SIMPOSIO "EL SECTOR SALUD FRENTE A GRANDES DESASTRES" 22-23 de Nov de 2010

1. Pandemia A(H1N1) y Laboratorio de Referencia
Instituto de Salud Pública de Chile
Al servicio de la salud desde
1892
Dr. Julio García Moreno
22 de noviembre de 2010

2. ESTRUCTURA VIRUS A(H1N1) 2009

3. RED LABORATORIOS DE VIGILANCIA
VIRUS RESPIRATORIOS
HOSPITALES CAPACITADOS EN IFI
REGION METROPOLITANA
Hospital Calvo Mackenna
Hospital Exequiel G. Cortés
Hospital Félix Bulnes
Hospital Padre Hurtado
Hospital Sótero del Río
Hospital San Juan de Dios
Hospital San B. Arriarán
Hospital Tórax
Hospital El Pino
Hospital Peñaflor
Hospital San José (Melipilla)
Hospital San Luis (Buin)
Hospital Talagante

4. ACCIONES PREVIAS A
ALERTA OMS
- Participación del ISP en el “plan
pandemia” del Minsal
- Capacitación de un profesional en el
CDC en técnica rtPCR y uso de kit diagnóstico del CDC
(fundamentalmente dirigido contra genes virales de
expresión interna: M, NP).
- Implementación de la tipificación genética de virus
influenza
- Laboratorios de la red de vigilancia de Virus Respiratorio
envían un porcentaje de casos positivos para aislamiento y
PCR convencional
- Solicitud de insumos y reactivos al CDC y otros.

5. ACCIONES POSTERIORES A
ALERTA OMS (24 de abril)
• Hospitales de Red ISP para vigilancia Virus respiratorio
envían al ISP el 100% de los casos de influenza detectados
. Recepción de muestras las 24 horas
• Apoyo respuesta telefónica ISP (Encuesta)
• Revisión guías y formularios
• Envío MTV a laboratorios
• Asignación de turnos para fin de semana.
• El 6 de mayo se recibe kit del CDC para virus pandémico (primers y sondas).
• El 7 de mayo se estandariza técnica
• El 17 de mayo se confirma por rtPCR el primer caso en Chile de influenza
pandémica
• Suspensión actividades no prioritarias
• Reasignación de recursos humanos profesionales y de apoyo al Laboratorio
Virus respiratorio ISP (capacitación)
• Habilitación exclusiva del laboratorio Bioseguridad 3
• Informe de resultados inmediato: correo electrónico al nivel local, Minsal y vía
telefónica a Directores de Servicios de Salud

6. ACCIONES FASE 4 y 5
• Se enfatiza la definición de caso para envío de muestras al ISP
• De intensifica la vigilancia de casos de IRA
• Se mantiene la solicitud de envío al ISP de 100% de muestras
detectados en nivel local
• El Minsal dota a Atención Primaria de kits de diagnóstico rápido (Directigen)
• Se prioriza al estudio de casos hospitalizados, pero se mantiene el análisis de casos
ambulatorios
• Se prioriza el estudio de casos de zonas nuevas o zonas con casos graves
• Turnos de 24 horas todos los días de la semana.
• Uso de bases de datos compartida con Minsal para acelerar notificación
• Apoyo de recursos humanos a recepción de muestras ISP
• Incorporación de equipos para PCR y otros a Virología para aumentar capacidad
de procesamiento de muestras.
• Certificación de laboratorios privados (Las Condes, Universidad Católica, Santa
María, Alemana, U. de Chile).

7. Acciones Fase 6 (período pandémico)
• Se incluye la investigación de brotes acotados
• Investigación genética del virus pandémico: caracterización
• Aislamiento viral y envío de un porcentaje al CDC
• Procesamiento de aproximadamente 200 muestras diarias en ISP
• Implementación de PCR en tiempo real en 7 laboratorios públicos por ISP/CDC
junio/octubre 2009:
Hospital San Camilo, San Felipe, Hospital Regional de Valdivia, Hospital San
Juan de Dios (Santiago), Consultorio Atención Norte Antofagasta, CAE Hospital
de Concepción, Complejo Miraflores de Temuco y Hospital Regional de Puerto
Montt
. Primer aislamiento y genotipificación de virus pandémico humano en aves (pavos)
en conjunto con el Servicio Agrícola Ganadero (SAG)

8. Total casos estudiados por PCR
años 2009- 2010.
Instituto de Salud Pública de Chile
Durante el 2009 en el ISP se estudiaron un total de 9.106
muestras por rtPCR para Influenza A (H1N1)2009 con 4.080
positivos.
Durante el 2010 se han estudiado 5.069 casos por rtPCR con
618 positivos A (H1N1)2009, 2001 A(H3N2), 292 Inf.B.
El análisis de laboratorio se realizó utilizando los sets de
partidores y sondas distribuidos por el CDC de Atlanta a los
Centros Nacionales de Influenza de la Red Global de la
Organización Mundial de la Salud, de la cual el ISP forma
parte desde 1968.

