Metodo citoquimicos
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metodos citoquimicos de tincion

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Metodo citoquimicos Presentation Transcript

  • 1. METODO CITOQUIMICOS
  • 2. • El objetivo de estos metodos es la localizacion e identificacion de las sustancias quimicas constituyentes de las celulas, para lo cual hay dos lineas de investigacion.
  • 3. • 1.-obtencion de fracciones subcelulares y su posterior analisis bioquimico,• 2.- determinacion de diferentes compuestos quimicos en el interior de la celula.
  • 4. ¿QUE ES LA CITOQUIMICA?• La citoquimica estudia la composicion quimica de la celula y permite detectar la localizacion topografica de algunos principios inmeditos,enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de union entre la morfologia y la bioquimica.
  • 5. EN UNA REACCION BIOQUIMICA HAY TRES PASOS FUNDAMENTALES:• 1.-fijacion:para preservar las mestruicturas y reactividad funcional celulares evitando fenomenos nocivos para la misma e impidiendo tambien la difucion de componentes bioquimicas entre los diferentes comportamientos celulares asi como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraidehido, formaldehido, etc.• 2,. Incubacion en el medio de reaccion: como consecuencia se liberan unos productos que bien por si mismo, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un presipitado visible en lugar de la reaccion.• 3,. Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad. Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células impactadas mediante cito centrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes.Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos.
  • 6. LA CROMATOGRAFIA• permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado.• La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades.
  • 7. CROMATOGARFIA EN PAPEL• se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad .
  • 8. CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO• la muestra se pasa por una columna con una resina cargada(positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y, por tanto, avanzarán a distinta velocidad. Al final podrán recogerse las distintas fracciones• separadas en función de su carga.
  • 9. CROMATOGRAFIA DEFILTRACION• se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina, mientras lasgrandes irán más rápido. La• separación se hace, por tanto, en función del tamaño molecular.
  • 10. ELECTROFORESIS• es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa.• La electricidad forzará el desplazamiento delas moléculas en función de su carga, es decir, se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de sumas a y del número de cargas eléctricas.
  • 11. METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR• En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos (trituración, vibración ultrasónica, choque osmótico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula.• El método más usado es la ultra centrifugación diferencial, proceso durante el cual se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas centrífugas progresivamente mayores, de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño; en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar.• Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas. Para estudiar esta fase soluble, es decir, para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis.