Laporan ini membahas tentang praktikum kultur jaringan yang dilakukan oleh mahasiswa Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Sebelas Maret Surakarta pada tahun 2012. Laporan ini berisi pendahuluan, tinjauan pustaka, metode praktikum, hasil dan pembahasan, serta kesimpulan dan saran untuk masing-masing acara praktikum kultur jaringan.

1. LAPORAN PRAKTIKUM
KULTUR JARINGAN
Disusun Oleh :
Nama
: Sriatin Rahayu
NIM
: K4309078
Kelompok : 6
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI
FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2012

2. HALAMAN PENGESAHAN
Laporan praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas
mata kuliah Kultur Jaringan. Laporan ini telah diketahui dan disahkan oleh CoAssisten dan Dosen Kultur Jaringan pada tanggal : 20 Desember 2012
Di susun Oleh :
Nama : Sriatin Rahayu
NIM : K4309078
Kelompok : 6
Mengetahui,
Dosen Kultur Jaringan
Dr. Ir. Endang Yuniastuti,MS
NIP. 197006091994022001
Co-Assisten
Haries Apriliyana
NIM. HO708105

3. KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan YME yang telah
memberikan Kasih dan Karunia- Nya sehingga penulis dapat menyusun dan
menyelesaikan Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini. Penyusunan laporan ini
bertujuan untuk melengkapi tugas mata kuliah Kultur Jaringan pada semester VII
di Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan
Universitas Sebelas Maret Surakarta. Dalam penyusunan laporan praktikum ini,
penulis menyadari sepenuhnya apabila tanpa bantuan, bimbingan dan dukungan
dari berbagai pihak tidak akan dapat terselessaikan dengan baik. Oleh karena itu,
penulis menyampaikan terima kasih kepada :
1. Dr. Ir. Endang Yuniastuti, MS dan Dr. Yudi Rinanto, M.P selaku Dosen mata
kuliah Kultur Jaringan yang telah memberikan izin kepada penulis dalam proses
penyusunan laporan ini
2. Seluruh Co-Assisten Praktikum Kultur Jaringan yang telah memberikan
bimbingan kepada penulis
3. Semua pihak yang telah memberikan bantuan moral maupun spiritual kepada
penulis, baik secara langsung maupun tidak langsung
Penulis menyadari bahwa masih terdapat banyak kekurangan, oleh karena
itu saran dan kritik penulis harapkan dari pembaca agar laporan ini menjadi lebih
baik. Demikian, semoga Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini dapat bermanfaat.

4. DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN .........................................................................ii
KATA PENGANTAR .................................................................................... iii
DAFTAR ISI .................................................................................................. iv
DAFTAR TABEL ...........................................................................................viii
DAFTRA GAMBAR.......................................................................................ix
ACARA I. Pembuatan Larutan Stock, Pembuatan Media Kultur dan Sterilisasinya
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
ACARA II. Kultur Jaringan Sansievera
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................

5. 2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
ACARA III. Kultur Jaringan Nanas
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
ACARA IV. Kultur Jaringan Jeruk
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................

6. 1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
ACARA V. Kultur Jaringan Jambu
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
ACARA IV. Sub Kultur
A. Pendahuluan ..............................................................................................1
1. Latar Belakang .............................................................................. 1
2. Tujuan ............................................................................................2
B. Tinjauan Pustaka .......................................................................................2
C. Metode Praktikum............... ......................................................................4
1. Waktu dan Tempat Praktikum ...................................................... 4
2. Alat ................................................................................................4
3. Bahan.... ........................................................................................ 4
4. Cara Kerja .....................................................................................
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan...........................................................................
2. Pembahasan....................................................................................
E. Kesimpulan dan Saran................................................................................
1. Kesimpulan....................................................................................
2. Saran..............................................................................................

7. DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 7
LAMPIRAN
Surakarta, 19 Desember 2012
Penulis

8. DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Rekapan kultur jaringan tanaman mawar (Rosa sp ) .......................... 11
Tabel 3.1 rekapan kultur jaringan tanaman nanas (Ananas comosus) ................ 19
Tabel 3.2 Rekapan Kultur Jaringan Tanaman wortel (Daucus carota) .............. 19
Tabel 4.1 Rekapan kultur Jaringan tanaman sansievera (Sansievera sp) ........... 27

