O documento descreve a técnica de imunoquimioluminescência, que quantifica antígenos ou anticorpos em fluidos corporais através da emissão de luz resultante de uma reação química. A técnica envolve a ligação do antígeno/anticorpo a uma substância quimioluminescente, de modo que a luz emitida é proporcional à quantidade do analito. A imunoquimioluminescência oferece vantagens em relação ao radioimunoensaio, como ausência de materiais radioativos e maior

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 IMUNOQUIMIOLUMINESCÊNCIA Trabalho realizado pela Doutoranda de Imunologia da UFBA Mírian Flores Rebouças sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

4. Quantifica antígeno ou anticorpo presente em fluidos corporais.

5. Muito usado para dosagens de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas.

7. Radioimunoensaio: Primeira técnica a ser desenvolvida para dosagem hormonal e de outras substâncias presentes em pequenas concentrações em fluídos biológicos, sendo um método muito sensível para análise quantitativa antígeno-anticorpo.

8. Limitações do radioimunoensaio:

9. envolve material radioativo.

10. a validade desse reagente reativo é curta.

12. Opção de ensaio com elevada sensibilidade e especificidade adequada.

13. Exame basicamente automatizado e rápido.

15. Derivados de luminol

16. Necessita de um catalisador.

17. Apresenta uma série de interferências de fundo ao emitir sua luz.

18. Reação lentae gradual.

20. Ésteres de acridina

21. Não requer um catalisador.

22. Baixas interferências de fundo.

23. Muito estável, grande vida média.

24. Alto rendimento – linear.

25. Tempo de reação rápido – medição mais fácil

26. A conjugação não limita o rendimento.

28. PASSOS DA TÉCNICA

29. PASSOS DA TÉCNICA Uma microesfera de poliestireno é revestida com anticorpo monoclonal contra antígeno analisado Adição do soro do paciente, que é incubado com agitação intermitente. Lavagem para retirada do antígeno não fixado Y Adição de anticorpo monoclonal específico para o antígeno pesquisado conjugado a enzima. Y Y Y Incubação do conjugado e mais uma lavagem para tirar o anticorpo não fixado Y Y Adição do substrato da enzima, em seguida, incubação. A adição de substrato quimioluminescente sofre hidrólise na presença da enzima, produzindo substâncias instáveis que geram emissão de fótons (luz). Y Conjugado Anticorpo monoclonal Antígeno do soro do paciente Substrato Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y

30. PASSOS DA TÉCNICA Estes fótons são medidos través de um fotomultiplicador (PMT) que tem a função de transformar a luz emitida pelos fótons em impulsos elétricos. Estes impulsos são lidos em “contagens” de luz por segundo (cps). Essa unidade é proporcional a quantidade de antígenos presentes na amostra.

31. REFERÊNCIAS Edwards, R. Imunnodiagnostics, a pratical approach. Oxford University Press. 281 pg, 1999. Howard, G.C.; Kaser, M.R. Making and using antibodies, a pratical handbook.CRC Press. 396 pg, 2006. http://alvaro.com.br/home/palestras/8 http://quimicanova.sbq.org.br/qn/qnol/1993/vol16n3/v16_n3_%20(6).pdf http://www2.ucg.br/cbb/professores/49/Biomedicina/6_periodo/Quimioluminescencia.pdf Zhao, L.; Sun, L.; Xiaogang Chu. Chemiluminescence immunoassay. Trends in Analytical Chemistry, Vol. 28, No. 4, 2009.