(technique de Kleinhauer-Betke)
Par : S / Abdessemed
Abdsalah
 Détecter l’hémoglobine F présente dans
les globules rouges. Ce test très utile
lors de la réapparition ou de la...
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 La présence de l’hémoglobine F est mise
en évidence par la technique de
Kleinhauer-Betke qui utilise la proprié...
Abdsalah
 Sang prélevé sur EDTA.
 Ethanol à 80%.
 Tampon acide :
-Solution A : Na2HPO4 0,2 mol/l (28,4 g/l)
-Solution B...
Abdsalah
1) Faire des frottis frais et fixer à
l’éthanol pendant 5 min.
2) Laver les frottis à l’eau et sécher à
l’air.
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Abdsalah
4) Laver les frottis à l’eau et les colorer
pendant 1 min dans la solution d’éosine.
5) Faire un témoin normal en...
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 L’hémoglobine F est acido-résistante.
 Les globules rouges contenant de
l’hémoglobine F sont colorés en rouge ...
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 A la naissance, 60 à 80% du pigment du
sang de cordon est de l’hémoglobine F.
Chez l’adulte, il y a moins de 1 ...
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 Un taux anormalement élevé
d’hémoglobine F se voit aussi au cours
de l’anémie de Biermer, des aplasies, de
la m...
Abdsalah
 Dans les complications de la grossesse,
comme dans les grossesses molaires et
en cas d’hémorragie fœto-maternel...
Abdsalah
 Lorsqu’on craint une incompatibilité Rh,
cet examen est très utile pour détecter
la présence des globules rouge...
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Détection de l’hémoglobine fœtale par la méthode de l’élution acide

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Détection de l’hémoglobine fœtale par la méthode de l’élution acide

  1. 1. (technique de Kleinhauer-Betke) Par : S / Abdessemed
  2. 2. Abdsalah  Détecter l’hémoglobine F présente dans les globules rouges. Ce test très utile lors de la réapparition ou de la persistance de l’hémoglobine fœtale dans les globules rouges et, aussi, pendant la grossesse, lorsqu’on craint le passage des globules rouges fœtaux Rh positifs chez une mère Rh négative.
  3. 3. Abdsalah  La présence de l’hémoglobine F est mise en évidence par la technique de Kleinhauer-Betke qui utilise la propriété acido-résistante de l’hémoglobine F.  L’hémoglobine adulte est éluée par une incubation dans un tampon acide ; l’hémoglobine F peut alors être colorée par un colorant approprié.
  4. 4. Abdsalah  Sang prélevé sur EDTA.  Ethanol à 80%.  Tampon acide : -Solution A : Na2HPO4 0,2 mol/l (28,4 g/l) -Solution B : acide citrique 0,1mol/l (21,01 g/l) Mélanger 24,7 ml de la solution A et 75,3 ml de la solution B. Le pH doit être de 3,2. Garder la solution au réfrigérateur et vérifier le pH avant chaque usage.  Eosine à 1%
  5. 5. Abdsalah 1) Faire des frottis frais et fixer à l’éthanol pendant 5 min. 2) Laver les frottis à l’eau et sécher à l’air. 3) Placer les frottis verticalement dans la solution tampon à 37° C en agitant de haut en bas pour éviter les bulles d’air ; l’élution est complète après 5 à 15 min.
  6. 6. Abdsalah 4) Laver les frottis à l’eau et les colorer pendant 1 min dans la solution d’éosine. 5) Faire un témoin normal en utilisant du sang normal d’adulte et un témoin anormal avec un sang dans lequel on a mélangé artificiellement des globules d’adulte et des globules rouges fœtaux (ABO compatibles).
  7. 7. Abdsalah  L’hémoglobine F est acido-résistante.  Les globules rouges contenant de l’hémoglobine F sont colorés en rouge par l’éosine.  L’intensité de la coloration est en rapport avec la quantité d’hémoglobine F présente dans le globule rouge. L’hémoglobine adulte est éluée à un pH de 3,2.
  8. 8. Abdsalah
  9. 9. Abdsalah  A la naissance, 60 à 80% du pigment du sang de cordon est de l’hémoglobine F. Chez l’adulte, il y a moins de 1 % d’hémoglobine F dans le sang normal. Des quantités plus importantes sont présentes dans les thalassémies.
  10. 10. Abdsalah  Un taux anormalement élevé d’hémoglobine F se voit aussi au cours de l’anémie de Biermer, des aplasies, de la myélofibrose, des leucémies myéloblastiques de divers types et des syndromes myéloprolifératifs.
  11. 11. Abdsalah  Dans les complications de la grossesse, comme dans les grossesses molaires et en cas d’hémorragie fœto-maternelle, on observe également une augmentation du taux de l’hémoglobine F.
  12. 12. Abdsalah  Lorsqu’on craint une incompatibilité Rh, cet examen est très utile pour détecter la présence des globules rouges fœtaux dans le sang de la mère. Dans ce cas, il est nécessaire d’administrer à la mère, de façon précoce, l’immunoglobuline anti –D.

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