1. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
DE ALTA RESOLUCIÓN

2. INTRODUCCION
A comienzos del año 1903, el botánico ruso Mijaíl Tsweet usó columnas
de adsorción de líquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo,
clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de
vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un
material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes
de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas
coloreadas a lo largo de la columna.
Los primeros equipos de cromatografía de gases aparecieron en el
mercado a mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografía líquida de
alta resolución (HPLC: High pressure liquid chromatography) comenzó
a desarrollarse en los años 1960, aumentando su importancia en las
décadas siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica más
empleada. Sin embargo esto se irá modificando con el paso de los años

3. DEFINICIÓN
La cromatografía es un método físico de separación basado en la
distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil. En cromatografía
líquida la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna
que contiene a la fase fija. La cromatografía líquida “clásica” se lleva a
cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual está rellena con la
fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir
la fase móvil a través de la columna por efecto de la gravedad. Con el
objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de las
partículas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamaño de los
micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones para
lograr que fluya la fase móvil. De esta manera, nació la técnica de
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), que requiere de
instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones
requeridas.

4. OBJETIVOS
• Aprender y dar a conocer el proceso de una
cromatografía líquida de alta resolución y sus
diferentes tipos.
• Conoceremos la funcionalidad de las diferentes
partes del equipo.

5. IMPORTANCIA
• La cromatografía líquida es una técnica instrumental
utilizada ampliamente en los laboratorios, por su
excelencia cualitativa y cuantitativa, siendo, por tanto,
necesaria su comprensión. Sus distintas modalidades y
las técnicas operativas existentes, junto a los aspectos
prácticos que permitirán realizar análisis cualitativos y
cuantitativos, optimizarlos y cumplir con ellos los
protocolos de calidad.

6. TÉCNICA
La cromatografía de líquidos de ultra-alta resolución (UHPLC) es
una técnica que permite separar, identificar y cuantificar los
componentes de una mezcla compleja.
ANÁLISIS
Se realizan análisis cualitativos y cuantitativos de polifenoles y
carotenos.

7. REVISIÓN DE CONCEPTOS BÁSICOS.
Deposito
Matriz porosa
solida (fase
estacionario)
Fase móvil
Soporte
poroso
efluido
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

8. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

9. ESQUEMA DEL HPLC

10. MÉTODOS DE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
Método Abreviatura
Mecanismo
predominante
Liquida, solida o
de adsorción
LSC
Adsorción sobre la
superficie
Líquido LLC
Reparto entre fases
líquidas, una móvil y la
otra estacionaria.
Fase enlazada BPC
Reparto y / o adsorción
entre las fases móvil y
enlazada.
Afinidad --
Uso de la estructura de
ligantes inmovilizados
para unir
bioselectivamente la
proteína deseada.

11. CLASIFICACIÓN DE CROMATOGRAFÍA SEGÚN EL
MECANISMO DE SEPARACIÓN

12. CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL
(EXCLUSIÓN MOLECULAR)
La cromatografía de
filtración molecular es un
método de cromatografía
en columna por el cual las
moléculas se separan en
solución según su peso
molecular.

13. CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL
(EXCLUSIÓN MOLECULAR)

14. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
En este tipo de
cromatografía la F.E tiene
grupos cargados que
interaccionan
electrostáticamente con
iones de signo contrario de
fase móvil.

15. CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD
(POR LIGANDOS)

16. CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD
(POR LIGANDOS)
Polímero
con ligando
Proteína
de interés
matriz ligando Inmovilizador ligando
Complejo
purificado
complejo

17. CARACTERISTICAS
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN

18. • Elevada sensibilidad.
• Elevada aplicabilidad.
• Permite realizar análisis cualitativos exactos.
• Es adecuada para la separación de especies termolábiles y no volátiles.
• Aplicaciones principales: Técnica de separación para los materiales menos
volátiles e iónicos; análisis cuantitativo de multicomponentes.
• Fenómeno molecular: Reparto entre una solución líquida y un substrato.
• Ventajas en el análisis cualitativo: Separa materiales para su examen por
medio de otras técnicas.
• Ventajas en el análisis cuantitativo: Aplicación amplia a los materiales menos
volátiles, análisis de multicomponentes.
• Muestra promedio deseable: 10 mg
• Limitaciones del método: Se tarda en desarrollar el método
• Limitaciones para la muestra: Ninguna

