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Juquan Song, MD, Jana de Libero, MD, and Steven E. Wolf, MD
Journal of surgical research, 2 de Octubre-2013
María Alejandra Aristizábal Giraldo y Juan José Garcés
Llamadas también descriptores
o encabezamientos de materia
Constituyen la mejor
herramienta con la
que se puede
clasificar la
información y es una
de las secciones que
más se cuidan para la
publicación de
cualquier artículo
1. Dan una idea breve
sobre el contenido del
artículo.
UPB,2014
2. Indican al lector bajo
qué nombre buscar más
información sobre el tema
que trata el artículo.
UPB,2014
3. Sirven para
estructurar el índice, por
tema, llamado anual o
acumulativo
UPB,2014
4. Con ellas se lleva a cabo
el análisis y clasificación del
artículo en los índices
internacionales.
UPB,2014
5. Facilita las entradas
(descriptores) en los
sistemas de indización y
de recuperación de la
información.
6. Nos permite detallar la
información usando
palabras que sean
adecuadas.
UPB,2014
No debe subestimarse su
trascendencia, porque se puede
dificultar la difusión del documento e
incluso su total olvido por problemas
de identificación
De la buena elección de la
palabra clave, el artículo será
ubicado por mayor cantidad
de investigadores
Hígado de ratón
Retículo endoplásmico
Autofagia
Apoptosis
Lesión térmica1
2
3
4
5
Los números sirven para remitir al lector a las
referencias bibliográficas, y bases de datos que
fueron usadas por los autores, para orientar y
sustentar su tesis, brindando una validez
académica al artículo
Esta remisión bibliográfica tiene gran
importancia para el lector. Pues con estas
fuentes puede profundizar los temas que de
pronto no quedaron claros, o para tener una
concepción más global de la lectura.
ESTUDIOS
Calcio
intracelular
Estrés del
R.E
Mal
plegamiento
de proteínas
DISFUNCIÓN HEPÁTICA
Supervivencia
de la célula a
corto plazo
Autofagia
Estrés
prolongado:
Apoptosis
4 semanas
(+) situación de estrés
inaniciónAusencia
factores de
crecimiento
infección Estrés
oxidativo
hipoxia
Homeostasis
Ubiquitina
Proteínas
ATG
Las proteínas ATG forman complejos funcionales que median las etapas
básicas de la macroautofagia
Iniciación1 Activar el complejo
fosfatidil inositol 3
Liberación de la beclin-1
(proteínas antiapoptóticas)
Se producen gracias
a señales de
supervivencia
Nucleación
Elongación de
membrana
2
3
Movilización del complejo PI3 al sitio de
la formación de la membrana limitante
ATG 5
LC3 activada
(proteína asociada al
microtúbulo)
ATG 7
ATG 3
Fusión de el
autofagosoma
con el lisosoma
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Reconocimiento
de carga
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Activación de las
quinasas tipo Unc-51
(UKL)
ATG13 y FIP200
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mTOR
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Quinasa tipo Unc-51 (1 y 2)
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Homóloga a ATG1
AUTOFAGIA
Rapamicina
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ATG13 y FIP200
FOSFORILA
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Proteína presente en
las células de los
animales mamíferos
Control del inicio de
la transcripción
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celular
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Cada estudio clínico
controlado aleatorizado
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trastorno en cuestión.
Los autores de los
estudios clínicos
generalmente
restringen esta
población mediante el
uso de criterios de
elegibilidad.
UPB,2014
Los criterios de inclusión y
exclusión son las normas para
decidir a quién se le permite
entrar o no en un ensayo.
Los criterios típicos de selección pueden
estar relacionados con la edad, el sexo,
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UPB,2014
Son un conjunto de propiedades cuyo
cumplimiento identifica a un
individuo que pertenece a la población
en estudio. Su objetivo es delimitar a la
Población o
universo de discurso.
Son un conjunto de propiedades cuyo cumplimiento
identifica a un
individuo que por sus características podría generar
sesgo en la estimación de la relación
entre variables, aumento de la varianza de las
mismas o presentar un riesgo en su salud
por su participación en el estudio. Su objetivo es
reducir los sesgos, y aumentar la eficiencia en la
estimación.
Además, los criterios de exclusión se
utilizan para garantizar la seguridad de
los pacientes.
UPB,2014
Criterios de inclusión
Pacientes consecutivos hospitalizados luego de
una mordedura de serpiente que necesitaron un
antídoto debido a un envenenamiento sistémico
o localizado grave.
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Criterios de exclusión
• Los pacientes serán excluidos del estudio si:
• Están embarazadas.
