencia de anticuerpos anti-Treponemas, puesto que la cardiolipina se obtiene del corazón de bovinos. A pesar de que la prueba solo permite el
  • 33. 33 diagnóstico de un 75% de los casos de sífilis primaria y de que puede dar reacciones falsas positivas con los anticuerpos anti-DNA, la cardiolipina continua siendo un reactivo útil para el diagnostico de la sífilis por las dificultades que existen para cultivar in vitro el Treponema Pallidum. Fundamento: Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación visible en microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de la técnica USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra. Procedimiento Tanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO O PLASMA 1. En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar:  Muestra; 50 ul Con gotero provisto colocar:  Antígeno; 1 gota Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. Observar inmediatamente en microscopio con poco aumento (60 a 100 X). II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO O PLASMA 1. Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solución fisiológica y realizar para cada dilución la prueba como se describe en I. III- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR 1. Diluir el Antígeno 1:2 con solución de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro de las 2 horas de preparación. 2. En cada sector delimitado de la placa colocar:  Muestra 50 ul Con aguja calibre 6 agregar:  Antígeno diluido 1 gota (10 ul) 3. Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante 8 minutos a 180 rpm. 4. Leer los resultados en microscopio con poco aumento (60 a 100 X). Interpretación de los resultados -Reactivo: presencia de floculación. -No reactivo: ausencia completa de floculación. Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la inversa de la última dilución que se observe reactiva. Leer atentamente las LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO. METODO DE CONTROL DE CALIDAD Para controlar la calidad del sistema procesar un Control Positivo (suero seguramente reactivo) y un Control Negativo (suero seguramente no reactivo) utilizándolos de la misma forma que las muestras.
  • 34. 34 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Resultados falsamente positivos pueden ser observados en individuos con cuadros patológicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma, tuberculosis, cáncer, diabetes y enfermedades autoinmunes. Estos casos no son muy comunes y generalmente presentan reacciones con títulos bajos y una historia clínica que no coincide con las características de sífilis. Es imprescindible por estos motivos ante toda prueba cualitativa reactiva realizar la prueba semicuantitativa. Resultados falsamente negativos pueden observarse cuando se presenta el fenómeno de prozona. Por este motivo se recomienda repetir la prueba en suero diluido 1:5 con solución fisiológica para verificar el resultado. Si en estas condiciones se observa floculación la muestra es reactiva. A pesar de las ventajas de este método, sus resultados al igual que los de cualquier prueba serológica, sólo constituyen un dato auxiliar de diagnóstico que debe corroborarse con la historia clínica del paciente. 2.4 Reacciones febriles Significado clínico La infección causada por microorganismos de diversas especies produce entre otros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. Enteritis, así como las paratifoideas causadas por S. Paratyphi A y B; y el Tifo causado por el género Rickettsias .La infección por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados por el antígeno especifico. Fundamento: La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente como lo son el Tífico “O” (somático), Tífico “H” (flagelar), Paratífico “A”, Paratífico “B”, Proteus OX-19; produciendo una reacción de aglutinación macroscópica. Procedimiento: Método Cuantitativo 1.- Obtener la muestra de sangre sin anticoagulante y separar el suero que este bien identificada. 2.- Llevar los reactivos correspondientes a temperatura ambiente y marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que este usando (“O”, “H”, “A”, “B”, Proteus OX-19). 3.- Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades de suero a probar: 0.04 ml, 0.02 ml ,0.01ml, 0.005 ml. 4.- Agitar el antígeno a utilizar y añadir una gota de la suspensión a cada una de las diferentes cantidades de suero.
  • 35. 35 5.- Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. 6.- Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante dos minutos. 7.- Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica. Reportar de acuerdo a la dilución que haya llegado. Interpretación de los resultados El grado de aglutinación se registra como sigue: El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación del 50 % de organismos (2+) Valores Normales: Negativos 2.5 Rosa de bengala Significado clínico Es una prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis). Fundamento: Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Procedimiento: 1.- Obtener la muestra de sangre y separar el suero. 2.- Utilizando una pipeta automática adicione 30 l de la muestra del paciente en un círculo de la placa. 3.- Mezcle bien el antígeno después coloque una gota sobre el suero y mezcle con un aplicador. 4+ Aglutinación del 100% de los organismos 3+ Aglutinación del 75% de los organismos 2+ Aglutinación del 50% de los organismos 1+ Aglutinación del 25% de los organismos - Aglutinación del 0% de los organismos Volumen del suero Titulo 0.08 ml 1:20 0.04 ml 1:40 0.02 ml 1:80 0.01 ml 1:160 0.005 ml 1:320
  • 36. 36 4.- Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. Y con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Interpretación de resultados. La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelen lentamente y que de otra manera se pueden omitir. Si hay cualquier cantidad de aglutinación es positiva. Si no hay aglutinación es negativa. Valores Normales: Negativo 2.6 Prueba inmunológica de embarazo por inmunoensayo cromatográfico con partículas de oro coloidal para detección de beta hcg en orina o suero. Significado clínico La gonadotropina coriónoica humana (hCG) es secretada normalmente por la placenta .En el embarazo, la secreción aumenta tiempo después .La hCG se excreta por la orina y se alcanzan niveles relativamente altos, lo que permite la utilización de técnicas rápidas y simples para la determinación del embarazo Durante el tiempo de atraso del último periodo menstrual, los niveles de hCG es suero son de 100mlU/ ml con niveles pico de 100,000 a 200,000 mlU/ ml observados al final del primer trimestre. Fundamento: El ensayo utiliza una combinación única de anticuerpos monoclonales y policlonales, reactivos que detectan selectivamente niveles bajos de hCG en la muestra. La prueba se lleva a cabo mediante la adición de muestra en la zona de prueba, seguido de la formación de líneas coloridas en las zonas de la muestra y de control. La muestra migra por acción capilar a lo largo de la membrana y reacciona con los conjugados coloridos. Procedimiento: 1.- Obténgase la muestra de sangre y separe el suero. O también muestra de orina. 2.- Remueva el dispositivo de prueba de su bolsa protectora y póngalo sobre una superficie plana .Identifique el dispositivo con los datos del paciente. 3.- Sosteniendo el gotero desechable e forma vertical, vierta cinco gotas de suero u orina (aproximadamente 0.2 ml) dentro del orificio de muestra.
