1. Plasma Rico en
Plaquetas
Plasma Rico en Factores de
Crecimiento
Dr. Jeremías Flores Felipe
2. P.R.P.
• Es un preparado autólogo, no tóxico, no
alergénico, obtenido por centrifugación
de la sangre del paciente a intervenir
cuya función esta directamente ligada a
la liberación de los factores de
crecimiento de las propias plaquetas.
Dr. JFF
3. Antecedentes
• 1948 Rita Levi Montalcini (1er NGF)
• 1952 Stanley Cohen
• 1986 Marx (gel de PRP para injertos óseos)
• Finales 80´s Matras (adhesivo de fibrina)
Dr. JFF
4. Antecedentes
• 1996 McAndrews, Ishimura
( Reparaciones meniscales)
• 1997 Akizuki (artroplastia)
• Finales 90´s Utiliza en el campo de la cirugía
maxilo-facial. (1997 Whitman, 1999 Anitua)
• 2003 Sánchez (aparto locomotor)
Dr. JFF
5. Factores de crecimiento
• Los factores de crecimiento regulan el
crecimiento de la célula de una forma muy
diversa; así un factor puede facilitar la unión de
otro factor diferente a su receptor, puede
modificar el número de receptores para sí
mismo o para otros factores, incluso puede
modificar la síntesis y secreción de otro factor
de crecimiento diferente.
Dr. JFF
7. Mecanismo de acción
• La mayoría de los factores de crecimiento, al
contrario de lo que se creía en un principio,
son multifuncionales (efecto pleiotrópico) y
pueden actuar sobre diversas células de
diferentes maneras, teniendo efectos
positivos (activadores) o negativos
(inhibidores), en función de las células sobre
las que intervienen y de otros factores.
Dr. JFF
8. Mecanismo de acción
• Las membranas celulares están constituidas por
proteínas insertadas en una película de dos capas
lipídicas. Estas membranas contienen diversas
proteínas, con forma característica, algunas de las
cuales actúan como receptores para un factor de
crecimiento específico.
Dr. JFF
9. Mecanismo de acción
• Estos factores están en el
exterior de la célula conectando
(chocando) continuamente con
la membrana celular; cuando
encuentran el sitio donde
encajar (lugar de recepción)
quedan adheridos a la
membrana y la célula se
estimula produciendo el efecto
deseado.
Dr. JFF
10. Factor de Crecimiento
Epidérmico
• Tiene capacidad mitogénica sobre una amplia
variedad de células epiteliales, hepatocitos y
fibroblastos. Esta actividad es importante en la
cicatrización de heridas, situación en la que los
macrófagos, los queratinocitos y otras células
inflamatorias que migran a la zona dañada
segregan EGF, que se distribuye ampliamente en
secreciones tisulares y fluidos.
Dr. JFF
11. Factor de Crecimiento
Transformante
TGF-alfa
• Es expresado por los queratinocitos epidérmicos y
también por otros epitelios como los de la mucosa
oral, glándula mamaria y gastrointestinal.
• Este factor tiene acciones similares, ya que incluso
ambos se ligan y se unen al mismo receptor, no
solo de los queratinocitos, sino también de las
células de los apéndices epiteliales, músculo liso y
otros tipos de células mesenquimales.
Dr. JFF
12. TGF-beta
• Entre sus misión está la de proliferar a
muchas células mesenquimales, pero es un
potente inhibidor de la mayoría de las
células epiteliales incluyendo los
queratinocitos, y las células
hematopoyéticas. Su misión estimuladora es
dosis dependiente y estaría mediada
indirectamente por factores de crecimiento
mitogénicos autocrinos como el factor de
crecimiento derivado de las plaquetas
Dr. JFF
13. Factor de Crecimiento
Fibroblastico
• El FGF básico es un potente mitógeno para
los melanocitos, fibroblastos y
queratinocitos, y es capaz de reemplazar al
FCE para poder iniciar la proliferación de
los queratinocitos en cultivo. El FGF ácido
estimula la replicación de queratinocitos y
fibroblastos.
Dr. JFF
14. Factores de Crecimiento
Derivados de las Plaquetas
• Se trata de un potente mitógeno para
muchas células mesenquimales, y también
estimula la quimiotaxis de
fibroblastos, células musculares lisas y
hematopoyéticas en las fases precoces de la
cicatrización de las heridas una vez que se
ha producido la degranulación de las
plaquetas.
