Este documento discute el traslado de embriones humanos criopreservados entre centros de reproducción asistida. Aunque los embriones forman parte del proyecto reproductivo de una mujer o pareja y pueden solicitar el cambio de centro, actualmente no existe un protocolo único consensuado para realizar este tipo de traslados. El documento analiza aspectos como la responsabilidad de los centros sobre la custodia de los embriones y la legislación española aplicable.

1. REVISTA DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA Y BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
REVISTA
ACTUALIDAD AULA JOVEN ARTÍCULO I
Embriones humanos Lavado seminal en Desequilibrios cromosómicos
criopreservados: traslado varones seropositivos en espermatozoides de
entre centros de reproducción para el VIH. ¿Está todo individuos portadores de
asistida resuelto? translocaciones recíprocas
ARTÍCULO II FORMACIÓN CONTINUADA
Patrón de movilización del [Ca2+]i, apoptosis y papel Medios de cultivo para fecundación in
de la actina en pacientes astenozoospérmicos vitro: ¿qué les falta para ser perfectos?
GRUPOS DE INTERÉS: GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN
IV Recogida de datos de DGP en España: 1 de enero del 2008 a 31 de diciembre de 2009

2. Asociación para el Estudio
de la Biología de la Reproducción
CONTROL DE CALIDAD
EXTERNO DEL LABORATORIO
DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA
Parámetros sometidos a examen: Casos virtuales de pacientes con embriones
D+2 a D+5 en los que se evaluará:
- Carcaterísticas morfológicas
- Clasificación y decisión clínica
Comprobación de toxicidad de material.
Características específicas: Duración: 1 año.
Nº Especímenes: vídeo y material esterilizado.
Envío de muestra: Uno.
Envío documentación: Uno.
Envío de datos: Vía página web.
Informes: Valoración por consenso de laboratorios
Valoración por consenso de grupo de expertos
Proceso de datos: Informatizado.
PLAZO MÁXIMO DE INSCRIPCIÓN
15 DE JULIO DE 2012
http://controldecalidad.asebir.com/
Con la colaboración de:

3. Í N D I C E
Junio 2012 Vol. 17 Nº1
EDITA
Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción (ASEBIR).
SUMARIO EDITORES Y DIRECTORES CIENTÍFICOS
SUMARIO Pág. Dra. Marga Esbert Algam
IVI BARCELONA, Barcelona
EDITORIAL 3 Dr. Jorge Cuadros Fernández
Adiós a Lynette A. Scott CLÍNICA FIVMADRID, Madrid
Montse Boada
COMITÉ EDITORIAL
ACTUALIDAD 5 Presidente:
Dr. Manuel Ardoy Vilches
Embriones humanos criopreservados:
HOSPITAL UNIVERSITARIO GREGORIO MARAÑÓN - Madrid
Traslado entre centros de reproducción asistida
Mark Grossmann i Camps, Vicepresidenta Responsable Certificación ASEBIR y Delegados Autonómicos:
María Victoria Hurtado de Mendoza Acosta, Dra. Carmen Ochoa Marieta
Montse Boada i Palà, Maria Carme Pons Gatell CER. CLINICA COTERO - Santander
Secretaría, Publicaciones:
ARTÍCULOS 12
Dra. Montserrat Boada Palá
Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS - Barcelona
portadores de translocaciones recíprocas
Anna Godo, Francesca Vidal, Joan Blanco, Ester Anton Tesorería y Relaciones con la Industria:
Dr. Fernando Marina Rugero
Patrón de movilización del [Ca2+]i , apoptosis y papel de la actina INSTITUTO DE REPRODUCCION CEFER - Barcelona
en pacientes astenozoospérmicos
Vocalía de Grupos de Interés, Investigación y Certificación ASEBIR:
Graciela M. Lozano, Águeda Ortiz, Fabián Monllor, Mª Isabel Jiménez, Dr. Josep Santaló Pedro
Juan Francisco García UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA - Bellaterra
AULA JOVEN 28 Vocalía de Congresos y Certificación ASEBIR:
Lavado seminal en varones seropositivos para el VIH ¿está todo Dra. Yolanda Mínguez Royo
resuelto? IVI MADRID - Madrid
Mª Carmen Galbis, José Remohí, Antonio Pellicer, Nicolás Garrido Vocalía de Docencia y Formación Continuada:
Dra. Mª José Torello Ybañez
DEBATE 40 HOSPITAL QUIRÓN, Barcelona
Dr. Ignacio Santiago Álvarez Miguel
FORMACIÓN CONTINUADA 44 INST. EXTREMEÑO REPRODUCCIÓN ASISTIDA –IERA -Badajoz
Medios de cultivo para fecundación in vitro: Dr. Juan Manuel Moreno García
¿Qué les falta para ser perfectos? CLINICA VISTAHERMOSA, Alicante
Pilar Coy Dra. Marga Esbert Algam
IVI BARCELONA, Barcelona
GRUPOS DE INTERÉS: GENÉTICA Y REPRODUCCIÓN 54
IV Recogida de datos de DGP en España: 1 de enero del 2008 Vocalía Página Web::
Dr. Juan Manuel Moreno García
a 31 de diciembre de 2009
CLINICA VISTAHERMOSA - Alicante
Esther Velilla, Silvia Fernández, Mònica Parriego, Mireia Sandalinas
Vocalía de Publicaciones:
AGENDA 61 Dr. Jorge Martín Cuadros Fernández
CLÍNICA FIV-MADRID, Madrid
NOTICIAS 62 Dra. Marga Esbert Algam
IVI BARCELONA, Barcelona
INFORMACIÓN PARA LOS AUTORES 63 Dra. Montserrat Boada Palá
INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS, Barcelona
Dr. Josu Franco Iriarte
CENTRO SANITARIO VIRGEN DEL PILAR, San Sebastian
La Revista de ASEBIR (Asociación para el Estudio de la Biología
de la Reproducción) está indexada en las bases de datos ICYT, de
ciencia y tecnología, e IME, de Biomedicina, del Consejo Superior de
Investigaciones Científicas (CSIC) de España y en las bases de datos
LATINDEX, para Iberoamérica y CUIDEN®, de la Fundación Index.
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Depósito legal: M-18873-1996 | ISSN: 1136-4424 | Soporte válido: 78-R-CM

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Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
3
ADIÓS A LYNETTE A. SCOTT
Lynette Scott, doctora en Biología del Desarrollo y embrióloga clínica de
reconocido prestigio mundial, fue directora del laboratorio de reproducción
asistida del Fertility Center de New England en Massachussets. A lo largo
de su trayectoria profesional, contribuyó enormemente al desarrollo
de nuestra profesión centrando su interés en el estudio de parámetros
morfológicos para la valoración de la viabilidad embrionaria. Publicó
numerosos artículos entre los que destacan los relacionados con la
valoración pronuclear y la valoración embrionaria secuencial que han
sido de gran valor para sentar las bases de la embriología clínica actual.
Su visión avanzada hizo que la idea, hoy por hoy incuestionable, de
valorar los embriones secuencialmente para seleccionar los de mejor pronóstico se difundiera y
empezara a tomar forma hace ya más de una década.
L.Scott colaboró activamente con distintas sociedades científicas no solo americanas sino
también europeas como ESHRE y ALPHA. Su reciente participación en la conferencia de Consenso
de Estambul sobre valoración embrionaria es una muestra de ello. En el congreso de ASEBIR de
Valencia 2009 tuvimos la oportunidad de poder contar también con su presencia ofreciéndonos
la ponencia “Oocyte and embryo oxygen comsumption. Can it tell us anything about developmental
potential?” Ahora, después de su inesperado fallecimiento el pasado 2 de febrero de 2012,
valoramos enormemente la suerte que tuvimos de poder contar con su presencia y compartir sus
experiencias en nuestro congreso de ASEBIR.
En agradecimiento a su trabajo y dedicación, desde la junta directiva de ASEBIR y en
representación de la comunidad que constituimos todos los miembros de nuestra sociedad
queremos expresar nuestro respeto y reconocimiento por la labor que L. Scott ha realizado en
beneficio de la ciencia en general y, muy especialmente, de la Embriología Clínica.
Hasta siempre Lynette.
Montse Boada
Secretaria de la Junta Directiva de ASEBIR

