Este documento describe diferentes técnicas de diagnóstico microbiológico en neumología, incluyendo técnicas no invasivas como el análisis de esputo, orina y sangre, y técnicas invasivas como la broncoscopia, lavado broncoalveolar y punción transtorácica. El objetivo es obtener muestras representativas para identificar agentes infecciosos mediante tinción, cultivo u otras pruebas.

1. Neumología
CULTIVOS ESPECIALES Dr. Gerardo
Emilio Sánchez
EN NEUMOLOGÍA Romero
Presenta:
Mayra Lizzeth
Osorio Gómez

2. TECNICAS DE DIAGNOSTICO
MICROBIOLOGICO
 Han experimentado en los últimos años un considerable
desarrollo, esto se ha hecho especialmente patente en el
estudio de la patología pulmonar infecciosa dada la
complejidad diagnóstica que presenta:
Dificultad para obtener
muestras
representativas del
foco infeccioso
Pacientes
Los
inmunodeprimidos
microorganismos
con el consiguiente
implicados en el
auge de la TB e
proceso pueden ser
infecciones
muy diferentes
oportunistas
Presencias de Creciente desarrollo
gérmenes de cepas resistentes
comensales en las a la terapia
VR antibiótica

3. OBTENCIÓN DE MUESTRAS
Tipo de muestras para diagnostico microbiologico en neumologia
1. No invasivas
 La obtención de las
- Esputo
muestras puede
- Sangre llevarse a cabo
- Suero mediante técnicas
- Orina no invasivas
- Liquido pleural
(esputo, líquido
2. Invasivas
- Puncion transtraqueal
pleural, sangre y
- Fibrobroncoscopia orina) e invasivas
• Broncoaspirado (punción
*Cateter telescopado con cepillo protegido transtraqueal, fibro
broncoscopia, punci
*Lavado vroncoalveolar
* Biopsia transbronquial
ón transtorácica y
* Puncion transbronquial espirativa biopsia pulmonar).
- Puncion aspiracion transtoracica
- Biopasi pulmonar

4. TÉCNICAS NO INVASIVAS

5. ANÁLISIS DE ESPUTO
 Para que sea de utilidad la muestra obtenida debe proceder
del tracto respiratorio inferior evitando la contaminación
orofaríngea.
 Tanto los resultados de la sensibilidad ( 60-100%),como de la
especificidad (14-100%) derivados de este tipo de muestra
son muy variables.
 En ocasiones será necesario recurrir a técnicas de inducción
de esputo con suero fisiológico para obtener una buena
muestra

6. TINCIÓN DE GRAM
 Perrmite el examen directo del esputo; tiene valor orientativo
en el diagnóstico de infecciones bacterianas, es una técnica
rápida y sencilla.
 Se considera que el material es representativo si se visualizan
> 10 leucocitos PMN y< 25 células de descamación por
campo

7. TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
 Debe realizarse ante sospecha de etiología tuberculosa, su
rentabilidad aumenta con el número de muestras recogidas
(por regla general tres)
 Se requieren al menos 10.000 BAAR / ml para que puedan
ser visualizados por esta técnica.
 No permite diferenciar M.tuberculosis de otras micobacterias.
 Es una técnica fácil y rápida de realizar

8. TINCIÓN DE AURAMINA
 Permite la visión directa del mycobacterium mediante un
microscopio de fluorescencia utilizando como colorante un
fluorocromo como la auramina, tiene una eficacia similar a la
tinción de Zhiehl – Neelsen aunque su principal ventaja es su
mayor rapidez, por lo que su utilización está justificada en
aquellos laboratorios que realicen más de 10 exámenes
microscópicos diarios

9. BLANCO DE CALCOFLUOR Y TINTA CHINA
 Blanco de calcofluor: para hongos
 Tinta china: análisis en fresco para criptococos.