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• Declaran haber recibido antisueros, incluso
antídotos.
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Sirve para recoger,
organizar, resumir y
analizar datos y así sacar
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razonables basadas en el
análisis hecho
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Se realiza un muestreo es decir
una muestra representativa de la
población.
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Se recolectan datos de cada elemento
muestreado. Finalmente se infiere
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población en la que se realizó el estudio.
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Los análisis estadísticos sirven para
comparar lo que se observa con lo
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Es fundamental para que
exista un consenso mundial.
Si la P ( significancia
estadística) es menor a 0,05;
nadie puede refutar y se
afirma que se presentan
diferencias estadísticas
significativas
Masculinos
6-8 semanas de edad
(adulto)
16 ratones
Jackson laboratory
(Bar Harbor)
Incubados en
cubículos
12h
12h
Avertin 1,2%
(250mg/ Kg peso)
1 2
Superficie dorsal y
lateral
3
1ml de
solución
salina al 9%
16 ratones
16
ratones
8 ratones
4
8 ratones
12% del
área
corporal
5
8 ratones: los
quemados
8 ratones: los
no quemados
97ºC 25ºC
6 1ml de solución lactato Ringer y
0,05 mg/Kg peso de buprenorfina
8 ratones: los
quemados
7
24 horas
8 9
1 PARAFINA:
PRESERVAR
Método de TUNEL
A) Se removió la parafina de 5 micrómetros del
tejido.
B) Se trató con 100 microlitros de solución de
proteinasa k, cuyo objetivo es degradar las
membranas celulares, liberando las proteínas.
(20microgramo/ ml) por 10 minutos.
C) Se fijó en metanol al 4%.
D) Se incubó con 50 microlitros de terminal
deowynucleotidy i transferasa (dUDP) durante
una hora a 37ºC
2
Es un método para detectar la fragmentación del ADN
marcando el extremo terminal de los ácidos nucleicos
3 10 microlitros de
Prolong Gold antifade
Preserva
fluorescencia
DAPI (4 ',6-diamino-2-
fenilindol)
Marcador
fluorescente
1
Dulbecco's modified
eagle's medium ( DMEM)
Hepatocito de carcinoma
humano
2
Confluencia
celular
Ácido etilendiaminotetraacético
(tripsina al 0,25%)
Facilita liberación individual de la célula
3 Placa
microtituladora
100 nmol/ L de
Thapsigargin (TG)
24 horas
Induce estrés en el
retículo
4 5 Se recoge el
lisado celular y
se extrae las
proteínas para
su posterior
análisis
MÉTODO FLUOROMÉTRICO
20 microgramos de la proteína extraída se incuban con 5 mmol/L de
rodamina 110 (Z-DEVD-R110) durante 30 min a temperatura de un cuarto
sin luz.
sustrato las proteasas principalmente de la caspasa 3 y 7
520 nm
Lector de
fluorescencia
Fluostar
Absorbancia
No especifican el procedimiento.
Midieron los niveles de ATP in vitro acorde a las
instrucciones del productor (Biovision, Milpitas, Ca)
30 mg de tejido se homogeniza con la extracción proteica
Inhibidor de la proteasa (Halt protease inhibitor cocktail)
20000g por
30 min a 4ºC
Se descarta el
sedimento
Para que las proteínas no
sea destruidas, es decir
para que permanezcan
Se toman muestras de
30 microgramos de cada
proteína
Es analizado bajo la prueba
SDS-PAGE
para separar
las proteínas
de interés
ATG3 ATG5
LC3A LC3B
Beclin-1
ULK1
mTOR
AMPK
GAPDH
B-actin
CONTROL
Western blot
Electroforesis
en gel
Uso
de anticuerpos
específicos
contra ella.
Se aplica cuando la población estudiada sigue
una distribución normal pero el tamaño muestral
es demasiado pequeño
P<0,05 (SIGNIFICANCIA
ESTADISTICA)
Con este estudio, los autores observaron
la expresión de señales de autofagia. Las
más evidenciables y reconocibles en su
proyecto fueron la ATG3, ATG5 y LC3, que
aumentaron significativamente en el
hígado de un ratón quemado, 24 horas
después de la lesión.
En el modelo in vitro, se encontró que el estrés del
retículo inducido por la TG, disminuía los niveles de
ATP en el citosol, activando las señales de AMPK/
MTOR en el hepatocito, induciendo así la autofagia.
Este trabajo nos pareció muy enriquecedor, fructífero y
determinante para nuestra formación porque:
1) Aprendimos la composición estructural básica para la elaboración de una
artículo científico y la importancia de conocer los parámetros de publicación
de las revistas.
