NORTHERN BLOT
PLANT DE TRAVAIL                Introduction 6-Avantages     et                        1-Historiqueinconvénients 5-Protoco...
INTRODUCTION        Nos connaissances actuelles sur les événementsbiologiques qui se produisent dans les cellules des orga...
1-HISTORIQUE   Northern blot est une technique dARN blot qui a    été développé en par Alwine, Kemp, et Stark en    1977 ...
2-DÉFINITION Une   méthode de laboratoire utilisée pour détecter des molécules dARN spécifiques au sein dun mélange dARN....
3-UTILISATIONla recherche en biologie moléculaire : létude directe de lexpression des gènes au  niveau de lARNm détectio...
4-PRINCIPE1. Séparation des ARN sur gel par  électrophorèse2. Transfert des ARN sur membrane  (capillarité)3. Hybridation ...
5-PROTOCOL Isolation dARN (total ou de poly (A) ARNm)             Génération de sonde Électrophorèse sur gel dénaturant da...
6-AVANTAGES ET INCONVINIENSAVANTAGES : la détection de la taille dARN. lobservation des produits dépissage  alternatifs ...
   INCOVINIENTS:    La dégradation de léchantillon par ARNases qui peuvent    être évitées par une bonne stérilisation d...
CONCLUSION     Northern blot, même si une technique relativement ancienneest encore aujourdhui utile dans létude et lanaly...
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  1. 1. NORTHERN BLOT
  2. 2. PLANT DE TRAVAIL Introduction 6-Avantages et 1-Historiqueinconvénients 5-Protocol 2-Définition 4-Principe 3-Utilisation
  3. 3. INTRODUCTION Nos connaissances actuelles sur les événementsbiologiques qui se produisent dans les cellules des organismes vivants peut être attribuée à lexistence de beaucoup techniques de laboratoire utilisées dans létude de ces processus. Parmi ces techniques est la technique ’’Northern blot’’ est très utile dans lanalyse de lARN .La plupart des informations disponibles qui sont connaissons aujourdhui sur lexpression des gènes et les fonctions d’ARN peuvent être attribués à ce technique.
  4. 4. 1-HISTORIQUE Northern blot est une technique dARN blot qui a été développé en par Alwine, Kemp, et Stark en 1977 à lUniversité Stanford . Il a été nommé daprès le Southern blot technique qui détecte pour lADN, inventé par Edwin M. Southern en 1975. Western blot , une méthode pour des protéines est également une pièce de théâtre sur la dénomination Southern blot et a été nommé en 1981
  5. 5. 2-DÉFINITION Une méthode de laboratoire utilisée pour détecter des molécules dARN spécifiques au sein dun mélange dARN. Northern blot peut être utilisé pour analyser un échantillon dARN à partir dun tissu ou un type particulier de cellule afin de mesurer lexpression de gènes dARN spécifiques.
  6. 6. 3-UTILISATIONla recherche en biologie moléculaire : létude directe de lexpression des gènes au niveau de lARNm détection de la taille de transcription ARNm étudier la dégradation des ARN étudier épissage de lARN peut détecter des transcrits dépissage alternatif étude la demi-vie de ARN IRES étude (site dentrée interne des ribosomes) Pour supprimer la possibilité de la digestion dARN souvent utilisé pour confirmer et de vérifier transgéniques
  7. 7. 4-PRINCIPE1. Séparation des ARN sur gel par électrophorèse2. Transfert des ARN sur membrane (capillarité)3. Hybridation de la membrane avec une sonde spécifique du gène d’intérêt
  8. 8. 5-PROTOCOL Isolation dARN (total ou de poly (A) ARNm) Génération de sonde Électrophorèse sur gel dénaturant dagarose Transfert à un support solide et limmobilisationPré- hybridation et lhybridation avec la sonde Lavage Détection
  9. 9. 6-AVANTAGES ET INCONVINIENSAVANTAGES : la détection de la taille dARN. lobservation des produits dépissage alternatifs d’ARN. lutilisation de sondes ayant une homologie partielle. la qualité et la quantité dARN peut être mesurée sur le gel avant buvard, et les membranes peuvent être stockées et sondé pendant des années après buvard. L’expression des marqueurs tumoraux spécifique par hybridation ARN –ADN
  10. 10.  INCOVINIENTS: La dégradation de léchantillon par ARNases qui peuvent être évitées par une bonne stérilisation de la verrerie et lutilisation des inhibiteurs de RNase comme DEPC( diéthylpyrocarbonate). Les produits chimiques utilisé dans la plupart des taches du Northern peut être un risque pour le chercheur, comme le formaldéhyde, les matières radioactives, le bromure déthidium, DEPC, et la lumière UV sont tous nuisibles dans certaines expositions.
  11. 11. CONCLUSION Northern blot, même si une technique relativement ancienneest encore aujourdhui utile dans létude et lanalyse de lARN.Cette situation est attribuable à sa flexibilité ,simplicité. Il exige essentiellement que lARN extrait est soumis à un gelélectrophorèse, qui est ensuite blotter à une membrane solide, puis hybridé avec la sonde appropriée qui aide à la lidentificationet lanalyse de la molécule dARN. La technique sest avérée utile et indispensable dans létudeet lanalyse de molécules dARN dans les cellules de la vieorganismes. Lapplication de cette technique dans lARN liédemandes de renseignements devrait se poursuivre dans plusieursdécennies à venir.

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