Dr. JFF
16. Factor Estimulador
Relacionado con la Insulina
• De este grupo el IGF-I (somatomedina C) es
producido por los fibroblastos y
queratinocitos y estimula la replicación de
las células mesenquimales y epiteliales.
Dr. JFF
17. Factor de Crecimiento de Células
Endoteliales Derivado de Plaquetas
• El factor de crecimiento de las células
endoteliales derivado de las plaquetas es un
polipéptido con actividad mitógena para las
células endoteliales capaz de inducir
angiogénesis in vivo.
Dr. JFF
18. EGF (Factor de Crecimiento Epidérmico)
• Está formado por dos cadenas polipeptídicas de 53 aa
y 6.045 dalton cada una, y dos moléculas de proteína
fijadora de 29.300 dalton.
• Es un complejo grande de 74.000 dalton, que
mantiene su estructura tridimensional gracias a tres
puentes disulfuro.
• La concentración fisiológica aproximada es de 0,05-3
ng/ml
Dr. JFF
19. EGF
• Tiene gran capacidad para estimular los
procesos de división, migración y diferenciación
de las células epiteliales tanto en tejidos de
revestimiento como glandulares.
• Su principal lugar de síntesis son las glándulas
salivares y el riñón, pero se ha detectado
actividad transcripcional (EGF mARN) en células
mamarias, en el páncreas, intestino delgado y
otros muchos tejidos, y se ha detectado en la
mayoría de los fluidos biológicos y en el plasma
Dr. JFF
20. EGF
• La respuesta del EGF puede ser
mitogénica y no mitogénica
Mitogénica:
• Proliferación de los queratinocitos y de
los fibroblastos.
Dr. JFF
21. EGF
No Mitogénica:
• Por su vía metabólica provoca la activación de la
enzima fosfatidilinositol-3-cinasa, lo que provoca un
aumento de pH citosólico activando el sistema
enzimático anti-stress.
• Incremento de la actividad de la enzima superóxido de
dismutasa, enzima que actúa sobre el anión
superóxido bloqueando al radical oxígeno, por lo tanto
disminuyendo la oxidación celular.
Dr. JFF
22. EGF
No Mitogénica:
• Por su vía metabólica provoca la activación de la
enzima fosfatidilinositol-3-cinasa, lo que provoca un
aumento de pH citosólico activando el sistema
enzimático anti-stress.
• Incremento de la actividad de la enzima superóxido de
dismutasa, enzima que actúa sobre el anión
superóxido bloqueando al radical oxígeno, por lo tanto
disminuyendo la oxidación celular.
Dr. JFF
23. EGF
• Interactúa con el óxido nítrico actuando
sobre el tono de la vasculatura lisa.
• Activa la síntesis de colágeno, matriz
intercelular, formación de ácido
hialurónico.
Dr. JFF
24. EGF y la Piel
• Los receptores cutáneos para el F.C.E. se
distribuyen entre sus distintos
componentes.
• DERMIS:
- Células mioepiteliales.
- Musculatura lisa vascular.
- Células de la musculatura erectora del
pelo.
Dr. JFF
25. EGF y la Piel
• EPIDERMIS:
- Células basales de la epidermis. Cuanto más
indiferenciada es una célula, mayor número de
receptores para el F.C.E. tendrá, de aquí que
haya mayor número en la membrana basal.
- Células del conducto sudoríparo ecrino.
- Sebocitos basales.
Dr. JFF
26. EGF y la piel
• PELO:
- En el desarrollo del folículo piloso hay dos
factores importantes, el F.C.E. y TGF-alfa
(Factor de crecimiento transformador alfa). El
receptor expresa en la vaina epitelial externa y
en el folículo pilosebáceo, y en algunas
especies en el bulbo piloso.
Dr. JFF
27. Obtención de los Factores de Crecimiento
Plaquetario
• Se realiza la extracción de sangre del
paciente, tomando en cuenta que la vida
media de las plaquetas a temperatura
ambiente es de 2 horas.
• La cantidad dependerá de el defecto a tratar
(sabiendo que de cada 10 cm3 de sangre se
obtiene aproximadamente de 1 a 1.5cm3
de PRP)
• Ayuno de 6 hrs antes de la extracción de la
sangre.