10. Laboratorio Genética Molecular
Técnica de Extracción de DNA y tipificación.
El Instituto ha impulsado la implementación análisis
genético para el diagnóstico y la tipificación de agentes
infecciosos, incluyendo el Virus influenzae ( ISP es
miembro de la Red Pulse Net International)

11. A/swine/OH/511445/2007(H1N1)6
A/Ohio/02/2007(H1N1)
A/swine/Minnesota/00194/2003(H1N2)
A/Wisconsin/87/2005(H1N1)
A/Swine/Indiana/9K035/99 (H1N2)
A/swine/Kansas/00246/2004(H1N2)
A/Shandong/1/2009 H1N1
A/Regensburg/Germany/02/2009 H1N1
A/Chile/9113/2009 H1N1
A/California/06/2009(H1N1)
A/Texas/04/2009(H1N1)
A/Netherlands/602/2009 H1N1
A/Denmark/513/2009 H1N1
A/Italy/06/2009 H1N1
A/El Salvador/213/2009 H1N1
A/England/195/2009 H1N1
A/Canada-NS/RV1536/2009 H1N1
A/Hamburg/4/2009H1N1
A/Auckland/4/2009 H1N1
A/Colombia/450/2009 H1N1
A/Stockholm/28/2009 H1N1
A/Mexico/4604/2009H1N1
A/Lisboa/26/2009H1N1
A/Brisbane/17/2009 H1N1
A/California/14/2009 H1N1
A/Chile/11193/2009 H1N1
A/Chile/8949/2009 H1N1
A/Chile/8947/2009H1N1
A/New York/21/2009 H1N1
A/Toronto/3146/2009 H1N1
A/Chile/9706/2009 H1N1
A/Chile/10084/2009 H1N1
A/Chile/9621/2009 H1N1
A/Ohio/3559/1988(H1N1)
A/swine/Kansas/3024/1987(H1N1))
A/swine/Iowa/24297/1991(H1N1)
A/swine/California/T9001707/1991(H1N1))
A/duck/NC/91347/01(H1N2)
A/SW/CO/17871/01(H1N2)
A/Iowa/CEID23/2005(H1N1)
A/SW/MO/1877/01(H1N2)
A/Washington/10/2008(H1N1)
A/Florida/3/2006(H1N1)
A/New Caledonia/20/1999(H1N1)
A/Chile/717/2009 (H1N1)
A/Brisbane/59/2007(H1N1)
A/Chile/1620/2009 (H1N1)
A/Chile/1621/2009 (H1N1)
A/swine/Saskatchewan/18789/02(H1N1)
A/mallard/MD/161/2002(H1N1)
A/duck/NY/13152-13/1994(H1N1)
A/swine/Spain/53207/2004(H1N1)
A/swine/Zhejiang/1/2007(H1N1)
A/swine/Belgium/1/83(H1N1)
A/swine/England/WVL7/1992(H1N1)
A/swine/Denmark/WVL9/1993(H1N1)
0.05
Porcino clásico
América del Norte
Brote 2009
Estacional
Aviar América del Norte
Porcino Europa
Análisis filogenético del virus Influenza
A(H1N1)2009. Secuencia del gen de la
hemaglutinina. ISP Chile