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Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
5
EMBRIONES HUMANOS CRIOPRESERVADOS: TRASLADO ENTRE
CENTROS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA
HUMAN CRYOPRESERVED EMBRYOS: TRANSPORTATION BETWEEN CENTRES OF
ASSISTED REPRODUCTION
Mark Grossmann i Camps1, María Victoria Hurtado de Mendoza Acosta2, Montse Boada i Palà3 y Maria Carme Pons Gatell1
1
Unitat de Reproducció Assistida de Centro Médico Teknon, Barcelona. 2MasVida Reproducción, Sevilla. 3Servei de Medicina de la Reproducció
del Institut Universitari Dexeus, Barcelona.
e-mail: mgrossmann@cmteknon.com
RESUMEN
Todos los embriones deben tener su proyecto reproductivo, lo que significa que una mujer o pareja son responsables del
destino de sus embriones criopreservados y pueden solicitar el cambio de centro de custodia aunque no dispongamos de un
único protocolo consensuado de actuación para los traslados. Este trabajo busca sopesar los distintos aspectos del traslado
entre centros de los embriones humanos criopreservados.
Palabras clave: traslado / embriones criopreservados humanos / protocolos
SUMMARY
Embryos must have their reproductive project, which means that a woman or a couple are responsible for the fate of their
cryopreserved embryos and they may apply for transferring embryos from one centre to another, although we do not have a
single Protocol Act in order to transfer embryos between centres. This work seeks to weigh up aspects of the transportation of
cryopreserved human embryos between centres.
Keywords: transportation / human cryopreserved embryos / guidelines
INTRODUCCIÓN Los últimos datos conocidos del existe riesgo de hiperestimulación
registro español de actividad, que no ovárica, los centros de RHA deben
Todos conocemos que los embriones es un registro obligatorio, muestra criopreservar todos los embriones
humanos pueden ser criopreservados para el año 2009 un total de 10.248 obtenidos en espera del momento
en distintos momentos de su desarrollo criotransferencias con una tasa de óptimo para realizar la transferencia
preimplantatorio in vitro (zigotos, embarazo del 32% por transferencia. embrionaria.
células o blastocisto) y usando distintos Según los datos comunicados, las
protocolos (por ejemplo congelación gestaciones a partir de embriones Los embriones quedan bajo la custodia
lenta con 1,2-propanodiol o con criopreservados representaron un de los centros de RHA porque son
glicerol; o vitrificación). Los resultados 17% de las gestaciones registradas las únicas instalaciones capaces de
del proceso de criopreservación, no (SEF, 2009). Otros autores refieren garantizar su continuidad en las
sólo dependen del estadio de desarrollo proporciones mayores de hasta un 25% estrictas condiciones requeridas para
y del protocolo escogido, sino también de gestaciones conseguidas a partir su correcta conservación pero forman
de la calidad de los embriones y de la de criotransferencias (Capalbo et al., parte de un proyecto reproductivo y son
experiencia de los embriólogos. 2011). responsabilidad de la mujer o la pareja.
En este sentido, los centros de Conforme a la legislación española Legalmente en España, este
reproducción humana asistida vigente los embriones que no se almacenamiento se podrá prolongar
(RHA), gracias a la mejora en los transfieran y se consideren aptos deben hasta el momento en que se considere
equipamientos, en las condiciones crioconservarse ya que no pueden por los responsables médicos, con el
de cultivo y en los conocimientos y destruirse fuera de los supuestos dictamen favorable de especialistas
formación de los embriólogos, hoy en legalmente autorizados. independientes y ajenos al centro
día consiguen un muy buen desarrollo correspondiente, que la receptora
embrionario preimplantacional, lo cual En otras ocasiones, por ejemplo cuando no reúne los requisitos clínicamente
permite reducir el número de embriones no se realiza la transferencia en un ciclo adecuados para la práctica de la técnica
a transferir y disponer de embriones de donación de ovocitos (donación de reproducción asistida (Ley 14/2006),
“sobrantes” de muy buena calidad. asincrónica) o cuando se dispone de o lo que se ha venido denominando la
un elevado número de embriones pero vida fértil de la mujer y que representa un

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I TTULO D
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Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida
6
período muy largo, que generalmente se sobreentiende que el centro donde • demás, de las consultas tramitadas
A
considera que finaliza cuando la mujer se tienen los embriones ya está en la asesoría jurídica de ASEBIR
alcanza los 50 años de edad. autorizado. se deduce que la mujer o la pareja
están en su derecho de solicitar el
Algunas veces, por los motivos que • ara mantener la debida protección
P traslado de sus embriones y que no se
sean, los pacientes deciden trasladar de datos de carácter personal, la les puede negar ese traslado, ya que
sus embriones a otro centro distinto mujer o la pareja deberían autorizar ellos son los responsables y el centro
de aquel que los criopreservó y los la transferencia entre centros de es el depositario (ASEBIR 2012).
conserva. En un reciente estudio información personal (información
belga sobre el destino que se da a los parcial de la Historia Clínica, HC) y de PROCEDIMIENTO PASO A PASO
embriones criopreservados, Provoost información relativa a los embriones
y colaboradores (2012) publican que, criopreservados (información parcial 1 ¿Quién notifica al centro donde
tras 15 años de actividad, sólo en 4 de los registros del laboratorio). están los embriones criopreservados,
casos sobre 2931 (0,1%) se solicitó el Además, según el Real Decreto el traslado de los mismos?
traslado de los embriones desde un 1301/2006, el centro emisor debe
centro a otro. identificarse y etiquetar tanto Siempre los pacientes, nunca el
el contenedor primario como el centro receptor. Conforme a la
De acuerdo a nuestra propia experiencia, contenedor externo (ver apartado 5 confidencialidad exigible en nuestras
y aunque en los últimos años las de este artículo). actuaciones, no deberían atenderse
solicitudes de traslado de embriones consultas (telefónicas o vía correo
a otros centros han experimentado un • demás, el centro de salida debe
A electrónico) sobre el número de
ligero aumento, las peticiones siguen adoptar las medidas para que la embriones, el estadio, el protocolo
siendo poco frecuentes y su práctica no información de carácter personal de criopreservación etc. de un
es muy habitual. quede protegida durante el traslado centro de RHA que nos diga que unos
si éste lo realizan terceras partes (Ley determinados pacientes desean un
Quizás por ello, cómo llevar a cabo 15/1999). traslado de embriones.
todos los pasos del proceso de traslado
puede ser motivo de confusión ya que • l centro receptor debe identificarse
E Es la mujer o la pareja la que, por escrito,
no disponemos de un único protocolo y emitir acuse de recepción para deben comunicar al centro donde tiene
de actuación consensuado ¿Dónde completar la trazabilidad a la que sus embriones que desean efectuar un
empiezan y acaban las responsabilidades ambos centros están obligados (Real traslado. En esa comunicación debería
del centro que custodia los embriones, Decreto 1301/2006). notificarse el centro de destino que
del que los recibe o de quién efectúe recibirá los embriones, y para cumplir
el traslado? ¿Qué documentación sería trazabilidad se entiende, según
Por con la ley de autonomía del paciente
necesaria? la definición dada en el Artículo 2.1 y con la LOPD, se recomienda que los
X) de ese Real Decreto, la capacidad pacientes firmen una autorización para
Este trabajo busca sopesar los distintos para ubicar, localizar e identificar la entrega, al centro de destino, de sus
aspectos del traslado de los embriones las células y/o tejidos en cualquier datos personales, también la de los
humanos y comentarlos desde la óptica paso del proceso desde la donación, datos de laboratorio relacionados con la
de distintos centros. la obtención, el procesamiento, criopreservación de sus embriones, así
la evaluación, el almacenamiento como una autorización para comentar,
MARCO LEGAL y la distribución hasta llegar al entre profesionales de cada centro, los
receptor o hasta ser desestimados detalles del caso si fuese preciso.
De cara a organizar un traslado de y/o destruidos, o que lleva consigo la
embriones entre centros, deberíamos capacidad de identificar al donante, 2 Una vez comunicado el deseo de
tener en cuenta los siguientes requisitos el establecimiento de tejidos y la traslado ¿quién lleva la iniciativa?
de la legislación española: instalación que recibe, procesa o
almacena los tejidos o células, así El centro que recibe los embriones
• odos los embriones deben tener
T como la capacidad de identificar al debe llevar la iniciativa porque, en
su proyecto reproductivo lo que receptor o receptores en los que se definitiva, es el centro que tiene interés
significa que una mujer o una pareja apliquen los tejidos o células. La en el traslado. En este contexto “llevar
son responsables del destino de sus trazabilidad cubre, asimismo, la la iniciativa” significa organizar el
embriones (Ley 14/2006). capacidad de localizar e identificar traslado de los embriones de forma
cualquier dato relevante de los adecuada y guiar a los pacientes sobre
• l centro receptor debe estar
E productos y materiales que van a estar los pasos del proceso. En el caso de los
autorizado por las autoridades en contacto directo con las células traslados hacia centros situados fuera
sanitarias correspondientes (Real y/o tejidos y que puedan afectar a la de España, entendemos que también
Decreto 413/1996 y normativas de calidad y seguridad de los mismos. es el centro receptor quien asesorará y
las distintas CCAA). Obviamente, se gestionará el proceso.

