Virus de l'hépatite A et E Virus et marqueurs diagnostiques Vincent THIBAULT Laboratoire de Virologie Groupe Hospitalier P...
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Historique VHA <ul><li>“ La Jaunisse” </li></ul><ul><li>1745 :  Cockayne, hépatites épidémiques </li></ul><ul><li>1908 :  ...
Virus de l'hépatite A
Virus de l’Hépatite A ARN (+) Vpg Capside 27-32nm <ul><li>Famille :  Picornaviridae   </li></ul><ul><ul><li>(entérovirus t...
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VHA : physiopathologie <ul><li>Absence d'effet cytopathique direct : </li></ul><ul><li>cytolyse résultant du processus imm...
Propriétés Physiques du VHA Virus  très  Stable HYGIENE
Variabilité génétique <ul><li>Comparaison nucléotidique </li></ul><ul><ul><li>7 Génotypes :  IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII </...
Génotypes et phylogénie IV Nonhuman primate, Philippines  V Nonhuman primate, Kenya VI  Nonhuman primate, Indonesia D'aprè...
Répartition mondiale des génotypes Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en  rouge .  Souche PA21 (génotype III...
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VHA : Paramètres Biologiques Semaines 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24 protection contre réinfection  Ac anti-VHA = hépatite A an...
VHA : Marqueurs disponibles <ul><li>1- Sang :  Marqueurs indirects </li></ul><ul><ul><ul><li>IgM </li></ul></ul></ul><ul><...
IgM HAV uniquement à bon escient ! <ul><li>Alaska : test &quot;réflexe&quot; si Ig-VHA totales +    Ig M HAV </li></ul><u...
Diagnostic <ul><li>Sérologie +++ </li></ul><ul><ul><li>IgM anti VHA :  infection récente </li></ul></ul><ul><ul><li>IgG an...
Hépatite A : le vaccin virus inactivé <ul><li>AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie  </li></ul><ul><ul><li...
Difficultés diagnostiques En routine · Adresser prélèvements au  Centre national de référence du VHA Pr E Dussaix Laborato...
Grippe aviaire ? SRAS ? Hépatite E ? Hépatite E ?
Historique VHE <ul><li>Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites </li></ul><ul><ul><li>1955 :  Inde...
 
VHE Virus non enveloppé Sphérique (SRV) Surface irrégulière Capside 27-34 nm Symétrie icosaédrique ARN simple brin hélice ...
Organisation génomique <ul><li>Hétérogénéité génétique </li></ul><ul><li>Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité OR...
Hétérogénéité génétique <ul><li>Au moins 4 groupes majeurs  (<20% hétérogénéité ORF2)  subdivisés en 24 sous groupes dont ...
301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains, 1 2 3 4 1a 1b 1c 1e 1d 0.05 4d 4c 4b 4a 4e 3f 3e 3c 3d 3b 3a D'après...
Similarités des souches humaines et animales Borgen et al.  BMC Infectious Diseases  2008,  8 :61 Genetic relatedness betw...
 
Culture et Modèles animaux <ul><li>Culture </li></ul><ul><ul><li>Difficile </li></ul></ul><ul><ul><li>Culture primaire d’h...
HEV – virémie- transmission Matsubayashi K, et al. Transfusion. 2008 Jul;48(7):1368-75.  Concentré de plaquettes à J0  Tra...
VHE : Paramètres Biologiques Jours 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200 Titre peu élevé protection contre réinfection ?   ...
<ul><li>Marqueurs non biologiques </li></ul><ul><ul><li>circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie) </li...
Spécificité et Sensibilité des ELISAs <ul><li>Epidémie Indonésie,  </li></ul><ul><ul><li>82 symptomatiques; 174 asymptomat...
Performance des tests J. Izopet Comm. Pers. CVV 2008 Panels 50 sérums ARN HEV (+), G3 406 sérums IgG ARN HEV (-)
Stratégie Diagnostique Se donner les moyens de faire le diagnostic Diagnostic Direct Recherche du  génome  sur  prélèvemen...
