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Bases de la genética
molecular
El ADN portador de la
información genética
A principios del siglo XX ya se sabía
que los genes (los factores hereditarios)
estaban en los cromosomas.
Se sabía que éstos estaban formados
por ADN y proteínas.
Los trabajos de Grifith (1928) Avery,
Mac Leod y MacCarthy (1944)
demostraron que era el ADN y no las
proteínas la molécula portadora de la
información genética.
Duplicación del ADN para transmitir
información a las siguientes generaciones por
medio de los cromosomas (asociaciones de
ADN y proteínas).
Transcripción del ADN para formar ARNm
principalmente, pero también ARNr, ARNt y
ARNn.
Traducción, en los ribosomas, del mensaje
contenido en el ARNm a proteínas.
Capacidad de cierta mutación química, para
conseguir nueva variabilidad genética y por
tanto fuente de evolución en las especies.
Funciones de los ácidos nucléiccos
El dogma central de la Biología
“El dogma central de la Biología” se refiere al
paso desde el ADN hasta las proteínas para
expresar el mensaje genético. El esquema de este
“dogma” ha sido encontrado repetidamente y se
considera una regla general (salvo en los
retrovirus)
ADN ARNm Proteína
Transcripción
Transcripción
inversa
Duplicación
Duplicación
Traducción
Transcriptasa
inversa
Transcriptasa
inversa
Transcriptasa
inversa
Transcriptasa
inversa
ARN
vírico
Envoltura
RETROVIRUS
Membrana plasmática
de la célula huésped
ADNc
(complementario)
ADNc
bicatenario
ADNc
monocatenarioDegradación
del ARN
Los retrovirus
Algunos virus poseen ARN replicasa, capaz
de obtener copias de su ARN.
Otros poseen transcriptasa inversa que
sintetiza ADN a partir de ARN mediante un
proceso de retrotranscripción.
Duplicación
del ADN
Hipótesis
Hipótesis conservativa Hipótesis dispersiva
Duplicación del ADN
F1
Replicación
medio con 14N
15N-15N
15N-14N
15N-14N 15N-14N
Duplicación del ADN
Hipótesis semiconservativa
F2
15N-14N
15N-14N 14N-14N
15N-14N
14N-14N
Duplicación del ADN
Hipótesis semiconservativa
Matthew Meselson Franklin Stahl
Duplicación del ADN
Estos autores descubrieron hacia
1958 que la replicación es
semiconservativa
Enzimas que
intervienen
Helicasas
Su misión es romper los puentes de
hidrógeno que unen las bases
nitrogenadas de ambas hebras. Este
desenrollamiento provoca a su vez,
superenrollamiento en el resto de la
doble hélice.
Otro par de enzimas, llamadas
topoisomerasas, liberan esta tensión
al cortar y luego reunir la doble
hélice.
Helicasa
helicasa
Topoisomerasas
Además de lo visto, son capaces de
actuar sobre la forma del ADN, ya sea:
enredándolo para permitir que se
almacene y no se transcriba.
desenredándolo para que controle la
síntesis de proteínas
transcribiéndose y para facilitar la
replicación.
Topoisomerasas
topoisomerasa
Estas enzimas son necesarias
debido a los inherentes
problemas causados por la
propia estructura del ADN.
Las ADN polimerasas son las que
sintetizan la nueva cadena de ADN.
No pueden empezar a añadir
nucleótidos sin tener un soporte al
que unirlos (no pueden empezar “de
novo”)
Utilizan un cebador (segmento corto
de ARN) al que se le agregan los
nuevos nucleótidos.
ADN polimerasas
La ADN polimerasa copia la cadena
molde con alta fidelidad. Sin
embargo, introduce en promedio un
error cada 107 nucleótidos
incorporados.
Tiene, además, la capacidad de
corregir sus propios errores, ya que
puede degradar ADN que acaba de
sintetizar.
ADN polimerasas
ADN polimerasa
ADN polimerasa
Hay varias, con dos funciones:
Polimerasa. Va uniendo los
nucleótidos, añadiendo siempre al
extremo 3’. Necesita una base de
ARN o ADN (cebador) para ir uniendo
los nucleótidos ya que no puede
empezar de cero.
Exonucleasa. Va retirando los
trozos de cebador además de retirar
trozos de ADN erróneos como vimos.
ADN polimerasa
ADN polimerasa
Está constituida por un complejo
(holoenzima) formado por varias
subunidades. P ej. Pol III de E. coli
Subunidad a: cuerpo central. Sintetiza
ADN.
Subunidad e: actividad exonucleasa.
Subunidad θ : ensambla las anteriores.
Subunidad τ: mantienen unido el dímero.
Subunidad γ y δ: ayudan al avance de la
enzima.
Subunidad b: Une la enzima a las hebras
de ADN
Curiosidad
La ADN polimerasa solo puede unir
nucleótidos al extremo 3’ y como las
dos hebras de ADN se orientan en
sentido contrario, cada hebra se
replica de manera totalmente distinta:
la hebra que se lee en sentido 5’ se
va a replicar en sentido 3’ por lo que
no hay problema y se sintetiza de
seguido. Da lugar a la hebra
conductora.
ADN polimerasa
ADN polimerasa
la hebra que se lee en sentido
3’ se va a replicar en sentido 5’
por lo que se va a sintetizar a
trozos. Da lugar a la hebra
retardada.
La ADN polimerasa recorre las
hebras molde en el sentido 3’-5’
uniendo los nuevos nucleótidos
en el extremo 3’.
Fragmentos de Okazaki
Otras enzimas que intervienen en el
proceso son:
Primasas: sintetizan los iniciadores
de ARN cebador que se necesitan
para iniciar la replicación.
Son ARN polimerasas que no
necesitan un trozo previo para
empezar a añadir nucleótidos.
Pueden empezar de novo.
Otras enzimas
Ligasas: sellan las lagunas dejadas
por las exonucleasas cuando retiran
los ARN cebadores. Catalizan los
enlaces fosfodiester entre nucleótidos
adyacentes.
Proteínas de unión (SSB) se unen a
la hebra sencilla del ADN: estabilizan
la horquilla de replicación, impidiendo
que las hebras se unan.
Otras enzimas
Mecanismo
general
Duplicación del ADN
La duplicación o replicación del ADN
tiene lugar antes de la división celular.
El mecanismo consiste en:
Separación de las dos cadenas de
polinucleótidos. Cada una actúa
como plantilla de la nueva.
La cadena original se abre, cada uno
de los nucleótidos atrae a otro
nucleótido complementario formado
previamente por la célula.
Los nucleótidos que intervienen son
desoxirribonucleótidos trifosfato:
ATP, GTP, TTP, CTP.
Al unirse a la cadena en formación
pierden un grupo pirofosfato(P-Pi) y se
aprovecha la energía desprendida.
Duplicación del ADN
Los nucleótidos complementarios
van encajando en su lugar, a través
una enzima ADN polimerasa.
Los nucleótidos nuevos se unen:
a los de la cadena molde por enlaces de
hidrógeno
entre ellos, por enlaces fosfodiester.
Este proceso continúa hasta que se
ha formado una nueva cadena de
polinucleótidos.
Duplicación del ADN
Duplicación del ADN
En procariotas
En procariotas se han descrito tres
ADN polimerasas, todas ellas con
actividad polimerasa y exonucleasa
ADN polimerasa I: retira el cebador
de ARN y lo sustituye por ADN.
ADN polimerasa II: repara ADN
dañado por agentes externos. No
participa en la replicación.
ADN polimerasa III: es la que
sintetiza el ADN, salvo el que
sustituye a los cebadores.
ADN polimerasas
La replicación se inicia en una secuencia
concreta, llamada origen de la
replicación.
Intervienen helicasas y topoisomerasas
para desespiralizar y separar ambas
hebras.
Inicio
Por la acción de
estos enzimas (SSB) se
forma y mantiene la
horquilla de
replicación.
Horquilla de replicación
A partir del origen, la replicación es
en ambos sentidos.
Debido a las limitaciones de las ADN
polimerasas cada hebra se duplica de
distinta manera:
una cadena produce la hebra
conductora
otra cadena produce la hebra
retardada,
Elongación
Hebra continua
La ADN pol necesita un cebador
al que añadir nucleótidos.
Una ARN polimerasa, primasa,
fabrica el trozo de ARN cebador o
“primer”.
La ADN polimerasa III utiliza ese
cebador para fabricar la nueva
cadena de ADN.
