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Diagnostic de  Fasciola hepatica  chez  Galba truncatula  par PCR multiplexe Righi S 1 ., Benakhla A. 1 , Mekroud A. 2 , Ouchene N. 1 , Sedraoui S. 1   1-  Institut des Sciences Vétérinaires, Centre Universitaire d’El Tarf, El Tarf, Algérie 2 -  Institut des Sciences Vétérinaires, Université de Constantine. Constantine, Algérie 2011 Parasitologie Parasitology Poster  98
Résumé La fasciolose à  Fasciola hepatica , est l’une des parasitoses les plus répandues dans le monde, elle affecte principalement les ruminants domestiques et est responsable de pertes économiques importantes (saisies de foie) ainsi qu’une diminution des performances zootechniques (Mage, 1988 ; 1989).  De nombreux outils de diagnostic sont utilisés pour dépister la maladie chez l’hôte définitif, cependant les méthodes relatives à la détection de l’infestation naturelle chez le mollusque reposent essentiellement sur l’écrasement, la dissection microscopique, l’observation de l’émission cercarienne. Ainsi des prévalences de l’infestation naturelle de  G. truncatula  dépistées par observation sous loupe binoculaire allant de 0,3% à 10,4%  ont été relevées dans trois régions (Jijel, Constantine et El Tarf) (Mekroud, 2004). Une méthode plus spécifique et hautement sensible (PCR) a été mise au point en utilisant une séquence d’ADN spécifique du génome de  Fasciola  sp.   (Kaplan  et al ., 1995 ; Caron  et al ., 2007). Cette technique a été optimisée par l’utilisation d’un protocole d’extraction d’ADN novateur, rapide et peu onéreux ainsi que par la mise en place d’un contrôle interne (PCR multiplexe) permettant d’éliminer les résultats faux négatifs (Caron  et al , 2011) . La présente étude a pour but l’utilisation d’une PCR multiplex e afin d’établir pour la première fois sur base moléculaire la prévalence de  F. hepatica  chez  G. truncatula  en Algérie. Introduction La fasciolose à  Fasciola hepatica  est une importante parasitose qui sévit largement en Algérie ainsi, la wilaya d’El Tarf est considérée comme une région endémique lourdement touchée par cette affection. La détection de l’infestation naturelle par  Fasciola hepatica  de l’hôte intermédiaire représenté en Algérie par  Galba truncatula  est traditionnellement basée sur les méthodes microscopique. Nous développons dans ce travail l’utilisation pour la première fois de la PCR multiplexe pour le diagnostic de l’infestation naturelle des mollusques prélevés dans la région d’El Tarf.  Deux primers ont été utilisés  pour   amplifier à la fois le fragment d’ADN de 124 pb (paire de base) spécifique de  Fasciola sp  et la séquence ITS2 de mollusque (± 500pb). Une mise en lots a été réalisée dans l’analyse des mollusques (75 lots).  L’étude a concerné 722 mollusques récoltés dans des habitats typiques (fossés de route, mares, cours d'eau et falques) au niveau de cinq localités dans la wilaya d’EL Tarf et sur les 722 mollusques, la bande du contrôle interne n’a pas pu être amplifiée pour 24 mollusques, ils ont donc été exclus pour le calcul des différentes prévalences. La prévalence de l’infestation a été estimée à 10,74 % (75/698). Les limnées de grandes tailles ont été les plus infestées
Matériels et méthodes ,[object Object],[object Object],[object Object],Figure n°1  : Présentation de la wilaya d’El-Tarf  .  B. Les mollusques ( Galba truncatula ) Les échantillons de mollusques retenus pour l’étude ont été pris au niveau  de cinq localités dans la wilaya d’El-Tarf (Boutheldja, Lac des oiseaux, El Matrouha, El Guergour et Oued El Hout). Les prélèvements ont été réalisés dans des biotopes typiques (mares temporaires, cours d’eau, fossés de route et flaques).  Nous avons utilisé pour la récolte des limnées la technique des quadrats (1 m2) soit par chasse à vue soit en utilisant le passoir. La méthode des quadrats consiste à collecter les mollusques présents au niveau du sol, la végétation ou dans l’eau dans un périmètre de 1 m2  pour chaque habitat  ( Mekoud, 2004). Les mollusques ont été rincés avec de l’eau et mis par la suite dans des tubes étiquetés contenants de l’alcool à 70° pour conservation. La densité des mollusques pour chaque habitat a été notée en comptant sur 3 m2 pris au hasard et en établissant par la suite la moyenne. (Tableau n° 1) Tableau n°1  : Valeurs concernant les habitas prospectés, effectifs de limnées ainsi que le taux d’infestation par  Fasciola hepatica. 21,95 35 5 41 Oued El Hout  14,10 36 14 80 EL Matrouha  13,24 96 64 323 Lac des oiseaux 6 143 7 101 El Guergour 5,08 44 33 177 Boutheldja  Taux d’infestation (%) Densité des limnées (l/m2) Superficie totale des habitats (m²) Nombre de limnées Prélevées Région