19. INSTRUMENTACIÓN
PARA
CROMATOGRAFÍA DE
LÍQUIDOS

20. La Figura :muestra un esquema de los componentes fundamentales de un cromatografía de líquidos de alta
resolución típico
• Con objeto de alcanzar un caudal de eluyente razonable con rellenos
de tamaño de partícula entre 3 y 10 µm, se requieren presiones de
algunos cientos de kilos por centímetro cuadrado. Como
consecuencia de estas elevadas presiones, el equipo necesario para la
HPLC tiende a ser más sofisticado y caro que el que se utiliza en
otros tipos de cromatografía.

21. Un aparato moderno de HPLC se equipa con uno o más recipientes de vidrio o
de acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500 mL de un
disolvente. Los recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los
gases disueltos en general oxígeno y nitrógeno- que interfieren formando
burbujas en los sistemas de detección.
• RECIPIENTES PARA LA FASE MÓVIL Y SISTEMAS PARA EL
TRATAMIENTO DE LOS DISOLVENTES.

22. • Con frecuencia estos sistemas también contienen un dispositivo para la filtración del
polvo y de las partículas sólidas en suspensión de los disolventes.
Por ejemplo, una forma conveniente de tratar los disolventes antes de
introducirlos en el recipiente, consiste en filtrarlos mediante el vacío a
través de un filtro de poro muy pequeño. Este tratamiento elimina los
gases además de la materia en suspensión.

23. • Los instrumentos en la moderna HPLC están
equipados con unos dispositivos que permiten
introducir los disolventes desde dos o más recipientes
en una cámara de mezcla a una velocidad que varía
continuamente y la relación de volumen de los
disolventes se puede modificar lineal o
exponencialmente con el tiempo.

24.  Los requisitos para un sistema de bombeo en HPLC son rigurosos e
incluyen:
La generación de presiones por encima de 400 kg/cm2
Un flujo libre de pulsaciones
Un intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min
El control y reproducibilidad del caudal mejor del 0,5% relativo
componentes resistentes a la corrosión (juntas de acero inoxidable o teflón).
•SISTEMAS DE BOMBEO

25. Bombas reciprocas:
• TIPOS DE BOMBAS:
.
 Son las mas utilizadas
 Movimiento cíclico de uno o mas pistones con válvulas de entrada y
salida.
 Elementos comprensibles en el circuito atenúan variaciones.
 2 pistones es la opción mas adecuada.
.
 Desventaja:
Producen un flujo con pulsaciones.
 Ventajas:
Pequeño volumen interno (35 a 400 mL), sus altas presiones de salida (por encima
de los 500 kg/cm2), su fácil adaptación a la elución con gradiente, y sus caudales
constantes.

26. • Bombas de desplazamiento:
.
 Cámara con un embolo impulsado por un motor.
Ventajas:
flujo libre de pulsos, independientemente de viscosidad y
contrapresión.
Desventajas:
capacidad de bombeo limitado ( 0.25l), poco practica para
reposición y cambio de disolvente.

27. • Bombas neumáticas:
.
Ventajas:
Baratas. Exentas de impulsos.
Desventajas:
capacidad limitada y de presión de salida.
Caudal dependiente de la viscosidad del disolvente y de la contrapresión.
No sirven para elución con gradientes.
Presiones menores a 2000psi.

28. Un método sencillo de amortiguación contiene un fuelle
flexible o un gas compresible en la porción superior cerrada
de un tubo en T para absorber parte de la energía de
pulsación. Cuando la bomba se rellena esta energía se
libera para ayudar a suavizar la pulsación de presión.
• AMORTIGUADORES DE PULSOS

29. • Los volúmenes que se emplean han de ser muy pequeños, de unas pocas
decimas de micro litro a tal vez 500microlitos. Para evitar en
ensanchamiento de picos.
• SISTEMAS DE INYECCIÓN
DE MUESTRA
Inyección manual Inyección con bucles
• Sencilla.
• Evitar
despresurizació
n (micro
jeringas capaces
de resistir
1500psi.)
• Inyecciones a
flujo detenido.
• Inyección a
presiones de hasta
7000psi.
• Precisión de
decimas por
ciento.
• Volúmenes de
bucles entre 0.5 y
500microlitros.