Hebra continua
Cuando termina, una ADN polimerasa
I retira el ARN cebador y lo
sustituye por ADN.
Finalmente una ligasa une los dos
fragmentos de ADN (el sintetizado
por la ADN-polimerasa III y el que
sustituye al ARN cebador.
En E. coli las ADN polimerasas I y
III, tienen capacidad para corregir
errores.
Hebra continua
Hebra retardada
La enzima Primasa (ARN
polimerasa que utiliza como
molde ADN) comienza
sintetizando un corto segmento
de ARN cebador a unos 1000
nucleótidos del origen.
la ADN polimerasa III
sintetiza ADN a partir del
cebador, en sentido 3’, hasta
llegar al origen, dando lugar a
un fragmento de Okazaki
Origen
ADN
ARN
5’
Fragmentos de Okazaki
Se conocen como fragmentos de
Okazaki a las cadenas cortas
de ADN recién sintetizadas en la
hebra discontinua.
Éstos se sintetizan en dirección 5’→
3’ a partir de cebadores de ARN que
después son eliminados.
Los fragmentos de Okazaki se unen
entre sí mediante la ADN ligasa
completando la nueva cadena.
Se van fabricando fragmentos de
Okazaki nuevos a medida que el
ADN patrón se va abriendo.
Cuando la ADN polimerasa III
que fabrica el ADN del fragmento
llega a un nuevo cebador, la ADN
polimerasa I sustituye a la ADN
polimerasa III.
Hebra retardada
Hebra retardada
La ADN polimerasa I retira
el ARN cebador mediante su
actividad exonucleasa y
rellena el hueco sintetizando
ADN
Por último, los dos fragmentos de
Okazaki tienen que unirse, enlazando el
extremo 3'OH de un fragmento con el 5'P
del siguiente fragmento.
Dicha labor de sellado y unión de los
sucesivos fragmentos la realiza la Ligasa.
Hebra retardada
Hebra continua
Duplicación del ADN en procariotas
En eucariotas
Duplicación en eucariotas
Es muy similar a procariotas
excepto por:
El empaquetamiento y
espiralización del ADN es mucho
más complejo por lo que los
procesos previos son más
complicados.
Existen cuatro tipos de ADN
polimerasas (a, b,  y ).
Las histonas también se duplican
durante la replicación.
Junto al ADN formarán el
nucleosoma.
Los nuevos nucleosomas se
incorporan a la hebra retardada y
los viejos en la conductora.
Los fragmentos de Okazaki son
más cortos que en procariotas
Duplicación en eucariotas
Orígenes de replicación
Como la molécula de ADN es muy
larga, existen múltiples orígenes de
replicación (replicones) para hacer la
duplicación mas rápida (si lo hiciera a
partir de un extremo, tardaría 30
días!!!!)
Orígenes de replicación
3’
5’
5’
3’
3’
5’
5’
3’
3’
5’
3’
La ADN polimerasa necesita un
fragmento de ARN (cebador o
primer) con el extremo 3’ libre
para iniciar la síntesis.
Una de las hebras se
sintetiza de modo contínuo.
Es la conductora o lider.
Fragmentos de
Okazaki
La otra hebra se sintetiza de modo
discontinuo formándose fragmentos que
se unirán más tarde. Es la retardada.
La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3’-5’
uniendo los nuevos nucleótidos en el extremo 3’.
El mecanismo de elongación (I)
Mitad de una burbuja de replicación
El mecanismo de elongación (II)
1 2
3 4
5 6
La primasa sintetiza un cebador en cada hebra
de la burbuja de replicación.
Las ADN polimerasa comienzan la síntesis de
la hebra conductora por el extremo 3’ de cada
cebador.
La primasa sintetiza un nuevo cebador sobre
cada hebra retardada.
La ADN polimerasa comienza a sintetizar un
fragmento de ADN a partir del nuevo cebador.
Cuando la ADN polimerasa llega al cebador de
ARN, lo elimina y lo reemplaza por ADN.
La ligasa une los fragmentos de ADN.
Nuevo cebador
Cebador
Ligasas
Hebra retardada
Hebra retardada
Primasas
Cebador
Nuevo cebador
Duplicación en eucariotas
Síntesis de proteínas
Genes, enzimas y caracteres
En 1901, el médico británico Garrod
estableció la relación entre los genes y
las sustancias químicas al ver que
enfermedades genéticas dependían de
sustancias presentes o ausentes.
En 1948, Beadle y Tatum
establecieron la relación entre genes y
enzimas, llegando a la conclusión de
que las alteraciones de los nucleótidos
alteraban la secuencia de aminoácidos
de las enzimas.
Al alterarse los enzimas, se alteran las
rutas metabólicas en las que
intervienen y no se producen las
sustancias finales de dichas rutas,
alterándose el carácter que depende de
dichas enzimas.
Genes, enzimas y caracteres
Por lo tanto, para
que se expresen los
genes en los
distintos
caracteres, tienen
que traducirse a
proteínas.
Este proceso consta
de varias fases.
Genes, enzimas y caracteres
SÍNTESIS PROTEÍCA: Fases
Transcripción:
ADN  ARNm, ARNr y ARNt
Traducción:
ARNm  Secuencia de
aminoacidos
Procesamiento de Proteínas
Formación de Estructuras:
Primaria, Secundaria, Terciaria y
Cuaternaria.
Transcripción
Introducción
La transcripción del ADN
es el primer proceso de
la expresión génica.
Mediante este proceso se
pasa la información
contenida en la
secuencia de ADN a la
secuencia de
aminoácidos de la
proteína utilizando
diversos ARN como
intermediarios.
La transcripción: requisitos
La síntesis de ARN se produce
gracias a la acción de la enzima
ARN polimerasa.
Necesita una molécula de ADN
como molde o patrón para
establecer la secuencia
específica de bases del ARN que
se va a sintetizar.
La transcripción: requisitos
La ARN
polimerasa se fija
a regiones
específicas del
ADN (regiones
promotoras que
no se transcriben)
para comenzar su
acción a partir de
ese punto.
Son enzimas complejas formadas
por varias subunidades
(holoenzimas)
No requiere cebador.
No tiene la función de corregir
errores.
Sintetiza en sentido 3’
En procariotas hay un sólo un tipo
con múltiples subunidades.
ARN polimerasa
ARN polimerasa
En eucariotas hay 3 tipos de ARN-
polimerasa:
I sintetiza ARNr (El ARN de las
subunidades grandes de los
ribosomas)
II sintetiza ARNm (mensajero)
III sintetiza ARNt, ARNr 5S (el
ARN de la subunidad pequeña de
ribosomas)
Tan solo se
transcribe una de las
dos hebras de ADN.
Se la llama hebra
molde, sin sentido o
no codificante.
La otra hebra es la
no transcrita,
inactiva, codificante.
ADN ARN
(5)’ CGCTATAGCG (3’)  cadena codificadora del
ADN (la secuencia de ARN es idéntica a esta
cadena, salvo por tener uracilo en vez de
timina. Por eso se la llama no transcrita, con
sentido o codificante)
(3’) GCGATATCGC (5’)  cadena molde del ADN.
(la secuencia de ARN es complementaria de
esta cadena, Por eso se la llama transcrita,
sin sentido o no codificante)
(5’) CGCUAUAGCG (3’)  transcrito de ARN
Orientación y nomenclatura de las cadenas
en relación a la transcripción
ADN ARN
¿Qué cadena de la doble hélice es la
codificadora?
Depende de cada gen, no es una
propiedad del cromosoma.
Siempre se transcribe en dirección 3’
ADN ARN
Mecanismo
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69
EL PROCESO DE LA
TRANSCRIPCIÓN EN
PROCARIOTAS
1. INICIACIÓN
2. ELONGACIÓN
3. TERMINACIÓN
HOLOENZIMA =
4 subunidades
2 a (alfa): ensamblan el
enzima y promueven
interacciones
b (beta): actividad
catalítica
b’: se une al ADN
ω (omega): ensamblaje
y regulación expresión
 (sigma): se une al
promotor y posiciona a
la holoenzima en el sitio
de inicio
ARN polimerasa en procariotas
Curiosidad
El promotor de un gen es la
sección de ADN que controla el
inicio de la transcripción.
Es una secuencia específica de
ADN, generalmente TATA (caja
TATA).
Es a donde se une la ARN
polimerasa.
Inicio
Inicio
Los promotores se localizan en
los extremos 5' de los genes, a
-35 y -10 nucleótidos del
comienzo del gen (+1), y a ellos
se une la ARN pol.