  • 37. 37 4.- Lea a los 3 minutos muestras de orina y a los 5 minutos muestras de suero. NOTA: Dependiendo de la concentración de HCG, un resultado positivo pude ser observado en tan solo 40 segundos. Sin embargo, para confirmar un resultado negativo, se requiere de esperar 5 minutos. No se deben interpretar los resultados después de 5 minutos. INTERPRETACIÓN Negativo. Únicamente aparecerá una banda de color rosa en la zona de control (C). No aparece banda sobre la región del paciente (T). Positivo. En adición a la banda de control, deberá aparecer una segunda banda de color rosa en la zona del test (T) No valido. Una total ausencia de color en ambas regiones. 2.7 Determinación de HIV y HCV Significado clínico La Prueba Rápida de Anticuerpos HIV y HCV detecta cualitativamente la presencia de anticuerpos VIH y HCV en muestras de suero, plasma o sangre completa. Cualquier persona expuesta al VIH o HCV producirá los anticuerpos que son indicadores de la infección. La detección de dichos anticuerpos, representa un resultado positivo (indicando que el individuo está infectado). La ausencia de anticuerpos al momento de la prueba (indicando que el individuo no está infectado) es indicativo de un resultado negativo, sin embargo no descarta totalmente una infección de VIH o HCV. Puede llevar hasta tres meses, tras la exposición al VIH o HCV, el desarrollo de estos anticuerpos. Fundamento. La prueba se basa en poner en contacto una muestra de suero con un conjugado de Ag viral-oro coloidal (VIH o HCV) embebido en el pocillo de muestra el cual reacciona con los Ac presentes en la muestra formando un complejo Ac-Ag-conjugado, la mezcla emigra a lo largo de la tira de prueba el cual es captado por un Ag de VIH recombinante inmovilizado en una membrana y formando una banda colorida en la región de prueba. Una muestra negativa no produce una banda colorida debido a la ausencia del complejo conjugado de oro coloidal/anticuerpos (anti-VIH o anti-HCV). Los Ag utilizados en la prueba de conjugado son proteínas recombinantes altamente inmunoreactivas de VIH-1 y VIH-2.
  • 38. 38 Una banda coloreada en la región control aparece al final de la prueba sin considerar el resultado de la prueba. Esta banda control es el resultado de la unión del conjugado de oro coloidal al anticuerpo viral (VIH o VIH) inmovilizado en la membrana. La banda control indica que el conjugado de oro coloidal es funcional. Procedimiento 1.- No abrir los sobres sellados hasta que se esté listo para la prueba. Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente. 2.- Sacar el cartucho de su sobre y colocarlo en una superficie seca. 3.- Identificar los cartuchos para cada muestra o control. 4.- Colocar una gota de muestra o control (con el gotero proporcionado) en el pocillo S. 5.- Posteriormente agregar 1 gota del diluyente en el pocillo S (para prueba de VIH) y en el pocillo D (para prueba de HCV). INTERPRETACION:  POSITIVO: Tanto la banda de prueba como la banda control se colorea de rojo púrpura.  NEGATIVO: Solo la banda control aparece de color rojo púrpura en la membrana.  INVALIDO: siempre tendrá que haber una banda color rojo púrpura en la región de control independientemente del resultado de la prueba. Si la banda control no se observa la prueba se considera inválida. Repetir la prueba empleando un nuevo cartucho. C C C C C T T T T T Positivo Negativo Inválido
  • 39. 39 3.- Departamento de orinas Desde hace mucho tiempo se reconoce que las propiedades físicas y químicas de la orina constituyen indicadores importantes del estado de salud. El análisis de orina incluye el examen del color, del aspecto, de la densidad, del pH, la detección de proteínas, glucosa, cetonas, sangre oculta, bilirrubinas, nitrito urobilinógeno, así como el examen microscópico del sedimento. Los principales constituyentes de la orina son agua, urea, ácido úrico, creatinina, sodio, potasio, cloro, calcio, magnesio, fosfatos, sulfatos y amoniaco. En 24 horas el organismo excreta aproximadamente 60g de material disuelto, la mitad de la cual esta constituida por urea. En algunos procesos patológicos aparecen en gran cantidad, sustancias tales como cuerpos cetónicos, proteínas, glucosa, porfirinas y bilirrubina. La orina también puede contener estructuras como cilindros, cristales, células sanguíneas y células epiteliales. Entre las enfermedades urológicas que el análisis de orina ayuda a diagnosticar pueden mencionarse la cistitis (inflamación de la vejiga), la nefritis (inflamación del riñón que puede presentarse con infección bacteriana, pielonefritis o sin ella, glomerulonefritis) y la nefrosis (degeneración del riñón sin