1. INTEGRANTES:
Stephanie Hernández Cadena
Ana Leticia Cruz Matías
David Hernández Santos
Francisco Mendez Anguiano
Biotecnología
Semestre: octavo

2. Bernard (1909) descubrió de forma accidental que los hongos
juegan un papel importante en la germinación de la semilla de
orquídeas y viven en una relación simbiótica con algunos
hongos desde el momento de la germinación.

3. La asociación simbiótica entre los hongos y raíces reciben el nombre de
micorrizas.
Existen dos tipos diferentes de células huésped en las orquídeas:
CÉLULAS HUÉSPED SUBEPIDÉRMICAS:
En las que el hongo pertenece “intacto” y sano.
CÉLULAS HUÉSPED MÁS PROFUNDAS:
Cuando es “digerido”, para convertirse en una masa amorfa
(Hadley, Harley, 1969).
Los hongos más importantes que tienen relación simbiótica con las
orquídeas, pertenecen al genero Rhizoctonia.

4. La investigación desarrollada por Knudson alrededor de
1933 supuso una conmoción en el mundo de las orquídeas,
ya que demostró que las semillas de Cattleya, Laelia,
Epidendrum, y de otras muchas orquídeas, eran capaces de
germinar simbióticamente in vitro. A pesar del
descubrimiento de Knudson, pronto se pudo comprobar que
no siempre era posible hacer un medio en una determinada
especie de orquídeas pudiese germinar y desarrollarse.

5. Para obtener una mejor comprensión de (la siembra de) las
semillas de orquídeas, se deben consultar los artículos de:
Arditti (1967), Arditti y Ernst (1982), y Harley (1969).

6. Las semillas de las orquídeas son muy pequeñas: 1,0 -2,0 mm de
largo y 0,5 – 1,0 mm de ancho.
Las semillas constan de una testa gruesa (cubierta seminal), que
encierra un embrión de alrededor de 100 células. La cubierta tiene un
aspecto exterior característico, en forma de red, que es diferente para
cada especie.
La testa está formada por un tejido muerto, compuesto hasta en un
96% de aire; de forma que cada semilla de orquídea puede ser
considerada como un auténtico globo.

7. El embrión tiene una forma
redondeada o esférica.
La mayor parte de las
semillas de orquídeas están
escasamente diferenciadas:
o se distinguen cotiledones,
ni raíces, y no tienen
endospermo. En el extremo
distal del embrión existe un
punto de crecimiento
potencial, no identificable en
el estado de la semilla.
Las células del embrión
presentan una estructura
simple, son isodiamétricas y
escasamente diferenciadas.

8. De acuerdo con Arditti (1967), Harley (1969), y Pierik (1982
a 1983) la germinación de las semillas de orquídeas tienen
lugar de la siguiente forma: el embrión absorbe agua a
través de la testa, aumentando de volumen. Después se
inicia la división celular, rompiendo el embrión la cubierta
seminal.

9. Se forma una estructura de tipo protocormo, a partir del agregado de las
células, y sobre aquel puede distinguirse un meristemo del vástago. Tan
pronto como se inicie la diferenciación de órganos (meristemo del
vástago en un lado y rizoides en el opuesto), comienza un periodo de
crecimiento intenso. Si el protocormo está a la luz, adquiere el color
verde y al mismo tiempo se desarrollan hojas. Como resultado de la
formación de la clorofila la planta se hace autótrofa. Más tarde las
primeras raíces auténticas se forman endógenamente; el protocormo y
los rizoides (pelos radicales) pierden su misión nutritiva y desaparecen.

10. Analizando el comportamiento germinativo, Hadley (1982)
observo que las orquídeas epifiticas por lo general germinan
más rápidamente; el hongo crece en el exterior. En contraste
las orquídeas terrestres germinan lentamente y el hongo
penetra en el cortex del protocormo

11. Hasta hace poco tiempo el porcentaje de germinación de
las semillas de orquídea, se podía determinar
exclusivamente sembrando las semillas y contando
aquellas que germinaban. Sin embargo, Singh (1981)
demostró que el test del tetrazolio (los embriones viables
se tiñen de rojo, mientras que los viables se quedan
blancos), puede ser utilizados para determinar la viabilidad
de las semillas de orquídeas tropicales epifitas. Sin
embargo, Van Waes y Debergh (1986) han demostrado
que el método Singh no puede ser aplicado directamente
a las orquídeas del oeste de Europa, Cuya viabilidad se
determina mejor por el siguiente procedimiento de tres
etapas:

12. Preparación de las semillas en una solución al
5% (p/v) de Ca (OC1)2 + 1% (v/v)Tween 80.
Inmersión en agua estéril durante 24 horas.
Aplicación, al final, del test clásico del tetrazolio.
Es aconsejable que las semillas maduras se
almacenen a temperatura de 5°C
Las semillas de orquídeas pueden germinar
antes de que la capsula este madura (adquiere un
color marrón) y se abra
La propagación precoz, a partir de la capsula
todavía verde, desgasta menos a la planta.