9. A C T U IA U L O A D
T II TTULO D
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7
3 Tipo de contenedor y quién lo aporta condiciones de mantenimiento frente El centro emisor, junto con los embriones
a imprevistos. Esto es particularmente debe incluir un documento que vincule
Es el centro que recibe los embriones el necesario en los trasportes de larga el código de identificación de las
que, a priori, debe aportar el contenedor distancia. pajuelas con la mujer o la pareja, y en
adecuado para el traslado. el que también se detalle el número de
4 ¿Quién transporta los embriones? embriones criopreservados entregados,
El depósito más apropiado es la bombona el estadio de desarrollo y la calidad, la
“en seco”, aquella cuyas paredes Éste es un punto de debate recurrente fecha de criopreservación y el protocolo
absorben el N2L y evitan los derrames al cuando se plantea un traslado ¿pueden utilizado. También debe indicarse el
tiempo que mantienen las condiciones los propios pacientes realizar ese origen de los gametos (propios o de
adecuadas de frío. La mayoría de casas traslado? Ésta es la opción fácil si no donante), las serologías y un resumen
comerciales especializadas tiene en tenemos en cuenta el alto grado de de la HC por si, al final, esos embriones
catálogo contenedores que cumplen la exigencias que se contempla en el Real que se trasladan pasasen a disposición
reglamentación internacional aplicable Decreto 1301/2006 para realizar el del banco de embriones del centro
al trasporte de mercancías peligrosas transporte del material biológico que receptor. Además, sería recomendable
por carretera (ADR), por vía aérea nos obliga a garantizar en todo momento que ese documento también
(IATA) o ferroviaria (RID) y cada centro su trazabilidad, también incluida en incorporase, a modo de recomendación,
debe conocer cuál es la autonomía dicha norma, y si no tenemos en cuenta las instrucciones para la descongelación
de sus bombonas de traslado (ver las los riesgos de manipular contenedores de los embriones entregados.
especificaciones de cada fabricante). que contengan N2L sin las debidas
precauciones. Pero si atendemos a la Adecuando los requerimientos del Real
Consideramos que el centro receptor es responsabilidad del centro para con los Decreto 1301/2006 a nuestro material,
el que debería proveer el contenedor de embriones se ve claramente que éstos la información que debería adjuntarse
traslado no solo porque es el que tiene sólo pueden entregarse a personal es la siguiente:
mayor interés en llevar a cabo el traslado especializado. En esta misma línea
sino por otras dos razones. De un lado, se manifestó la Asesoría Jurídica de 1.º El establecimiento de tejidos debe
porque recupera el contenedor al final ASEBIR cuando se le planteó la cuestión disponer de un sistema de etiquetado
del trayecto, pero además también de quién debía realizar el transporte: que garantice que las etiquetas o los
porque, tratándose de su contenedor, la conclusión no puede ser otra que documentos cumplen con los siguientes
conoce su estado de conservación y la de descartar que el transporte de requisitos de información:
limpieza. Téngase en cuenta que las embriones congelados pueda realizarse
especificaciones sobre cómo limpiar los por los propios pacientes o por alguien i) El etiquetado del contenedor primario
contenedores de transporte (Castilla no profesional (ASEBIR 2012). de las células/tejidos debe mostrar:
y Magán, 2003), pueden variar según
cada tipo de contenedor no existiendo Y por personal especializado se entiende 1) l número de identificación o código
E
un protocolo único de manera que cada personal de los propios centros de RHA del tejido/célula, el tipo de células o
centro debería responsabilizarse de que acompañan el contenedor o bien tejidos y el lote cuando esto último
mantener en buenas condiciones sus transportistas especializados. proceda.
propios recipientes.
La primera opción sería la mejor, al 2) a identificación del establecimiento
L
Alternativamente, las empresas menos en traslados de corta distancia… de tejidos.
especializadas en el transporte de la segunda, con servicio puerta a
material biológico disponen de puerta, sería la elegible entre ciudades 3) La fecha de caducidad.
contenedores adecuados, tanto distantes.
del recipiente primario como del 4) el caso de que sea para uso
En
contenedor secundario de protección. Evidentemente el centro receptor debe autólogo, esto debe ir especificado:
identificar la empresa transportista «para uso autólogo». Además, se
El centro emisor, que es quien tiene con la suficiente antelación e incluso mostrará el código de identificación
la custodia de los embriones, puede algunos centros de RHA piden la del donante/receptor.
retrasar la entrega o negarse a hacerla identificación previa de la persona física
si considera que las condiciones para que recogerá el contenedor, de cara a 5) n el caso de donaciones dirigidas, se
E
el transporte no son las apropiadas, trasladar custodias. identificará el receptor.
por ejemplo si se recibe un contenedor
sin la temperatura adecuada o sin N2L. 5 Documentación que acompaña el 6)
Cuando se conozca que las células
El centro emisor debería asegurarse traslado de los embriones /tejidos son positivos para
que el contenedor que recibe está algún marcador de enfermedad
suficientemente frio antes de introducir Sin lugar a dudas el traslado de infecciosa, deberán ir identificados
las pajuelas. Así se garantizará la embriones criopreservados debe quedar como muestras de riesgo: «riesgo
máxima duración posible de las exhaustivamente documentado. biológico».