Dr. JFF
28. Obtención de los Factores de Crecimiento
Plaquetario
• En el procedimiento se elige
como anticoagulante el citrato
sódico el idóneo por no alterar
los receptores de membrana
de las plaquetas.
Dr. JFF
29. Obtención de los Factores de Crecimiento
Plaquetario
• La sangre centrifugada se comportará
precipitando al fondo los elementos
morfes y superponiéndolos por orden
de densidades.
• Al fondo lógicamente se ubicará la
fórmula roja (glóbulos rojos), la parte
superior será plasma (por que
conserva la actividad del fibrinógeno).
Dr. JFF
30. SELECCIÓN P.R.G.F.
• Los primeros .5 cc plasma
pobre.
• Los siguientes.5 cc plasma con
un núm. de plaquetas similar al
que tiene la sangre periférica.
• La fracción de plasma plasma
rico en factores de crecimiento
son .5 cc inmediatamente
encima de la serie roja.
Dr. JFF
31. ACTIVACION
• Añadiremos 50 microlitros (0.005cc) de
cloruro càlcico al 10% por cada cc. de plasma
rico en factores de crecimiento (fracción 3).
• Entre 10 y 15 minutos antes de su utilización.
• De 3 a 5 min. se forma un coagulo.
Dr. JFF
32. Aplicación de los
Factores de Crecimiento
Plaquetario
A los tres meses una nueva sesión de
Plasma Enriquecido con Plaquetas.
Luego se realiza a una sesión anual.
Dr. JFF
33. FCP para uso terapéutico
• Este PRP está compuesto por un pequeño volumen de
plasma con fibrinógeno, plaquetas y leucocitos.
• Las plaquetas, inicialmente, se encuentran en un estado
inactivado.
• La plaqueta se activa tras la interacción con la trombina
(potente activador plaquetar) y un exceso de calcio que
además precipitará la coagulación y por lo tanto
retroalimentará la activación plaquetar.
• El resultado final es la formación de una sustancia
gelatinosa pegajosa tipo trombo o Gel Plaquetario, en la
cual las plaquetas activadas están atrapadas en una red de
fibrina donde continúan excretando su contenido al
ambiente extracelular.
Dr. JFF
34. Gel Plaquetario
• El Gel Plaquetario contiene leucocitos diferenciados y no
activados, con diversas funciones como la protección
inmune frente a bacterias.
• La concentración de plaquetas en el PRP es de 3 a 7 veces
mayor que en la sangre y la de leucocitos de 2 a 4 veces
• Tras la activación del PRP, se forma un gel viscoso, con una
cierta plasticidad, que se pega a los tejidos dañados.
• Al Gel Plaquetario resultante, se le puede dar forma,
poner en diferentes vehículos (gasas o materiales
biocompatibles como fibrina o ácido hialurónico) o usar
tópicamente.
• También se puede mezclar con el hueso o sustitutos óseos
para acelerar la curación ósea.
Dr. JFF
35. Gel Plaquetario
• El término gel describe un producto maleable,
parecido a la gelatina, y que es el resultado de añadir
calcio y/o trombina al plasma rico en plaquetas.
• El fibrinógeno se transforma en fibrina, la cual
polimeriza dando lugar a una sustancia similar a un
pegamento.
• Las plaquetas atrapadas en este gel están activadas y
liberan moléculas bioactivas, que difunden lentamente
a su entorno con el fin de ejercer sus acciones de
proliferación, remodelación y regeneración tisular.
Dr. JFF
36. Factor de Crecimiento Derivado
de Plaquetas (PDGF)
Juega un papel crítico en la proliferación y desarrollo tisular.
El primero en actuar en las heridas y fomentar la revascularización.
Su proporción casi inmensurable en el coágulo (0.06ng/m plaquetas) es
suficiente para:
Inducir la mitogénesis, angiogénesis y producción de proteínas de la
matriz extracelular
Efecto quimiotáctico y activador de las células inflamatorias
Facilitar la formación de colágeno tipo I y estimula la producción de
fibronectina y ac. hialurónico
Dr. JFF
37. Gel de Plaquetas, ventajas clínicas
Predecesor histórico es el adhesivo de fibrina
Aporte rico en factores de crecimiento plaquetares y otras
moléculas biológicas
Se logra con la mezcla de Plasma Rico en Plaquetas con Calcio
y/o trombina
Suele ser de origen autólogo
Aplicación Local
Dr. JFF
38. Obtención del Gel Plaquetario
Obtención del PRP:
Aféresis de plaquetas
Capa leucoplaquetaria
Centrifugación diferencial, a partir de sangre total.