inflamación). Significado clínico La orina es un material que permite obtener una considerable información, de forma rápida y económica. Los análisis de orina deben realizarse de forma cuidadosa y perfectamente controlada. El estudio de la orina puede plantearse desde dos puntos de vista: diagnostico de enfermedades renales o de tracto urinario y para la detección de enfermedades metabólicas o sistémicas no directamente relacionadas con el sistema urinario. Fundamento: La orina es una solución acuosa de sustancias orgánicas e inorgánicas, de las cuales la mayor parte, son de desecho del metabolismo celular .Las tiras reactivas Ames –Bayer para uroanalisis son bases plásticas en las que hay adheridas diversas áreas reactivas para determinar glucosa, bilirrubina, cetona, gravedad, pH, leucos, etc. Los resultados obtenidos proporcionan información referente al metabolismo de carbohidratos, función hepática, y renal, balance ácido base e infecciones del tracto urinario.
  • 40. 40 3.1 Recolección de la muestra de orina La muestra deberá recolectarse en un recipiente estéril, limpio y seco, de preferencia deberá ser la primera de la mañana por ser la más concentrada y a mitad de chorro, a fin de evitar su contaminación por alguna descarga hemorrágica. El análisis de la orina recolectada en 24 hrs. Y adecuadamente conservada, proporciona una medida cuantitativa más exacta de la excreción de proteína y otros constituyentes. La cateterización se considera como un procedimiento innecesariamente peligroso, debido a riesgo de que cause infecciones genitourinarias y pielonefritis. A veces puede ser necesario taponar la vagina, pero las muestras de orina libremente emitidas son preferibles. La orina debe examinarse siempre fresca, de ser posible, dentro de los 30 minutos siguientes a su emisión y a una temperatura no menor de 20 ° C. Evitar la presencia de conservadores o diluyentes, rotular con los datos completos del paciente. 3.2 Examen físico de la orina El examen físico se debe realizar en la muestra previamente agitada y sin centrifugar. Color La orina normal presenta una amplia gama de colores, lo cual está determinado por su concentración. El color puede variar de un color amarillo pálido a un ámbar oscuro, según la concentración de los pigmentos urocrómicos. Sin embargo existen muchos factores y constituyentes que pueden alterar el color normal de la orina, incluyendo medicamentos así como productos químicos. En el siguiente cuadro se presentan algunas sustancias que pueden influir en el color. SUSTANCIAS QUE PUEDEN COLOREAR LA ORINA COLOR PATOLÓGICAS NO PATOLÓGICAS Blanco Quilo Pus (muchos leucocitos) Fosfatos Amarillo a anaranjado Bilirrubina Urobilina Acriflavina Azo-Ganstrisin Colorantes de alimentos Nitrofurantonina Orina concentrada Pyridium Quinacrina Riboflavina Ribarbo Sena Serotonina
  • 41. 41 Rosado a rojo Eritrocitos Hemoglobina Mioglobina Porfobilina Porfirinas Aminopirina Antipirina Bromosulftaleina Cascara Colorantes de alimentos Fenacetina Fenolftaleina Metildopa Remolacha Rojo a castaño a púrpura Porfobilina Porfobilinogeno Uroporfirina Castaño a negro Ácido homogentisico Bilirrubina Fenol Melanina Metahemoglobina Mioglobina Porfirinas Compuestos de hierro Cloroquina Hidroquinona Levodopa Metildopa Nitroforantoina Quinina Resorcinol Azul a verde Biliverdina Infección por pseudomonas Acriflavina Amitriptilina Azul de Evans Azul de metileno Azur A Complejo de vitamina B Creosota Fenil salicilato Timol Tolonio Triampireno Si bien algunos laboratorios ya no informan mas sobre el color de la orina, no deben subestimarse las pistas dadas por las características físicas. Debería informarse siempre sobre todo color muy anormal, como negro o castaño, así como también la presencia de orinas rojas con lectura negativa para sangre oculta. Aspecto La orina habitualmente es clara pero puede tornarse turbia por precipitación de partículas de fosfato amorfo en orinas ácidas. La orina puede ser turbia por presencia de leucocitos o de células epiteliales. Las bacterias pueden causar turbidez. El moco puede dar a la orina un aspecto brumoso. Olor Existen solo unas pocas sustancias donde el olor de la orina tiene importancia. Las cetonas pueden concebirle un olor dulce o a frutas. Una muestra contaminada con bacterias puede tener un olor picante. Se dice que la orina de un lactante con fenilcetonuria tiene un olor “rancio” o “a ratón”. El olor de orina que se asemeja al de “pies sudados” se encuentra en la acidemia isovalerica o en individuos que presentan cantidades excesivas de ácido butírico o hexanoico. La hipermetioninemia a sido asociada con un olor a “manteca rancia” o a “pescado”.
  • 42. 42 Peso especifico El peso especifico es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y el peso del mismo volumen de agua destilada medidos a una temperatura constante. Constituye un índice de la concentración del material disuelto en la orina. El peso específico se utiliza para medir el poder concentrador y diluyente del riñón en su esfuerzo por mantener la homeostasis en el organismo. El intervalo normal para una muestra tomada al azar es de 1.003 – 1.035 aunque en casos de hidratación excesiva la lectura puede llegar a 1.001 (el valor del agua es 1). El valor varía enormemente según el estado de hidratación y el volumen urinario. El rango para la muestra de 24 hrs. es de 1.015 – 1.025. 3.3 Examen químico de la orina El análisis de orina incluye pruebas químicas para pH, proteínas, glucosa, cetonas, sangre oculta, bilirrubinas, nitrito y urobilinógeno. Estos procedimientos pueden ser mediciones cualitativas (positivos o negativos) o semicuantitativas (por ejemplo, de trazas de 4+). Desde la introducción de tiras reactivas simples y múltiples el examen químico de la orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rápido. Actual mente es posible analizar hasta 9 pruebas diferentes en menos de 60 segundos. Una tira reactiva es esencialmente una banda angosta de plástico con pequeños tacos adheridos. Cada taco contiene reactivos para una reacción diferente. El procedimiento para usar las tiras reactivas es el siguiente: 1) Sumergir completamente las áreas de prueba de la tira en orina fresca, bien mezclada y sin centrifugar y retirar la tira en forma inmediata. 2) Eliminar el exceso de orina en la tira. 3) Comparar las áreas reactiva con la correspondiente carta de colores del envase. pH URINARIO El pH de la orina esta determinado por la concentración de H+ libre. Como el pH es la reciproca de la concentración de ion hidrogeno (H+ ), a medida que la concentración de este ion aumenta, el pH disminuye y viceversa. El pH de la orina puede variar entre 4.6 y 8, pero en promedio se encuentra alrededor de 6. Tiras reactivas Utilizan dos indicadores, el rojo de metilo y el azul de bromotimol, que cubren la escala de pH entre 5 y 8, 5 o 9. Los colores van del anaranjado al amarillo y del verde al azul. PROTEINAS En el riñón normal solo una pequeña cantidad de proteínas de bajo peso molecular se filtra en el glomérulo. La mayor parte de la proteína filtrada se reabsorbe en lo túbulos; se excretan <150 mg/24h (o 20mg/dl) de proteína. En el niño la excreción normal es de 100mg/m2 /24h. Puede observarse que existen dos mecanismos principales que pueden dar lugar a una proteinuria: el daño glomerular o un defecto en el proceso de reabsorcion a nivel tubular.
  • 43. 43 Tiras reactivas Esta prueba está basada en el principio conocido como indicadores de error de proteína. A un pH constante, el desarrollo de cualquier color verde es debido a la presencia de proteínas. Los colores formados van desde amarillo verdoso y verde hasta azul verdoso para las pruebas positivas. GLUCOSA La cantidad de glucosa que aparece en la orina depende del nivel de la glucemia, de la velocidad de filtración glomerular y del grado de reabsorción tubular. Por lo general no existe glucosa en la orina hasta que en nivel de glucosa en sangre no supera los 160 – 180 mg/dl cifra que es el umbral renal normal para la glucosa. Cuando el nivel de la glucemia supera el umbral renal, los túbulos no pueden reabsorber toda la glucosa filtrada y se produce glucosuria. Tiras reactivas Esta prueba está basada en una reacción enzimática secuencial doble. Una enzima, la glucosa oxidaza, cataliza la formación de ácido gluconico y peróxido de hidrogeno a partir de la oxidación de la glucosa. Una segunda enzima, la peroxidaza, cataliza la reacción entre él peróxido de hidrogeno y el cromógeno yoduro de potasio para oxidar al cromógeno y producir colores que van de verde a café. CETONAS Los cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos grasos. Cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es superada, el exceso se excreta en la orina. Tiras reactivas Esta prueba esta basada en la reacción que se produce entre el ácido acetoacetico y el nitroprusido. Los colores formados van desde un rosa moderado, para las lecturas negativas, hasta un color púrpura. SANGRE OCULTA Los métodos químicos que se utilizan en el examen de orina para detección de sangre (Hematuria: presencia d sangre o de hematíe intactos en la orina), también detectan hemoglobina libre (Hemoglobinuria: presencia de hemoglobina libre en la orina como consecuencia de hemolisis intravascular) y mioglobina (Mioglobinuria: aparece en procesos en los cuales hay destrucción muscular). Los glóbulos rojos pueden entrar en la orina en cualquier sitio, desde el glomérulo hasta la uretra. Tiras reactivas Esta prueba está basada en la acción de la hemoglobina, que mimetiza, la acción de la peroxidaza, catalizando la reacción entre el hidroparoxido de cumeno y la 3, 3´,5, 5´ tetrametilbenziolina. Los hematíes intactos de la orina se hemolisan al contacto con el taco reactivo. La hemoglobina liberada reacciona con el reactivo dando puntos verdes sobre el fondo amarillo o anaranjado. Entonces, la presencia de hematíes intactos da una reacción de color verde punteado, mientras que la hemoglobina libre y la mioglobina da una coloración uniforme de color verde o del verde al azul oscuro.