Immunodépression, hépatite chronique et stratégie diagnostique Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1...
VHE et vaccination Risque cumulé d'un premier épisode  d'hépatite E Moyenne géométrique du taux d'anticorps anti-VHE 20 μg...
Adresser les prélèvements au  Centre national de référence du VHE Dr E Nicand Laboratoire de biologie HIA Val de Grâce Tel...
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  • Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)

    1. 1. Virus de l'hépatite A et E Virus et marqueurs diagnostiques Vincent THIBAULT Laboratoire de Virologie Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière Assistance Publique Hôpitaux de Paris
    2. 2. Hépatites virales parentéral non A, non B féco-oral mode de transmission préférentiel B 1965 D 1977 A 1972 F, G, TTV, autres… C 1990 E 1991
    3. 3. Historique VHA <ul><li>“ La Jaunisse” </li></ul><ul><li>1745 : Cockayne, hépatites épidémiques </li></ul><ul><li>1908 : McDonald, &quot;notion de virus…&quot; </li></ul><ul><li>Reproduction de la maladie 1942 : </li></ul><ul><ul><li>volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum </li></ul></ul><ul><li>Entité clinique : </li></ul><ul><ul><li>17-18ème siècle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA &quot;infectious&quot; -VHB &quot;serum&quot; ) </li></ul></ul><ul><li>Visualisation : 1973 (Feinstone) </li></ul><ul><li>Développement de la sérologie : épidémiologie </li></ul><ul><li>1979 : culture (Provost et Hilleman) </li></ul><ul><li>1981... : Clonage, Séquences nucléotidiques </li></ul><ul><li>1991…: Vaccination </li></ul><ul><li>2006 : Déclaration obligatoire </li></ul>
    4. 4. Virus de l'hépatite A
    5. 5. Virus de l’Hépatite A ARN (+) Vpg Capside 27-32nm <ul><li>Famille : Picornaviridae </li></ul><ul><ul><li>(entérovirus type 72) </li></ul></ul><ul><li>Genre : hépatovirus </li></ul><ul><li>Taille 27-32 nm </li></ul><ul><li>Non enveloppé, </li></ul><ul><li>Structure icosaèdrique </li></ul><ul><li>ARN simple brin, </li></ul><ul><ul><li>polarité positive </li></ul></ul><ul><ul><li>lié de façon covalente à une protéine Vpg </li></ul></ul>
    6. 6. 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1 prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales IRES Traduction         VP1 VP3 VP2 VP4 2A Protéines de surface immunogénicité 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B VP1 VP3 VP2 3 A-B VP4 2A poly- protéine 2 227 AA ? Liaison NTP Hélicase Vpg Protéase ARN Polymérase Réplication VP1 VP3 VP2 VP4 2A VP0 Maturation finale X5 – X12
    7. 7. Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules Relargage Membrane cellulaire Réticulum endoplasmique Espace de Disse Canalicule biliaire P3 P2 P1 Traduction Synthèse de la polyprotéine + - - + Réplication Maturation Libération du génome Attachement Empaquetage
    8. 8. VHA : physiopathologie <ul><li>Absence d'effet cytopathique direct : </li></ul><ul><li>cytolyse résultant du processus immun de défense de l'hôte, </li></ul><ul><ul><li>médiation cellulaire </li></ul></ul><ul><ul><li>médiation humorale </li></ul></ul>
    9. 9. Propriétés Physiques du VHA Virus très Stable HYGIENE
    10. 10. Variabilité génétique <ul><li>Comparaison nucléotidique </li></ul><ul><ul><li>7 Génotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Homme : génotype I (90%), (III, II=VII) </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Singes : IV, V, VI </li></ul></ul></ul><ul><li>Sérotype unique </li></ul><ul><ul><li>Nombre limité d'épitopes antigéniques VP1, VP3 </li></ul></ul><ul><ul><li>Tests immunologiques </li></ul></ul><ul><ul><li>Vaccination (HM175, CR326) </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>virus inactivé cultivé sur MRC-5 </li></ul></ul></ul>3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1 prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales
    11. 11. Génotypes et phylogénie IV Nonhuman primate, Philippines V Nonhuman primate, Kenya VI Nonhuman primate, Indonesia D'après Nainan et al. 2006 Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79 Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates in the VP1/P2B region (315-bp fragment). VP1/P2A Génotypes : >15% variations Sous types : 7.5% variations
    12. 12. Répartition mondiale des génotypes Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge . Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert . Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
    13. 13. VHA : épidémiologie http://wwwn.cdc.gov/travel/image.ashx?i=255
    14. 14. VHA : Paramètres Biologiques Semaines 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24 protection contre réinfection Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique) Symptomes Ictère Ag foie VHA Sang VHA Selles IgM IgG
    15. 15. VHA : Marqueurs disponibles <ul><li>1- Sang : Marqueurs indirects </li></ul><ul><ul><ul><li>IgM </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>IgG </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>Génome viral (RT-PCR) 10 5 virions/mL sang </li></ul></ul><ul><li>3- Milieux : </li></ul><ul><ul><li>Génome viral (RT-PCR) </li></ul></ul><ul><ul><li>Particules virales IEM </li></ul></ul><ul><li>4- Foie : </li></ul><ul><ul><li>Ag viral à la surface des hépatocytes </li></ul></ul><ul><ul><li>Génome viral : hybridation, RT-PCR </li></ul></ul><ul><li>2- Selles : 10 9 virions/g selles </li></ul><ul><ul><li>Génome viral (RT-PCR) - épidémiologie </li></ul></ul><ul><ul><li>Particules virales IEM - EIA </li></ul></ul><ul><li>Salive : </li></ul><ul><ul><li>IgG (ELISA) </li></ul></ul><ul><ul><li>Génome viral (RT-PCR) </li></ul></ul>Marqueurs indirects (+++) (ELISA) Marqueurs directs (plus spécialisé)
    16. 16. IgM HAV uniquement à bon escient ! <ul><li>Alaska : test &quot;réflexe&quot; si Ig-VHA totales +  Ig M HAV </li></ul><ul><ul><li>32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86) </li></ul></ul><ul><li>Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant l'injection… </li></ul><ul><li>NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË </li></ul>Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887 82 % 11 % 1 % Faux positifs
    17. 17. Diagnostic <ul><li>Sérologie +++ </li></ul><ul><ul><li>IgM anti VHA : infection récente </li></ul></ul><ul><ul><li>IgG anti VHA : infection passée ou vaccination </li></ul></ul><ul><ul><li>IgM et IgG anti VHA </li></ul></ul><ul><li>Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études] </li></ul><ul><ul><li>Virémie : techniques sensibles (10 5 v./mL) </li></ul></ul><ul><ul><li>Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante (10 9 v./mL), épidémiologie </li></ul></ul><ul><li>Marqueurs biochimiques </li></ul><ul><ul><li>Transaminases (ALAT, ASAT) </li></ul></ul><ul><ul><li>Bilirubine </li></ul></ul><ul><ul><li>Phosphatase alcaline </li></ul></ul><ul><ul><li>Facteurs de coagulation </li></ul></ul>
    18. 18. Hépatite A : le vaccin virus inactivé <ul><li>AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie </li></ul><ul><ul><li>Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-5 , inactivé  </li></ul></ul><ul><li>HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue </li></ul><ul><li>HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue </li></ul><ul><ul><li>Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines diploïdes MRC5 </li></ul></ul><ul><li>Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à 12 mois plus tard. </li></ul><ul><li>La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur jusqu'à 10 ans (20 ans ?) après primo-immunisation. </li></ul>Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17
    19. 19. Difficultés diagnostiques En routine · Adresser prélèvements au Centre national de référence du VHA Pr E Dussaix Laboratoire de virologie Hôpital Paul Brousse 12-14 av Paul Vaillant Couturier 94804 Villejuif cedex Tel : 01 45 59 37 21 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
    20. 20. Grippe aviaire ? SRAS ? Hépatite E ? Hépatite E ?
