1. LA VITA DAL MARE Analisi microbiologiche Su alimenti e acque marine PON 2011 ITAS ELENA SAVOIA Esperto Prof.ssa LiliaAndriani Tutor Prof. Giacomo Sollecito
2. Analisi Microbiologiche sulle acque di Balneazione Membrane Filtranti (MF) per concentrazione, mediante filtrazione di aliquote su membrana con pori di 0,22 – 0,44 m. La membrana viene posta successivamente su agar (m-Enterococcus Agar (detto anche Slanetz-Bartley). Il terreno contiene azide come inibente e TTC (TrifenilTetrazolio Cloruro) come differenziale (produzione di precipitato insolubile che conferisce colore rosso-rosa alle colonie).
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4. LA BALNEAZIONE Requisiti qualità acque di balneazione - anno 2009 (allegato 1 al DPR) Su ogni punto di controllo è prevista la determinazione di parametri fisici, chimici e microbiologici indicatori di contaminazione. D. Lgs. n.116/2008 REQUISITI E CRITERI DI VALUTAZIONE DELLA QUALITA’ ACQUE COSTIERE (*) basato sulla valutazione del 95° percentile (**) basato sulla valutazione del 90° percentile
5. Analisi Microbiologiche su molluschi bivalvi Il D.L.svo 530/92 prevede la ricerca dei metalli mercurio e piombo oltre alla ricerca di coliformi totali o di Escherichia Coli. Reg. CE 2075/05 E.coli <230 MPN/100 g Salmonella assenza in 25 g
7. ANALISI SU MOLLUSCHI BIVALVI I molluschi vengono puliti , lavati con acqua e sciacquati con acqua distillata sterile. Successivamente vengono aperti sterilmente in numero adeguato ad ottenere circa 100 g di polpa e liquido intravalvare. Omogeneizzatore a lame rotanti produce una completa frammentazione e miscelazione del campione
8. PLATE COUNT AGAR STANDARD (PCA) Substrato per la numerazione dei microrganismi totali negli alimenti Conta microbica totale A 37°
9. MPN enteroCOCCHI FECALI AZIDE DEXTROSE BROTH Terreno selettivo per la determinazione presuntiva degli streptococchi fecali nelle acque ETHYL VIOLET AZIDE BROTH Terreno liquido selettivo per confermare la presenza degli streptococchi fecali
10. Determinazione degli Enterococchi con il metodo MPN L'intero procedimento prevede due stadi: il test presuntivo viene effettuato in provette di Brodo Azide destrosio (positive con intorbidamento) la conferma in provette di EVA (EthylViolet Azide Broth): positive con intorbidamento e precipitato violetto. Azide ed etil violetto sono inibenti per i GRAM- e cocchi GRAM+ diversi dagli enterococchi Terreno crescita terreno crescita base base Brodo Azide Brodo EVA
11. MPN COLIFORMI totali e FECALI BRODO LATTOSATO Terreno liquido per la ricerca presuntiva e la conferma dei coliformi BRILLIANT GREEN AGAR Terreno selettivo per l’isolamento di Salmonella, e coliformi fecali da acqua ed altri prodotti alimentari.
12. Prova presuntiva per coliformi totali Brodo lattosio in provette da 9 ml. Inoculare 3 – 5 serie di tubi con le opportune diluizioni del campione Incubare per 24 ore 2 a 35°C 0,5. Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio); tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore) Prova confermativa per coliformi totali Brodo lattosio verde brillante bilein provette da 9 ml. Trasferire 1 ml da ciascun tubo positivo in un tubo di BLVBB Incubare per 24 ore 2 a 35°C 0,5. Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio); tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore) Prova confermativa per coliformi fecali EC brothoppure brodo lattosio verde brillante bile (BLVBB) tubi da 9 ml Trasferire 1 ml da ciascun tubo positivo di Brodo lauryl-solfato Incubare per 24 ore 2 a 44,5°C. Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio); tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore) E. coli produce indolodaltriptofano a 44°C
13. TEST DI SCREENING PER GRAM – Il test preliminare è quello della citocromo-ossidasi, per differenziare le Enterobacteriaceae (-) dalle non Enterobacteriaceae (+). Positivo: BLU Vibrionaceaee Pseudomonadaceae Negativo: ROSA Enterobacteriaceae
14. LA VITA DAL MARE fine PON 2011 ITAS ELENA SAVOIA