La ARN pol, unida al promotor,
abre la doble hélice de ADN.
Inicio
Primero se une al promotor -35 .
Luego avanza hasta el -10 donde la
la subunidad que la ayudó a fijarse
() se desprende.
La ARN pol
avanza hasta el
primer
nucleótido del
gen y comienza
a transcribir.
Inicio
La ARN polimerasa comienza a unir
ribonucleótidos trifosfato mediante
enlaces fosfodiéster.
Lo hace sin necesidad de cebador.
Una vez que se forma el primer
enlace fosfodiéster (con separación de
un pirofosfato), acaba la etapa de
iniciación.
Una vez comenzada la síntesis, el
promotor queda libre para volver a
funcionar de nuevo.
Inicio
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Adición de sucesivos ribonucleótidos.
Sentido de lectura del ADN por la ARN
pol: 3’  5’
Sentido de síntesis ARN: 5’  3’
Se sintetiza la cadena
complementaria.
Elongación
Elongación
La ARN polimerasa
reconoce a los ribo
nucleótidos trifosfato
entrantes.
La ARN polimerasa
cataliza la formación
del enlace fosfodiéster y
se separa un pirofosfato
(P-Pi)
Se aprovecha la energía
desprendida ya que es
anabolismo
Terminación
La terminación está señalizada por
ciertas secuencias del ADN que hacen
que la ARN polimerasa se detenga.
Estas secuencias forman un bucle al final
del ARN.
Así se favorece la
separación del ARN, el ADN y
la ARN polimerasa.
El ADN se espiraliza de
nuevo.
Terminación
Terminación
En bacterias, con mucha
frecuencia, los ARN-m son
poligénicos o policistrónicos,
de manera que un solo ARN-m
contiene información para la
síntesis de varios polipéptidos
distintos.
15/02/2016 9:50
81
EL PROCESO DE LA
TRANSCRIPCIÓN EN
EUCARIOTAS
1. INICIO
2. ELONGACIÓN
3. TERMINACIÓN
Diferencias con procariotas
Existen varias diferencias con
procariotas:
Existen tres tipos de ARN-
polimerasa.
Se necesitan factores de
transcripción (que se unen al
promotor) para que se pueda unir
a ellos la ARN-polimerasa
Los genes están fragmentados por
fragmentos sin sentido por lo que
el ARN transcrito necesita un
proceso de maduración.
El ADN está enrollado a histonas
formado nucleosomas y tiene que
extenderse para transcribirse.
Los genes que se transcriben
continuamente, están
continuamente extendidos.
Diferencias con procariotas
ARN polimerasa
Existen tres tipos de ARN polimerasa
ARN polimerasa I, 13 subunidades.
Sintetiza subunidad grande de
ribosomas (rARN).
ARN polimerasa II, 12 subunidades.
Sintetiza los precursores de los
mARN.
ARN polimerasa III, 17
subunidades. Sintetiza la
subunidad pequeña de ribosomas
rARN) y tARN.
Inicio
En eucariotas se necesitan
toda una serie de factores
de transcripción que
ejercen de factores de
iniciación
Se unen a secuencias
concretas de ADN
(promotor en posición -25
nucleótidos) para
reconocer el sitio donde
ha de comenzar la
transcripción.
Inicio
Un factor de transcripción es una
proteína que regula la
transcripción, pero que no forma
parte de la ARN polimerasa.
Para que se pueda unir el factor de
transcripción actúa una helicasa
que separa las hebras de ADN en la
secuencia del promotor (TATA).
Iniciación
Entonces ya se unen los factores
de transcripción permitiendo el
acceso de la ARN polimerasa II al
molde de ADN.
La ARN polimerasa II tiene como
función establecer enlaces
fosfodiester entre ribonucleótidos
trifosfato.
Una vez que se forma el primer
enlace, acaba la etapa de iniciación
y comienza así la siguiente etapa
Elongación
La ARN polimerasa II cataliza la
elongación de cadena del ARN.
Se van añadiendo los nucleótidos
trifosfato.
Para establecer los enlaces
fosfodiéster, se desprende un
pirofosfato (P-Pi) y se aprovecha la
energía desprendida.
Básicamente es igual que en
procariotas.
TERMINACIÓN
El ARNm que se
sintetiza es más largo
de lo necesario.
Hay señal de corte
(AAUAA).
Se corta 20
nucleótidos después
de dicha señal.
El ARN se separa del
ADN y de la ARN pol.
89
Procesos postrascripcionales
Adición del casquete CAP
Adición de cola de poli-A
Splicing
Traslado
Acoplamiento
Degradación
Adición del casquete CAP
El CAP es un ribonucleótido modificado de
guanina que se añade al extremo 5' de la
cadena del ARNm transcrito mediante un
enlace fosfodiéster.
Es necesario para el proceso normal de
traducción del ARN, para mantener su
estabilidad y el acceso apropiado del
ribosoma.
CAP
Adición de cola poli-A
Secuencia larga de nucleótidos de
Adenina (100-200) al extremo 3.
Su misión es proteger y facilitar el
viaje al citoplasma.
Splicing
En eucariotas el ADN tiene en cada gen
intrones y exones:
Los intrones no se traducen a
proteína.
Los exones sí se traducen.
Ambos se transcriben y aparecen
transcritos en el ARNm.
Antes de la traducción, es necesario
eliminar los intrones que no se van a
traducir.
Splicing
La ARN Ligasa
pega los trozos
(exones) tras la
retirada de los
intrones
Es el proceso de corte y empalme de
ARN.
Este proceso es muy común en
eucariotas, pudiéndose dar en cualquier
tipo de ARN aunque es más común en el
ARNm.
Autosplicing
Corte y empalme en el
que el propio intrón
actúa como
catalizador en su
eliminación, por lo
que no se requiere de
proteínas
enzimáticas.
Cuando un fragmento
de ARN tiene
actividad catalítica se
le denomina ribozima.
Splicing Alternativo
Proceso que permite
obtener, a partir de
un transcrito
primario de mARN o
pre-ARNm, distintas
moléculas de mARN
maduras, para la
síntesis de
diferentes proteínas.
NO
15/02/2016 9:50
(+1)
(-25)
Transcripción eucariotas
Transcripción:
Diferencias procariotas
eucariotas
ARNm primario o
ARNhn (heterogéneo
nuclear)
Transcripción procariotas vs
eucariotas
La transcripción y la traducción son
procesos simultáneos.
La transcripción y la traducción no
son procesos simultáneos
Transcripción procariotas vs
eucariotas
Procariotas Eucariotas
El ARNm es policistrónico: tiene información para más
de una proteína y transcribe más de un gen
El ARNm es monocistrónico: tiene información solo
para una proteína y solo transcribe un gen
Transcripción
Traducción
Traducción
La traducción es la transferencia
de información de un lenguaje
(ácido nucleíco) a otro (proteína).
El proceso de traducción sucede
en el Citoplasma de la célula una
vez que el ARNm sale del núcleo
finalizada la transcripción.
Se produce en 3 etapas:
Iniciación, elongación y
terminación.
Traducción
Intervienen dos tipos de enzimas
fundamentales:
aminoacil-ARNt-sintetasas: unen los
aminoácidos con el correspondiente
ARNt. Hay 20 distintas, una para
cada aminoácido y su ARNt.
peptidil transferasa: es una ribozima
aminoacil transferasa que se encarga
de la formación de enlaces peptídicos
entre aminoácidos adyacentes. Es
parte del ARN de los ribosomas.
Código genético
Es el utilizado por los ribosomas
para descifrar el ARNm y
transformar su lenguaje
(nucleótidos) en lenguaje de
proteínas (aminoácidos)
La combinación formada por un
triplete de tres bases (codón) del
ARNm dice qué aminoácido se
tiene que incorporar a la cadena
polipeptídica en crecimiento.
Existe un triplete o codón de inicio
de síntesis que determina
Metionina (AUG) y tres tripletes o
codones de final de síntesis: UAA,
UAG, UGA.
Se dice que el código es degenerado
porque hay más de un triplete para
la mayoría de aminoácidos y hay
tripletes sin sentido (los de final de
síntesis)
Código genético
UNIVERSAL
Compartido por todos los organismos
conocidos incluso los virus.
El código ha tenido un solo origen
evolutivo.
Existen excepciones en las
mitocondrias y algunos protozoos.
A excepción de la metionina y el
triptófano, cada aminoácido está
codificado por más de un codón.
Esto es una ventaja ante las mutaciones.