2) Comprendimos la importancia de la publicación de un articulo
científico, que es básicamente la contribución al desarrollo de la
sociedad y la disminución de tiempo invertido para próximas
investigaciones
3) Entendimos que la investigación es un componente
fundamental de todas las áreas de conocimiento.
NORMAS VANCOUVER
Dan las pautas para la
publicación de artículos
científicos en revistas
biomédicas
Existe una relación entre
los documentos
consultados y citados en
el texto
Las referencias bibliográficas
son organizadas por el
número de cita que les fue
asignado en el texto
 Cumple con la numeración de
divisiones y subdivisiones; para
clarificar la secuencia e
importancia de las mismas
Las referencias bibliográficas se enumeran
consecutivamente en el orden de aparición en el
texto. Y se identifican mediante números arábigos
entre paréntesis (1), corchetes [1], superíndice 1, o
una combinación de corchetes más superíndice [1].
Los decimales están
separados por un punto y
no una coma.
 Cuando citan a un autor en el cuerpo del
texto, citan primero a el autor y luego
ponen “et al.” en itálica. (Ejemplo: Según
González et al. en su artículo…).
 El título REFERENCIAS
debe ir en mayúscula y en
negrita, no se debe poner
Bibliografía o Referencia
bibliográficas.
• Juquan Song, Jana de Libero, Steven E. Wolf. Autofagia hepática tras
quemaduras severas en respuesta al estrés del retículo endoplásmico. JRS.
2 de Octubre del 2013. 128-132
• Cooper, Geoffrey M; Hausman, Robert E. La célula. Editorial Marbán. 4º
edición.
• Esta entrada fue publicada el 25/10/2011,Disponible en Internet:
http://nutricionpersonalizada.wordpress.com/2011/10/25/macroautofagia_r
egulacion_metabolismo_lipidos/#top
• Esta página fue actualizada por última vez el 8/6/2011.
Disponible en Internet:
https://globalhealthtrials.tghn.org/site_media/media/articles/trialprotocoltool_sp/
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Final del seminario bio cel

  • 1. Juquan Song, MD, Jana de Libero, MD, and Steven E. Wolf, MD Journal of surgical research, 2 de Octubre-2013 María Alejandra Aristizábal Giraldo y Juan José Garcés
  • 2. Llamadas también descriptores o encabezamientos de materia
  • 3. Constituyen la mejor herramienta con la que se puede clasificar la información y es una de las secciones que más se cuidan para la publicación de cualquier artículo
  • 4. 1. Dan una idea breve sobre el contenido del artículo. UPB,2014
  • 5. 2. Indican al lector bajo qué nombre buscar más información sobre el tema que trata el artículo. UPB,2014
  • 6. 3. Sirven para estructurar el índice, por tema, llamado anual o acumulativo UPB,2014
  • 7. 4. Con ellas se lleva a cabo el análisis y clasificación del artículo en los índices internacionales. UPB,2014
  • 8. 5. Facilita las entradas (descriptores) en los sistemas de indización y de recuperación de la información.
  • 9. 6. Nos permite detallar la información usando palabras que sean adecuadas. UPB,2014
  • 10. No debe subestimarse su trascendencia, porque se puede dificultar la difusión del documento e incluso su total olvido por problemas de identificación De la buena elección de la palabra clave, el artículo será ubicado por mayor cantidad de investigadores
  • 11. Hígado de ratón Retículo endoplásmico Autofagia Apoptosis Lesión térmica1 2 3 4 5
  • 12. Los números sirven para remitir al lector a las referencias bibliográficas, y bases de datos que fueron usadas por los autores, para orientar y sustentar su tesis, brindando una validez académica al artículo Esta remisión bibliográfica tiene gran importancia para el lector. Pues con estas fuentes puede profundizar los temas que de pronto no quedaron claros, o para tener una concepción más global de la lectura.
  • 13. ESTUDIOS Calcio intracelular Estrés del R.E Mal plegamiento de proteínas DISFUNCIÓN HEPÁTICA Supervivencia de la célula a corto plazo Autofagia Estrés prolongado: Apoptosis 4 semanas
  • 14. (+) situación de estrés inaniciónAusencia factores de crecimiento infección Estrés oxidativo hipoxia Homeostasis Ubiquitina Proteínas ATG
  • 15. Las proteínas ATG forman complejos funcionales que median las etapas básicas de la macroautofagia Iniciación1 Activar el complejo fosfatidil inositol 3 Liberación de la beclin-1 (proteínas antiapoptóticas) Se producen gracias a señales de supervivencia
  • 16. Nucleación Elongación de membrana 2 3 Movilización del complejo PI3 al sitio de la formación de la membrana limitante ATG 5 LC3 activada (proteína asociada al microtúbulo) ATG 7 ATG 3
  • 17. Fusión de el autofagosoma con el lisosoma 5 Reconocimiento de carga 4 Activación de las quinasas tipo Unc-51 (UKL) ATG13 y FIP200 FOSFORILA
  • 18.
