1. UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR
DE LOJA
HONGOS ENDOFITOS EN PLANTAS
MEDICINALES.
Primeras Jornadas Andinas de
Etnomedicina.
Jorge Ramírez
Solveig Tosi
Mayo, 2007
2. INTRODUCCION
La palabra endófito se deriva del griego
endon, que significa dentro y phyte que
significa planta.
Grupo muy interesante de
microorganismos asociados a plantas
terrestres y acuáticas.
Seis de los veinte medicamentos más
comúnmente prescritos son de origen
fúngico. (Gloer 1997)
3. INTRODUCCION
5 % de los hongos han sido descritos,
(Hawksworth 1991, 2001).
Gran Fuente potencial para nuevos Productos.
(Schulz et al., 2002).
Solo existen datos de hongos epifitos
asociados a diversas especies de Baccharis,
Piper y Borreria (Farr et al., 1995).
En la mayoría de Plantas la presencia de
hongos endófitos es beneficiosa. (Siegel &
Scharld, 1991)
4. INTRODUCCION
Las Plantas seleccionadas en función de:
Son plantas nativas de la zona Andina de Ecuador.
Son Plantas medicinales y por tal motivo utilizadas por la población
local (Zaragoza 2003)
El propósito principal del trabajo es aislar los hongos endófitos de 4
plantas ecuatorianas con interés medicinal: Baccharis latifolia (Ruiz
& Pav.) Pers., Baccharis obtusifolia Kunth Piper barbatum Kunth,
Borreria laevis (Lam.) Grises. Además determinar la interacción
entre los hongos endofitos aislados y microorganismos (hongos y
bacterias): Aspergillus niger, Stafilococcus aureus, Klebsiella
pneumomiae, Pseudomonas aeruginosa y Escherichia coli.
5. MATERIALES Y METODOS
Lugar de estudio
Al Sur del Ecuador en la
Provincia de Loja.
Figura 1: Localización geográfica de la provincia de Loja,
mapa creado en SIG-UTPL 2005.
Figura 2: Localización de las zonas de muestreo. En la zona 1 fueron
colectadas: Baccharis latifolia, Baccharis obtusifolia y Borreria laevis,
mientras que en la zona 2 se colecto Piper barbatum. Mapa creado en
el SIG-UTPL 2006
6. MATERIALES Y METODOS
Recolección y Tratamiento de la muestra
Las hojas se lavaron con agua potable y fueron esterilizadas
superficialmente por inmersiones consecutivas, durante 1 minuto en
etanol 70% (v/v), 10 minutos en hipoclorito de sodio 3% y 30 segundos
en etanol 70% (v/v) siguiendo el método reportado por Bills (1996).
Cada hoja
10 hojas al
azar
Inoculo al 1 2
azar / 1
pedazo
10 3 4
Individuos
Aislamiento
MEA
2-1 Medio MEA
2
MEA
2-2
MEA
2-3
7. MATERIALES Y METODOS
Evaluación de la Interacción Antagonista entre los
aislados Fúngicos y Hongos y Bacterias Patógenas.
Las bacterias fueron inoculadas con Tryptic Soy Agar (TSA;
DIFCO), como medio de cultivo e incubadas a 37 ºC, hasta
observar crecimiento.
Los hongos fueron inoculados con Potato Dextrosa Agar (PDA;
DIFCO), como medio de cultivo e incubados en el laboratorio a
temperatura ambiente (25 ± 2ºC) expuestos a periodos naturales
de luz y oscuridad.
8. MATERIALES Y METODOS
Prueba Hongo-Hongo
I % = (R − r) / r *100
Método Fokkema
(1973). Formula de
Van Den Heuvel.
9. MATERIALES Y METODOS
Prueba Hongo-Bacteria
Prueba similar a la anterior,
del un lado el micelio fúngico
y del otro la bacteria
10. RESULTADOS Y
DISCUSION
En la tabla, se enlistan los taxa de hongos encontrados en las
cuatro especies de plantas medicinales investigadas
Aislados Baccharis Baccharis
fúngicos Borreria laevis latifolia obtusifolia Piper barbatum
Alternaria-like X (20 %) X (10 %)
Alternaria sp. X (70 %) X (30 %) X (10 %)
Aspergillus sp. X (20%)
Coelomycetes X (20%)
Epicoccum-like X (10%) X (10 %)
Micelia sterilia X (100%) X (40%) X (10%) X (70%)
Nigrospora sp. X (10%)
Phoma-like X (10 %)
Stilbacea X (10%)
Zygomycetes-like X (10 %)
12. RESULTADOS Y
DISCUSION
Diversos taxa aislados, son: Alternaria, Epicoccum, Nigrospora,
Phoma resultando como hongos ambientales comunes, estos se
encuentran comúnmente en el aire, como epifitos o en asociación
con numerosos sustratos (Domsch et al., 1980).