10. A C T UT U L O A D
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Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida
8
S
i, por razones de espacio, no es 2) dentificación del centro de implante
I correcta entrega de los embriones en
posible incluir la información referida de tejidos o establecimiento de tejidos destino (fecha y hora de la recepción y
en los puntos 4) y 5), ésta deberá ser destino, incluyendo la dirección, el persona que recibe los embriones).
facilitada en un documento añadido al teléfono y la persona de contacto.
contenedor primario. Dicho documento Y finalmente, el centro receptor de los
deberá ir embalado junto al contenedor 3) constatación de que el paquete
La embriones debería emitir un acuse de
primario de forma que se asegure que contiene tejidos o células humanas y recibo en el que constara el material
permanecen juntos. que debe ser manejado con cuidado. recibido.
ii) La información que se detalla a 4) se envían células vivas y el
Si De esta manera, el centro emisor puede
continuación puede figurar en la etiqueta mantenimiento de la viabilidad documentar los embriones hasta el
o bien en un documento adjunto: es básico para el éxito del injerto, centro de nuevo destino, mientras
como es el caso de los progenitores que el centro receptor dispone de
1) escripción, definición y, si fuera
D hematopoyéticos, células precursoras, información suficiente para almacenar
relevante, las dimensiones del tejido o gametos o células embrionarias, debe los embriones.
producto celular. añadirse en un lugar bien visible el
anuncio de: «NO IRRADIAR». 6 Comprobación del material
2) Morfología y datos funcionales cuando entregado
sea relevante. 5) Recomendaciones para las condiciones
de transporte (posición, temperatura En alguna rara ocasión ha sucedido
3) echa de distribución de las células /
F etc). que la persona que va a transportar el
tejidos. contenedor con los embriones solicita
6) nstrucciones de seguridad.
I revisar el contenido antes de aceptar la
4)
Determinaciones biológicas que se custodia. Este es un punto delicado y de
han llevado a cabo en el donante y sus 7)
Métodos de congelación o difícil resolución. En primer lugar, como
resultados. descongelación o cualquier otra profesionales realizando un trabajo
manipulación necesaria cuando ello altamente especializado y con los
5) Recomendaciones de almacenamiento. sea de aplicación. mejores estándares de calidad, actuar de
buena fe y en beneficio de los pacientes
6)
Instrucciones para la apertura El centro emisor debe identificar la es nuestra obligación, y con ello debería
del contenedor, para el embalaje persona que retira los embriones y bastar para convencer. Por otro lado,
y para cualquier manipulación o conservar en la HC los datos de esta la localización de las pajuelas con los
reconstitución. persona. Es recomendable que exista embriones y su traspaso al contenedor
un Documento de entrega-retirada de de traslado deberían realizarse con un
7)
Fechas de caducidad después de los embriones criopreservados para testigo o controller interno, propio del
la apertura o manipulación del su traslado a otro Banco de Embriones centro emisor, y con ello debería bastar.
contenedor. autorizado donde se especifica el día Si no fuese así, se podría acordar la
y hora en el que son entregados los revisión del contenido en el momento
8) Instrucciones para la comunicación de embriones. En el caso de que vengan de pasar las pajuelas desde el banco
efectos o reacciones adversas. los propios pacientes acompañando el al contenedor, pero ello sólo tendría
transporte, ellos firmarán conforme sentido si la persona que recibe el
9) resencia de residuos potencialmente
P se exime al centro de cualquier contenedor es también embriólogo/a.
peligrosos (antibióticos, óxido de responsabilidad, especialmente Admitir como controller a una persona
etileno, etc). referidas al traslado, mantenimiento, ajena no sería recomendable pues puede
proceso de descongelación y sus comportar una alteración innecesaria
iii) Etiquetado externo para el contenedor resultados. En caso de que venga una del orden y estabilidad del laboratorio
de envío o transporte. persona autorizada, ésta traerá una de RHA.
autorización firmada por los pacientes,
Para el envío, el contenedor primario entregará fotocopia de su DNI y firmará Normalmente, la comprobación del
debe ir incluido en un contenedor de la retirada de los embriones. contenido se llevaría a cabo en el
transporte adecuadamente etiquetado. Esta laboratorio del centro receptor y en las
etiqueta contendrá, al menos, la siguiente Para el transporte debería completarse condiciones adecuadas. Y es entonces
información: un formulario de declaración de material cuando en caso de que se detecte alguna
biológico y de los riesgos asociados anomalía, éstas deberían consignarse.
1) dentificación del establecimiento de
I al tipo de transporte. Las empresas En ningún caso es aceptable que se
tejidos de origen, incluyendo la dirección, especializadas disponen de estas fichas abra el contenedor fuera de las áreas de
el teléfono y la persona de contacto. de declaración de productos biológicos. embriología ya que ello pone en riesgo la
Y si se usa una empresa especializada, viabilidad de los embriones trasladados.
ésta debería comunicar por escrito la

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T TULO
Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
9
Procediendo de esta manera, todos los embriones de una misma con los embriones es suficiente para
las pajuelas con los embriones mujer o una misma pareja a menos que decidir ante una petición de donación a
criopreservados sufren únicamente exista una razón de peso para proceder terceros, si son donables o no.
dos momentos de estrés coincidiendo de otra forma. Aceptar particiones
con los dos cambios de contenedor. aumenta la posibilidad de abandono Y en este contexto surge la duda de
Aunque parezca innecesario, queremos de los embriones y sólo complica la la “seroteca” que se exige en el Real
recordar que esos cambios de ubicación gestión de los bancos de embriones Decreto 1301/2006, y que como
deben realizarse lo más rápidamente criopreservados, sin aportar ninguna mínimo debe conservarse durante dos
posible, sobre todo con los soportes ventaja a la mujer o la pareja. años desde la última transferencia. Si
para embriones vitrificados ya que las existe suero de la paciente que solicita
pajuelas para criopreservación tienen OTRAS CONSIDERACIONES el traslado y no queda ningún otro
un volumen de 0,3 ml lo que les otorga material criopreservado en el centro
mayor resistencia a los cambios de a) En caso de que los pacientes emisor, entendemos que, para cumplir
temperatura, mientras que los soportes no puedan acudir al centro emisor con los requerimientos legales, una
para vitrificación se cargan con sólo 1 o (pacientes extranjeros, etc.) deberán muestra del suero debería enviarse
2 µl. enviar el original de consentimiento también al centro receptor.
de traslado debidamente firmado y
Si se hacen bien los cambios de ubicación con fotocopias de sus documentos de d) En el caso de entregar embriones
de las pajuelas y si el contenedor de identidad. Lo mejor sería concretar la para investigación, el protocolo para
transporte está correctamente enfriado fecha para la recogida cuando se firman el traslado de los embriones debería
y no hay demora en el transporte, no los consentimientos ya que, aunque ser similar al que aquí se ha descrito
sería necesario incorporar, dentro del parezca incomprensible, se ha dado e igualmente, en estos casos, debería
contenedor, un control de temperatura. el caso de venir a la firma y después recibirse acuse de recibo del centro
transcurrir meses antes de retirar los receptor para poder mantener la
7 ¿Cómo se traspasa la custodia? embriones. Por un lado han firmado que trazabilidad exigida.
retiran los embriones pero por otro lado
Es importante que la mujer o la no se los llevan, lo que da pie a que los CONCLUSIONES
pareja entiendan que el traslado pacientes se desentiendan del tema y el
de los embriones es un proceso con centro quede con la custodia de unos 1. El traslado de embriones
riesgos asociados y que comporta la embriones “abandonados”. criopreservados es una operación de
transferencia de custodia durante el riesgo y así debe informarse a la mujer
traslado. b) Es importante minimizar el tiempo de o la pareja.
traslado y evitar posibles retenciones en
La custodia se transfiere con la entrega aduanas u otras oficinas intermediarias. 2. Hasta la fecha, y por falta de un
de los embriones, es decir, el centro Aunque los embriones criopreservados único protocolo, cada centro de RHA
emisor recibe el contenedor y es pueden trasladarse entre centros de ha establecido sus propios requisitos
responsable de los embriones hasta que RHA, se trata de material biológico muy y el traslado de embriones se realiza
el contenedor se entrega a la persona sensible a los cambios de temperatura, frecuentemente de forma improvisada
que hará el traslado y que firma la mucho más en el caso de los embriones en aras de la “buena fe” de las partes
recepción del mismo. vitrificados. implicadas y atendiendo al bien de los
pacientes.
Esta persona que realiza el traslado (o Nuestra recomendación para el traslado
en su defecto la empresa para la que de embriones vitrificados es que éstos Consideramos que sería enormemente
trabaja) es responsable de los embriones se trasladen sumergidos en N2L, aunque beneficioso aprobar un protocolo
hasta que entrega el contenedor en el somos conscientes que ello conlleva estandarizado común que sirva de
centro de recepción y obtiene la firma restricciones en determinados medios modelo para todos, que no induzca a
de aceptación de los embriones. de transporte, como el aéreo. dudas y miedos a los pacientes y facilite
la labor de los centros. Emplazamos a
A partir de ese momento los embriones c) En principio los embriones se ASEBIR a abordar el asunto del traslado
quedan bajo la custodia del centro trasladan por deseo de la mujer o de embriones criopreservados, tanto
receptor. la pareja y para uso propio, y si más para la elaboración de un modelo
adelante los donan, es responsabilidad de protocolo único como para un
8 ¿Todos los embriones se trasladan? del centro receptor disponer de toda la modelo de Consentimiento Informado
información necesaria para determinar ya que éste es uno de los vacíos que
De la misma manera que queda claro si los embriones son aptos para ser actualmente tenemos.
que un centro de RHA no puede donados a otras personas o sólo pueden
negarse al traslado de unos embriones, donarse para investigación. Por lo tanto,
parece lógico establecer que, cuando el centro receptor debe asegurarse
se autorice un traslado, éste incluya de que la información recibida junto