30. Características:
Tubos rectos de acero inoxidable.
Longitud entre 10 y 30 cm.
Acoplables
Diámetro interno entre 4 y 10 mm.
Tamaño de partículas entre 5 y 10 um.
Columnas comunes: longitud 25cm, diámetro interno 4.6mm,
rellenos de partículas de 5um, : 40000 a 60000 platos/metro.
• COLUMNAS PARA
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

31. • Eliminación en materia de suspensión y los contaminantes de los disolventes.
• Sirve para saturar la fase móvil con la fase estacionaria y así minimizar las
perdidas de relleno.
• La composición del relleno debe ser semejante al de la columna analítica sin
embargo el tamaño de partícula es mayor al de la columna para minimizar
la caída de presión.
Pre columnas:
• Muchas veces se controla la temperatura de la columna en unas
pocas decimas de grado centígrado; y se obtienen mejores
cromotogramas.
• Controlan la temperatura entre la temperatura ambiente y 100° -
150°C.
Termostatos:
• PECULIAR:
• Bolas de vidrio o polímero, no porosas y esféricas con diámetros de 30 y
40um.
• Recubrimiento con una capa delgada y porosa de distintos compuestos y
recubrimiento adicional de fase estacionaria liquida y retenida por
absorción.
• PARTICULAS POROSAS:
• Micro partículas porosas con diámetros entre 3 y 10um.
• Preparadas por aglomeración a partir de partículas pequeñas
• Recubrimiento con peliculas orgánicas unidas químicamente o físicamente.
Tipos de rellenos de la columna:

32. DETECTORES
A diferencia de la cromatografia de
gases, en la cromatografía de líquidos
no hay detectores tan aplicables
universalmente ni tan fiables como los
detectores de ionización de llama y de
conductividad térmica. Uno de los
mayores retos en el desarrollo de la
cromatografía de líquidos ha sido el
perfeccionamiento de los detectores.

33. • Un detector ideal para cromatografía de líquidos debería poseer todas las propiedades
listadas en relación con la cromatografía de gases, con la excepción de que un detector
para cromatografía de líquidos no es necesario que sea sensible en un intervalo tan
grande de temperaturas. Además, un detector de HPLC debe tener un volumen interno
mínimo a f i n d e r e d u c i r e l e n s a n c h a m i e n t o d e
b a n d a .
• L o s d e t e c t o r e s e n c r o m a t o g r a f i a de líquidos son de
dos tipos básicos. Los detectores basados en una propiedad de la disolución responden
a una propiedad de la fase móvil, tal como el índice de refracción, la constante
dieléctrica, o l a d e n s i d a d , q u e s e m o d i f i c a p o r l a
p r e s e n c i a d e l o s a n a l i t o s . P o r
c o n t r a s t e , l o s d e t e c t o r e s b a s a d o s e n u n a
p r o p i e d a d d e l s o l u t o r e s p o n d e n a a l g u n a

34. En la Tabla 4.1 se indican los detectores más comunes
empleados en HPLC y algunas de sus propiedades más
importantes.

35. DETECTORES DE
ABSORVANCIA:
L a F i g u r a 4.5 m u e s t r a e l e s q u e m a d e u n a c u b e t a
d e f l u j o e n f o r m a d e Z p a r a l a m e d i d a d e l a
a b s o r b a n c i a d e l o s e f l u e n t e s d e u n a c o l u m n a
cromatográfica. A f i n d e m i n i m i z a r e l e n s a n c h a m i e n t o
d e b a n d a e x t r a c o l u m n a , el volumen de estas cubetas ha de ser lo menor
posible, de modo que los volúmenes se limitan por lo común de 1 a 10 µL y l a s
l o n g i t u d e s d e l a c u b e t a d e 2 a 10 m m . La utilización de cubetas
de este tipo está r e s t r i n g i d a a p r e s i o n e s n o m a y o r e s d e
u n o s 50 k g /c m 2

