O documento descreve o processo de eletroforese, incluindo a separação de partículas em gel de agarose ou poliacrilamida com base em seu tamanho e carga elétrica, e a visualização dos resultados sob luz UV após a adição de agentes intercalantes como bromureto de etídio.

1. Eletroforese Docente: Dyego Miranda

2. Métodos Após: Extração Quantficação PCR Visualização do resultadodaamplificaçãopeloprocedimento de Eletroforese

3. Princípio Eletroforese Consistenamigração e separação de partículasemumamatriz (suporte), submetidas a umadiferença de potencialelétrico; Os suportespodem ser: Papel de filtro Acetato de celulose Gel de agarose Gel de poliacrilamida A migração das partículasdepende do seutamanhoe carga, alémda DDP a queforamsubmetidas

4. Eletroforeseem gel Eletroforeseem gel é eficienteempromover a separação de partículas de acordo com o seutamanho Gel de poliacrilamida Usadoemseparação de proteínasoupartículasmuitopequenas Gel de agarose Utilizadoparaseparação de partículasrelativamentepequenas e partículasgrandes O DNA contémcarganegativa, portantomigrapara o pólopositivo Quantomaisconcentrado o gel, mais “fechada’’ é suamalha, portanto a partículaterámaisdificuldadeematravessá-la

5. Princípio + A amostra é inseridanos “pocinhos” Partículas de menortamanhooucargamaisnegativacorreprimeiro - Umacorrenteelétrica é aplicada

7. Gel de agarose É utilizadoemumacuba horizontal ligada a umafonte Umasoluçãotampão é adicionada à cuba, ondeirámanterestáveis as condições de pH do meio

8. Intercalantes Brometo de etídio Agente intercalante do DNA Cancerígeno! Composto fluorescente à luz UV Nitrato de prata Gel Red

9. Visualização do gel de agarose em luz UV

11. Gel de poliacrilamida A poliacrilamida também pode ser utilizada com gel para a eletroforese. A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida; Utilizada para observação de fragmentos menores (poucos pares de bases ou proteínas); Melhorresolução do que a eletroforeseem gel de agarose; Desvantagem: Neurotóxica

12. Gel de poliacrilamida É realizadaemumacuba de eletroforese vertical.