    21. 21. Historique VHE <ul><li>Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites </li></ul><ul><ul><li>1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le VHA, épidémie particulière. &quot;NANBH&quot; </li></ul></ul><ul><li>Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A : </li></ul><ul><ul><li>Inde : prévalence de l’hépatite A importante </li></ul></ul><ul><ul><li>Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau </li></ul></ul><ul><li>1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire immunisé contre VHA (Balayan), </li></ul><ul><ul><li>Hépatite à J36 </li></ul></ul><ul><ul><li>J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm) </li></ul></ul><ul><ul><li>Reproduction de l’infection chez le singe ( cynomolgus ) </li></ul></ul><ul><ul><li>Hépatite nonA-nonB à transmission entérique (ENANB) </li></ul></ul><ul><li>1990 : Reyes et al . clonage et séquençage  &quot;VHE&quot; </li></ul><ul><li>1991 : Tam et al . VHE </li></ul><ul><li>2000 : Panda et al. cDNA infectieux </li></ul>
    22. 23. VHE Virus non enveloppé Sphérique (SRV) Surface irrégulière Capside 27-34 nm Symétrie icosaédrique ARN simple brin hélice droite polarité + 7,5kb poly-A extrémité 3’ Stabilité Au laboratoire : instable(-70 à +8°C) Décongélation/congélation Tractus GI : stable (pH) Famille : Hepeviridae Genre : Hepevirus
    23. 24. Organisation génomique <ul><li>Hétérogénéité génétique </li></ul><ul><li>Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés en 24 sous groupes dont homologues animaux : </li></ul><ul><li>Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2 </li></ul><ul><li>Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype </li></ul><ul><ul><li>Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre les différents types ?) </li></ul></ul><ul><ul><li>Vaccin : ORF 2 recombinante </li></ul></ul>Non structurales Structurales 28 5109 7124 5’ NC 3’NC Poly-A ARN polarité + 7 200 nt Protéines immunogènes DIAGNOSTIC MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF3 ORF2 Génotypes 1-3
    24. 25. Hétérogénéité génétique <ul><li>Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés en 24 sous groupes dont homologues animaux : </li></ul><ul><ul><li>I- Birmanie et certaines souches africaines et asiatiques </li></ul></ul><ul><ul><li>II- Mexique et certaines souches du Niger </li></ul></ul><ul><ul><li>III- Amérique, Italie, NZ, Autriche, Grèce, Argentine (+ souches porcines) </li></ul></ul><ul><ul><li>IV- Chine, Taiwan et Japon (plus sévère que III ?) </li></ul></ul><ul><li>Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2 </li></ul><ul><ul><li>Connaissances limitées sur l’immunité contre les Ag natifs </li></ul></ul><ul><ul><li>Parties structurales variables </li></ul></ul><ul><ul><li>Grande homologie des parties non structurales </li></ul></ul><ul><li>Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype </li></ul><ul><ul><li>Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre les différents types ?) </li></ul></ul><ul><ul><li>Vaccin : ORF 2 recombinante </li></ul></ul>
    25. 26. 301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains, 1 2 3 4 1a 1b 1c 1e 1d 0.05 4d 4c 4b 4a 4e 3f 3e 3c 3d 3b 3a D'après Lu et al. Rev. Med. Virol. 2006;16:5-36 Inde, Népal, Birmanie, Japon, Espagne Chine, Pakistan, Bengladesh Chine, Inde, Nepal, Russie Maroc, Algérie Algérie, Namibie, Afrique C. Mexico, Nigeria US, Japon, Corée, NL + porc Japon + porc NL (porc) Taiwan (porc) France, UK, Japon, Espagne + porc Espagne, UK, Grèce, NL, Japon + porc Chine, Taiwan Chine, Taiwan Japon, Vietnam Chine (porc) Inde (porc) Génotype < 20% hétérogénéité ORF2
    26. 27. Similarités des souches humaines et animales Borgen et al. BMC Infectious Diseases 2008, 8 :61 Genetic relatedness between HEV strains from human and non-human sources and from various countries . Minimal spanning trees of 81 sequences of 148 nucleotides HEV RNA showing genetic distances between genotype 3 HEV strains from humans and animals. Dutch cases are marked with ID numbers inside the colored circles.