DEGENERADO
Cada codón solo codifica a un
aminoácido.
SIN IMPERFECCIÓN
Los tripletes se disponen de
manera lineal y continua, sin
espacios entre ellos y sin
compartir bases nitrogenadas
CARECE DE SOLAPAMIENTO
Posibilidad de solapamiento
Met Gli Tre His Ala Fen Ala
Met Leu Leu Pro
Solapamiento
Codones de iniciación
Código genético
1ª Base
2ª Base
3ª Base
UCC
UCA
UCG
UCU
Ser
Ventaja frente a
mutaciones
LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
ARN MENSAJEROAMINOÁCIDOS
ENZIMAS Y
ENERGÍA
SUBUNIDAD
PEQUEÑA
SUBUNIDAD
GRANDE
SITIO A
SITIO P
AMINOÁCIDO
POLIPÉPTIDO
Dondesesitúael
Tienen
dos
lugares
Formados por
RIBOSOMAS
Donde se unen los
Donde se une el
Donde se
une el
EXTREMO 3’
Tiene
dos
zonas
ARN DE
TRANSFERENCIA
Por donde
se une al
ANTICODÓN
AMINOACIL-ARNt
-SINTETASA
Como la
necesita
Traducción: necesidades
ARN transferente
El ARNt tiene cuatro brazos, tres de
ellos con un bucle que se enrolla en
hélice:
Brazo D por donde se une a la enzima
peptidil transferasa del ribosoma.
Esta enzima cataliza el enlace
peptídico entre los aminoácidos que
llegan.
Brazo TYC por el que se une al
ribosoma.
Brazo anticodón donde se encuentra
el triplete complementario del codón
del ARNm. De este triplete depende el
aminoácido que va a transportar el
ARNt.
Brazo aceptor: es el que carece de
bucle y donde están los extremos 3’ y
5’ del ARN. En su extremo 3’, que es
el más largo, hay un triplete CCA a
donde se unirá el aminoácido
determinado por el anticodón.
ARN transferente
Unión al
ribosoma
Unión al codon complementario
del ARNm en el ribosoma
NOTA.- EXISTEN TANTOS ARNt como
aminoácidos, uno para cada uno, en total 20
clases de ARNt
ARN transferente
Sitio de unión del
aminoácido
Anticodón Unión a la
peptidil-
transferasa en
el ribosoma
Unión del aminoácido
Triplete de
unión:
siempre CCA
Brazo D Brazo TYC
Brazo D
Brazo TYC
Anticodón
Estructura terciaria del ARNt
ARN de transferencia
activado: cargado con el
aminoácido
correspondiente
ARN transferente
Ribosomas
Unión del
ARNt con la
cadena
polipeptídica
en formación
Unión del
ARNt que
llega con el
nuevo
aminoácido
E
Sitio que
ocupa el
ARNt que
está a
punto de
irse
Sitio E
Traducción
Activación de aminoácidos.
Iniciación.
Elongación.
Terminación
Activación de los aminoácidos
Consiste en la formación de aminoacil-
ARNt (aminoácido unido al ARNt).
Se requiere
una enzima Aminoacil-ARNt-sintetasa
ATP que desprende P-Pi y deja un
AMP unido al aminoácido
aprovechando la energía desprendida.
La energía liberada del ATP al liberar
los P-Pi, es la utilizada en la síntesis
del aminoacil-ARNt
El aminoácido se une al brazo aceptor
del ARNt, a un triplete que siempre es
CCA.
La enzima Aminoacil-ARNt-sintetasa es
específica de cada aminoácido.
El aminoácido queda unido al AMP
formando el acido aminoaciladenílico
y sólo lo libera al unirse al ARNt.
Hay 20 ARNt distintos, uno para cada
aminoácido.
Activación de los aminoácidos
+ +
+
Aminoacil ARNt -
sintetasa
Aminoácido Ácido
aminoaciladenílico
ARNtx
Aminoácil -ARNtx
Existen al menos 20 aminoacil-
ARNt-sintetasas, una para cada
aminoácido. Son enzimas muy
específicas
La unión se realiza
en el extremo 3’
del ARNt
Activación de aminoácidos
aa
aa
Aminoacil
ARNt
sintetasa
ATP
Ácido
aminoaciladenílico
aa AMP
PPi
AMP
Existen al menos 20 aminoacil-
ARNt-sintetasas, una para cada
aminoácido. Son enzimas muy
específicas
Activación de aminoácidos
Iniciación
Comienza cuando la subunidad
menor del ribosoma se une al ARNm.
Luego el primer ARNt se empareja
con el primer codón (AUG) del ARNm
llevando siempre el aminoácido
correspondiente (metionina).
Esta unión se hace en el sitio P del
ribosoma.
Ahora la subunidad ribosómica
mayor se une a la menor, y el ARNm
queda encerrado por ambas
ARNt
iniciador
Subunidad
menor
3’
5’
U
A C
5’
3’
A
U G
5’
3’
E
A
Metionina
5’
3’
GTP
GDP
Iniciación de la síntesis
Iniciación
Elongación
Llega un segundo ARNt con el
aminoácido correspondiente al
anticodón complementario del siguiente
codón y se sitúa en el sitio A del
ribosoma.
Se establece el enlace peptídico entre la
metionina y este segundo aminoácido.
Dicho enlace es catalizado por la peptidil
transferasa que es una de las enzimas
(ribocimas) que constituyen el ribosoma.
Elongación
Una vez unidos los aminoácidos, el
primer ARNt se suelta de la metionina,
quedando el nuevo ARNt con el
dipéptido en el sitio A
El ribosoma avanza un codón
(translocación ribosomal y el ARNt con
el dipéptido pasa al sitio P.
El ARNt primero queda en el sitio E, de
donde se irá posteriormente.
El sitio A queda libre a la espera de otro
aminoacil-ARNt
Todo esto requiere energía que cede
un GTP.
Llega otro ARNt con su aminoácido al
sitio A.
Se establece el segundo enlace
peptídico.
De nuevo avanza el ribosoma un
codón
El ARNt anterior se va.
Y así sucesivamente hasta el final
Elongación
Anticod
ón
Complementar
iedad entre
codón
y anticodón
GTP
GDP
5’
3’ 3’
5’ 5’ 5’
3’
3’GTP
GDP
Enlace
peptídico
El aminoácido
se traslada al
otro ARNtARNt
Aminoácido
Se libera el ARNt
que ha cedido el
aminoácido
Elongación
Terminación
Al finalizar la secuencia, el ribosoma
se encuentra con codones de
terminación para los que no hay ARNt
(UAA, UAG, UGA).
Cuando se llega a estos codones, la
traducción se detiene.
La cadena polipeptídica (proteína) se
desprende.
Las subunidades ribosomales y el
ARNm se separan.
El codón de
finalización puede
ser UAA, UAG o UGA
Último
ARNt
Factor de
liberación
Polipéptido
libre
Separación del ARNm
y las subunidades
ribosómicas
3’
5’
3’
5’
Terminación
Microfotografía electrónica
(MET, falso color) de un
polirribosoma.
Si el ARN a traducir es lo suficientemente largo puede ser
leído por más de un ribosoma a la vez, formando un
polirribosoma o polisoma.
Ribosoma
Proteína
en
formación
Poliribosomas o polisomas
Traducción
Plegamiento de las proteínas.
Las proteínas según se van sintetizando,
se van plegando para adquirir las
estructuras tridimensionales propias de
cada una de ellas.
Estructura primaria.
Estructura secundaria.
Estructura terciaria.
Estructura cuaternaria.
Estructuras Proteicas
Preparación de la proteína.
Después de la traducción hay
proteínas enzimáticas que ya son
activas.
Otras necesitan eliminar algunos
aminoácidos (generalmente se libera
la metionina o aminoácido iniciador)
Algunas tienen que unirse a
cofactores o coenzimas.
Anaya
Anaya
En el siguiente PowerPoint ya que
pertenece al mismo tema.
PAU Cantabria
PAU
Con un esquema /dibujo describe el mecanismo
mediante el cual las células eucarióticas
obtienen un ARN mensajero maduro a partir de
ADN. Representa los elementos que intervienen
en proceso, así como las funciones de cada uno
de ellos en el mismo. Define el concepto de
promotor e indica su papel en dicho proceso.
Desarrolla un texto de no más de diez líneas en
el que se relacionen de manera coherente,
dentro de un fenómeno biológico, los siguientes
conceptos: polimerasa de ADN, cebador,
semiconservativa, fase S del ciclo celular.