13. LA ESTERILIZACION SE PUEDE
REALIZAR DE DOS FORMAS:
1. Capsulas todavía cerradas: La
esterilización es muy simple; se baña la
capsula en alcohol de 96% y
posteriormente se flamea; la capsula que
contiene la semilla, que generalmente
esta estéril en su interior, se abre después
con una escalpelo estéril.

14. 1. Capsulas Abiertas: la esterilización de las semillas
individuales constituye un proceso mas delicado y
complejo; se colocan la semillas en un pequeño
matraz (se tapa con un tapón de goma) conteniendo
lejía (10% de NaClO). En la proporción de 2-5% (
v/v). También se añade Tween 20 u 80; la
esterilización se realiza durante 5-10 minutos; las
semillas viables se hunden en la lejía. Mientras que
las que flotan, la mayor parte de las veces no
contienen embrión. Después de la esterilización el
liquido es retirado, bien por vertido, o con la ayuda
de una pipeta, posteriormente se aclara las semillas
con agua esterilizada etc. Otro procedimiento de
retirar el liquido consiste en invertir el matraz, con
el tapón ligeramente suelto de esta forma la semilla
queda en las paredes del matraz.

15. Antes de sembrar las semillas de orquídeas, se
debe de comprobar si tienen embrión; esto se
puede ver con la ayuda de un estereomicroscopio,
con una iluminación adecuada. La siembra se
realiza generalmente sobre un medio nutritivo solido
con una cierta pendiente.
Se utiliza una espátula o aguja de siembra para
distribuir las semillas de forma uniforme sobre el
medio, también se puede suspender las semillas en
agua estéril y hacer la siembra por medio de una
gota.
Las semillas se siembran sobre, y no dentro del
agar, donde se puede dar una deficiencia en
oxigeno

16. Van der Kinderen (1982) indico que la
germinación de algunas orquídeas,
estaba influida por la concentración
de ABA de las semillas: de manera si
que la concentración de ABA era alta
se producía una germinación pobre.

17. FACTORES QUE AFECTAN LA GERMINACION Y
AL CRECIMIENTO
Existe un gran numero de factores
complejos que influyen en la germinación y
crecimiento de las orquídeas, y que
depende en gran numero de la especie.
La germinación de las semillas inmaduras
requiere de unas condiciones mas
controladas que la que precisan las semillas
completamente desarrolladas.

18. Las orquídeas terrestres son mas
difíciles de germinar y cultivar que las
epifitas.
1) TEMPERATURA: las semillas
generalmente germinan de 20-25
grados, se sabe poco sobre la
dormición y la necesidad de frio.
2) LUZ: se utiliza durante el días de 12
a16 horas (tubos florescentes), con
una irradiación de 2.5- 10 W.

19. Las semillas de Paphiopedilum ciliolare, solo
germinan cuando están el la oscuridad
durante los primeros tres meses.
3) AGAR: la concentración recomendada es
de 0, 6-0, 8%, (p/v, Bacto-agar difco).
4) MINERALES: se recomienda utilizar un
medio que contenga micro-macroelementos.
Las orquídeas generalmente necesitan hierro
y es muy probable que también necesiten
Manganeso.

20. 5) AZUCAR: es de extremada
importancia como fuente de energía,
especialmente para las semillas que
germinan en la oscuridad por ser
completamente heterótrofas. Se utiliza
en una concentración de 1-3%
normalmente de sacarosa.
6) EL pH: de be situarse entre 4, 8-5,
8. un pH mas bajo de 4 o arriba de 7
resulta desfavorable.

21. 7) VITAMINAS: a veces se añaden
las siguientes vitaminas: biotina,
acido nicotínico (niacina), vitamina c,
vitamina b1, piridoxina, acido
pantotenico y meso-inositol. El acido
nicotínico es el mas utilizado.
8) REGULADORES: generalmente
no son necesarios para germinar las
semillas y su presencia puede suele
producir efectos no deseados.

22. 9) MEZCLAS COMPLEJAS: se
utilizan las siguientes mezclas:
homogeneizado de plátano, leche
de coco, peptona, triptona,
lavadura de fermentación,
hidrolizado de caseína, salep, jugo
de piña, jugo de tomate y extracto
de patata.
10) CARBON ACTIVO: en algunas
especies estimula el crecimiento.