Le lupus érythémateux systémique (LES) est une maladie auto-immune systémique, affectant plusieurs organes. Elle est caractérisée cliniquement par des atteintes surtout cutanées ,articulaires et rénales et biologiquement par la présence de plusieurs auto-anticorps en particulier les anticorps anti-nucléaires. Le lupus érythémateux systémique (LES) est une maladie auto-immune systémique, affectant plusieurs organes. Elle est caractérisée cliniquement par des atteintes surtout cutanées ,articulaires et rénales et biologiquement par la présence de plusieurs auto-anticorps en particulier les anticorps anti-nucléaires. Prix du meilleur des journées départementales d'épidémiologie de l'institut Pasteur, Paris, 2016

1. ETUDE DES MÉCANISMES DE RÉSISTANCE DES LYMPHOCYTES T AU TGF-b EXOGÈNE
AU COURS DU LUPUS ÉRYTHÉMATEUX SYSTÉMIQUE
Raja REKIK1, Monia SMITI KHANFIR2, Imen ZAMALI3, Thara LARBI4, Salwa HAMZAOUI4, Ons KAMMOUN3, Skander Mrad4,
Habib HOUMAN2, Mohamed Ridha BARBOUCHE1,Mélika BEN AHMED1, 3
1 Laboratoire de transmission, de contrôle et immunobiologie des infections, Institut Pasteur de Tunis, Tunisie
2 Service de Médecine Interne, Hôpital La Rabta, Tunisie
3 Laboratoire d’Immunologie Clinique, Institut Pasteur de Tunis, Tunisie
4 Service de Médecine Interne, Hôpital Mongi Slim, Tunisie
 Le lupus érythémateux systémique (LES) est une maladie auto-immune systémique, affectant plusieurs organes. Elle est caractérisée cliniquement par des
atteintes surtout cutanées ,articulaires et rénales et biologiquement par la présence de plusieurs auto-anticorps en particulier les anticorps anti-nucléaires.
 Il s’agit d’une maladie multifactorielle dont l’étiopathogénie n’est que partiellement élucidée. Une des hypothèses évoquées est un défaut des mécanismes
régulateurs impliquant les cytokines anti-inflammatoires, particulièrement le TGF-β.
 Dans une étude précédente, nous avons suggéré l’implication d’un défaut de réponse lymphocytaire au TGF-β dans la pathogénie du LES.
 L’objectif de notre présent travail est d’évaluer le caractère intrinsèque ou extrinsèque de ce défaut et de préciser les mécanismes moléculaires sous-jacents.
TGF-β ou Transforming Growth Factor-β, est une cytokine
immunosuppressive majeure responsable du maintien de l’homéostasie
immunitaire à travers notamment l’implication de la voie Smad-
dépendante. Dans notre étude, on se propose décortiquer cette voie afin
de préciser les mécanismes moléculaires responsables de ce défaut par :
1- La quantification des transcrits des gènes cibles du TGF-β par PCR en
temps réel (Figure 1A).
2- La recherche du défaut de la voie de signalisation du TGF-β à travers la
quantification des récepteurs TGF-βRII (Figure 1B) et l’analyse de
phosphorylation de Smad3 par cytométrie en flux (Figure 1C).
Lymphocytes
T CD3+
Stimulation 2h avec du TGF-β
10ng/ml
Extraction d’ARN
via RNAeasy
Mini Kit (Qiagen)
Real time PCR
primers et sondes de Smad7 et de
TTP
Transcription
inverse
ARN
Marquage
membranaire
Récepteur TGF-β
LT CD3+
Anti- récepteur TGF-β RII
PE
Analyse par
cytométrie en flux
EVALUATION LE
NIVEAU
D’EXPRESSION
DES
RÉCEPTEURS
TGF-β RII
LT CD3+
Marquage
cytoplasmique
Perméabilisation
Stimulation avec du TGF-β
de 10mn à 30mn
ANALYSE PAR
CYTOMERTIE EN
FLUX
3,2% 17,2% 24,3% 10,8%
0,1% 0,2% 0,4%
0,3%
Sujet sains
Lupique en activité
La transcription de Smad7, gène cible
de TGF-β, est significativement
diminuée dans le groupe de patients
lupiques en activité (Figure 2). Cette
diminution est particulièrement
observée chez les lupiques ayant un
SLEDAI > 8.
La quantification du récepteurs TGF-βRII
nous révèle l’absence d’anomalie
d’expression de ce dernier chez les
patients lupiques par rapport aux
témoins sains (Figure 3).
Figure 2. Transcription du gène cible du
TGF-β
Figure 3. Expression membranaire du
récepteurs TGF- βR II
1- Quantification des transcrits des gènes cibles du TGF-β
3- Etude de phosphorylation de Smad2/3
Nos résultats montrent que les lymphocytes T issus de patients lupiques en
phase d’activité présentent un défaut de phosphorylation de Smad2/3 après
stimulation par le TGF-β (Figure 4) expliquant l’absence de translocation de
ce complexe moléculaire dans le noyau et le défaut de transcription des
gènes cibles.
Figure 4. Etude de la phosphorylation
des molécules Smad 2/3 après
stimulation par le TGF-β chez un
patient et un témoin sain.
Nos résultats montrent la présence d’un défaut de transcription des gènes cibles du TGF-β chez les sujets lupiques en phase d’activité confirmant le caractère
extrinsèque de l’anomalie. L’étude de la voie de signalisation du TGF-β chez les patients lupiques montrent l’absence d’une anomalie d’expression du récepteur
TGF-βRII et la présence d’un défaut de phosphorylation de Smad2/3 au cours de la transduction du signal du TGF-β. L’identification des facteurs directement
responsables de ce défaut de signalisation du TGF-β chez les sujets en phase d’activité est en cours et ce, à travers notamment l’étude de l’implication de
l’expression incontrôlée des cytokines pro-inflammatoires telles que l’IL-15 ou l’IL-22, deux cytokines surexprimées au cours du lupus.
INTRODUCTION
MATERIELS & METHODES RESULTATS & DISCUSSION
CONCLUSION & PERSPECTIVES
Dans la présente étude nous avons prélevé le sang périphérique de 30
patients lupiques et 29 témoins indemnes de toute maladie auto-immune, à
partir duquel nous avons isolé les lymphocytes T.
A
B
C
Figure 1. Méthodes d’étude de la signalisation du TGF-β
2- Quantification du récepteur TGF-βRII