  • 44. 44 BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO La bilirrubina se forma a partir de la degradación de la hemoglobina en el sistema reticuloendotelial; unida a la albumina, es transportada por la sangre hasta el hígado. Esta bilirrubina libre o no conjugada es insoluble en agua y no puede filtrar a través del glomérulo. En el hígado es captada por las células parenquimatosas y conjugadas con ácido glucurónico para formar diglucuronido de bilirrubina. Esta bilirrubina conjugada es hidrosoluble y se excreta por el hígado a través del conducto biliar hacia el duodeno. Normalmente, cantidades muy pequeñas de bilirrubina conjugada siguen el camino inverso (regurgitación) desde el conducto biliar hacia el sistema sanguíneo. En consecuencia pueden encontrarse cantidades muy pequeñas de bilirrubina en plasma. Como la bilirrubina conjugada no esta unida a las proteínas filtra fácilmente a través de los glomérulos y es excretada en la orina toda vez que aumenta el nivel plasmático. En el intestino, las enzimas bacterianas, convierten la bilirrubina en diversos compuestos relacionados que se denominan en forma colectiva “urobilinógeno”. La mayor parte del urobilinógeno se pierde con las heces. Aproximadamente el 10 – 15% del urobilinógeno es reabsorbido, pasa al torrente sanguíneo, retorna al hígado y es excretado hacia el intestino. Una pequeña cantidad de este urobilinógeno se excreta también por los riñones, y en la orina existe un nivel normal de aproximadamente 1 – 4 mg/24h. Tiras reactivas Bilirrubina: Esta prueba esta basada en el acoplamiento de la bilirrubina con la dicloroanilina diasotizada en un medio fuertemente ácido. Urobilinógeno: Esta prueba esta basada en la reacción de Ehrlich, el la cual el p-dimetilaminobenzaldeido reacciona con el urobilinógeno en un medio fuerte mente ácido para producir un color rosa. NITRITOS La prueba para detección de nitrito es un método rápido, indirecto, para el diagnostico temprano de bacteriuria significativa y asintomática. Los organismos comunes que causan infección del tracto urinario, como la Escherichia Coli, el Citrobacter, la Klebsiella y las especies de Proteus, contienen enzimas que reducen el nitrato de la orina a nitrito. Tiras reactivas Esta prueba depende de la conversión de nitrato a nitrito por la acción de bacterias Gram-negativas presentes en la orina. El nitrito reacciona con el ácido p-arsanilico en un medio ácido para formar un compuesto de diazonio. El compuesto de diazonio a su vez se acopla con la 1, 2, 3, 4 - tetrahidrobenzoquinolina para producir un color rosa. 3.4 Examen microscópico de la orina El examen microscópico del sedimento constituye una parte vital del análisis de orina. Es una herramienta diagnostica valiosa para detección y evaluación de trastornos renales y del tracto urinario, así como de otras enfermedades sistémicas.
