catedras: fisica facultad de farmacia y bioquimica (uba)

1. MÓDULO III ELECTRICIDAD Y ELECTROFORESIS II

4. ¿Qué ocurrió con la movilidad electroforética a altos valores de diferencia de potencial? Discutamos los resultados obtenidos en el T.P. EFECTO JOULE Q/tpo = k.V.i d V

6. Voltaje constante vs Intensidad constante Voltaje constante V = R.i = constante Q/t = k.V. i = k.R.i 2 Al transcurrir la corrida: R   i    Q/t  evaporación de solvente   Fuerza iónica    Refrigerar

7. Voltaje constante vs Intensidad constante Intensidad constante i = R/V = constante Q/t = k.V. i = k.R.i 2 Al transcurrir la corrida: R   V    Q/t pero como V  :  = d . L / t . V  d  debo  t   difusión   resolución

8. Equilibrio de disociación o ionización de un ácido débil en solución acuosa HA H + + A - Constante de disociación [ H + ] [A - ] K A = [HA]

9. Ecuación de Henderson Hasselbach Tomando el log negativo de ambos miembros y sustituyendo - log [H + ] por pH y - log K a por pK A y ordenando: [A - ] pH = pK A + log [HA] [ H + ] [A - ] K A = [HA]

10. Entonces... COO H 3 N – C – H R + - COOH H 3 N – C – H R + COO H 2 N – C – H R -

11. Variación de la movilidad electroforética con el pH del medio + - + - pH < pI pH = pI pH > pI COO H 3 N – C – H R COO H 2 N – C – H R COOH H 3 N – C – H R

12. Movilidad electroforética en función del pH pI

14. Se desea determinar el pI de una proteína. Los datos experimentales obtenidos en las distintas corridas son: Longitud de cada tira = 20.0 cm. Resistencia de cada tira = 10 5  . a) Determine el campo eléctrico aplicado en cada corrida. b) Calcule las movilidades de la proteína a cada pH. c) Calcule pI de la proteína. pH intensidad (mA) tiempo (minutos) distancia recorrida por la proteína (cm) distancia recorrida por el dextrano (cm) 2.0 4.0 20 - 7.0 0.0 4.0 4.0 25 - 4.0 0.0 6.0 7.0 40 - 1.0 - 0.5 8.0 3.0 25 2.0 - 1.0 10.0 3.0 30 5.0 - 2.0

15. Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: aminoácidos Neutros

16. Neutros Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: aminoácidos

17. Ácidos Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: aminoácidos

18. Básicos Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: aminoácidos

19. Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: polipéptidos y proteínas Son polímeros de aminoácidos unidos por uniones peptídicas Polipéptidos: 10 -100 aminoácidos Proteínas: más de 100 aminoácidos

20. Ejemplos de sustancias con movilidad electroforética: ácidos nucleicos (ADN y ARN)

24. Al realizar una electroforesis debe tenerse en cuenta la selección de: 1) Objetivo de la electroforesis: tipo de electroforesis. 2) Soporte y buffer de corrida. 3) Modo y lugar de siembra de la muestra.

25. Al realizar una electroforesis debe tenerse en cuenta la selección de: 4) Condiciones de corrida: voltaje (bajo, mediano o alto) e intensidad. Si se trabaja con voltajes medianos y altos debe refrigerarse la corrida para evitar el efecto Joule. Puede trabajarse a voltaje o intensidad constante. 5) Tiempo de corrida

27. ELECTROFORESIS LIBRE 1937 Tiselius CROMATOGRAFÍA Avance Tecnológico ELECTROFORESIS EN SOPORTES ELECTROFORESIS CAPILAR 2004 AUMENTO EN RESOLUCION Y SENSIBILIDAD

29. SDS-PAGE

31. Electroforesis bidimensional

32. Electroforesis Capilar

33. Electroforesis Capilar

34. Páginas a consultar: 1) http://www.rit.edu/~pac8612/electro/Electro_Sim.html 2) http://micro.magnet.fsu.edu/electromag/java/electrophoresis/ 3) http://www2.uah.es/biomodel/biomodel-misc/anim/elfo/electrof2.html

35. FIN