Desarrolla un texto de no más de diez
líneas en el que se relacionen de manera
coherente, los siguientes conceptos:
transcripción, polimerasa de ARN, ADN
molde, proteína, traducción del
mensajero.
Desarrolla un texto de no más de diez
líneas en el que se relacionen de manera
coherente, dentro de un fenómeno
biológico, los siguientes conceptos:
maduración ARN, intrones, ribosomas,
código genético.
PAU
Describe, ayudándote de un dibujo, el mecanismo
de la transcripción de un gen eucariótico,
indicando los principales elementos moleculares
que intervienen en el mismo. ¿Cómo tiene lugar
la maduración del producto obtenido para generar
el ARNm? ¿En qué lugar de la célula tiene lugar la
transcripción?
Describe, mediante un dibujo claro, el mecanismo
de replicación del material genético indicando en
cada etapa los elementos moleculares más
importantes así como la posición naturaleza y
función del cebador y los carbonos terminales de
cada cadena (3’ ó 5’)
PAU
Identifique el proceso biológico (localizado
en el citoplasma)
que aparece en la figura e
identifique su finalidad, así
como dos elementos que componen la
estructura representada.
Desarrolla un texto de no más de 10 lineas
en el que se relacionen, de manera
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PAU
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Bases genética molecular ADN

  • 1. Bases de la genética molecular
  • 2. El ADN portador de la información genética A principios del siglo XX ya se sabía que los genes (los factores hereditarios) estaban en los cromosomas. Se sabía que éstos estaban formados por ADN y proteínas. Los trabajos de Grifith (1928) Avery, Mac Leod y MacCarthy (1944) demostraron que era el ADN y no las proteínas la molécula portadora de la información genética.
  • 3. Duplicación del ADN para transmitir información a las siguientes generaciones por medio de los cromosomas (asociaciones de ADN y proteínas). Transcripción del ADN para formar ARNm principalmente, pero también ARNr, ARNt y ARNn. Traducción, en los ribosomas, del mensaje contenido en el ARNm a proteínas. Capacidad de cierta mutación química, para conseguir nueva variabilidad genética y por tanto fuente de evolución en las especies. Funciones de los ácidos nucléiccos
  • 4. El dogma central de la Biología “El dogma central de la Biología” se refiere al paso desde el ADN hasta las proteínas para expresar el mensaje genético. El esquema de este “dogma” ha sido encontrado repetidamente y se considera una regla general (salvo en los retrovirus) ADN ARNm Proteína Transcripción Transcripción inversa Duplicación Duplicación Traducción
  • 5. Transcriptasa inversa Transcriptasa inversa Transcriptasa inversa Transcriptasa inversa ARN vírico Envoltura RETROVIRUS Membrana plasmática de la célula huésped ADNc (complementario) ADNc bicatenario ADNc monocatenarioDegradación del ARN Los retrovirus Algunos virus poseen ARN replicasa, capaz de obtener copias de su ARN. Otros poseen transcriptasa inversa que sintetiza ADN a partir de ARN mediante un proceso de retrotranscripción.
  • 8. Hipótesis conservativa Hipótesis dispersiva Duplicación del ADN
  • 9. F1 Replicación medio con 14N 15N-15N 15N-14N 15N-14N 15N-14N Duplicación del ADN Hipótesis semiconservativa
  • 11. Matthew Meselson Franklin Stahl Duplicación del ADN Estos autores descubrieron hacia 1958 que la replicación es semiconservativa
  • 13. Helicasas Su misión es romper los puentes de hidrógeno que unen las bases nitrogenadas de ambas hebras. Este desenrollamiento provoca a su vez, superenrollamiento en el resto de la doble hélice. Otro par de enzimas, llamadas topoisomerasas, liberan esta tensión al cortar y luego reunir la doble hélice.
  • 15. Topoisomerasas Además de lo visto, son capaces de actuar sobre la forma del ADN, ya sea: enredándolo para permitir que se almacene y no se transcriba. desenredándolo para que controle la síntesis de proteínas transcribiéndose y para facilitar la replicación.
  • 16. Topoisomerasas topoisomerasa Estas enzimas son necesarias debido a los inherentes problemas causados por la propia estructura del ADN.
  • 17. Las ADN polimerasas son las que sintetizan la nueva cadena de ADN. No pueden empezar a añadir nucleótidos sin tener un soporte al que unirlos (no pueden empezar “de novo”) Utilizan un cebador (segmento corto de ARN) al que se le agregan los nuevos nucleótidos. ADN polimerasas
  • 18. La ADN polimerasa copia la cadena molde con alta fidelidad. Sin embargo, introduce en promedio un error cada 107 nucleótidos incorporados. Tiene, además, la capacidad de corregir sus propios errores, ya que puede degradar ADN que acaba de sintetizar. ADN polimerasas
  • 20. Hay varias, con dos funciones: Polimerasa. Va uniendo los nucleótidos, añadiendo siempre al extremo 3’. Necesita una base de ARN o ADN (cebador) para ir uniendo los nucleótidos ya que no puede empezar de cero. Exonucleasa. Va retirando los trozos de cebador además de retirar trozos de ADN erróneos como vimos. ADN polimerasa
  • 21. ADN polimerasa Está constituida por un complejo (holoenzima) formado por varias subunidades. P ej. Pol III de E. coli Subunidad a: cuerpo central. Sintetiza ADN. Subunidad e: actividad exonucleasa. Subunidad θ : ensambla las anteriores. Subunidad τ: mantienen unido el dímero. Subunidad γ y δ: ayudan al avance de la enzima. Subunidad b: Une la enzima a las hebras de ADN Curiosidad
  • 22. La ADN polimerasa solo puede unir nucleótidos al extremo 3’ y como las dos hebras de ADN se orientan en sentido contrario, cada hebra se replica de manera totalmente distinta: la hebra que se lee en sentido 5’ se va a replicar en sentido 3’ por lo que no hay problema y se sintetiza de seguido. Da lugar a la hebra conductora. ADN polimerasa
  • 23. ADN polimerasa la hebra que se lee en sentido 3’ se va a replicar en sentido 5’ por lo que se va a sintetizar a trozos. Da lugar a la hebra retardada. La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3’-5’ uniendo los nuevos nucleótidos en el extremo 3’.
  • 25. Otras enzimas que intervienen en el proceso son: Primasas: sintetizan los iniciadores de ARN cebador que se necesitan para iniciar la replicación. Son ARN polimerasas que no necesitan un trozo previo para empezar a añadir nucleótidos. Pueden empezar de novo. Otras enzimas
  • 26. Ligasas: sellan las lagunas dejadas por las exonucleasas cuando retiran los ARN cebadores. Catalizan los enlaces fosfodiester entre nucleótidos adyacentes. Proteínas de unión (SSB) se unen a la hebra sencilla del ADN: estabilizan la horquilla de replicación, impidiendo que las hebras se unan. Otras enzimas
  • 28. Duplicación del ADN La duplicación o replicación del ADN tiene lugar antes de la división celular. El mecanismo consiste en: Separación de las dos cadenas de polinucleótidos. Cada una actúa como plantilla de la nueva. La cadena original se abre, cada uno de los nucleótidos atrae a otro nucleótido complementario formado previamente por la célula.
  • 29. Los nucleótidos que intervienen son desoxirribonucleótidos trifosfato: ATP, GTP, TTP, CTP. Al unirse a la cadena en formación pierden un grupo pirofosfato(P-Pi) y se aprovecha la energía desprendida. Duplicación del ADN
  • 30. Los nucleótidos complementarios van encajando en su lugar, a través una enzima ADN polimerasa. Los nucleótidos nuevos se unen: a los de la cadena molde por enlaces de hidrógeno entre ellos, por enlaces fosfodiester. Este proceso continúa hasta que se ha formado una nueva cadena de polinucleótidos. Duplicación del ADN
  • 33. En procariotas se han descrito tres ADN polimerasas, todas ellas con actividad polimerasa y exonucleasa ADN polimerasa I: retira el cebador de ARN y lo sustituye por ADN. ADN polimerasa II: repara ADN dañado por agentes externos. No participa en la replicación. ADN polimerasa III: es la que sintetiza el ADN, salvo el que sustituye a los cebadores. ADN polimerasas
  • 34. La replicación se inicia en una secuencia concreta, llamada origen de la replicación. Intervienen helicasas y topoisomerasas para desespiralizar y separar ambas hebras. Inicio Por la acción de estos enzimas (SSB) se forma y mantiene la horquilla de replicación. Horquilla de replicación
  • 35. A partir del origen, la replicación es en ambos sentidos. Debido a las limitaciones de las ADN polimerasas cada hebra se duplica de distinta manera: una cadena produce la hebra conductora otra cadena produce la hebra retardada, Elongación
  • 36. Hebra continua La ADN pol necesita un cebador al que añadir nucleótidos. Una ARN polimerasa, primasa, fabrica el trozo de ARN cebador o “primer”. La ADN polimerasa III utiliza ese cebador para fabricar la nueva cadena de ADN.