10. CULTIVO DE ESPUTO
 Su rentabilidad depende de la calidad de la muestra obtenida.
Tiene una sensibilidad entre 45-60% cuando se realiza
conjuntamente con la tinción de GRAM y un 60% de
especificidad en el diagnóstico del agente etiológico
responsable de la neumonía adquirida en la comunidad. Su
utilidad es limitada en el caso del neumococo

11. CULTIVO DE M. TUBERCULOSIS
Permite el diagnóstico de confirmación de la enfermedad.
Es u n procedimiento mucho más sensible que la microscopía, y consigue mayor rentabilidad en caso de muestras
paucibacilares (son suficientes 10 BAAR / ml de esputo
Los medios sólidos son los más conocidos como el de Lowenstein-Jensen (medio con base de huevo), O el cultivo
7H10-7H11 de Midelbrook (semisintético con base de ágar).
Algunas micobacterias requieren suplementar los medios de cultivo con factores de crecimiento especiales
(sangre, citrato amónico, hemina…)
El tiempo de crecimiento del bacilo una vez sembrado, oscila entre 3-6 semanas
Se han desarrollado sistemas de detección más rápidos como los radiométricos (BACTEC) que permiten determinar
la actividad metabólica del mycobacterium entre 15- 20 días, presenta mayor sensibilidad que los cultivos
tradicionales así como la posibilidad de identificar M. tuberculosis en 4-5 días y realizar antibiograna en 3-6 días.

12. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (IFD)
 Demuestra la presencia de antígenos mediante anticuerpos
específicos marcados con fluoresceína, con el empleo de
anticuerpos monoclonales ha mejorado la especificidad de la
técnica que de por sí es elevada, la sensibilidad varía según el
tipo de muestra utilizada, siendo más alta cuando se utiliza
una técnica invasiva.
 Es útil para la detección de L. pneumophila, Chlamydia
pneumoniae y virus respiratorios entre otros

13. HEMOCULTIVO
 De uso obligado en pacientes diagnosticados de neumonía que
requieran ingreso hospitalario.
 Suele ser positivo tan sólo en un 15 -25% de los casos ya que por
regla general los pacientes han recibido terapia antibiótica
previamente y las bacteriemias en las neumonías son transitorias.
 Los hemocultivos deben realizarse lo más precozmente posible y
durante un pico febril, la cantidad mínima de sangre requerida es
de 10cc y la siembra debe realizarse tanto en medio aerobio como
anaerobio.

14. TÉCNICAS SEROLÓGICAS
Consisten en la detección de Anticuerpos específicos en el suero del paciente.
Tienen gran valor epidemiológico, pero son poco útiles como orientación terapéutica ya que son técnicas de
resultado tardío; se requieren dos muestras, una en la fase aguda y otra en la de convalecencia (a los 14 -21
días), siendo necesario detectar seroconversión entre una y otra
Se considera positiva cuando el título de la fase de convalecencia es cuatro veces superior al dela fase aguda.
Las técnicas más utilizadas son: fijación del complemento, inmunofluorescencia indirecta y Enzimoinmunoensayo
(ELISA).
La fijación del complemento ha sido la más utilizada en el serodiagnóstico de infecciones respiratorias sin embargo
es poco sensible y requiere altas concentraciones de antígenos, es una técnica larga con resultados inespecíficos
con mucha frecuencia.
Ha sido el diagnóstico más establecido en laboratorios de referencia para el diagnóstico de neumonías víricas, se
utiliza para el diagnóstico, con fines epidemiológicos de gérmenes como Mycoplasma, Legionella, Chlamydia y
Coxiella.
La técnica de ELISA presenta mejor sensibilidad y especificidad. La prueba es menos efectiva para virus por mala
reproductibilidad así como falsos positivos y negativos. Su mayor utilidad radica en el diagnóstico de Micplasma
pneumoniae y Coxiella burnetti, tanto para detectar IgG como Ig M

