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Cytometry
Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002.
http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom-
Learning-Guide.pdf Recuperado: 19/10/16.
• Identificación de marcadores celulares con
anticuerpos.
• Fenotipificación por antígenos de superficie.
• Detección intracelular de iones o moléculas.
• Citometría de bacterias.
• Análisis de DNA: ciclo celular, tamaño del
genoma y aneuploidías.
• Estudios de inducción de apoptosis.
Proliferación celular mediante marcaje.
• Expresión génica.
• Separación (sorting) para: estudios
funcionales en subpoblaciones definidas,
cultivo de células transfectadas, clonación de
células y enriquecimiento celular.
http://labnalcit.org/que-es-la-citometria-de-flujo/
Cytometry
• Single cells suspensions (células disgregadas)
• Genera mediciones discretas
• Provee la distribución de las características.
• Tres partes básicas:
Fluídica
Óptica
Electrónica
• La muestra se
inyecta en un
sheath fluid
• Enfoque
hidrodinámico
• Pasa por el haz
• Solo una
partícula pasa
frente al laser
Menor flujo:
-Más precisión
-Muy Tardado.
Mayor flujo:
-Menos precisión
-Rápido.
Sistemas acústicos
Cytometry
• Formados por una fuente, espejos lentes y
filtros que dirigen el haz
• Se usan láser:(The argon ion laser is commonly used in flow
cytometry because the 488-nm light that it emits excites more than
one fluorochrome )
-Que emiten longitudes estándar.
• Al entrar en contacto con una célula la luz es
espaciada (scattered y varias direcciones
Foward y Side Scatter)
Cytometry
• Pulsos de Voltaje
• Analiza altura, área y la longitud del pulso
• Trasfiere los datos
Cytometry
• El fluorocromo interacciona con el láser y
emite energía radiante, la luz emitida es de
menor energía obteniendo diferencia entre la
longitud de onda de absorción y emisión
• El uso de fluorocromos se puede detectar
hasta 3 colores por láser.
Cytometry
• La muestra a analizar debe encontrarse en
suspensión.
• Hay muestras como la sangre periférica,
médula ósea, o otros fluidos biológicos, que
precisan de un mínimo procesamiento;
• Otras muestras necesitan disgregación
(mecánica, enzimática, etc.)
Cytometry
Referencias.
• Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002.
http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom-Learning-
Guide.pdf Recuperado: 19/10/16
• http://labnalcit.org/ Fecha de consulta:18/10/16, http://labnalcit.org/equipos-2/
• Jacob Frelinger, Thomas B Kepler, Cliburn Chan. Flow: Statistics, visualization and informatics
for flow cytometry, Source Code Biol Med. 2008.
• [Thermo,Fisher Scientific].(2/10/2012), The Discovery of Acoustic Focusing & the Attune®
Flow Cytometer. Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=b2ilHEnugE0
• [Thermo,Fisher Scientific].(14/04/2011), Attune® Acoustic Focusing Cytometer Tutorial
Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=kpkL2EEJDsU

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Cytometry

  • 2. Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002. http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom- Learning-Guide.pdf Recuperado: 19/10/16.
  • 3. • Identificación de marcadores celulares con anticuerpos. • Fenotipificación por antígenos de superficie. • Detección intracelular de iones o moléculas. • Citometría de bacterias. • Análisis de DNA: ciclo celular, tamaño del genoma y aneuploidías. • Estudios de inducción de apoptosis. Proliferación celular mediante marcaje. • Expresión génica. • Separación (sorting) para: estudios funcionales en subpoblaciones definidas, cultivo de células transfectadas, clonación de células y enriquecimiento celular. http://labnalcit.org/que-es-la-citometria-de-flujo/
  • 5. • Single cells suspensions (células disgregadas) • Genera mediciones discretas • Provee la distribución de las características.
  • 6. • Tres partes básicas: Fluídica Óptica Electrónica
  • 7. • La muestra se inyecta en un sheath fluid • Enfoque hidrodinámico • Pasa por el haz • Solo una partícula pasa frente al laser
  • 8. Menor flujo: -Más precisión -Muy Tardado. Mayor flujo: -Menos precisión -Rápido.
  • 11. • Formados por una fuente, espejos lentes y filtros que dirigen el haz • Se usan láser:(The argon ion laser is commonly used in flow cytometry because the 488-nm light that it emits excites more than one fluorochrome ) -Que emiten longitudes estándar. • Al entrar en contacto con una célula la luz es espaciada (scattered y varias direcciones Foward y Side Scatter)
  • 13. • Pulsos de Voltaje • Analiza altura, área y la longitud del pulso • Trasfiere los datos
  • 15. • El fluorocromo interacciona con el láser y emite energía radiante, la luz emitida es de menor energía obteniendo diferencia entre la longitud de onda de absorción y emisión • El uso de fluorocromos se puede detectar hasta 3 colores por láser.
  • 17. • La muestra a analizar debe encontrarse en suspensión. • Hay muestras como la sangre periférica, médula ósea, o otros fluidos biológicos, que precisan de un mínimo procesamiento; • Otras muestras necesitan disgregación (mecánica, enzimática, etc.)
  • 19. Referencias. • Introduction to Flow Cytometry: A Learning Guide. BD Biosciences, 2002. http://www.bu.edu/flow-cytometry/files/2010/10/BD-Flow-Cytom-Learning- Guide.pdf Recuperado: 19/10/16 • http://labnalcit.org/ Fecha de consulta:18/10/16, http://labnalcit.org/equipos-2/ • Jacob Frelinger, Thomas B Kepler, Cliburn Chan. Flow: Statistics, visualization and informatics for flow cytometry, Source Code Biol Med. 2008. • [Thermo,Fisher Scientific].(2/10/2012), The Discovery of Acoustic Focusing & the Attune® Flow Cytometer. Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=b2ilHEnugE0 • [Thermo,Fisher Scientific].(14/04/2011), Attune® Acoustic Focusing Cytometer Tutorial Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=kpkL2EEJDsU

Notes de l'éditeur

  1. Técnica que mide caracteristicas fisicas y quimicas de 1 celula o partícula con una corriente de flujo. Fisicas: tamaño y granularidad quimicas depende el agente utilizado.
  2. Fuente de imágenes: http://labnalcit.org/equipos-2/
  3. Fuente de imágenes: http://labnalcit.org/equipos-2/
  4. La utilidad de usar estos lasers, es cuando se tiene una muestra heterogenea dará tamaños y granularidad distintos pero conglomerado, así distinguiendo entre cada tipo celular. Un ejemplo muy común es la sangtre
  5. se denomina Stokes shiff.