Contenido de plaquetas terapéutico > 12 x 106/ µL
Activación con Calcio y/o trombina para producir el gel
Cuantificación de FC:
Enzimoinmunoensayo
Citometría de flujo
Dr. JFF
39. Trombina de origen bovino
• El uso de trombina de origen bovino para la activación
del PRP se está abandonando, debido a que en algunos
casos se han desarrollado:
• Anticuerpos contra el FV, FXI y trombina, lo que podría
producir una coagulopatía.
• Existe también un posible riesgo de transmisión de la
vCJD (variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob).
• Otro potencial efecto sería el que se deriva de la
liberación de micropartículas existentes en las
plaquetas, que transportan proteínas como IL-1β con
efecto protrombótico.
Dr. JFF
40. Obtención de Gel Plaquetario
• En un primer paso se obtiene PRP, que posteriormente es
“activado” para favorecer la liberación de los FC.
• La obtención del PRP autólogo puede realizarse por tres métodos:
aféresis, capa leucoplaquetaria y en tubo .
• La diferencia entre ellos viene condicionada sobre todo por el
volumen que se procesa, que está en relación con la extensión de la
lesión sobre la que se va a aplicar.
• Las plaquetas se obtienen a través de separadores celulares de flujo
continuo o discontinuo, procesándose volúmenes grandes, o bien
por centrifugación diferencial a partir de sangre total recolectada
en tubos citratados.
Dr. JFF
42. Semi Automatizados
• Entre los sistemas disponibles actualmente
para la obtención ambulatoria de PRP se
encuentra el Smart PReP® 2 APCTM (Harvest
technologies) y el PCCS 3i (Implant
Innovation Inc.).
• Los dos sistemas utilizan una centrifugación
diferencial y consiguen concentraciones de
plaquetas superiores a 1x106.
• Existen otros sistemas diseñados con la
misma finalidad y aprobados en
Europa, como el PRGF (de BTI), el GPSTM (de
Biomet) y el AGFTM (de MBA).
Dr. JFF
43. Control de variables
• El control de variables en la fase de obtención es
crucial, ya que la forma de preparación y el tipo
de contenedor, así como ciertas medicaciones –
ácido acetilsalicílico u otros antiagregantes- y
hábitos del donador/paciente -tabaquismo,
hiperlipidemia, estrés- tienen una repercusión
directa en la activación de las plaquetas y en su
posterior capacidad funcional.
Dr. JFF
44. Condiciones para que actúen
los FCP
Existen tres importantes áreas condicionantes en la
reparación de las heridas.
• La primera es la ambiental: la herida debe ser estable,
cerrada, bien vascularizada y libre de infección.
• La segunda es la celular: las células reparadoras deben
ser capaces de migrar a los bordes de la herida desde
el tejido sano.
• La tercera es la bioquímica: los factores de crecimiento
deben estar presentes en concentración suficiente para
estimular los mecanismos de reparación tisular.
Dr. JFF
45. Riesgos del Gel de Plaquetas
¿POTENCIAL CARCINOGÉNICO?
Se propone evitar su uso en pacientes con procesos cancerosos o
exposición a carcinógenos. Pero al momento no hay evidencia que
demuestre efecto cancerígeno.
CAPACIDAD ANTI-APOPTÓTICA.
Depósito excesivo de colágeno y cicatrización hipertrófica.
Aparición de Ac anti FII y Anti FV por el uso de trombina de origen
bovino.
Dr. JFF
47. Otras acciones del Gel de plaquetas
Capacidad antimicrobiana:
Efecto antiséptico de las proteasas contenidas en los gránulos alfa.
Neutrófilos ricos en mieloperoxidasa
Proteínas microbicidas plaquetares liberadas por las propias
plaquetas.
Fibronectina y otras proteínas, actúan como moléculas de
adhesión, como matriz para el tejido conectivo y favorecen la migración
epitelial.
Dr. JFF