    27. 29. Culture et Modèles animaux <ul><li>Culture </li></ul><ul><ul><li>Difficile </li></ul></ul><ul><ul><li>Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus) </li></ul></ul><ul><ul><li>Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007) </li></ul></ul><ul><ul><li>Cellule embryonnaire </li></ul></ul><ul><li>Modèles animaux </li></ul><ul><ul><li>Primates : reproduction de la pathologie humaine </li></ul></ul><ul><ul><li>Volontaires... </li></ul></ul><ul><ul><li>VHE du porc, du poulet </li></ul></ul><ul><ul><li>Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton... </li></ul></ul>
    28. 30. HEV – virémie- transmission Matsubayashi K, et al. Transfusion. 2008 Jul;48(7):1368-75. Concentré de plaquettes à J0 Transfusé à un homme de 64 ans traité pour Lymphome non-Hodgkinien par GM autologue serum salive selle IgG IgM
    29. 31. VHE : Paramètres Biologiques Jours 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200 Titre peu élevé protection contre réinfection ? Symptomes Ictère VHE Sang VHE Selles IgM IgG
    30. 32. <ul><li>Marqueurs non biologiques </li></ul><ul><ul><li>circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie) </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>A adapter en fonction de la zone géographique ? (Sud versus Nord ?) </li></ul></ul></ul><ul><ul><li>clinique : hépatite “classique”, absence de chronicité ( chez l'immunocompétent ! ) </li></ul></ul><ul><li>Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion </li></ul><ul><ul><li>Absence des marqueurs des virus des autres hépatites (A, B, C, D) </li></ul></ul><ul><ul><li>Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès) </li></ul></ul><ul><li>Marqueurs sérologiques spécifiques </li></ul><ul><ul><li>IgM anti-HEV </li></ul></ul><ul><ul><li>IgG anti-HEV (+++) </li></ul></ul><ul><ul><li>RT-PCR : détection du génome viral (sang, selles) </li></ul></ul>Stratégie Diagnostique
    31. 33. Spécificité et Sensibilité des ELISAs <ul><li>Epidémie Indonésie, </li></ul><ul><ul><li>82 symptomatiques; 174 asymptomatiques; 496 contrôles </li></ul></ul><ul><li>Comparaison de 5 tests sérologiques </li></ul><ul><ul><li>Référence = RT-PCR </li></ul></ul><ul><ul><li>Concordance IgM : 81% </li></ul></ul><ul><ul><li>Concordance IgG : 85% </li></ul></ul>Myint et al. JCM, 2006, p. 1581–1583
    32. 34. Performance des tests J. Izopet Comm. Pers. CVV 2008 Panels 50 sérums ARN HEV (+), G3 406 sérums IgG ARN HEV (-)
    33. 35. Stratégie Diagnostique Se donner les moyens de faire le diagnostic Diagnostic Direct Recherche du génome sur prélèvements sang et selles Diagnostic Indirect Recherche de l'immunité antivirale IgM anti VHE IgG anti VHe - - + Immunité ancienne - - +++ Douteux + - - ou + Probable + ++ ++ Certain RT-PCR IgM IgG Diagnostic
    34. 36. Immunodépression, hépatite chronique et stratégie diagnostique Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
    35. 37. VHE et vaccination Risque cumulé d'un premier épisode d'hépatite E Moyenne géométrique du taux d'anticorps anti-VHE 20 μg d'antigène rHEV (capside exprimée dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur 0.5 mg d'hydroxyde d'aluminum. 3 injections Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9 Efficacité : 95,5% après 3 doses
    36. 38. Adresser les prélèvements au Centre national de référence du VHE Dr E Nicand Laboratoire de biologie HIA Val de Grâce Tel : 01 40 51 40 00 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

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