12. A C T UT U L O A D
I A L I D
Mark Grossmann i Camps. Embriones humanos criopreservados: Traslado entre centros de reproducción asistida
10
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14. A R TT IÍ I C U LL O
T TTULO O
U I
Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas
12
DESEQUILIBRIOS CROMOSÓMICOS EN ESPERMATOZOIDES DE
INDIVIDUOS PORTADORES DE TRANSLOCACIONES RECÍPROCAS
CHROMOSOMAL IMBALANCES IN SPERMATOZOA FROM RECIPROCAL TRANSLOCATION
CARRIERS
Anna Godo, Francesca Vidal, Joan Blanco, Ester Anton*
*
Unitat de Biologia Cel·lular, Departament de Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia. Facultat de Biociències. Universitat Autònoma de
Barcelona.
08193 Bellaterra (Cerdanyola del Vallès).
e-mail: ester.anton@uab.cat
Fecha recepción: 14 Marzo 2012
Fecha aceptación: 4 Abril 2012
RESUMEN
Los portadores de translocaciones recíprocas tienen asociado un riesgo genético reproductivo debido a la producción de
gametos portadores de alteraciones cromosómicas. Estas alteraciones se pueden cuantificar en espermatozoides mediante
estudios de hibridación in situ fluorescente. Normalmente se realizan estudios de segregación y de efecto intercromosómico
en espermatozoides de un mismo individuo, pero siempre de forma independiente. En consecuencia, las anomalías
resultantes de estos dos eventos no pueden relacionarse directamente. El objetivo de este trabajo es hallar la relación entre
los modos de segregación del tetravalente y la producción de espermatozoides con anomalías numéricas. Se han estudiado
espermatozoides de tres individuos portadores de translocaciones recíprocas, siguiendo un protocolo de análisis secuencial
basado en la realización de dos rondas de hibridación consecutivas con un lavado intermedio: la primera para detectar las
anomalías numéricas y la segunda para evaluar el resultado de la segregación en los gametos aneuploides/diploides.
Los resultados han demostrado que los espermatozoides portadores de anomalías numéricas presentan una clara desviación
del patrón de segregación estándar. En concreto, los espermatozoides aneuploides/diploides presentan un incremento de
modos de segregación que implican procesos de no disyunción en el tetravalente; así como una disminución de la segregación
equilibrada. Este hecho podría explicarse por la existencia de errores en el punto de control que actúa durante la transición
de las fases metafase I y anafase I que permitirían la progresión de espermatocitos con alteraciones cromosómicas. Rev Asoc
Est Biol Rep 2012; 17(1):12-16.
Palabras clave: FISH, translocación recíproca, ICE, anomalías cromosómicas numéricas, patrón de segregación,
espermatozoides.
SUMMARY
Carriers of reciprocal translocation entail a particular reproductive risk as a consequence of the production of unbalanced
gametes. Sperm fluorescent in situ hybridization studies are a useful tool to estimate the frequency of abnormal gametes.
Usually, segregation and interchromosomal effect studies are performed in these individuals. Nevertheless, both studies are
carried out independently and consequently, anomalies cannot be directly related. The aim of this work was to establish if
there is a relationship between the occurrence of specific segregation modes and the production of numerical abnormalities
in the same spermatozoa. Semen samples of three reciprocal translocations carriers were analyzed by a sequential fluorescent
in situ hybridization protocol based on two successive hybridization rounds and probes washing off in-between. Spermatozoa
with numerical abnormalities were detected in the first round, and the second round allowed the segregation analysis in the
aneuploid/diploid gametes.
Results have shown that spermatozoa with numerical abnormalities show a clear deviation of the standard segregation
pattern. In particular, aneuploid/diploid spermatozoa display significant increases of segregation modes that imply
quadrivalent non-disjunctions, whereas balanced modes are reduced. A plausible explanation for this deviation might be
a failure in the metaphase I-anaphase I checkpoint that would allow the progression of spermatocytes with an abnormal
chromosomal content. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):12-16.
Keywords: FISH, reciprocal translocation, ICE, chromosome numerical abnormalities, segregation pattern, spermatozoa.

15. A R T T IC U L O
Í TULO I
Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
13
INTRODUCCIÓN que el resto de modos de segregación MATERIAL Y MÉTODOS
se distribuyen de la siguiente forma:
La incidencia de portadores de Adyacente I (33.6% ± 4.4); adyacente Se analizaron muestras de semen procedentes
translocaciones recíprocas en la II (11.7% ± 6.9); 3:1 (6.8% ± 3.5) y 4:0 de tres individuos infértiles portadores de
población general es aproximadamente (0.6% ± 0.6). Las diferencias observadas translocaciones recíprocas que presentaban
1/700 (Nielsen and Wohlert, 1991), no entre diferentes translocaciones han los siguientes cariotipos: 46,XY,t(5;8)
obstante en la población de individuos sido atribuidas clásicamente a las (q33;q13) (P1); 46,XY,t(8;14)(q22;q32) (P2)
infértiles esta cifra puede elevarse características citogenéticas particulares y 46,XY,t(9;19)(q10;p10) (P3).
hasta seis veces (De Braekeleer and Dao, de los cromosomas reorganizados en
1991). La fertilidad de estos individuos cada caso. Los tres individuos fueron seleccionados
está condicionada por la presencia de por presentar ICE positivo en estudios
bloqueos meióticos y/o por la producción El fenómeno de ICE consiste en la previos (Anton et al., 2008). Las muestras
de un cierto porcentaje de gametos producción de gametos con anomalías se procesaron según el protocolo de
portadores de anomalías cromosómicas. cromosómicas numéricas no relacionadas FISH en espermatozoides estandarizado
Estas anomalías se originan con los cromosomas reorganizados. en nuestro laboratorio (Sarrate and
mayoritariamente como consecuencia Aunque todavía no hay consenso sobre Anton, 2009), que incluye la fijación,
de segregaciones desequilibradas de los el origen y relevancia de este fenómeno, descondensación, desnaturalización y
cromosomas reorganizados, o bien como se cree que las aneuploidías o diploidías posterior hibridación de las muestras.
resultado de un fenómeno denominado producidas son consecuencia de la
efecto intercromosómico (ICE). existencia de heterosinapsis entre Se realizaron dos rondas de hibridación
regiones desapareadas del tetravalente secuencial con un lavado de sondas
En relación a la segregación de los con otros bivalentes no implicados en intermedio:
cromosomas reorganizados, durante la reorganización (Oliver-Bonet et al.,
la profase I de la meiosis los cuatro 2005). Estas asociaciones ilegítimas 1. Primera ronda: Se realizaron dos
cromosomas que comparten segmentos favorecen alteraciones del proceso estudios paralelos de ICE, analizando las
homólogos en un individuo portador meiótico, afectando negativamente aneuploidías y diploidías de los cromosomas
de una translocación recíproca adoptan al apareamiento y disyunción de los 18, X, Y por un lado y 13, 21 por otro,
una estructura llamada tetravalente. A cromosomas (Burgoyne et al., 2009). La mediante la utilización del AneuVysion
lo largo de la anafase I, esta estructura presencia de gametos con incrementos Multicolor DNA Probe Kit (Abbott Molecular
puede resolverse según cinco modos de de al menos un tipo de disomía o diploidía Inc., Des Plaines, IL, USA). El kit consta de
segregación: Alternante, adyacente I (ICE positivo) es un fenómeno habitual en dos combinaciones de sondas para realizar
(los centrómeros homólogos migran a portadores de translocaciones recíprocas una FISH triple (sondas centroméricas
polos celulares opuestos), adyacente II, (revisado en Anton et al., 2011). para los cromosomas 18, X e Y) y una FISH
3:1 y 4:0, (los centrómeros homólogos dual (sondas locus específicas para los
migran al mismo polo). El modo de Los estudios de segregación del cromosomas 13 y 21).
segregación alternante es el único que tetravalente y de ICE se realizan de forma 2. Lavado de las sondas: Se eliminaron
puede dar lugar a gametos normales o independiente en distintas fracciones mediante una solución citrato-sódica
equilibrados, mientras que el resto de de la muestra, y no es posible establecer salina en condiciones altamente
segregaciones resultará en gametos relaciones entre los resultados astringentes (0,0625xSSC).
desequilibrados para los cromosomas obtenidos. El objetivo de este trabajo es 3. Segunda ronda de hibridación: Se
reorganizados. realizar ambos estudios en los mismos utilizaron combinaciones específicas de
espermatozoides mediante una FISH sondas para los cromosomas implicados
En la literatura existen varios estudios secuencial, y así poder determinar si en cada reorganización, que permitieron
realizados con FISH en espermatozoides existe una relación entre la ocurrencia identificar los diferentes productos de
sobre la frecuencia de gametos de los diferentes modos de segregación segregación del tetravalente. Las sondas
equilibrados y desequilibrados del tetravalente y la producción de utilizadas en cada paciente se detallan en
en portadores de translocaciones anomalías cromosómicas numéricas. la Tabla I.
recíprocas. A pesar de que en algunos
casos se describen valores extremos Tabla I. Combinaciones de sondas utilizadas para los estudios de segregación
en la frecuencia de segregaciones
desequilibradas, con rangos desde Paciente Cariotipo Sondas
19% hasta el 80% (revisado por Morel CEP 8 LSI 8q24 LSI 5pl5.2
P1 46, XY, t (5;8)(q33; q13)
et al., 2004), la mayoría de individuos (SA) (SO) (SG)
analizados presentan frecuencias que se P2 46, XY, t (8;14)(q22; q32)
CEP 8 Tel 14q Tel 8q
ajustan al patrón estándar de segregación (SA) (SO) (SG)*
observado por Anton et al., 2008. LSI9q34 Tel 19q Tel 19p
P3 46, XY, t (9;19)(q10; p10)
Según éste, la segregación preferente (SA) (SO) (SG)
es la alternante, con un porcentaje de SA: Spectrum Aqua, visible con el filtro específico Aqua; SO; Spectrum Orange, visible con el filtro específico
46,5% ± 6.5 (media ± DE), mientras Cy3; SG: Spectrum Green, visible con el filtro específico FITC. Todas las sondas son de Vysis, Abbott Molecular
Inc., excepto * (Qbiogene Inc., Irvine, CA, USA)

