Cultura celular e de órgãos
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Cultura de Células e tecidos.
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Cultura celular e de órgãos
- 2. ConceitoConceito Conjunto de técnicas que permitem cultivar ou manter células isoladas fora do organismo onde existem, mantendo as características próprias; A cultura de tecidos é um termo genérico que inclui a cultura de órgãos, o qual é o crescimento de pequenos fragmentos de tecidos ou de um completo órgão embrionário, essa cultura implica a prévia desagregação (mecânica ou enzimática) do tecido original e em que as células são cultivadas numa camada aderente, num substrato sólido ou em suspensão em meio de cultura.
- 3. Alguns DestaquesAlguns Destaques Ferramenta de estudos de processos biologicos Grande avanço (1940): Surgimento dos antibióticos Crescimento de linhagens celulares a partir de células isoladas que aderiam à superfície de placas de cultura.
- 4. Desenvolvimento da Cultura de Células e TecidosDesenvolvimento da Cultura de Células e Tecidos
- 6. Linhagem de célulasLinhagem de células As células podem proliferar indefinidamente e poderão ser propagadas como uma linhagem de células; podem ser preparadas a partir de células cancerígenas
- 7. Linhagem de célulasLinhagem de células Assim… A uniformidade genética de uma linhagem de células pode ser melhorada pela clonagem celular, em que uma única célula é isolada e prolifera-se para formar posteriormente uma colónia; Podem ser armazenadas em azoto (N) líquido a - 196ºC, por um período muito longo e continuarem viáveis, quando descongeladas.
- 8. Exemplos de cultura de célulasExemplos de cultura de células Fig. 1 – Células em cultura
- 9. Meios de cultura de células e orgãosMeios de cultura de células e orgãos
- 10. IsolamentoIsolamento Células grandes são separadas das células pequenas e células densas de células não densas por centrifugação fraccionada; Fig.2 - Centrifugação fracionada
- 11. IsolamentoIsolamento Marcação específica das células com anticorpos acoplados a um corante fluorescente, em seguida, a separação destas células marcadas das não marcadas num separador de células ativado por fluorescência; Fig. 3 – Citometria de fluxo
- 12. PreparaçãoPreparação B- Cultivo em placas de cultura Ao contrário das bactérias, a maior parte das células de tecidos não estão adaptadas para viverem em suspensão e necessitam de uma superfície sólida para crescerem e dividirem-se, que é agora usualmente a superfície plástica de uma placa de cultura de tecidos; Fig.4- Microdissecção
- 13. Aminoácidos Vitaminas Sais Outros Proteínas (necessárias em meios sem soro, quimicamente definidos) Arginina Cistina Glutamina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Treonina Triptofano Tirosina Valina Biotina Colina Folato Nicotinamida Pantotenato Piridoxal Tiamina Riboflavina NaCl KCl NaH2PO4 NaHCO3 CaCl2 MgCl2 Glicose Penicilina Estreptomicina Vermelho de fenol Soro Insulina Transferrina Factores específicos de crescimento Composição de um Meio Típico AdequadoComposição de um Meio Típico Adequado para o Cultivo de Células de Mamíferospara o Cultivo de Células de Mamíferos Fig.5 – Tabela de componentes de um meio típico Algumas células não crescem nem se diferenciam se a placa não estiver coberta com componentes específicos da matriz extracelular.
- 14. Vantagens da Cultura CelularVantagens da Cultura Celular
- 15. Desvantagens da Cultura CelularDesvantagens da Cultura Celular
- 17. Aplicações gerais da cultura celular
- 18. Equipamentos Básicos Necessários ao Cultivo de Células e órgão.
- 19. Câmara de Fluxo LaminarCâmara de Fluxo Laminar
- 20. Estufa de CO2 - Placa de culturaEstufa de CO2 - Placa de cultura
- 21. Centrifuga / Microscópio InvertidoCentrifuga / Microscópio Invertido
- 22. Agitadores
- 23. Culturas de células e tecidos Fig. 6 - etapas da célula-tronco
- 25. AgradecimentosAgradecimentos Agradecimentos aos que deAgradecimentos aos que de alguma forma contribuíramalguma forma contribuíram para realização destepara realização deste seminário...seminário... Orientador: Prof. Me.Orientador: Prof. Me. Adalberto A. M. Neto;Adalberto A. M. Neto; Aos colegas de classe.Aos colegas de classe. Obrigado ...Obrigado ...
