Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique                 université Mohamed Heider -Biskra
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    3-Les méthodes de conservation   3-1- La lyophilisation   3-2-La conservation par congélation   3-3-La conservatio...
 En biologie, la culture cellulaire désigne un  ensemble de technique utilisée pour faire  croître des cellules lors de l...
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   Les   milieux    de    culture    sont   des    préparations stériles, solides, semi solides    ou liquides utilisées ...
 Plusieurs centaines de milieux de culture ont  été décrits a ce jour Ils doivent apporter tous les éléments  nécessaire...
 Un bon milieu doit :-Etre stérile.-Etre nutritif.-avoir un PH convenable.-Contenir une quantité d’eau suffisante. Ces o...
 1-Définition de conservation:Cest le maintien de toutes les propriétés  morphologiques et génétiques des souches  microb...
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 Définition:Est le procédé qui fait tout dabord intervenir  une congélation a basse température  (entre -40 et -80 C0) su...
 La lyophilisation comporte généralement  trois étapes:La congélation, la sublimation (dessiccation  primaire) et la dess...
 Se fait par appareille ou par des produits  lyophilisée tels que les plasmas oxalate  de lapin qui après réhydratation.E...
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*Type de congélation:1-La congélation à (-18 C0) des cadavres des  animaux injecte expérimentalement (ou  fragment dorgane...
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   Capacité verticaux ou horizontaux,    ventilés ou non, fonctionnant de -18 C0 à    -25 C0, de -25 C0 à -35 C0 ou -40 C...
Définition : Se fait par des réfrigérateurs de laboratoire de  microbiologie dans ce cas qui concerne la  bactérie Il y ...
   Ce sont des milieux pauvres qui    maintiennent les micro-organismes dans    un état de vie ralentie. Ce type de milie...
 Les cultures dun milieu gélose incliné en  tube a essai se conservation mieux, se  contaminent moins, mais la surface es...
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 Des exemples de milieu de conservation :A- Une gélose de type VF (milieu complexe gélosé  utilisé pour la détermination ...
B- Lutilisation de bio-Rad qui distinguer a la  conservation des entérobactéries mais  aussi         des      vibrionaceae...
 *Ces milieux est disponible en tube prêts.Pour     les    bactéries     aéro-anaerobies  facultatives, utiliser une cult...
   *Les milieux de culture continue :Définition :Cest un phénomène de renouvellement  régulier de milieu de culture avec ...
   Par lutilisation de lazote liquide à -196    C0des souches se microorganismes    exigeants ont ainsi été conservées   ...
   Définition :Est la transplantation dune culture pure    sur un milieu de culture neuf.
 Il est nécessaire de bien connaitre le  milieu le plus convenable: la  température la plus favorable et la durée  de sto...
 Remarque :La conservation se fait naturellement par la  sporulation des bactéries capable de  sporulées pour éviter leur...
Souche            Mode de conservation Température debactérienne                              conservationStaphylocoque   ...
 La conservation des champignons, y  compris les dermatophytes, peut se faire  de la même façon, que pour les  bactéries....
   Dans le cas de champignon provenant    de produits pathologiques, il faut se    méfier de léventuelle présence    daca...
   Généralement par lutilisation de    lyophilisation.
1- Dans le domaine de génie biologique : Par exemples: une souche destinée a la  production industrielles dantibiotique o...
2- En médecine :   La conservation d’une souche isolée sur    un patient et transmise pour étude    complémentaires. (Étu...
   La conservation est une méthode nécessaire et    étape importante dans le protocole détudes des    souches microbienne...
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  1. 1. Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique université Mohamed Heider -Biskra
  2. 2.  Introduction Généralité I-Conservation des souches microbiennes 1-Définition de conservation 2-Les types de conservation 2-1-Conservation de courte durée 2-2-Conservation de longue durée
  3. 3.  3-Les méthodes de conservation 3-1- La lyophilisation 3-2-La conservation par congélation 3-3-La conservation sur gélose 3-4-La réfrigération 3-5-Ultra congélation 3-6-La repiquage des souches II-Conservation des champignons III-Conservation des virus IV-Les applications de la conservation en générale Conclusion
  4. 4.  En biologie, la culture cellulaire désigne un ensemble de technique utilisée pour faire croître des cellules lors de leur organisme ou de leur milieu d’origine, dans un but d’expérimentation scientifique. Lorsque en microorganisme ou un virus a été sélectionné ou construit dans un but spécifique, il doit être conservé dans son état original pour usage ultérieur et l’étude donc :
  5. 5. Toutes les souches bactériennes ↓ L’identifier ↓ Confirmer ↓ Et a lafin : ConserverA lors comment on fait une conservation des souches microbienne ?
  6. 6.  Les milieux de culture sont des préparations stériles, solides, semi solides ou liquides utilisées pour la croissance, repiquage ou la conservation des microorganismes, ils offrent sous forme assimilable toutes les substances indispensables leur nutrition dans des conditions physico-chimiques optimum.