16. A R TT II IT U LL O
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Í CU L O
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Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas
14
Referente a los análisis de ICE, las Marzhauser Wetzlar; Isis Fluorescence RESULTADOS
muestras P1 y P3 se valoraron de Image System, Metasystems, Germany).
forma automática con el sistema Spot- El número de espermatozoides
Counting (Spot AX software, Applied El análisis del patrón de segregación analizados se resume en la Tabla II.
Imaging, Newcastle, U.K.) (Molina et se realizó de forma diferencial en dos En los estudios de ICE, se valoraron
al., 2009) acoplado al microscopio poblaciones de gametos para cada un total de 10706 (P1), 5181 (P2)
BX-61 (Olympus, Barcelona, España) individuo: (i) fracción aleatoria de y 12319 (P3) espermatozoides
equipado con filtros específicos para espermatozoides (no seleccionados), para los cromosomas X, Y, 18; y de
DAPI (4’,6-diamidino-2-phenylindole), y (ii) espermatozoides portadores de 11844 (P1), 4192 (P2) y 10486 (P3)
Aqua, FITC (fluorescein isothiocyanate) anomalías numéricas (detectados en los espermatozoides para los cromosomas
y Cy3 (cytochrome 3). Este sistema análisis de ICE previos). En este último 13 y 21. En conjunto, se clasificaron
permite almacenar información relativa caso, los espermatozoides aneuploides como diploides o aneuploides para
a la localización y a los parámetros y diploides se relocalizaron de forma alguno de los cromosomas analizados
morfológicos de los núcleos, además automática o manual, según el método un total de 762 (P1), 329 (P2) y 401 (P3)
del número e intensidad de las en que se inició el estudio. espermatozoides. En la segunda ronda de
señales presentes en cada uno de hibridación (estudio de segregación) se
los espermatozoides analizados. La Para la valoración de las muestras se relocalizaron y analizaron los siguientes
muestra del individuo P2 se analizó de siguieron los criterios estrictos de porcentajes de espermatozoides
forma manual con el microscopio BX-60 valoración, referentes a la intensidad, aneuploides/diploides: 92.4%
(Olympus) con un filtro de triple banda el tamaño y la localización de las señales (704/762) (P1), 83.9% (276/329) (P2)
y otros específicos para FITC, Cy3, Aqua. de hibridación descritos en nuestro y 94.5% (379/401) (P3). Los productos
En cualquier caso (automático o manual) grupo (Blanco et al., 1996). Para cada resultantes de la segregación también
se capturaron imágenes y se anotó la individuo, las frecuencias encontradas se valoraron en una fracción aleatoria
localización de los espermatozoides se analizaron estadísticamente de espermatozoides en cada individuo:
aneuploides o diploides valorados mediante el test χ2 (SSP v2.8, 396 (P1), 100 (P2) y 100 (P3).
en cada panel de cromosomas (Spot Claremont, California), considerando
AX software; Sensor Control Display, un intervalo de confianza del 95%.
Tabla II. Número total de espermatozoides analizados en cada uno de los individuos
Paciente Análisis Anomalías Análisis segregación Análisis segregación
ICE1 numéricas2 muestra seleccionada3 muestra no seleccionada4
P1 22550 762 704 396
P2 9373 329 276 100
P3 22805 401 376 100
1
Nº total de espermatozoides valorados en los estudios de ICE para los cromosomas 18/X/Y y 13/21
2
Nº de espermatozoides con anomalías numéricas para alguno de los cromosomas X, Y, 13, 18 o 21 encontrados en los análisis de ICE
3
Nº de espermatozoides con anomalías numéricas relocalizados y valorados en el análisis de segregación
4
Nº de espermatozoides valorados al azar en el análisis de segregación
Los resultados referentes a la gametos equilibrados de 43.5 ± 2.7% El análisis de los patrones de segregación
valoración de los diferentes modos de (media ± DE), siendo la segregación en la población de espermatozoides
segregación en las dos poblaciones alternante el modo más representado. portadores de anomalías numéricas
de espermatozoides analizadas se Del resto de segregaciones, la que se mostró un cambio en los porcentajes
muestran en la Figura 1. observó con mayor frecuencia (media de segregación. Los porcentajes de
± DE) fue la adyacente I (30.8 ± 7.6), gametos equilibrados fueron tan sólo
El análisis en la población no seguida de la 3:1 (15.1 ± 1), adyacente de 11.1% (P1); 16.3% (P2) y 6.3%
seleccionada muestra un porcentaje de II (7.8 ± 6.5) y 4:0 (0.7 ± 0.6). (P3). En este caso, los productos de

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Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
15
Figura 1. Frecuencias de espermatozoides obtenidas en los análisis de segregación realizados en la muestra seleccionada (portadores
de anomalías numéricas) y no seleccionada de P1, P2 y P3
P1 50 Población
45 no seleccionada
40
Población
35
% espermatozoides
seleccionada
30
25
20
15
10
05
00
Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras
P2 50
45
40
35
% espermatozoides
30
25
20
15
10
05
00
Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras
P3 50
45
40
35
% espermatozoides
30
25
20
15
10
05
00
Alt. Ad. I Ad. II 3:1 4:0 Otras
* indica p-valor 0.05 respecto poblaciones no seleccionadas de espermatozoides
segregación mayoritarios fueron los estándar observado en portadores de en las poblaciones de espermatozoides
desequilibrados, con valores medios de translocaciones recíprocas, en el que con anomalías numéricas, se detectó
(media ± DE) 31.7 ± 28.1 (segregación predominan los gametos equilibrados una reducción significativa de las
4:0), 29.9 ± 8.1 (segregación 3:1), 9.2 ± productos de la segregación alternante, segregaciones alternante y adyacente I.
4.3 (segregación adyacente I) y 5.2 ± 2.6 seguida de la adyacente I (Anton et al., Por otro lado, en esta misma población, se
(segregación adyacente II). La categoría 2008). Por otro lado, los resultados de detectaron incrementos significativos de
“otras” incluyó combinaciones de segregación en la población de gametos las segregaciones 3:1, 4:0 y de la categoría
sondas no esperadas según los modos portadores de anomalías numéricas “otras”.
teóricos de segregación, y se encontró mostraron una clara desviación del patrón.
representada por una media de 12.1 ± Al comparar las frecuencias de cada modo de DISCUSIÓN
4% espermatozoides. segregación hallado en las dos poblaciones
de espermatozoides estudiadas, se La condición aneuploide/diploide se
Los resultados de segregación obtenidos evidenciaron diferencias estadísticamente encuentra preferentemente asociada a
en la población de espermatozoides no significativas en la mayoría de los la presencia de productos de segregación
seleccionados se ajustaron al patrón modos de segregación. En concreto, del tetravalente que implican una no