12. A/Thailand/271/2005(H1N1))
A/swine/Chonburi/05CB1/2005(H1N1)
A/swine/Ratchaburi/NIAH550/2003(H1N1))
A/swine/Ratchaburi/NIAH1481/2000(H1N1))
A/swine/Denmark/WVL9/1993(H1N1))
A/swine/Zhejiang/1/2007(H1N1))
A/Swine/Spain/50047/2003(H1N1))
A/swine/England/WVL7/1992(H1N1)
A/swine/England/WVL14/1996(H1N1
A/swine/Italy/53949/2004(H1N1)
A/swine/Spain/53207/2004(H1N1))
A/swine/Italy/65296/2004(H1N1
A/California/07/2009(H1N1))
A/California/04/2009(H1N1))
A/Chile/9113/2009 N1 lsw
A/Texas/06/2009(H1N1))
A/California/06/2009(H1N1))
A/Texas/04/2009(H1N1))
A/California/05/2009(H1N1))
A/Chile/11194/2009
A/Chile/11193/2009
A/Chile/10084/2009
A/Ohio/07/2009(H1N1))
A/New York/18/2009(H1N1))
A/New York/19/2009(H1N1))
A/Chile/8886/2009
A/Chile/9623/2009
A/Chile/9706/2009
A/duck/Mongolia/47/2001(H7N1))
A/duck/Mongolia/116/2002(H1N1))
A/duck/Italy/69238/2007(H1N1))
A/duck/Shantou/700/2002(H5N1))
A/chicken/Indonesia/CDC25/2005(H5N1)
A/swan/Germany/R65/2006(H5N1))
A/chicken/Korea/IS/2006(H5N1))
A/duck/NY/13152-13/1994(H1N1)
A/mallard/MD/161/2002(H1N1))
A/swine/Saskatchewan/18789/02(H1N1))
A/northern pintail/California/HKWF151/20
A/ring-necked duck/California/HKWF662/20
A/American wigeon/California/HKWF42/2007
A/gadwall/California/HKWF100/2007(H6N1))
A/northern shoveler/California/HKWF383/2
A/Ohio/3559/1988(H1N1))
A/swine/OH/511445/2007(H1N1)) s
A/Wisconsin/10/98 (H1N1))
A/Wisconsin/301/1976(H1N1))
A/swine/Korea/CAS08/2005(H1N1))
A/Iowa/CEID23/2005(H1N1))
A/swine/Iowa/00239/2004(H1N1))
A/Puerto Rico/8/34(H1N1))
A/Florida/3/2006(H1N1))
A/Santiago/1412/2009
A/New Caledonia/20/99(H1N1))
A/Washington/10/2008(H1N1))
A/Santiago/1670/2009
A/Brisbane/59/2007(H1N1))
A/Santiago/1411/2009
0.02
Brote A(H1N1)2009
Porcino
euroasíático
Estacional
Aviar América del Norte
Aviar euroasiático
Porcino Americano
Análisis Filogénetico secuencia del gen
de la Neuraminidasa. ISP

13. Resultados análisis genético virus
Influenza A(H1N1)2009.
Instituto de Salud Pública de Chile
A. Análisis secuenciamiento de hemaglutinina
(Para determinar variabilidad y mutaciones
en los sitios de unión al receptor celular)
En el año 2009 se analizaron 191 cepas
(se obtuvo similitud entre un 97.5 - 99.6 % con la cepa de
referencia A/California/4/2009).
En el año 2010 se han analizado 52 cepas
(se obtuvo similitud entre un 97.5 - 99.6 % con la cepa de
referencia A/California/4/2009).
No se han observado diferencias entre las cepas 2009 y 2010

14. Resultados análisis genético
virus InfluenzaA (H1N1)2009.
Instituto de Salud Pública de Chile
B. Análisis secuenciamiento Neuraminidasa
48 cepas con análisis de la Neuraminidasa:
100% sensibles a oseltamivir (no se detectó
mutación H275Y)
C. Análisis de genoma completo :12 cepas con análisis de genoma
completo (HA, Neuraminidasa, M)
Incluía aislamientos en pacientes fallecidos, graves y leves.
Dependiendo del fragmento, presentaron una similitud de
aminoácidos entre 98.8 a 100% a la cepa A California/4/2009.
No se encontró evidencia de mutaciones en los factores de
virulencia descritos en la literatura (aa básicos en el sitio de
clivaje de la HA, Glu en posición 627 de PB2 en lugar de lisina,
proteína N51, etc.)

15. Próximos pasos
• El Instituto continuará actuando como laboratorio de
referencia para aquellas regiones del país que no puedan derivar sus
muestras a los laboratorios regionales. Así también recibirá todas
las muestras que no puedan ser subtipificadas por los laboratorios
regionales.
• El Instituto continuará con sus labores de aislamiento, tipificación,
secuenciamiento genético y estudio de resistencia a antivirales
• El Instituto realizará un estudio de anticuerpos contra virus
A(H1N1)2009 en muestras serológicas recolectadas en San Felipe
mediante la técnica de inhibición de hemaglutinación y se
implementará además, la técnica de microneutralización dada su
mayor sensibilidad para los mismo fines