  7. 7.  Plusieurs centaines de milieux de culture ont été décrits a ce jour Ils doivent apporter tous les éléments nécessaire a l’élaboration du protoplasme cellulaire. De ce fait, le micro-organismes doivent trouver dans le milieu du culture et son atmosphère toutes les substances requise pour leur croissance: l’eau, une source d’énergie, le carbone, l’azote, de même que des ions essentiels: phosphate, sulfate, sodium, calcium, magnésium, potassium, fer ainsi que des traces d’élément divers sous forme appropriée (Zn, Mn, Mo, Co, Cu etc.)
  8. 8.  Un bon milieu doit :-Etre stérile.-Etre nutritif.-avoir un PH convenable.-Contenir une quantité d’eau suffisante. Ces organismes différent les uns des autres par leur propriétés nutritionnelles et leur adaptation aux conditions physiques de leur milieu de vie (ph, température, disponibilité en O2, salinité….) et sont divisés en différant groupes nutritionnels. Les ingrédients apportés aux milieux de culture dépendent donc des exigences de chaque espèce.
  9. 9.  1-Définition de conservation:Cest le maintien de toutes les propriétés morphologiques et génétiques des souches microbiennes aussi assure la survie de ces dernier et indispensable les aux études taxonomiques.En microbiologie, ou on travaille avec des organismes conserver viable a lidentique.La conservation doit évidemment exclure les contaminations.
  10. 10.  2-Les types de conservation:Il y a 02 types de conservation 2-1-conservation de courte durée:Certains souches sont rapidement perdues, il sagit par fois des souches de culture délicate.Exemple: Neissericeae, streptococcus, H.influenzae….
  11. 11. 2-2-Conservation de longue durée:Pour les souches plus résistances comme les Psudomonas se sont souvent des bactériophages qui sont responsable de distraction lors de la conservation tue tous les survivants. Ces souches nécessitent donc dautre techniques des conservations des souches
  12. 12.  Définition:Est le procédé qui fait tout dabord intervenir une congélation a basse température (entre -40 et -80 C0) suivie dune dessiccation puis dune sublimation sous vide poussé. La sublimation est le passage direct de létat solide à létat gazeux direct.
  13. 13.  La lyophilisation comporte généralement trois étapes:La congélation, la sublimation (dessiccation primaire) et la dessiccation secondaire.La durée de cette méthode est plusieurs années. Cest la meilleure technique de conservation et du transport mais peut conduire a la perte des plasmides présent dans ces souches lyophilisées et onéreuse.La lyophilisation nest pas compatible avec tous les microorganismes dans certain cas elle occasionne des altérations cellulaire et génétique.
  14. 14.  Se fait par appareille ou par des produits lyophilisée tels que les plasmas oxalate de lapin qui après réhydratation.Exemple: staphylococcus……. Des microorganismes lyophilisés tels que la souche bactérienne lyophilisée de collection internationale.
  15. 15.  Définition:Est un technique de conservation visant à faire passer un produit a létat solide par des technique de refroidissement forcé. La température de conservation sont en générale -20 C0 (congélateur standard), - 80C0.
  16. 16. *Type de congélation:1-La congélation à (-18 C0) des cadavres des animaux injecte expérimentalement (ou fragment dorgane) permet notamment la conservation des streptococcuspneumoniae.2-La congélation à (-80 C0) de billes imprégnées de culture.3-La congélation à (-80 C0) en billon glycérolé a 20%-30% permet une excellente conservation de la plupart des souches cette technique est applicable à (-18 C0).
  17. 17. a- Préparation le bouillon trypticase soja et ladditionner de 20% de glycérol.b- Le répartir dans des tubes à essai contient des souches pures a conserver sur gélose.c- Stérilisation les tubes à 121 C0 pendant 15 min.d-Le refroidissement du bouillon dans le congélateur -20 C0→-80 C0
  18. 18.  Capacité verticaux ou horizontaux, ventilés ou non, fonctionnant de -18 C0 à -25 C0, de -25 C0 à -35 C0 ou -40 C0 (pour une température ambiante de 35 C0).
  19. 19. Définition : Se fait par des réfrigérateurs de laboratoire de microbiologie dans ce cas qui concerne la bactérie Il y a 02 types de réfrigération:a-Réfrigérateur: pendant la conservation des souches bactérienne.b-Réfrigérateur: assure la conservation échantillons.Destinée à lanalyse microbiologique à 2±2 C0. Exemples: la réfrigération a 4 C0 dune suspension de souches dans un sang stérile permet une bonne conservation de Streptococcus pneumoniae.