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Anna Godo. Desequilibrios cromosómicos en espermatozoides de individuos portadores de translocaciones recíprocas
16
disyunción (centrómeros homólogos en et al., 2001). En células portadoras de Molina O, Sarrate Z, Vidal F, Blanco J. Fish on
el mismo polo celular), especialmente las translocaciones recíprocas, el número sperm:spot-conting to stop counting? Not
segregaciones 3:1 y 4:0. En cambio, las de espermatocitos con este tipo de yet. Fertil Steril. 2009;92:1474-1480.
segregaciones alternante y adyacente I alteraciones es muy elevado. En esta
(los centrómeros homólogos migran a situación, es plausible esperar una Morel F, Douet-Guilbert N, Le Bris MJ, Herry A,
polos celulares opuestos) se encuentran frecuencia de gametos con alteraciones Amice V, Amice J, et al. Meiotic segregation of
reducidas significativamente. Estos cromosómicas que escapen al SAC translocations during male gametogenesis.
resultados sugieren que el fenómeno de proporcionalmente incrementada. Int Journal of Andrology. 2004;27:200-212.
ICE y las segregaciones desequilibradas Estos eventos explicarían por qué la
3:1 y 4:0 son sucesos dependientes célula presentaría errores derivados Nielsen J, Wohlert M. Chromosome
y que están condicionados por las de una segregación anómala de los abnormalities found among 34,910 newborn
interacciones cromosómicas que se cromosomas reorganizados, además children: results from a 13-year incidence
establecen durante el proceso meiótico de errores en la disyunción de otros study in Arhus, Denmark. Hum Genet.
(heterosinapsis), y por el nivel de cromosomas. 1991;87:81-83.
eficiencia de los puntos de control.
En consecuencia, los portadores de AGRADECIMIENTOS Oliver-Bonet M, Benet J, Sun F, Navarro J,
translocaciones recíprocas producen Abad C, Liehr T, et al. Meiotic studies in two
espermatozoides que acumulan Este trabajo se ha realizado con human reciprocal translocations and their
anomalías cromosómicas procedentes la financiación de los proyectos association with spermatogenic failure. Hum
de dos orígenes distintos. SAF2010-22241, SGR2009-282 y UAB Reprod. 2005; 20:683-688.
CF-180034. AG es beneficiaria de una
La heterosinapsis se produce en beca predoctoral PIF 456-01-4/2011. Sarrate Z, Anton E. Fluorescence in situ
portadores de translocaciones Queremos agradecer el suministro de hybridization (FISH) Protocol in Human
recíprocas entre el tetravalente y las muestras a los centros I.B.Q. Flor de Sperm. J Vis Exp. 2009;31. pii:1405. doi:
regiones asinápticas de otros bivalentes Maig y CPC (Barcelona). 10.3791/1405.
(Oliver-Bonet et al., 2005). Este
mecanismo se ha descrito como una REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Sciurano R, Rahn M, Rey-Valzacchi G, Solari
estrategia que adopta el espermatocito AJ. The asynaptic chromatin in spermatocytes
para evitar la activación del punto de Anton E, Vidal F, Blanco J. Reciprocal of translocation carriers contains the histone
control de sinapsis y recombinación en translocations: tracing their meiotic variant gamma-H2AX and associates with
la etapa de paquiteno (profase I) que behaviour. Genet Med. 2008;10:730-8. the XY body. Hum Reprod. 2007;22:142-50.
conllevaría apoptosis (Sciurano et al.,
2007). Los resultados obtenidos indican Blanco J, Egozcue J, Vidal F. Incidence Vogt E, Kirsch-Volders M, Parry J, Eichenlaub-
que la heterosinapsis podría tener un of chromosome 21 disomy in human Ritter U. Spindle formation, chromosome
efecto recíproco, que condicionaría spermatozoa as determined by fluorescent segregation and the spindle checkpoint in
tanto la segregación del tetravalente in-situ hybridization. Hum Reprod. mammalian oocytes and susceptibility to
como la de otros bivalentes implicados. 1996;11:722-6. meiotic error. Mutat Res. 2008;651:14-29.
Por otro lado, durante la transición Burgoyne PS, Mahadevaiah SK, Turner
metafase I-anafase I, la presencia del JMA. The consequences of asynapsis for
tetravalente en la placa metafásica mammalian meiosis. Nat Rev Genetics.
podría implicar una activación 2009;10:207-16.
prolongada del punto de control de
formación del huso meiótico (SAC) De Braekeleer M, Dao TN. Cytogenetic studies
(Vogt et al., 2008). En esta situación, la in male infertility: a review. Hum Reprod.
formación de gametos desequilibrados 1991;6:245-250.
y con anomalías numéricas se podría
originar por dos vías. En primer lugar, Eaker S, Pyle A, Cobb J, Handel MA. Evidence
la no reparación de las anomalías for meiotic spindle checkpoint from analysis
detectadas podría derivar en la of spermatocytes from Robertsonian-
ausencia de citocinesis y la consecuente chromosome heterozygous mice. J Cell Sci.
producción de espermatozoides 2001;114:2953-2965.
diploides (Egozcue et al., 2000). En
segundo lugar, existen indicios de Egozcue S, Blanco J, Vendrell JM, Garcia F,
que el punto de control del SAC no Veiga A, Aran B, et al. Human male infertility:
es del todo eficiente en la detección chromosome anomalies, meiotic disorders,
y eliminación de espermatocitos con abnormal spermatozoa and recurrent
alteraciones en la disposición de los abortion. Hum Reprod Update. 2000;6:93-
bivalentes en el huso meiótico (Eaker 105.

19. A R T ÍT CTULO O
I U L I I
Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2012 Vol. 17 Nº 1
17
PATRÓN DE MOVILIZACIÓN DEL [Ca2+]i , APOPTOSIS Y PAPEL DE
LA ACTINA EN PACIENTES ASTENOZOOSPÉRMICOS
[Ca2+]i MOBILIZATION, APOPTOSIS AND ROLE OF ACTIN IN ASTHENOZOOSPERMIC
PATIENTS
*Graciela M. Lozano, Águeda Ortiz, Fabián Monllor, Mª Isabel Jiménez, Juan Francisco García.
Hospital Materno Infantil. Centro Extremeño de Reproducción Humana Asistida (C.E.R.H.A). C/ Violeta SN. 06010. Badajoz
e-mail: laoliventina@hotmail.com
Fecha recepción: 30 Marzo 2012
Fecha aceptación: 12 Abril 2012
RESUMEN
La astenozoospermia se caracteriza por la disminución o ausencia total de movilidad espermática y es una de las alteraciones
más comunes en los pacientes estériles. La señalización de calcio intracelular es una importante llave reguladora de muchos
procesos celulares, entre ellos el movimiento espermático.
El objetivo de este trabajo es analizar el papel del calcio en las muestras de pacientes astenozoospérmicos estimulando la
señal de calcio intracelular con progesterona. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):17-25
Palabras clave: Astenozoospermia, Calcio, Progesterona, Citoesqueleto, Apoptosis.
SUMMARY
Asthenozoospermia is characterized by reduced forward motility or absent sperm motility and is a common cause in male
infertility. The Calcium signalling is a pivotal key in sperm physiology envolved in the motility of the sperm.
We investigated the role of calcium signalling evoked by progesterone. Rev Asoc Est Biol Rep 2012; 17(1):17-25
Key words: Asthenozoospermia, Calcium, Progesterone, Cytoskeleton, Apoptosis.
INTRODUCCIÓN progesterona (Kirkman-Browm et como receptores quimiotácticos
al., 2002; Bedu-Addo et al., 2007) (Eisenbach et al., 2006). Al mismo
Está bien establecido que la probablemente provocadas por la tiempo, aumentos en la señalización y
señalización del [Ca2+]i juega un interacción de la progesterona con concentración de [Ca2+]i pueden revelarse
papel importante en la fisiología del receptores de superficie presentes en los como señales apoptóticas que induzcan
espermatozoide humano, estando espermatozoides (Blackmore et al., 1994). a la célula a una muerte programada.
íntimamente relacionado con muchos El equilibrio entre el aumento de la
aspectos funcionales de los mismos Esta habilidad de la progesterona para concentración de [Ca2+]i y la capacidad de
(Félix, 2005; Jiménez-González et producir un aumento del [Ca2+]i en la célula para responder a estos estímulos
al., 2006), tales como el control de la espermatozoides humanos ha sido es crucial para la supervivencia celular.
movilidad, incluyendo hiperactivación directamente correlacionada con éxitos
y quimiotaxis, donde la señalización de fecundación in vitro (Krausz et al., La astenozoospermia es una causa común
del [Ca2+]i es imprescindible para 1996; Publicover et al., 2008). de esterilidad masculina caracterizada
producir el movimiento del flagelo. por una reducción o ausencia total de
La progesterona está presente en altas movilidad espermática. Alteraciones de
De hecho, una movilidad anormal concentraciones en el líquido folicular los factores que regulan la movilidad
podría estar relacionada con niveles y es sintetizada antes y después de la espermática y su estructura celular y
bajos en la concentración de [Ca2+]i ovulación por células del cúmulo oóforo metabólica son los responsables de este
(Luconi, 2003), debido a alteraciones del ovocito. Aunque la capacidad de la defecto, de hecho, en los últimos años,
en la entrada capacitativa de calcio progesterona para inducir la RA está bien se ha comprobado que en pacientes con
(ECC) a través de canales específicos establecida, parece ser que el aumento astenozoospermia, hay una reducción
pudiendo influir también en la de [Ca2+]i que produce está relacionado de los receptores de progesterona
reacción acrosómica (RA) de los con la regulación de la actividad (Gadkar et al., 2002), así como una
espermatozoides (Rossato, 2001). flagelar y de la quimiotaxis (Ulher et relación entre la infertilidad masculina y
al., 1992), resultando ser un potente la incapacidad de esos espermatozoides
El aumento citosólico de calcio se puede quimioatrayente para el espermatozoide para responder a progesterona in vitro
favorecer con dosis micromolares de humano, pudiendo actuar sus receptores (Krausz et al., 1995).