  • 37. Hebra continua Cuando termina, una ADN polimerasa I retira el ARN cebador y lo sustituye por ADN. Finalmente una ligasa une los dos fragmentos de ADN (el sintetizado por la ADN-polimerasa III y el que sustituye al ARN cebador. En E. coli las ADN polimerasas I y III, tienen capacidad para corregir errores.
  • 39. Hebra retardada La enzima Primasa (ARN polimerasa que utiliza como molde ADN) comienza sintetizando un corto segmento de ARN cebador a unos 1000 nucleótidos del origen. la ADN polimerasa III sintetiza ADN a partir del cebador, en sentido 3’, hasta llegar al origen, dando lugar a un fragmento de Okazaki Origen ADN ARN 5’
  • 40. Fragmentos de Okazaki Se conocen como fragmentos de Okazaki a las cadenas cortas de ADN recién sintetizadas en la hebra discontinua. Éstos se sintetizan en dirección 5’→ 3’ a partir de cebadores de ARN que después son eliminados. Los fragmentos de Okazaki se unen entre sí mediante la ADN ligasa completando la nueva cadena.
  • 41. Se van fabricando fragmentos de Okazaki nuevos a medida que el ADN patrón se va abriendo. Cuando la ADN polimerasa III que fabrica el ADN del fragmento llega a un nuevo cebador, la ADN polimerasa I sustituye a la ADN polimerasa III. Hebra retardada
  • 42. Hebra retardada La ADN polimerasa I retira el ARN cebador mediante su actividad exonucleasa y rellena el hueco sintetizando ADN Por último, los dos fragmentos de Okazaki tienen que unirse, enlazando el extremo 3'OH de un fragmento con el 5'P del siguiente fragmento. Dicha labor de sellado y unión de los sucesivos fragmentos la realiza la Ligasa.
  • 45. Duplicación del ADN en procariotas
  • 47. Duplicación en eucariotas Es muy similar a procariotas excepto por: El empaquetamiento y espiralización del ADN es mucho más complejo por lo que los procesos previos son más complicados. Existen cuatro tipos de ADN polimerasas (a, b,  y ).
  • 48. Las histonas también se duplican durante la replicación. Junto al ADN formarán el nucleosoma. Los nuevos nucleosomas se incorporan a la hebra retardada y los viejos en la conductora. Los fragmentos de Okazaki son más cortos que en procariotas Duplicación en eucariotas
  • 49. Orígenes de replicación Como la molécula de ADN es muy larga, existen múltiples orígenes de replicación (replicones) para hacer la duplicación mas rápida (si lo hiciera a partir de un extremo, tardaría 30 días!!!!)
  • 51. 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ La ADN polimerasa necesita un fragmento de ARN (cebador o primer) con el extremo 3’ libre para iniciar la síntesis. Una de las hebras se sintetiza de modo contínuo. Es la conductora o lider. Fragmentos de Okazaki La otra hebra se sintetiza de modo discontinuo formándose fragmentos que se unirán más tarde. Es la retardada. La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3’-5’ uniendo los nuevos nucleótidos en el extremo 3’. El mecanismo de elongación (I) Mitad de una burbuja de replicación
  • 52. El mecanismo de elongación (II) 1 2 3 4 5 6 La primasa sintetiza un cebador en cada hebra de la burbuja de replicación. Las ADN polimerasa comienzan la síntesis de la hebra conductora por el extremo 3’ de cada cebador. La primasa sintetiza un nuevo cebador sobre cada hebra retardada. La ADN polimerasa comienza a sintetizar un fragmento de ADN a partir del nuevo cebador. Cuando la ADN polimerasa llega al cebador de ARN, lo elimina y lo reemplaza por ADN. La ligasa une los fragmentos de ADN. Nuevo cebador Cebador Ligasas Hebra retardada Hebra retardada Primasas Cebador Nuevo cebador
  • 55. Genes, enzimas y caracteres En 1901, el médico británico Garrod estableció la relación entre los genes y las sustancias químicas al ver que enfermedades genéticas dependían de sustancias presentes o ausentes. En 1948, Beadle y Tatum establecieron la relación entre genes y enzimas, llegando a la conclusión de que las alteraciones de los nucleótidos alteraban la secuencia de aminoácidos de las enzimas.
  • 56. Al alterarse los enzimas, se alteran las rutas metabólicas en las que intervienen y no se producen las sustancias finales de dichas rutas, alterándose el carácter que depende de dichas enzimas. Genes, enzimas y caracteres
  • 57. Por lo tanto, para que se expresen los genes en los distintos caracteres, tienen que traducirse a proteínas. Este proceso consta de varias fases. Genes, enzimas y caracteres
  • 58. SÍNTESIS PROTEÍCA: Fases Transcripción: ADN  ARNm, ARNr y ARNt Traducción: ARNm  Secuencia de aminoacidos Procesamiento de Proteínas Formación de Estructuras: Primaria, Secundaria, Terciaria y Cuaternaria.
  • 60. Introducción La transcripción del ADN es el primer proceso de la expresión génica. Mediante este proceso se pasa la información contenida en la secuencia de ADN a la secuencia de aminoácidos de la proteína utilizando diversos ARN como intermediarios.
  • 61. La transcripción: requisitos La síntesis de ARN se produce gracias a la acción de la enzima ARN polimerasa. Necesita una molécula de ADN como molde o patrón para establecer la secuencia específica de bases del ARN que se va a sintetizar.
  • 62. La transcripción: requisitos La ARN polimerasa se fija a regiones específicas del ADN (regiones promotoras que no se transcriben) para comenzar su acción a partir de ese punto.
  • 63. Son enzimas complejas formadas por varias subunidades (holoenzimas) No requiere cebador. No tiene la función de corregir errores. Sintetiza en sentido 3’ En procariotas hay un sólo un tipo con múltiples subunidades. ARN polimerasa
  • 64. ARN polimerasa En eucariotas hay 3 tipos de ARN- polimerasa: I sintetiza ARNr (El ARN de las subunidades grandes de los ribosomas) II sintetiza ARNm (mensajero) III sintetiza ARNt, ARNr 5S (el ARN de la subunidad pequeña de ribosomas)
  • 65. Tan solo se transcribe una de las dos hebras de ADN. Se la llama hebra molde, sin sentido o no codificante. La otra hebra es la no transcrita, inactiva, codificante. ADN ARN
  • 66. (5)’ CGCTATAGCG (3’)  cadena codificadora del ADN (la secuencia de ARN es idéntica a esta cadena, salvo por tener uracilo en vez de timina. Por eso se la llama no transcrita, con sentido o codificante) (3’) GCGATATCGC (5’)  cadena molde del ADN. (la secuencia de ARN es complementaria de esta cadena, Por eso se la llama transcrita, sin sentido o no codificante) (5’) CGCUAUAGCG (3’)  transcrito de ARN Orientación y nomenclatura de las cadenas en relación a la transcripción ADN ARN
  • 67. ¿Qué cadena de la doble hélice es la codificadora? Depende de cada gen, no es una propiedad del cromosoma. Siempre se transcribe en dirección 3’ ADN ARN
  • 69. 15/02/2016 9:50 69 EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS 1. INICIACIÓN 2. ELONGACIÓN 3. TERMINACIÓN
  • 70. HOLOENZIMA = 4 subunidades 2 a (alfa): ensamblan el enzima y promueven interacciones b (beta): actividad catalítica b’: se une al ADN ω (omega): ensamblaje y regulación expresión  (sigma): se une al promotor y posiciona a la holoenzima en el sitio de inicio ARN polimerasa en procariotas Curiosidad
  • 71. El promotor de un gen es la sección de ADN que controla el inicio de la transcripción. Es una secuencia específica de ADN, generalmente TATA (caja TATA). Es a donde se une la ARN polimerasa. Inicio
  • 72. Inicio Los promotores se localizan en los extremos 5' de los genes, a -35 y -10 nucleótidos del comienzo del gen (+1), y a ellos se une la ARN pol. La ARN pol, unida al promotor, abre la doble hélice de ADN.