36. • D e t e c t o r e s d e a b s o r b a n c i a u l t r a v i o l e t a c o n
f i l t r o s .- Los detectores de absorción UV más simples son los fotómetros de filtros
con una lámpara de mercurio como fuente. Lo más común en estos casos es aislar la línea
i n t e n s a a 254 n m por medio de filtros; en algunos equipos también se pueden
utilizar las líneas a 250, 313, 334 y 365 n m e m p l e a n d o o t r o s
f i l t r o s .
• D e t e c t o r e s d e a b s o r b a n c i a u l t r a v i o l e t a c o n
mo n o c r o r n a d o r e s .- La mayoría de los fabricantes de instrumentos de HPLC
ofrecen detectores que consisten en un espectrofotómetro de barrido con óptica de red.
Algunos se limitan a la radiación ultravioleta; mientras que otros abarcan la radiación
u l t r a v i o l e t a y l a v i s i b l e .
Una de las formas de presentación de los datos espectrales, que resulta útil para la identificación
de las especies y para elegir las condiciones de la determinación cuantitativa, consiste en un
gráfico t r i d i m e n s i o n a l t a l c o m o e l q u e s e m u e s t r a
e n l a F i g u r a 4.6.
En este caso, los espectros se obtuvieron a intervalos de cinco segundos. La aparición y
desaparición d e c a d a u n o d e l o s e s t e r o i d e s e n e l
e f l u e n t e d e l a c o l u m n a r e s u l t a e v i d e n t e .

38. • D e t e c t o r e s d e a b s o r b a n c i a e n e l
i n f r a r r o j o . C o m e r c i a l m e n t e s e o f r e c e n d o s
t i p o s d e d e t e c t o r e s d e i n f r a r r o j o . El primero con
barrido de longitud de onda que proporcionan tres segmentos de filtro semicirculares. El
segundo, mucho más s o f i s t i c a d o , e s u n t i p o d e
d e t e c t o r i n f r a r r o j o q u e s e b a s a e n l o s
i n s t r u m e n t o s d e t r a n s f o r m a d a d e F o u r i e r .
U n a d e l a s m a y o r e s l i m i t a c i o n e s a l u s o d e
l o s d e t e c t o r e s d e i n f r a r r o j o s e d e b e a l a
b a j a t r a n s p a r e n c i a d e m u c h o s d e l o s
d i s o l v e n t e s q u e s e u t i l i z a n . P o r e j e m p l o ,
l a s bandas anchas de absorción i n f r a r r o j a d e l a g u a y
d e l o s a l c o h o l e s i m p i d e n prácticamente e l u s o d e
e s t e d e t e c t o r p a r a m u c h a s a p l i c a c i o n e s .
• D e t e c t o r e s d e f l u o r e s c e n c i a .- L o s detectores de
fluorescencia para HPLC son semejantes en diseño a l o s fluorímetros y
espectrofluorímetros. En la mayoría de ellos, la fluorescencia se detecta por medio de
un detector fotoeléctrico colocado perpendicularmente respecto al haz de excitación. Los
detectores más sencillos utilizan una fuente de excitación de mercurio, y uno o más
filtros para aislar la radiación fluorescente. Los futuros desarrollos en los detectores de
fluorescencia probablemente se basarán en el uso de fuentes de láser

39. • Detectores de índice de refracción Los detectores de índice de refracción tienen
la ventaja de que responden a casi todos los solutos. Es decir, son detectores
universales análogos a l o s d e t e c t o r e s d e l l a m a e n
c r o m a t o g r a f i a de gases. Además, s o n f i a b l e s y
n o d e p e n d e n d e l c a u d a l . Sin embargo, son muy sensibles
a los cambios de temperatura, y se han de mantener a una temperatura constante
en unas pocas milésimas de grado centígrado. Por otra parte, no son tan
sensibles como la mayoría de los otros detectores, y por lo general no se
pueden utilizar en la elución c o n g r a d i e n t e .
• D e t e c t o r de dispersión d e l u z
Recientemente, se ha comercializado un nuevo tipo de detector general para la
HPLC, el detector de dispersión d e l u z (E L S D ). E n e s t e
detector, el efluente de la columna se pasa a un nebulizador donde se convierte en
una fina niebla mediante un flujo de nitrógeno o aire. Las finas gotitas se llevan a
través de un tubo de conducción a temperatura controlada donde tiene lugar la
evaporación de la fase móvil, lo que origina unas finas partículas d e
a n a l i t o . La nube de partículas d e a n a l i t o pasa a través de un
haz láser. Mediante un fotodiodo de silicio se detecta la radiación
d i s p e r s a d a p e r p e n d i c u l a r m e n t e a l
f l u j o .