20. A R T ÍT CTULO O
T I I U L O
T U L I I
Graciela M. Lozano. Patrón de movilización del [Ca2+]i , apoptosis y papel de la actina en pacientes astenozoospérmicos
18
MATERIALES Y MÉTODOS 1999). La concentración espermática y En los experimentos libres de
la movilidad se midieron mediante el calcio, se añadió etilenglicol-bis
Progesterona, albúmina bovina (BSA), sistema de imagen digitalizado CASA (2-aminoetileter)-N,N,N’,N’- acido
medio de lavado RPMI-1640, dimetil (Computer Assisted Sperm Analysis) que tetraacético (EGTA) al medio.
BAPTA, RU-38486, etilenglicol- analiza 25 fotogramas en un campo
bis(2-aminoetileter)-N,N,N’,N’-acido magnificado de 100x en campo oscuro. La entrada capacitativa de calcio (ECC)
tetraacético (EGTA) (Sigma, Madrid, así como su aumento y mantenimiento
España). La normozoospermia se clasificó por una se midieron a los 2.5 minutos tras
concentración espermática de ≥20 × 106 la adición de CaCl2 o progesterona +
Fura-2 acetoximetil ester (fura-2/AM) y cels /ml ( x ± SD = 62 ± 30 × 106 cels/ thapsigargina, respectivamente.
thapsigargina (Invitrogen, Barcelona, ml), una movilidad progresiva (grado a
España). + b) ≥50% ( x ±SD = 54.2 ± 4.1%) y una DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD
morfología normal ≥14% ( x ± SD = 17 CASPASA-3
citocalasina D y jasplakinolide ± 3.6%).
(Calbiochem, Darmstadt, Alemania). Las células se incubaron con solución
El principal criterio de clasificación sustrato de caspasa-3 (AC-DEVD-AMC)
Receptor Anti-progesterona (PRc262) de muestras astenozoospérmicas fue unido a una sonda fluorescente durante 1
y anticuerpo monoclonal de ratón (RU una baja movilidad (Curi et al., 2002). hora a 37ºC. La actividad de la caspasa-3
-38486) (Santa Cruz Biotechnology, La astenozoospermia se caracterizó se determinó por la fluorescencia
Alemania). por una concentración espermática de producida al fragmentarse el sustrato
20 × 106 cels/ml (x ± SD = 42 ± 16 × con la ayuda de un espectrofluorímetro
Sustrato de caspasa-3 (AC-DEVD-AMC) 106 cels/ml) y una movilidad reducida con una onda de excitación de 360 nm y
(Sigma, Madrid, España). (grado a+b) 50% ( x ± SD = 23.3 emisión de 460 nm.
± 12.2%) o ausencia de movilidad,
Las determinaciones de apoptosis se independientemente de los resultados DETERMINACIÓN DE LA EXTERNALIZACIÓN
realizaron mediante el ensayo TUNEL morfológicos. DE FOSFATIDIL SERINA (PS)
(Terminal dUTP Nick-End Labeling )
(Boehringer Mannheim (Indianapolis, A continuación las muestras se lavaron Las células se fijaron en glutaraldehído
IN, USA). en medio RPMI-1640 (250 g, 10 min), e incubaron con Anexina-V unida a una
se retiraron los sobrenadantes y se sonda fluorescente de isotiocianato
PREPARACIÓN DEL SEMEN resuspendieron en una solución de Na- (Anexin-V-FITC). La fluorescencia se midió
HEPES que contiene (en mM): NaCl,140; con ayuda de un espectrofluorímetro
Las muestras de semen se obtuvieron KCl, 4.7; CaCl2, 1.2; MgCl2, 1.1; glucosa, con una onda de excitación de 488 nm y
de 37 varones normozoospérmicos y 10; y HEPES, 10 (pH 7.4). emisión de 516 nm.
33 astenozoospérmicos que acudieron
al Centro Extremeño de Reproducción MEDIDA DE LA CONCENTRACIÓN DE DETERMINACIÓN DE TUNEL
Humana Asistida (C.E.R.H.A) en CALCIO INTRACELULAR [Ca2+]i
Badajoz, para estudio de esterilidad. Las muestras sometidas a técnicas
Este trabajo fue aprobado por el Las células se incubaron con 4 µM fura-2 de TUNEL tras su incubación
comité ético del Hospital Infanta acetoximetil ester (Fura-2 AM) durante con progesterona se fijaron en
Cristina de Badajoz y por la Universidad 30 minutos a temperatura ambiente, paraformaldehído (PFA) al 4%. El
de Extremadura de acuerdo con la siguiendo protocolos publicados ADN dañado se detectó por la TdT
declaración de Helsinki. (Bejarano et al., 2008). Después se (deoxinucleotidil Transferasa Terminal)
lavaron y se utilizaron en las siguientes medida por dUDP aplicándose la técnica
A cada paciente se le sometió a una 2-4 horas. según protocolo de la casa comercial.
completa anamnesis confirmando Se revelaron con fluorescencia y los
su buen estado de salud, no eran La fluorescencia se midió en espermatozoides que presentaban su
fumadores, ni bebían alcohol, ni suspensiones celulares (2 × citoplasma con fluorescencia verde se
estaban siguiendo ningún tratamiento 108 cels/ml) a 37°C usando un contabilizaron como espermatozoides
médico. espectrofluorofotómetro Shimadzu con apoptóticos (TUNEL positivo).
longitudes de onda de excitación de 340
Las muestras se obtuvieron por y 380 nm y de emisión de 505 nm. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
masturbación tras un periodo de
abstinencia de entre 4 y 5 días y se Los cambios en las concentraciones de El análisis estadístico se realizó
dejaron licuar a 37ºC durante 30 minutos. [Ca2+]i se monitorizaron usando el ratio utilizando la prueba T de Student (p
de fluorescencia fura-2 340/380 nm y 0.05 se considera estadísticamente
Los parámetros básicos seminales que se se calibraron de acuerdo al método de significativo).
analizaron, se realizaron de acuerdo a los Grynkiewicz (Grynkiewicz et al., 1985).
criterios establecidos por la OMS (OMS,