Notas do Editor
- - Os tecidos humanos podem ser obtidos nas cirurgias, biópsias e autópsias, ou retiradas de fetos ou placentas; - Os tecidos animais podem ser recolhidos nos matadouros ou em animais de laboratório abatidos humanamente. Mantendo as característica que possuem no tecido e organismo. Os métodos de cultura de tecido estão sendo desenvolvidos para o transplante das células produtoras de insulina, isoladas de um tecido pancreático fetal em pacientes com diabetes que não respondem ao tratamento médico convencional.
- Células L – linhagem de células de fibroblasto de rato
- As células apresentam as propriedades associadas à sua origem com por exemplo células nervosas estabelecem sinapse com outras, células derivadas do musculo esquelético contraem espontaneamente na placa de cultura Citar exemplos: células derivadas do músculo esquelético embrionário fundem-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são electricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; células epiteliais que formam extensas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto. Dadas as condições apropriadas a maior parte das células animais e vegetais poderão viver, multiplicar-se até mesmo expressar propriedades diferenciadas numa placa de cultura de tecidos. As células podem ser observadas num microscópio ou analisadas bioquimicamente e os efeitos da adição ou remoção de moléculas específicas, tais como hormonas ou factores d crescimento, podem ser explorados Células da pele humana, por exemplo, duram por vários meses em cultura, dividindo-se apenas 50 a 100 vezes antes de morrerem. Tem sido sugerido que este limite de tempo de vida está relacionado com o limite de tempo de vida do animal do qual a célula se derivou.
- Linhagem de células preparadas a partir de células cancerígenas diferem de várias formas das preparadas a partir de células normais. Por exemplo, as linhagens de células cancerígenas frequentemente crescem sem se fixarem a uma superfície, proliferam em densidades muito mais altas em placas de cultura.
- Uma das utilidades mais importantes de clonagem celular é o isolamento de linhagens de células mutantes com defeitos em genes específicos. O estudo de células defectivas em uma determinada proteína revela, frequentemente, um pouco da função desta proteína nas células normais.
- A- fibroblastos em cultura B- mioblastos
- Mecanismos para separar os diferentes tipos de células presentes numa suspensão celular. Diferenças das propriedades físikas
- Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Vantagem dessa tecnica identificar estruturasque tenham afinidades com esses substancias fluorescente. Certas células podem aderir frequentemente a vidro ou a plástico, o que permite a separação destas das células que se aderem menos a estes materiais;
- Quando uma população uniforme de células é obtida por um destes métodos, esta pode ser directamente usada por análise bioquímica ; O tecido pode, então ser dissociado em células individuais viáveis, através de uma agitação branda; Por foto da placa Tais células apresentam frequentemente muitas propriedades diferenciadas apropriadas à sua origem: ex.: fibroblastos que continuam a segregar colagénio;
- Tabela..dos requerimentos
- Reprodutibilidade dos resultados Linhagem de células clonais Controle das condições ambientais Possibilidade de selecionar uma população de células específicas Conhecimento do comportamento e função das células selecionadas
- Perda das características – cultivo longo Necessidade de marcadores Confiabilidade dos resultados in vivo – ex: drogas Contaminação Perda de características; Dificuldade de extrapolação pDificuldade de extrapolação para o modelo de organismo intacto.
- Necessidade de operadores experientes (com conhecimentos da técnica em condições assépticas, etc); Perda de características fenotípicas; Necessidade do uso de marcadores devido à perda de características fenotípicas; Instabilidade das células (sobretudo em linhas celulares imortais).
- Estudo da fisiologia e metabolismo de células específicas Estudar interações entre vários tipos de células – culturas mistas Estudo de neoplasias Testar drogas ou compostos químicos Possibilidade de gerar tecidos artificiais Produção de proteínas terapêuticas