15. ORINA: DETERMINACIÓN DE
ANTIGENURIA
 Antígeno neumocócico urinario: detecta antígenos capsulares por técnicas
de coaglutinaci ón , aglutinación con par tículas de látex
(LA), radioinmunoensayo (RIA), fluorescencia directa, enzimoinmunoensayo
(EIA)…
 La prueba tiene una alta especificidad pero baja sensibilidad (0-58% ).
Estos inconvenientes se obvian con una técnica más reciente, la
inmunocromatografía de membrana que detecta el antígeno polisacárido C
de membrana neumocóci co , con resultados disponibles en unos 15
minutos.
 La técnica es cara y puede dar falsos positivos en EPOC, por lo que en la
actualidad es complementari a pero no de primera línea en el diagnóstico
de la neumonía neumocóci ca

16. ANTIGENO URINARIO DE LEGIONELLA
Legionella es un patógeno obligado que no coloniza la vía aérea por lo que su aislamiento es
sinónimo de infección.
El cultivo de esputo tiene una sensibilidad entre el 50-80% y una especificidad del 100% pero
presenta como principal inconveniente que su máximo rendimiento no se obtiene hasta los 7-9
días, por lo que no se considera una buena técnica para diagnóstico rápido.
Al menos el 80% de los pacientes con legionellosis excretan antígenos por orina, de ellos el 70-80%
es producida por L. pneumophila serogrupo 1. La antigenuria aparece dentro de los 3 días desde el
comienzo de los síntomas y puede mantenerse hasta 60 días después de su aparición.

17. ESTÁN INDICADAS EN SITUACIONES DE
GRAVEDAD O EN AUSENCIA DE RESPUESTA A TÉCNICAS
TRATAMIENTO EMPÍRICO CORRECTO INVASIVAS

18. PUNCIÓN TRANSTRAQUEAL
 Es una técnica que se encuentra en declive en la
actualidad, tiene dependiendo de las series una sensibilidad
entre 60-100% y una especificidad del 14 -100%. Esta
especificidad es menor en pacientes EPOC o en situaciones
que predisponen a la aspiración.
 Sus principales contraindicaciones son: diátesis
hemorrágica, tos incontrolable y falta de colaboración.
 Entre sus principales complicaciones cabe destacar la
hemoptisis grave y el enfisema subcutáneo

19. TECNICAS FIBROBRONCOSCOPICAS
BRONCOASPIRADO (BAS)
 Una de sus principales indicaciones es el diagnóstico de
tuberculosis pulmonar. En el diagnóstico de infecciones
bacterianas su inconveniente más importante es la
contaminación con flora de la vía aérea superior

20. CATÉTER TELESCOPADO DE DOBLE LUZ
CON CEPILLO PROTEGIDO
 Su principal indicación es el diagnóstico de las neumonías en
pacientes sometidos a ventilación mecánica y de las
neumonías comunitarias graves en pacientes con factores de
riesgo. La técnica tiene escasas complicaciones y
contraindicaciones, pero su principal desventaja es que
explora un territorio pulmonar muy pequeño.
 El punto de corte establecido en cultivos cuantitativos es >
103 ufc/ml.

21. LAVADO BRONCOALVEOLAR
 Muy útil para el diagnóstico de infecciones opor tunistas en
inmunodeprimidos , a pesar de su baja especificidad tiene la ventaja
de que explora un territorio pulmonar amplio. El punto de cor te en
cultivos cuantitativos para distinguir entre infección y colonización
es de 104 ufc/ml.
 La administración previa de antibióticos invalida tanto este
resultado como el del catéter Telescopado: La realización de LBA
protegido mejora tanto la sensibilidad como la especificidad de la
técnica. La sensibilidad de las pruebas endoscópicas oscila , según
el procedimiento empleado Entre 55-95% y la especificidad del
90%.

22. TÉCNICAS PERCUTANEAS:
PUNCIÓN TRANSTORACICA ASPIRATIVA
(PTA)
 En la actualidad se realiza con aguja ultrafina de calibre 25.
Tiene una sensibilidad del 50 -60%,que aumenta si el paciente
no ha sido previamente tratado con antibióticos, y una
especificidad entre el 90-100%.
 Es una técnica muy útil en pacientes
neutropénicos, receptores de trasplantes e infectados por
VIH.
 Sus complicaciones más frecuentes son la hemoptisis y el
neumotórax. Son contraindicaciones el enfisema bulloso y la
ventilación mecánica