40. • D e t e c t o r e s electroquímicos
Los fabricantes de instrumentos proporcionan en la actualidad varios tipos de
detectores electroquímicos. Estos dispositivos se basan en cuatro métodos
electroanalíticos q u e i n c l u y e n l a amperometría, l a
voltamperometría, l a coulombimetría y l a conductimetría.

41. PARÁMETROS
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN

42.  Diámetro interno
El diámetro interno de una columna de HPLC es un aspecto crítico que
influye en la sensibilidad de la detección y la selectividad de separación en
gradiente de elución. También determina la cantidad de analito que puede
ser cargada en la columna. Las columnas de diámetro interno más grande
(>10 mm) se utilizan normalmente en aplicaciones industriales tales como la
purificación de un producto farmacéutico para su uso posterior. En cambio,
las columnas de diámetro interno menor (4-5 mm) se utilizan en el análisis
cuantitativo de las muestras, y se caracterizan por el aumento la sensibilidad
y la minimización del consumo de disolventes que conllevan. Estas
columnas se suelen denominar columnas de rango analítico y normalmente
están asociadas a un detector UV-VIS. Aparte, existen otros tipos de
columnas, como las de tipo capilar, con un diámetro inferior a 0.3 mm,
utilizadas principalmente en espectrometría de masas.

44.  Medida de las partículas
La mayoría de HPLC tradicionales se realizan con una fase estacionaria unida al
exterior de partículas esféricas de silica. Estas partículas pueden tener diferentes
medidas, siendo las de 5um de diámetro las más utilizadas. Partículas más
pequeñas ofrecen una mayor superficie y una mejor separación, pero la presión
que se requiere por obtener una velocidad lineal óptima aumenta de forma
inversamente proporcional al cubo del diámetro de la partícula. Esto significa
que disminuir la medida de las partículas a la mitad, manteniendo el tamaño de
la columna de la misma, habrá el doble de rendimiento, pero aumentaría la
presión requerida por un factor de cuatro.
Las partículas más grandes se utilizan en HPLC preparativa y para aplicaciones
no-HPLC tales como la extracción en fase sólida.

46.  Tamaño de poro
Muchas fases estacionarias son porosas para proporcionar una mayor
superficie. Los poros pequeños proporcionan una mayor superficie
mientras que los poros de mayor medida proporcionan una cinética
mejor, especialmente para los compuestos de tamaño más grande; por
ejemplo, una proteína que sea ligeramente más pequeña que el tamaño
de los poros puede entrar, pero difícilmente saldrá con facilidad.

47. 
Presión del sistema
La presión de las bombas es variable según el modelo y fabricante, pero su
rendimiento se mide en su capacidad para producir una velocidad de flujo constante
y reproducible. La presión puede lograr valores de hasta 40 MPa (o unas 400
atmósferas). Los aparatos más modernos de HPLC incorporan mejoras para poder
trabajar a presiones más altas y, por lo tanto, poder utilizar partículas de tamaño más
pequeño en las columnas (< 2 micrometros). Estos nuevos
aparatos, denominados Ultra Performance Liquid Chromatograp orma general para
designar este tipo de aparatos).
Estos sistemas "Ultra High Performance Liquid Chromatography" o RSLC/UHPLCs
pueden trabajar a velocidades de hasta 100 MPa, o alrededor de 1.000 atmósferas. El
término "UPLC" es una marca comercial de Waters Corporation, pero a veces se
utiliza para referirse a la técnica más general.

48. Cromatografía de fase normal
Fue el primer tipo de HPLC, separaba analito basándose
en la polaridad.
Este método usa una fase estacionaria
polar(Agua, Soluciones "Amortiguadoras de
pH", Acetonitrilo, Metanol) y una fase móvil no polar
(hexano ,Tetracloruro de Carbono, Benceno) que se usa
cuando el analito es polar. El analito polar es retenido por
la fase estacionaria polar. La adsorción aumenta con la
polaridad del analito y la interacción entre analito y fase
estacionaria.