  • 19. mTOR AMP Proteína quinasa ( AMPK) (+) (--) Quinasa tipo Unc-51 (1 y 2) ( UKL desfosforiladas) Homóloga a ATG1 AUTOFAGIA Rapamicina ATP (--) (+) ATG13 y FIP200 FOSFORILA (+) Proteína presente en las células de los animales mamíferos Control del inicio de la transcripción del ARN Regulación del crecimiento, proliferación y muerte celular Tráfico de membrana, la formación de ribosomas.
  • 20. Cada estudio clínico controlado aleatorizado trata un tema de importancia para alguna población con el trastorno en cuestión.
  • 21. Los autores de los estudios clínicos generalmente restringen esta población mediante el uso de criterios de elegibilidad. UPB,2014
  • 22. Los criterios de inclusión y exclusión son las normas para decidir a quién se le permite entrar o no en un ensayo.
  • 23. Los criterios típicos de selección pueden estar relacionados con la edad, el sexo, el diagnóstico clínico y las patologías UPB,2014
  • 24. Son un conjunto de propiedades cuyo cumplimiento identifica a un individuo que pertenece a la población en estudio. Su objetivo es delimitar a la Población o universo de discurso.
  • 25. Son un conjunto de propiedades cuyo cumplimiento identifica a un individuo que por sus características podría generar sesgo en la estimación de la relación entre variables, aumento de la varianza de las mismas o presentar un riesgo en su salud por su participación en el estudio. Su objetivo es reducir los sesgos, y aumentar la eficiencia en la estimación.
  • 26. Además, los criterios de exclusión se utilizan para garantizar la seguridad de los pacientes. UPB,2014
  • 27. Criterios de inclusión Pacientes consecutivos hospitalizados luego de una mordedura de serpiente que necesitaron un antídoto debido a un envenenamiento sistémico o localizado grave. UPB,2014
  • 28. Criterios de exclusión • Los pacientes serán excluidos del estudio si: • Están embarazadas. • Son menores de 12 años o mayores de 70. • Declaran haber recibido antisueros, incluso antídotos. UPB,2014
  • 29. Sirve para recoger, organizar, resumir y analizar datos y así sacar conclusiones válidas y tomar decisiones razonables basadas en el análisis hecho UPB,2014
  • 30. Se realiza un muestreo es decir una muestra representativa de la población. UPB,2014
  • 31. Se recolectan datos de cada elemento muestreado. Finalmente se infiere estadísticamente algo sobre la población y se concluye sobre alguna característica de la población en la que se realizó el estudio. UPB,2014
  • 32. Los análisis estadísticos sirven para comparar lo que se observa con lo que se espera.
  • 33. Es fundamental para que exista un consenso mundial. Si la P ( significancia estadística) es menor a 0,05; nadie puede refutar y se afirma que se presentan diferencias estadísticas significativas
  • 34. Masculinos 6-8 semanas de edad (adulto) 16 ratones Jackson laboratory (Bar Harbor) Incubados en cubículos 12h 12h
  • 35. Avertin 1,2% (250mg/ Kg peso) 1 2 Superficie dorsal y lateral 3 1ml de solución salina al 9% 16 ratones 16 ratones 8 ratones
  • 36. 4 8 ratones 12% del área corporal 5 8 ratones: los quemados 8 ratones: los no quemados 97ºC 25ºC 6 1ml de solución lactato Ringer y 0,05 mg/Kg peso de buprenorfina 8 ratones: los quemados
  • 38. 1 PARAFINA: PRESERVAR Método de TUNEL A) Se removió la parafina de 5 micrómetros del tejido. B) Se trató con 100 microlitros de solución de proteinasa k, cuyo objetivo es degradar las membranas celulares, liberando las proteínas. (20microgramo/ ml) por 10 minutos. C) Se fijó en metanol al 4%. D) Se incubó con 50 microlitros de terminal deowynucleotidy i transferasa (dUDP) durante una hora a 37ºC 2 Es un método para detectar la fragmentación del ADN marcando el extremo terminal de los ácidos nucleicos
  • 39. 3 10 microlitros de Prolong Gold antifade Preserva fluorescencia DAPI (4 ',6-diamino-2- fenilindol) Marcador fluorescente
  • 40. 1 Dulbecco's modified eagle's medium ( DMEM) Hepatocito de carcinoma humano 2 Confluencia celular Ácido etilendiaminotetraacético (tripsina al 0,25%) Facilita liberación individual de la célula