  20. 20.  Ce sont des milieux pauvres qui maintiennent les micro-organismes dans un état de vie ralentie. Ce type de milieu dit "gélose pour conservation des souches bactériennes "
  21. 21.  Les cultures dun milieu gélose incliné en tube a essai se conservation mieux, se contaminent moins, mais la surface est beaucoup plus réduite. Lorsquune culture pure a été obtenue elle peut transférer sur/dans un milieu gélosé adapté pour constituer une "culture stock" qui sera repiquée a intervalles réguliers sur/dans un milieu frais. Il est primordial de conserver de telles cultures à létat ascénique (culture pure).
  22. 22.  Généralement il y a 02 types de gélose plus utilisées pour la conservation1-Une gélose nutritive inclinée ensemencée en plusieurs points.2-Une gélose nutritive en culot ensemencée par piqure centrale.
  23. 23.  Des exemples de milieu de conservation :A- Une gélose de type VF (milieu complexe gélosé utilisé pour la détermination du type respiratoire des microorganismes) en particulier pour les bactéries anaérobies stricts.Leur composition:Viande foie………30gGlucose ………….02gAgar Agar………...06gEau distillée…….1000mlPH ……………….. 7.4-Le gradient de pression partielle en oxygène peut permettre une conservation optimale de certaines souches aéro-anearobies.
  24. 24. B- Lutilisation de bio-Rad qui distinguer a la conservation des entérobactéries mais aussi des vibrionaceae, du Pseudomonaceae…-Leur composition chimique (en g/l):Extrait de viande…..…5Peptone ……………..10Chlorure de sodium ......5Agar …………………10Ph……………………7.3Température ………..25 C0
  25. 25.  *Ces milieux est disponible en tube prêts.Pour les bactéries aéro-anaerobies facultatives, utiliser une culture sur milieu gélosé (gélose nutritive on gélose tryplicase soja) a laide dune anse de platine bien chargée en germes effectuer plusieurs piqures centrales.-Pour les bactéries aérobies ensemencer en surface incubé à 37C0 maximum pendant 24 heures.
  26. 26.  *Les milieux de culture continue :Définition :Cest un phénomène de renouvellement régulier de milieu de culture avec l’élèmentation des métabolites toxique en même temps.Par exemple: Chimiostat
  27. 27.  Par lutilisation de lazote liquide à -196 C0des souches se microorganismes exigeants ont ainsi été conservées pendant plus de 15 ans.
  28. 28.  Définition :Est la transplantation dune culture pure sur un milieu de culture neuf.
  29. 29.  Il est nécessaire de bien connaitre le milieu le plus convenable: la température la plus favorable et la durée de stockage. La dessiccation du milieu de culture est évitée en bouchant saignement lorifice des tubes de cultures. La culture est conservée à labri de la lumière on à la température de laboratoire.
  30. 30.  Remarque :La conservation se fait naturellement par la sporulation des bactéries capable de sporulées pour éviter leur destruction dans les conditions défavorables.Comme chez les Endospores Bacillus qui est Thermorésistantes a la chaleur humide et les Exospores des Streptomyces qui ne possède pas un thermorésistantes a la chaleur humide mais quand même du solide sur de très longues durée.
  31. 31. Souche Mode de conservation Température debactérienne conservationStaphylocoque Gélose stock + Température congélation ambiante, -20 C0Pseudomocoque Congélation -20 C0, -80 C0Neisseria Congélation -20 C0gonorrhoeaeEntérobactéries Gélose stock + Température congélation ambiante, -20 C0Listeria Gélose stock + Température congélation ambiante, -20 C0
  32. 32.  La conservation des champignons, y compris les dermatophytes, peut se faire de la même façon, que pour les bactéries. Une gélose Sabouraud (milieu complexe gélosé, pour lisolement des champignons). Conservée à température ambiant et à lobscurité convient généralement.
  33. 33.  Dans le cas de champignon provenant de produits pathologiques, il faut se méfier de léventuelle présence dacariens qui risquent denvahir, le souchier. Une quarantaine et des repiquages fréquents permettront déviter cette désagréable présence. Il est possible aussi de mettre de lantimite dans le souchier.
  34. 34.  Généralement par lutilisation de lyophilisation.
  35. 35. 1- Dans le domaine de génie biologique : Par exemples: une souche destinée a la production industrielles dantibiotique ou dune molécule a très haute valeur ajoutée. Conserver les caractéristiques dintérêt biotechnologique pour tous l’inoculum qui devant être gérés pendant la période dexploitation de la souche. Pour limitées la contamination par les espèces microbienne dangereuses….
  36. 36. 2- En médecine : La conservation d’une souche isolée sur un patient et transmise pour étude complémentaires. (Études des réactions particulières vis s vis d’antibiotiques)
  37. 37.  La conservation est une méthode nécessaire et étape importante dans le protocole détudes des souches microbienne pour le but de :1-La fabrication des vaccins qui rend aussi nécessaire pour la conservation des souches vaccinales.2-La recherche et comme un centre de référence.3-Létude dans le domaine de contrôle de qualité.

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