  • 73. Inicio Primero se une al promotor -35 . Luego avanza hasta el -10 donde la la subunidad que la ayudó a fijarse () se desprende. La ARN pol avanza hasta el primer nucleótido del gen y comienza a transcribir.
  • 74. Inicio La ARN polimerasa comienza a unir ribonucleótidos trifosfato mediante enlaces fosfodiéster. Lo hace sin necesidad de cebador. Una vez que se forma el primer enlace fosfodiéster (con separación de un pirofosfato), acaba la etapa de iniciación. Una vez comenzada la síntesis, el promotor queda libre para volver a funcionar de nuevo.
  • 76. 15/02/2016 9:5076 Adición de sucesivos ribonucleótidos. Sentido de lectura del ADN por la ARN pol: 3’  5’ Sentido de síntesis ARN: 5’  3’ Se sintetiza la cadena complementaria. Elongación
  • 77. Elongación La ARN polimerasa reconoce a los ribo nucleótidos trifosfato entrantes. La ARN polimerasa cataliza la formación del enlace fosfodiéster y se separa un pirofosfato (P-Pi) Se aprovecha la energía desprendida ya que es anabolismo
  • 78. Terminación La terminación está señalizada por ciertas secuencias del ADN que hacen que la ARN polimerasa se detenga. Estas secuencias forman un bucle al final del ARN. Así se favorece la separación del ARN, el ADN y la ARN polimerasa. El ADN se espiraliza de nuevo.
  • 80. Terminación En bacterias, con mucha frecuencia, los ARN-m son poligénicos o policistrónicos, de manera que un solo ARN-m contiene información para la síntesis de varios polipéptidos distintos.
  • 81. 15/02/2016 9:50 81 EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS 1. INICIO 2. ELONGACIÓN 3. TERMINACIÓN
  • 82. Diferencias con procariotas Existen varias diferencias con procariotas: Existen tres tipos de ARN- polimerasa. Se necesitan factores de transcripción (que se unen al promotor) para que se pueda unir a ellos la ARN-polimerasa
  • 83. Los genes están fragmentados por fragmentos sin sentido por lo que el ARN transcrito necesita un proceso de maduración. El ADN está enrollado a histonas formado nucleosomas y tiene que extenderse para transcribirse. Los genes que se transcriben continuamente, están continuamente extendidos. Diferencias con procariotas
  • 84. ARN polimerasa Existen tres tipos de ARN polimerasa ARN polimerasa I, 13 subunidades. Sintetiza subunidad grande de ribosomas (rARN). ARN polimerasa II, 12 subunidades. Sintetiza los precursores de los mARN. ARN polimerasa III, 17 subunidades. Sintetiza la subunidad pequeña de ribosomas rARN) y tARN.
  • 85. Inicio En eucariotas se necesitan toda una serie de factores de transcripción que ejercen de factores de iniciación Se unen a secuencias concretas de ADN (promotor en posición -25 nucleótidos) para reconocer el sitio donde ha de comenzar la transcripción.
  • 86. Inicio Un factor de transcripción es una proteína que regula la transcripción, pero que no forma parte de la ARN polimerasa. Para que se pueda unir el factor de transcripción actúa una helicasa que separa las hebras de ADN en la secuencia del promotor (TATA).
  • 87. Iniciación Entonces ya se unen los factores de transcripción permitiendo el acceso de la ARN polimerasa II al molde de ADN. La ARN polimerasa II tiene como función establecer enlaces fosfodiester entre ribonucleótidos trifosfato. Una vez que se forma el primer enlace, acaba la etapa de iniciación y comienza así la siguiente etapa
  • 88. Elongación La ARN polimerasa II cataliza la elongación de cadena del ARN. Se van añadiendo los nucleótidos trifosfato. Para establecer los enlaces fosfodiéster, se desprende un pirofosfato (P-Pi) y se aprovecha la energía desprendida. Básicamente es igual que en procariotas.
  • 89. TERMINACIÓN El ARNm que se sintetiza es más largo de lo necesario. Hay señal de corte (AAUAA). Se corta 20 nucleótidos después de dicha señal. El ARN se separa del ADN y de la ARN pol. 89
  • 90. Procesos postrascripcionales Adición del casquete CAP Adición de cola de poli-A Splicing Traslado Acoplamiento Degradación
  • 91. Adición del casquete CAP El CAP es un ribonucleótido modificado de guanina que se añade al extremo 5' de la cadena del ARNm transcrito mediante un enlace fosfodiéster. Es necesario para el proceso normal de traducción del ARN, para mantener su estabilidad y el acceso apropiado del ribosoma. CAP
  • 92. Adición de cola poli-A Secuencia larga de nucleótidos de Adenina (100-200) al extremo 3. Su misión es proteger y facilitar el viaje al citoplasma.
  • 93. Splicing En eucariotas el ADN tiene en cada gen intrones y exones: Los intrones no se traducen a proteína. Los exones sí se traducen. Ambos se transcriben y aparecen transcritos en el ARNm. Antes de la traducción, es necesario eliminar los intrones que no se van a traducir.
  • 94. Splicing La ARN Ligasa pega los trozos (exones) tras la retirada de los intrones Es el proceso de corte y empalme de ARN. Este proceso es muy común en eucariotas, pudiéndose dar en cualquier tipo de ARN aunque es más común en el ARNm.
  • 95. Autosplicing Corte y empalme en el que el propio intrón actúa como catalizador en su eliminación, por lo que no se requiere de proteínas enzimáticas. Cuando un fragmento de ARN tiene actividad catalítica se le denomina ribozima.
  • 96. Splicing Alternativo Proceso que permite obtener, a partir de un transcrito primario de mARN o pre-ARNm, distintas moléculas de mARN maduras, para la síntesis de diferentes proteínas. NO
  • 99. ARNm primario o ARNhn (heterogéneo nuclear) Transcripción procariotas vs eucariotas
  • 100. La transcripción y la traducción son procesos simultáneos. La transcripción y la traducción no son procesos simultáneos Transcripción procariotas vs eucariotas Procariotas Eucariotas El ARNm es policistrónico: tiene información para más de una proteína y transcribe más de un gen El ARNm es monocistrónico: tiene información solo para una proteína y solo transcribe un gen
  • 103. Traducción La traducción es la transferencia de información de un lenguaje (ácido nucleíco) a otro (proteína). El proceso de traducción sucede en el Citoplasma de la célula una vez que el ARNm sale del núcleo finalizada la transcripción. Se produce en 3 etapas: Iniciación, elongación y terminación.
  • 104. Traducción Intervienen dos tipos de enzimas fundamentales: aminoacil-ARNt-sintetasas: unen los aminoácidos con el correspondiente ARNt. Hay 20 distintas, una para cada aminoácido y su ARNt. peptidil transferasa: es una ribozima aminoacil transferasa que se encarga de la formación de enlaces peptídicos entre aminoácidos adyacentes. Es parte del ARN de los ribosomas.
  • 105. Código genético Es el utilizado por los ribosomas para descifrar el ARNm y transformar su lenguaje (nucleótidos) en lenguaje de proteínas (aminoácidos) La combinación formada por un triplete de tres bases (codón) del ARNm dice qué aminoácido se tiene que incorporar a la cadena polipeptídica en crecimiento.
  • 106. Existe un triplete o codón de inicio de síntesis que determina Metionina (AUG) y tres tripletes o codones de final de síntesis: UAA, UAG, UGA. Se dice que el código es degenerado porque hay más de un triplete para la mayoría de aminoácidos y hay tripletes sin sentido (los de final de síntesis) Código genético
  • 107. UNIVERSAL Compartido por todos los organismos conocidos incluso los virus. El código ha tenido un solo origen evolutivo. Existen excepciones en las mitocondrias y algunos protozoos. A excepción de la metionina y el triptófano, cada aminoácido está codificado por más de un codón. Esto es una ventaja ante las mutaciones. DEGENERADO Cada codón solo codifica a un aminoácido. SIN IMPERFECCIÓN Los tripletes se disponen de manera lineal y continua, sin espacios entre ellos y sin compartir bases nitrogenadas CARECE DE SOLAPAMIENTO Posibilidad de solapamiento Met Gli Tre His Ala Fen Ala Met Leu Leu Pro Solapamiento Codones de iniciación Código genético
  • 108. 1ª Base 2ª Base 3ª Base UCC UCA UCG UCU Ser Ventaja frente a mutaciones
  • 109. LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS ARN MENSAJEROAMINOÁCIDOS ENZIMAS Y ENERGÍA SUBUNIDAD PEQUEÑA SUBUNIDAD GRANDE SITIO A SITIO P AMINOÁCIDO POLIPÉPTIDO Dondesesitúael Tienen dos lugares Formados por RIBOSOMAS Donde se unen los Donde se une el Donde se une el EXTREMO 3’ Tiene dos zonas ARN DE TRANSFERENCIA Por donde se une al ANTICODÓN AMINOACIL-ARNt -SINTETASA Como la necesita Traducción: necesidades
  • 110. ARN transferente El ARNt tiene cuatro brazos, tres de ellos con un bucle que se enrolla en hélice: Brazo D por donde se une a la enzima peptidil transferasa del ribosoma. Esta enzima cataliza el enlace peptídico entre los aminoácidos que llegan. Brazo TYC por el que se une al ribosoma.