49. Cromatografía de fase inversa
La cromatografía de fase reversa se basa en el principio
de las interacciones hidrofóbicas que resultan de las
fuerzas de repulsión entre un disolvente relativamente
polar (Agua, Soluciones "Amortiguadoras de
pH", Acetonitrilo, Metanol) , y una fase estacionaria
apolar (Generalmente Sílica injertada con cadenas de
grupos orgánicos de 8 y 18 átomos de Carbón (C8 y
C18). El efecto hidrofóbico disminuye con la adición
de disolvente apolar a la fase móvil. Esto modifica el
coeficiente de partición de forma que el compuesto se
mueve por la columna y eluye.

50. También conocida como cromatografía de
gel permeante o cromatografía de gel
filtrante. Separa las partículas en función del
tamaño. Es una cromatografía de baja
resolución y sirve para determinar
estructuras terciarias y cuaternarias de
proteínas y es la técnica común para
averiguar el peso molecular de polímeros
sintéticos y naturales.
Cromatografía de exclusión por tamaño

52. La retención está basada en la atracción entre iones del soluto y la carga complementaria
de la fase estacionaria. Si los iones del soluto y la fase estacionaria tienen la misma
carga, son excluidos. Algunos intercambiadores de iones son: Resinas de Poli estireno:
permite entrecruzamientos que dan estabilidad a la cadena .Celulosa: Tiene tamaño de
poros más grandes y bajas densidades de carga que los hacen ideales para la separación
de proteínas .Poro controlado de vidrio o silicona porosa.
Los intercambiadores de iones favorecen la unión de iones de mayor carga y radio
inferior. Un incremento en el contra-ión (con respecto a los grupos funcionales de
resinas) reduce el tiempo de retención. Un incremento del pH reduce el tiempo de
retención en el intercambio catiónico, pero bajar el pH reduce la retención en intercambio
aniónico.
Se usa en la purificación de agua, pre concentración de componentes
traza, cromatografía de intercambio de ligandos, cromatografía de intercambio de iones
de proteínas, intercambio de aniones a alto pH de carbohidratos y polisacáridos.
Cromatografía de intercambio iónico

54. Se basa en las propiedades de sustancias bio-activas para
formar complejos estables, específicos y reversibles. La
formación de los complejos implica fuerzas moleculares
como Van der Waals, electrostática, dipolo-dipolo,
hidrofóbicas y puentes de hidrogeno. Una unión
bioespecífica se forma por acción simultánea de estas fuerzas
en los sitios de unión.
Cromatografía de bioafinidad

57. Conservantes antioxidantes:
 Se usa el gradiente de HPLC con un detector colorimétrico para
medir simultáneamente los nueve antioxidantes más comunes
Hipoclorito , iodo ..etc
Carbohidratos simples:
 Usar HPLC con ELSD elimina la necesidad de usar bases fuertes
o alto pH, convirtiéndose en un método no destructivo.
.
Aplicación al análisis de alimentos

58. La adición de mono y disacáridos a bebidas y zumos sirve
como propósito de enriquecer el sabor. Para determinar si
la cantidad añadida es correcta se miden los azucares
usando HPLC de intercambio iónico con detección de
pulso amperométrico con detectores de refracción o
ultravioletas.
Análisis de carbohidratos en las bebidas

59. Flavonoides y fenoles
 En el vino la medición de estas sustancias permite la
determinación del color, la edad y las variedades de uva
usadas. El HPLC en combinación con colorímetros, permiten
la determinación de hasta 22 compuestos diferentes
simultáneamente.
Lípidos
 La determinación de lípidos animales y vegetales como:
colesterol, triglicéridos, glicéridos y esteroles, se basa en el
uso del HPLC

60. Catequinas del té
 Las catequinas son flavonoles del té, posiblemente
anticancerígenos. Se usa HPLC con hidrólisis enzimática
para detectar estas sustancias tan beneficiosas.
Triglicéridos:
 HPLC con ELSD permite la separación y caracterización
de todos los tipos detriglicéridos