  • 45. 45 PREPARACIÓN DEL SEDIMENTO El examen microscópico debe hacerse en una muestra centrifugada. Se mezcla la muestra y se colocan aproximadamente 10 – 5ml de orina en un tubo de centrifugación. Se centrifuga a 2000 rpm durante 5 minutos. Se elimina el liquido sobrante y se suspende el sedimento en la orina que baja por las caras del tubo. Se dan golpecitos en la parte inferior del tubo para mezclar el sedimento. Se coloca una gota de este en un portaobjetos limpio. Se cubre con un cubreobjetos y se examina inmediatamente. CÉLULAS Entre las células que pueden estar presentes en la orina se encuentran eritrocitos, leucocitos y células epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario, o como contaminantes procedentes de vagina o vulva. Eritrocitos. Los hematíes presentes en la orina pueden provenir de cualquier punto del tracto urinario, desde el glomérulo hasta el meato urinario, y en la mujer constituyen a veces contaminación menstrual. Normalmente no aparecen hematíes en la orina; sin embargo, la presencia de 1 – 2 hematíes/campo por lo general no se considera anormal. El mecanismo por el cual los hematíes entran en la orina no esta aclarado totalmente. Hematuria es una presencia de un numero elevado de hematíes en la orina. Leucocitos. Los glóbulos blancos pueden entrar en cualquier punto del tracto urinario desde el glomérulo hasta la uretra. En promedio, la orina normal puede contener hasta 2 glóbulos blancos / campo. Pueden aparecer en forma aislada o en acúmulos. La mayoría de los leucocitos de la orina son neutrofilos. El aumento de leucocitos en la orina esta asociado con procesos inflamatorios en el tracto urinario o en sus adyacencias. Células epiteliales. Las células epiteliales presentes en la orina pueden provenir de cualquier sitio del tracto urinario, desde los túbulos contorneados proximales hasta la uretra, o de la vagina. Normalmente pueden encontrarse algunas células epiteliales en la orina como consecuencia del desprendimiento normal de células viejas. Un incremento marcado indica una inflamación de la porción del tracto urinario de donde procede CRISTALES Por lo general no se encuentran cristales en la orina recién emitida, pero aparecen dejándola reposar durante un tiempo. Cuando la orina esta sobresaturada con un compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de este se encuentran alteradas, el resultado es la formación de cristales. Cristales de ácido úrico. Pueden aparecer con muy diversas formas, como el diamante o prisma romboico y la roseta. En ocasiones pueden tener seis caras. Tienen color amarillo o rojo – castaño. Los estados patológicos en los cuales se observan cristales de ácido úrico en la orina son la gota, el metabolismo de las piurias aumentado, enfermedades febriles agudas, nefritis crónica y el síndrome de Lesch – Nyhan.
  • 46. 46 Cristales de oxalato de calcio. Son incoloros, de forma octaédrica o de “sobre”, parecen cuadrados pequeños cruzados por líneas diagonales que se interceptan. Al encontrar un típico cristal de oxalato de calcio el observador ve la “X” del cristal sobresaliendo en el campo. Pueden existir normalmente en la orina, en especial después de ingerir diferentes alimentos ricos en oxalato, como tomate, ruibarbo, ajo, naranjas y espárragos. Los estados patológicos en los que puede existir oxalato de calcio en la orina en cantidad aumentada son la intoxicación con etilenglicol, diabetes mellitus, enfermedad hepática y enfermedad renal crónica grave. Urato amorfo.Con frecuencia hay en la orina sales de urato (de sodio, potasio, magnesio y calcio) en una forma no cristalina, amorfa. Estos uratos amorfos tienen aspecto granular y color amarillo-rojo. Carecen de significación clínica. Cristales de Ácido Hipúrico. Son prismas o placas enlongadas amarillo castaño o incoloras. Pueden ser tan delgadas que parecen agujas, y con frecuencia esta agrupados. Carecen de significación clínica. Uratos de sodio. Son agujas o prismas delgados, incoloros o amarillentos que se presentan en grupos o racimos. Carecen de significación clínica. Cristales de Sulfato de calcio. Son agujas o prismas largas, delgadas e incoloras. Carecen de significación clínica. Cristales de Cistina. Son placas hexagonales, refringentes e incoloras, cuyos lados pueden ser iguales o no. Aparecen en pacientes con cistinosis o cistinuria congénita y pueden formar cálculos. Leucina. Son esferoides oleosos, altamente refractarios de color amarillo o castaño con estriaciones radiales y concéntricas. Se encuentran en orina de pacientes con la enfermedad de la orina en jarabe de arce, con síndrome de Smith y Strang y con enfermedades hepáticas graves como cirrosis terminal, hepatitis viral grave y atrofia amarilla del hígado. Tirosina. Son agujas muy finas, altamente refringentes que aparecen en grupos o acúmulos. Los cúmulos de agujas con frecuencia aparecen de color negro, sobretodo en el centro, pero pueden tomar una coloración amarilla en presencia de bilirrubina. Los cristales de tirosina aparecen en enfermedades hepáticas graves, en la tirosinosis y en el síndrome de Smith y Strang. Colesterol. Son placas de gran tamaño, planas y transparentes, con ángulos mellados. La presencia de placas de colesterol en la orina es índice de una excesiva destrucción tisular; estos cristales se observan en cuadros nefríticos y nefróticos y también en caso de quiluria. Fosfato triple. Son prismas incoloros de tres o seis caras que con frecuencia tienen extremos oblicuos. Aparecen en pielitis crónica, cistitis crónica, hipertrofia de próstata.