Mayoritariamente se ha aislado Micelia sterilia en las cuatro
especies de plantas medicinales investigadas, hongos interesantes
que viven en posible asociación endófitica. Dato que arroga una
perspectiva muy amplia para el aislamiento de metabolitos
secundarios, de interés potencial.
13. RESULTADOS Y
DISCUSION
Pruebas de Interacción entre Hongos y Bacterias.
En la tabla , se presenta los resultados de la interacción antagonista de algunas de
las cepas de hongos aislados frente a microorganismos patógenos (Hongos y
Bacterias). El porcentaje de inhibición I1, esta referido a la inhibición del patógeno
sobre la cepa ensayada y el porcentaje de inhibición I2, esta referido a la inhibición
de la cepa sobre el patógeno.
Aislados Fúngicos Aspergillus niger
Klebsiella Pseudomonas Staphylococcus
I1 % I2 % Escherichia coli pneumonie aeruginosa aureus
Alternaria sp. 17,86 36,95 + + + +
Alternaria-like 26,78 17,37 + + + +
Phoma-like 37,5 8,7 + + + +
Nigrospora sp. 15,93 22 + + + +
Epicoccum-like 25 21 + + + +
Micelia sterilia 1 10,71 39,13 + * * +
Micelia sterilia 2 15.85 25.87 - - - -
Micelia sterilia 3 7.14 39.13 + + - +
Stilbacea 32,14 21,74 + + + +
14. RESULTADOS Y
DISCUSION
Cultivo Doble. Inhibición de K Cultivo Doble. Inhibición de E coli
pneumoniae de parte de Micelia de parte de Nigrospora sp.
sterilia 3
Cultivo Doble. Inhibición de Cultivo Doble. Inhibición de
Aspergillus niger de parte phoma- Aspergillus niger de parte
like. alternaria-like.
15. RESULTADOS Y
DISCUSION
El potencial bioactivo de los hongos aislados es prometedor, la
mayoría muestran propiedad antagonista positiva tanto con
bacterias como también con Aspergillus niger. Principalmente las
tres cepas que no han fructificado nombrados como Micelia sterilia,
exhiben antagonismo positivo.
16. CONCLUSIONES
Micelia sterilia fue la cepa fúngica mayoritariamente aislada en las cuatro
especies de plantas medicinales estudiadas, principalmente en Borreria
laevis (Lam.) Grises, se encontró presente en todos los individuos
muestreados.
Los géneros de Alternaria sp., fueron comúnmente aislados en Baccharis
latifolia (Ruiz & Pav.) Pers., Piper barbatum Kunth y Borreria laevis (Lam.)
Grises.
Los géneros Phoma-like y Nigrospora sp., además la Familia de Moniliales,
(Stilbacea), se aislaron de manera común en Borreria laevis (Lam.) Grises.
Los géneros, Zygomycetes-like, Aspergillus sp y los hongos Coelomycetes,
se aislaron de forma común en Piper barbatum Kunth.
Epicoccum-like, fue un género fúngico aislado tanto en Borreria laevis
(Lam.) Grises. como también en Piper barbatum Kunth
17. CONCLUSIONES
Los resultados de los ensayos de bioactividad, mediante cultivo doble,
evidencian que, Alternaria sp, Micelia sterilia 1(Hospedero Baccharis
latifolia), Micelia sterilia 2 (Hospedero Borreria laevis) y Micelia sterilia 3
(Hospedero Baccharis obtusifolia), muestran actividad antifúngica, aunque
débil contra Aspergillus Níger.
La mayoría de las cepas fúngicas testadas, muestras actividad
antibacteriana, en contra de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.
El resultado mas interesante se muestra en lo referente al Micelio estéril 3
(Hospedero Baccharis obtusifolia), pues este muestra una marcada
actividad antibacteriana, principalmente frente a Klebsiella pneumoniae.