  • 111. Brazo anticodón donde se encuentra el triplete complementario del codón del ARNm. De este triplete depende el aminoácido que va a transportar el ARNt. Brazo aceptor: es el que carece de bucle y donde están los extremos 3’ y 5’ del ARN. En su extremo 3’, que es el más largo, hay un triplete CCA a donde se unirá el aminoácido determinado por el anticodón. ARN transferente
  • 112. Unión al ribosoma Unión al codon complementario del ARNm en el ribosoma NOTA.- EXISTEN TANTOS ARNt como aminoácidos, uno para cada uno, en total 20 clases de ARNt ARN transferente Sitio de unión del aminoácido Anticodón Unión a la peptidil- transferasa en el ribosoma Unión del aminoácido Triplete de unión: siempre CCA Brazo D Brazo TYC Brazo D Brazo TYC Anticodón Estructura terciaria del ARNt
  • 113. ARN de transferencia activado: cargado con el aminoácido correspondiente ARN transferente
  • 114. Ribosomas Unión del ARNt con la cadena polipeptídica en formación Unión del ARNt que llega con el nuevo aminoácido E Sitio que ocupa el ARNt que está a punto de irse Sitio E
  • 116. Activación de los aminoácidos Consiste en la formación de aminoacil- ARNt (aminoácido unido al ARNt). Se requiere una enzima Aminoacil-ARNt-sintetasa ATP que desprende P-Pi y deja un AMP unido al aminoácido aprovechando la energía desprendida. La energía liberada del ATP al liberar los P-Pi, es la utilizada en la síntesis del aminoacil-ARNt
  • 117. El aminoácido se une al brazo aceptor del ARNt, a un triplete que siempre es CCA. La enzima Aminoacil-ARNt-sintetasa es específica de cada aminoácido. El aminoácido queda unido al AMP formando el acido aminoaciladenílico y sólo lo libera al unirse al ARNt. Hay 20 ARNt distintos, uno para cada aminoácido. Activación de los aminoácidos
  • 118. + + + Aminoacil ARNt - sintetasa Aminoácido Ácido aminoaciladenílico ARNtx Aminoácil -ARNtx Existen al menos 20 aminoacil- ARNt-sintetasas, una para cada aminoácido. Son enzimas muy específicas La unión se realiza en el extremo 3’ del ARNt Activación de aminoácidos
  • 119. aa aa Aminoacil ARNt sintetasa ATP Ácido aminoaciladenílico aa AMP PPi AMP Existen al menos 20 aminoacil- ARNt-sintetasas, una para cada aminoácido. Son enzimas muy específicas Activación de aminoácidos
  • 120. Iniciación Comienza cuando la subunidad menor del ribosoma se une al ARNm. Luego el primer ARNt se empareja con el primer codón (AUG) del ARNm llevando siempre el aminoácido correspondiente (metionina). Esta unión se hace en el sitio P del ribosoma. Ahora la subunidad ribosómica mayor se une a la menor, y el ARNm queda encerrado por ambas
  • 122. Elongación Llega un segundo ARNt con el aminoácido correspondiente al anticodón complementario del siguiente codón y se sitúa en el sitio A del ribosoma. Se establece el enlace peptídico entre la metionina y este segundo aminoácido. Dicho enlace es catalizado por la peptidil transferasa que es una de las enzimas (ribocimas) que constituyen el ribosoma.
  • 123. Elongación Una vez unidos los aminoácidos, el primer ARNt se suelta de la metionina, quedando el nuevo ARNt con el dipéptido en el sitio A El ribosoma avanza un codón (translocación ribosomal y el ARNt con el dipéptido pasa al sitio P. El ARNt primero queda en el sitio E, de donde se irá posteriormente. El sitio A queda libre a la espera de otro aminoacil-ARNt
  • 124. Todo esto requiere energía que cede un GTP. Llega otro ARNt con su aminoácido al sitio A. Se establece el segundo enlace peptídico. De nuevo avanza el ribosoma un codón El ARNt anterior se va. Y así sucesivamente hasta el final Elongación
  • 125. Anticod ón Complementar iedad entre codón y anticodón GTP GDP 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’GTP GDP Enlace peptídico El aminoácido se traslada al otro ARNtARNt Aminoácido Se libera el ARNt que ha cedido el aminoácido Elongación
  • 126. Terminación Al finalizar la secuencia, el ribosoma se encuentra con codones de terminación para los que no hay ARNt (UAA, UAG, UGA). Cuando se llega a estos codones, la traducción se detiene. La cadena polipeptídica (proteína) se desprende. Las subunidades ribosomales y el ARNm se separan.
  • 127. El codón de finalización puede ser UAA, UAG o UGA Último ARNt Factor de liberación Polipéptido libre Separación del ARNm y las subunidades ribosómicas 3’ 5’ 3’ 5’ Terminación
  • 128. Microfotografía electrónica (MET, falso color) de un polirribosoma. Si el ARN a traducir es lo suficientemente largo puede ser leído por más de un ribosoma a la vez, formando un polirribosoma o polisoma. Ribosoma Proteína en formación Poliribosomas o polisomas
  • 130. Plegamiento de las proteínas. Las proteínas según se van sintetizando, se van plegando para adquirir las estructuras tridimensionales propias de cada una de ellas. Estructura primaria. Estructura secundaria. Estructura terciaria. Estructura cuaternaria.
  • 132. Preparación de la proteína. Después de la traducción hay proteínas enzimáticas que ya son activas. Otras necesitan eliminar algunos aminoácidos (generalmente se libera la metionina o aminoácido iniciador) Algunas tienen que unirse a cofactores o coenzimas.
  • 133. Anaya
  • 134. Anaya En el siguiente PowerPoint ya que pertenece al mismo tema.
  • 136. PAU Con un esquema /dibujo describe el mecanismo mediante el cual las células eucarióticas obtienen un ARN mensajero maduro a partir de ADN. Representa los elementos que intervienen en proceso, así como las funciones de cada uno de ellos en el mismo. Define el concepto de promotor e indica su papel en dicho proceso. Desarrolla un texto de no más de diez líneas en el que se relacionen de manera coherente, dentro de un fenómeno biológico, los siguientes conceptos: polimerasa de ADN, cebador, semiconservativa, fase S del ciclo celular.
  • 137. Desarrolla un texto de no más de diez líneas en el que se relacionen de manera coherente, los siguientes conceptos: transcripción, polimerasa de ARN, ADN molde, proteína, traducción del mensajero. Desarrolla un texto de no más de diez líneas en el que se relacionen de manera coherente, dentro de un fenómeno biológico, los siguientes conceptos: maduración ARN, intrones, ribosomas, código genético. PAU
  • 138. Describe, ayudándote de un dibujo, el mecanismo de la transcripción de un gen eucariótico, indicando los principales elementos moleculares que intervienen en el mismo. ¿Cómo tiene lugar la maduración del producto obtenido para generar el ARNm? ¿En qué lugar de la célula tiene lugar la transcripción? Describe, mediante un dibujo claro, el mecanismo de replicación del material genético indicando en cada etapa los elementos moleculares más importantes así como la posición naturaleza y función del cebador y los carbonos terminales de cada cadena (3’ ó 5’) PAU
  • 139. Identifique el proceso biológico (localizado en el citoplasma) que aparece en la figura e identifique su finalidad, así como dos elementos que componen la estructura representada. Desarrolla un texto de no más de 10 lineas en el que se relacionen, de manera coherente, los siguientes conceptos: promotor, ARN-polimerasa, maduración del mensajero, gen. PAU
  • 140. FIN