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Résultats ,[object Object],[object Object],[object Object],Figure n°2:  Gel d’électrophorèse obtenu suite à la PCR multiplexe:  (M) poids moléculaire;  (1), (4), (5), (7), (8), (9), (10) limnées négatives;  (2), (3), (6) limnées positives;  (C-) control négatif; (C+) control positif
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Discussion et conclusion ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Bibliographies ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Nous tenons à exprimer nos vifs remerciements  au Professeur Losson Bertand et au Docteur Caron Yannick de la faculté de Médecine Vétérinaire, Université de Liège (Belgique) pour leur soutien matériel, leur aide précieuse et assistance technique dans la réalisation des analyses de PCR multiplexe (Laboratoire de Parasitologie et des maladies Parasitaires).   Remerciements

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  • 1. Diagnostic de Fasciola hepatica chez Galba truncatula par PCR multiplexe Righi S 1 ., Benakhla A. 1 , Mekroud A. 2 , Ouchene N. 1 , Sedraoui S. 1 1- Institut des Sciences Vétérinaires, Centre Universitaire d’El Tarf, El Tarf, Algérie 2 - Institut des Sciences Vétérinaires, Université de Constantine. Constantine, Algérie 2011 Parasitologie Parasitology Poster 98
  • 2. Résumé La fasciolose à Fasciola hepatica , est l’une des parasitoses les plus répandues dans le monde, elle affecte principalement les ruminants domestiques et est responsable de pertes économiques importantes (saisies de foie) ainsi qu’une diminution des performances zootechniques (Mage, 1988 ; 1989). De nombreux outils de diagnostic sont utilisés pour dépister la maladie chez l’hôte définitif, cependant les méthodes relatives à la détection de l’infestation naturelle chez le mollusque reposent essentiellement sur l’écrasement, la dissection microscopique, l’observation de l’émission cercarienne. Ainsi des prévalences de l’infestation naturelle de G. truncatula dépistées par observation sous loupe binoculaire allant de 0,3% à 10,4% ont été relevées dans trois régions (Jijel, Constantine et El Tarf) (Mekroud, 2004). Une méthode plus spécifique et hautement sensible (PCR) a été mise au point en utilisant une séquence d’ADN spécifique du génome de Fasciola sp. (Kaplan et al ., 1995 ; Caron et al ., 2007). Cette technique a été optimisée par l’utilisation d’un protocole d’extraction d’ADN novateur, rapide et peu onéreux ainsi que par la mise en place d’un contrôle interne (PCR multiplexe) permettant d’éliminer les résultats faux négatifs (Caron et al , 2011) . La présente étude a pour but l’utilisation d’une PCR multiplex e afin d’établir pour la première fois sur base moléculaire la prévalence de F. hepatica chez G. truncatula en Algérie. Introduction La fasciolose à Fasciola hepatica est une importante parasitose qui sévit largement en Algérie ainsi, la wilaya d’El Tarf est considérée comme une région endémique lourdement touchée par cette affection. La détection de l’infestation naturelle par Fasciola hepatica de l’hôte intermédiaire représenté en Algérie par Galba truncatula est traditionnellement basée sur les méthodes microscopique. Nous développons dans ce travail l’utilisation pour la première fois de la PCR multiplexe pour le diagnostic de l’infestation naturelle des mollusques prélevés dans la région d’El Tarf. Deux primers ont été utilisés pour amplifier à la fois le fragment d’ADN de 124 pb (paire de base) spécifique de Fasciola sp et la séquence ITS2 de mollusque (± 500pb). Une mise en lots a été réalisée dans l’analyse des mollusques (75 lots). L’étude a concerné 722 mollusques récoltés dans des habitats typiques (fossés de route, mares, cours d'eau et falques) au niveau de cinq localités dans la wilaya d’EL Tarf et sur les 722 mollusques, la bande du contrôle interne n’a pas pu être amplifiée pour 24 mollusques, ils ont donc été exclus pour le calcul des différentes prévalences. La prévalence de l’infestation a été estimée à 10,74 % (75/698). Les limnées de grandes tailles ont été les plus infestées
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