Production des anticorps monoclonaux

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Production des anticorps monoclonaux

  1. 1. Département des sciences de vie Module : biotechnologie animale
  2. 2. Plan : • 1- les anticorps monoclonaux : vue générale • 2-la technique d’hybridation cellulaire A- Matériel biologique utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire B-Etapes pré-hybridation cellulaire C- la technique d’hybridation cellulaire,proproment dit. D- étapes post-hybridation
  3. 3. • Les Anticorps monoclonaux sont une population homogène d’anticorps issus d’un «seul et unique» clone de cellules B. • Ils sont : Spécifiques on peut diriger l’anticorps vers un épitope donné de la protéine Affines on peut créer des anticorps extrêmement affines Production massive et constante de ces anticorps
  4. 4. Des cellules B extraites des organes lymphatiques secondaires Des cellules Myélomateu ses (immortelle s) polyéthylène glycol (PEG) Facteurs de croissance SVF Milieu HAT Et autres A- Matériel utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire:
  5. 5. • Immunisation :  Les antigènes que l’on injecte à la souris pour créer l’anticorps peuvent être des haptènes ou des protéines porteuses. Cette injection a pour effet de produire des plasmocytes libérant des anticorps polyclonaux contre cet antigène • Extraction des cellules B de la sourie
  6. 6. • Des partenaires de fusion: Cellules B extraites d’organes lymphoïdes secondaires (rate, ganglions)+ cellules myélomateuses ayant perdus l’HGPRT ; Cette enzyme impliquée dans la synthèse des nucléotides dans la voie de sauvetage • Une méthode de fusion: Nous allons utiliser soit la fusion chimique grâce à PEG ou la Fusion physique qui se fait par électro fusion
  7. 7. • Sélection du milieu : Nous devons sélectionner un milieu où l’on doit retrouver du HAT (Hypoxanthine Aminopterine Thymidine), des facteurs de croissance (IL6 b mercaptoethanol), du sérum de veau fœtal, des fibroblastes, sous atmosphère CO2 .  Dans ces conditions, seuls les hybridomes se développent à hauteur de 1 x 105 cellules/ml
  8. 8. • Le clonage : • Il peut se faire par 2 méthodes: Soit dans l’Agarose où l’on visualise directement les colonies cellulaires dans l’agar, que l’on remet en culture après dilution Soit par dilution limite où le clonage est réalisé directement dans une plaque de microtitration.
  9. 9. • Production : Production en grande quantité : production en batch ou microencapsulation • Production en micro particules: technique de capture des hydridomes dans des billes d’alginate sans contamination et avec une purification simplifiée D- étapes post-hybridation
  10. 10. Références: • http://fr.wikipedia.org/wiki/Anticorps_monocl onal • http://coursl3bichat2012- 2013.weebly.com/uploads/9/6/0/7/9607940/0 6_-_roneo_-_immuno.pdf

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