  • 47. 47 Fosfato amorfo. Las sales de fosfato con frecuencia están presentes en la orina en forma no cristalina, es decir, como sustancias amorfas. Se distingue de urato amorfo por el pH. Carece de significación clínica. Biurato de amonio. Son cuerpos esféricos de color amarillo castaño, con espiculas largas e irregulares. Constituyen una anormalidad solo si se encuentran en orinas recién emitidas. CRISTALES OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIO CILINDROS Cilindros Hialinos. Son incoloros, homogéneos y transparentes y por lo general tienen extremos redondeados. Cilindros eritrocitarios. Los cilindros eritrocitarios pueden tener color castaño o ser casi incoloros. Pueden estar formados por unos pocos glóbulos rojos en una matriz proteica, o bien por muchas células aglomeradas sin matriz visible. Cilindros leucocitarios. La mayoría de los leucocitos que aparecen en los cilindros son neutrofilos polimorfonucleares. En el cilindro puede haber unos pocos leucocitos o bien puede estar formado por muchas células aglomeradas. Cilindros granulosos. Pueden formarse a partir de la degradación de cilindros celulares, o bien por la agregación directa de proteínas séricas en una matriz de mucoproteinas de Tamm-Horsfall. Cilindros de células epiteliales. Se forman como consecuencia de las estacas urinarias y de la descamación de células del epitelio tubular. Pueden estar ordenadas en hileras paralelas o carecer de ordenación. CILINDROS OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIO
  • 48. 48 ESTRUCTURAS DIVERSAS Bacterias. Normal mente en la orina a nivel renal y vesical no existen bacterias, pero puede contaminarse por bacterias presentes en la uretra, en la vagina o procedentes de fuentes externas. Cuando una muestra de orina correctamente recolectada contiene gran numero de bacterias, por lo general es índice de infección del tracto urinario. Hongos. Las células micóticas son uniformes, incoloras por lo general de forma ovoide con pared de doble refringencia. Pueden tener diferente tamaño y con frecuencia muestran gemación. Espermatozoides. Pueden existir espermatozoides en la orina masculina después de convulsiones epilépticas, poluciones nocturnas, enfermedades de órganos genitales y en la espermatorrea. En ambos sexos después del coito. Filamento de moco. Son estructuras de forma acintada, largas, delgadas y ondulantes que pueden mostrar tenues estriaciones longitudinales. Parásitos. Ocasionalmente pueden encontrarse parásitos en la orina, sea porque ocupan el tracto urinario, sea como resultado de contaminación fecal o vaginal. La Trichomonas vaginalis es el parásito que más a menudo se observa en la orina. Pueden encontrarse huevos y en ocasiones el adulto o hembra de Enterobius vermicularis. Valores Normales: Volumen: Variable (ml) Sedimento: Color: Amarillo I Leucocitos: Menos de 10/campo Aspecto: Transparente Eritrocitos: No se observan Densidad: 1.010- 1.025 Cilindros: No se observan PH: 4.5 –8.0 Filamento mucoso: Negativo Glucosa: Negativo Levaduras: Negativo Cetona: Negativo Cristales: Negativo. Proteínas: Negativo Bilirrubinas Negativo Urobilinogeno: Negativo Nitritos: Negativo Sangre: Negativo Leucocitos: Negativo
  • 49. 49 4.- Departamento de Química clínica En este departamento se encarga de evaluar a los pacientes con síntomas de deficiencia o alteración respecto a cantidades de las distintas sustancias en el cuerpo humano normal, determinados mediante la evaluación de una gran muestra de sujetos supuestamente sanos. Los valores normales se expresan en rangos numéricos y pueden variar de un laboratorio a otro. Aquí se evalúan las moléculas de carbohidratos, enzimas, proteínas y electrolitos. Los grupos principales que se evalúan son: química sanguínea, pruebas funcionales hepáticas, enzimas cardiacas, enzimas pancreáticas, y electrolitos. Las enzimas son proteínas de uso repetitivo que catalizan las innumerables reacciones químicas necesarias para conservar a las células vivas, y con sus funciones .Aceleran y controlan la rapidez de las reacciones sin ser destruidas por sí mismas en el proceso .Los diferentes tipos de células producen enzimas distintas, y casi todos los tejidos contienen sustancias de muy diversa índole d esta categoría. Los análisis pueden revelar la magnitud del daño e indicar la evolución de la curación. Las proteínas del suero, que son los compuestos que más abundan en dicho líquido, tienen funciones muy diferentes de las proteínas tisulares. Poseen enorme importancia en el diagnostico, por sus funciones vitales y heterogéneas, por su acción neutralizadora, y servir como fuente de reserva de elementos nutritivos para los tejidos, entre otras cosas.