  • 41. 3 Placa microtituladora 100 nmol/ L de Thapsigargin (TG) 24 horas Induce estrés en el retículo 4 5 Se recoge el lisado celular y se extrae las proteínas para su posterior análisis
  • 42. MÉTODO FLUOROMÉTRICO 20 microgramos de la proteína extraída se incuban con 5 mmol/L de rodamina 110 (Z-DEVD-R110) durante 30 min a temperatura de un cuarto sin luz. sustrato las proteasas principalmente de la caspasa 3 y 7 520 nm Lector de fluorescencia Fluostar Absorbancia
  • 43. No especifican el procedimiento. Midieron los niveles de ATP in vitro acorde a las instrucciones del productor (Biovision, Milpitas, Ca)
  • 44. 30 mg de tejido se homogeniza con la extracción proteica Inhibidor de la proteasa (Halt protease inhibitor cocktail) 20000g por 30 min a 4ºC Se descarta el sedimento Para que las proteínas no sea destruidas, es decir para que permanezcan
  • 45. Se toman muestras de 30 microgramos de cada proteína Es analizado bajo la prueba SDS-PAGE para separar las proteínas de interés ATG3 ATG5 LC3A LC3B Beclin-1 ULK1 mTOR AMPK GAPDH B-actin CONTROL Western blot Electroforesis en gel Uso de anticuerpos específicos contra ella.
  • 46. Se aplica cuando la población estudiada sigue una distribución normal pero el tamaño muestral es demasiado pequeño P<0,05 (SIGNIFICANCIA ESTADISTICA)
  • 47.
  • 48.
  • 49.
  • 50.
  • 51.
  • 52. Con este estudio, los autores observaron la expresión de señales de autofagia. Las más evidenciables y reconocibles en su proyecto fueron la ATG3, ATG5 y LC3, que aumentaron significativamente en el hígado de un ratón quemado, 24 horas después de la lesión. En el modelo in vitro, se encontró que el estrés del retículo inducido por la TG, disminuía los niveles de ATP en el citosol, activando las señales de AMPK/ MTOR en el hepatocito, induciendo así la autofagia.
  • 53. Este trabajo nos pareció muy enriquecedor, fructífero y determinante para nuestra formación porque: 1) Aprendimos la composición estructural básica para la elaboración de una artículo científico y la importancia de conocer los parámetros de publicación de las revistas. 2) Comprendimos la importancia de la publicación de un articulo científico, que es básicamente la contribución al desarrollo de la sociedad y la disminución de tiempo invertido para próximas investigaciones 3) Entendimos que la investigación es un componente fundamental de todas las áreas de conocimiento.
  • 54. NORMAS VANCOUVER Dan las pautas para la publicación de artículos científicos en revistas biomédicas Existe una relación entre los documentos consultados y citados en el texto Las referencias bibliográficas son organizadas por el número de cita que les fue asignado en el texto
  • 55.  Cumple con la numeración de divisiones y subdivisiones; para clarificar la secuencia e importancia de las mismas Las referencias bibliográficas se enumeran consecutivamente en el orden de aparición en el texto. Y se identifican mediante números arábigos entre paréntesis (1), corchetes [1], superíndice 1, o una combinación de corchetes más superíndice [1].
  • 56. Los decimales están separados por un punto y no una coma.  Cuando citan a un autor en el cuerpo del texto, citan primero a el autor y luego ponen “et al.” en itálica. (Ejemplo: Según González et al. en su artículo…).  El título REFERENCIAS debe ir en mayúscula y en negrita, no se debe poner Bibliografía o Referencia bibliográficas.
  • 57. • Juquan Song, Jana de Libero, Steven E. Wolf. Autofagia hepática tras quemaduras severas en respuesta al estrés del retículo endoplásmico. JRS. 2 de Octubre del 2013. 128-132 • Cooper, Geoffrey M; Hausman, Robert E. La célula. Editorial Marbán. 4º edición. • Esta entrada fue publicada el 25/10/2011,Disponible en Internet: http://nutricionpersonalizada.wordpress.com/2011/10/25/macroautofagia_r egulacion_metabolismo_lipidos/#top • Esta página fue actualizada por última vez el 8/6/2011. Disponible en Internet: https://globalhealthtrials.tghn.org/site_media/media/articles/trialprotocoltool_sp/ SOURCE/Checklist/StudyPop/Inclusion%20y%20exclusion.html