  • 50. 50 4.1 Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250. Analizador de química clínica y electrolitos, que supera todas las expectativas de los laboratorios relativas a innovación, rapidez y eficiencia con la incorporación de la tecnología de la química seca. Figura 5. Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250. Características del vitros 250. - 1 a 6 pruebas diferentes con 50 ul de muestra. - Procesamiento de 250 pruebas por hora. - Dos tipos de lectura en forma simultanea, reflectometria y potenciometria. - 7 a 30 pruebas diferentes con 150ul de muestra. - Mínimas instalaciones especiales, pues no requiere del suministro de agua tratada. - Amplio menú de pruebas; 43 directas y 14 calculadas, en un mismo analizador. - Mantenimiento diario mínimo de 5 &ndash; 10 minutos. - Mínimo espacio para el almacenamiento de los reactivos - Tres calibraciones al año para todas las pruebas incluidas los electrolitos y las pruebas especiales, equivalente a menor gasto de reactivos. - Control de calidad una vez al día en un solo turno de trabajo, equivalente a optimizar los recursos del laboratorio pormenor gasto de reactivo. - Eficiencia superior al 80%. - Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Neonatal. - Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Delta. - Identificación de pacientes y programación de pruebas por código de barras ya que permite ser conectado en red. - Comunicación bidireccional. - Eliminación de cambio de electrodos. - Detección de coágulos de fibrina previo al dispensado de reactivos. - Reactivos listos para usar, no requiere de la preparación de soluciones de trabajo y elimina errores de reconstitución. - Eliminación de contaminación por arrastre de reactivo y/o muestras. - Capacidad de procesar perfiles de pruebas y programación de pacientes de urgencias (Stat). - Menor manejo de inventario de pruebas. - Almacenamiento en memoria de 5000 pacientes, con hasta 30 pruebas por paciente. - Capacidad de generar estadísticas de carga de trabajo por prueba. - Dilución Automatica con puntas individuales,listo multiplicado por factor de dilución.
  • 51. 51 MENU DE PRUEBAS DROGAS ACETAMINOFENO ALCOHOL AMONIO CARBAMAZEPINA DIGOXINA FENOBARBITAL FENITOINA SALICILATOS TEOFILINA RUTINA ACIDO URICO ALBUMINA ALKP ALT AST BILIRRUBINA TOTAL BILIRRUBINA CONJUGADA Y NO CONJUGADA BILIRRUBINA NEONATAL BUN / UREA COLESTEROL CREATININA GLUCOSA HDLC PROTEIINA C REACTIVA PROTEINAS URINARIAS PROTEINAS TOTALES PROTEINAS LCR TRIGLICERIDOS ELECTROLITOS SODIO POTASIO CLORO LITIO MAGNESIO ESPECIALES ACTIVIDAD CK-MB CK AMILASA CALCIO COLINESTERASA DIOXIDO DE CARBONO FOSFORO GGT GLOBULINA HEMOGLOBINA HIERRO TIBC LACTATO LDH LDL (DIRECTO) LIPASA COLINESTERASA FOSFATASA ALCALINA DERIVADAS ALBUMINA / GLOBULINA BUN / CREATININA CK-MB / CK COLESTROL / HDL OSMOLARIDAD PORCENTAJE DE SATURACION ANION GAP CON POTASIO ANION GAP SIN POTASIO BILIRRUBINA DELTA BILIRRUBINA DIRECTA VLDL
  • 52. 52 Valores de referencia. β Albúmina: 3.9 a 5.0 mg/dL β Fosfatasa alcalina: 44 a 147 UI/L β ALT (alanina transaminasa): 8 a 37 UI/L β AST (aspartato de aminotransferasa): 10 a 34 UI/L β BUN (urea en la sangre): 7 a 20 mg/dL β Calcio en suero: 8.5 a 10.9 mg/dL β Cloruro en suero: 101 a 111 mmol/L β CO2 (dióxido de carbono): 20 a 29 mmol/L β Creatinina: 0.8 a 1.4 mg/dL ** β Bilirrubina directa: 0.0 a 0.3 mg/dL β Gama GT (gamma-glutamiltranspeptidasa): 0 a 51 UI/L β Examen de glucosa: 64 a 128 mg/dL β DHL (lactato de deshidrogenasa): 105 a 333 UI/L β Fósforo en suero: 2.4 a 4.1 mg/dL β Examen de potasio: 3.7 a 5.2 mEq/L β Sodio en suero: 136 a 144 mEq/L β Bilirrubina total: 0.2 a 1.9 mg/dL β Colesterol total: 100 a 240 mg/dL β Proteína total: 6.3 a 7.9 g/dL β Ácido úrico: 4.1 a 8.8 mg/dL **Nota: los valores normales o "saludables" para la creatinina pueden variar con la edad. Puede haber disminución en la función renal y en la masa muscular con la edad o niveles muy altos de masa muscular en un atleta joven. El médico puede interpretar y explicarle estos valores a la persona. Clave para las abreviaciones: UI = unidades internacionales L = litro dL = decilitro = 0.1 litro g/dL = gramos por decilitro mg = miligramos mmol = milimoles mEq = miliequivalentes Electrolitos: Los iones cargados positivamente (cationes) son, entre otros, sodio, potasio, calcio y magnesio. Los iones cargados negativamente (aniones) son, entre otros, los iones de cloruro, bicarbonato (esencialmente el mismo del CO2), proteína, fósforo, SO4 y ácidos orgánicos. Cuando se hace un examen de electrolitos, los iones medidos por lo general incluyen sodio, potasio, cloruro y bicarbonato; además, los niveles de calcio y magnesio se obtienen en muchas instituciones como parte de este examen. Consideraciones especiales Las venas y las arterias varían de tamaño de un paciente a otro y de una parte del cuerpo a otra, por tal razón obtener una muestra de sangre de una persona puede ser más difícil que de otras.