9. Acara I
Pembuatan Larutan Stok, Media Kultur dan Sterilisasai Alat
A. Pendahuluan
1. Latar Belakang
Kultur jaringan merupakan salah satu metode perbanyakan tanaman secara
vegetatif. Kultur jaringan tertua dilakukan pada biji anggrek dengan tujuan untuk
mengecambahkannya dalam media yang kaya nutrisi karena biji dari anggrek tidak
mempunyai
cadangan
makanan.
Kultur
jaringan
terus
berkembang
dari
mengkulturkan biji berkembang dengan mengkulturkan jaringan dan terus
berkembang hingga mampu mengkulturkan satu sel dari tanaman.
Penggunaan
kultur
jaringan
mempunyai
kelebihan
yaitu
mampu
memproduksi bibit yang seragam dalam jumlah banyak dan dalam waktu yang relatifr
singkat. Oleh karena itu kultur jaringan sering dijadikan solusi sebagai metode
perbanyakana tanaman dan juga dapat digunakan sebagai suatu metode penyimpanan
plasma nutfah yang tidak membutuhkan temapat yang besar.
Keberhasilan darai kultur jaringan sangat bergantung dari ketepatan
konsentrasi nutrisi yang berada di dalam media kultur. Ketepatan konsentrasi ini
menyangkut pada ketersediaan nutrisi bagi eksplan tanaman. Kelebihan nutrisi dari
tanaman akan menyebabkan tanaman mengalami keracunan unsur hara. Oleh karena
itu, pembuatan larutan stock dan sterilisasi media dianggap penting untuk diketahui
sebagai sarana penenunjang kebutuhan informasi akan kultur jaringan.
Sterilisasi dimaksudkan untuk menciptakan serta memelihara kondisi
aseptik. Seperti yang kita ketahui bahwa sumber kontaminan yang terdiri dari
jamur dan bakteri berukuran sangat kecil. Baik media tumbuh maupun eksplan
yang akan ditanam harus dibebaskan dari sumber kontaminan yang menyebabkan
kontaminasi.
Pada dasarnya, peralatan yang digunakan dalam teknik kultur jaringan
harus bersih dan steril. Peralatan yang tidak steril mengakibatkan tanaman yang
ditanam pada kultur jaringan menjadi terkontaminasi sehingga tidak dapat tumbuh
kembang dan menghambat proses pertumbuhan pada tanaman karena yang
disebabkan oleh jamur dan bakteri.

10. Unsur-unsur yang dibutuhkan pada media kultur antara lain seperti
aquadest, larutan stok terdiri atas hara mikro dan hara makro, vitamin, zat
pengatur tumbuh (ZPT), agar-agar, gula serta NaOH dan HCL.
2. Tujuan
Pada praktikum acara Sterilisasi dan Pembuatan Media Kultur mempunyai
tujuan yaitu :
a. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan larutan stock.
b. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan media kultur jaringan.
c. Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman dan media kultur.
.

11. B. Tinjauan Pustaka
Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur
jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang
akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral,
vitamin, dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar,
gula, dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga
bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur
jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung reaksi
atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus disterilkan dengan cara
memanaskannya dengan autoklaf (Anonim, 2008). Cara kerjanya hampir sama
dengan alat masak pressure cooker sebab alat ini merupakan sebuah bejana yang
dapat diisi air dan ditutup rapat-rapat. Sumber pemanas autoklaf ada yang dari
listrik, tetapi ada pula yang harus diletakkan diatas kompor gas. Jika alat ini
dipanaskan maka akan terdapat uap air yang tidak dapat keluar karena bejana
tertutup rapat sehingga tekanan normal. Kenaikan tekanan uap ini akan
menyebabkan air mendidih diatas 100 %. Apabila tekanan uap ini tidak diatur
maka akan bertambah tinggi (Nugroho dan Sudito, 2000).
Apabila kita melakukan gerakan-gerakan selama bekerja di dalam
laboratorium, akan megakibatkan timbulnya suatu awan debu yang hampir tidak
tampak. Debu tersebut mengandung spora yang sangat besar jumlahnya. Bila
spora ini kontak dengan media kultur yang digunakan dalam pekerjaan tersebut,
spora kan tumbuh dengan cepat. Dalam beberapa hari spora akan tumbuh menjadi
koloni yang terlihat oleh mata biasa (Wetherel, 1982). Untuk membuat media
dengan jumlah zat seperti yang ditentukan, diperlukan penimbangan dan
penakaran bahan secara tepat. Ketidaktepatan ukuran dapat menyebabkan
terjadinya proses yang dikehendaki. Pada umumnya untuk suatu keperluan, media
yang telah dirumuskan dapat diubah atau diperbarui, dengan mengganti zat-zat
tertentu, atau menambah zat lain. Untuk melakukan perubahan ini diperlukan
acuan yang mantap atau pengalaman (Rahardja, 1988).
Media yang umum digunakan dalam kultur jaringan adalah medium
padat, medium semi padat dan medium cair. Keadaan fisik media akan

12. mempengaruhi pertumbuhan kulur, kecepatan pertumbuhan dan differensiasinya.
Keadaan fisik media ini mempengaruhi pertumbuhan antara lain karena efeknya
terhadap osmolaritas larutan dalam media serta ketersediaan oksigen bagi
pertumbuhan eksplan yang dikulturkan.
Media merupakan faktor penentu
dalam perbanyakan dengan kultur
jaringan. Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang
akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral,
vitamin dan hormon. Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula
(sebagai sumber energi), dan lain-lain. Zat pengatur tumbuh (hormon) yang
ditambahkan juga bervariasi, baik jenis maupun jumlahnya, tergantung dengan
tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. Media yang sudah jadi ditempatkan
pada tabung reaksi atau botol-botol kaca. Media yang digunakan juga harus
disterilkan dengan cara memanaskannya menggunakan autoklaf (Yuniastuti.
2012).
Komponen media kultur yang lengkap adalah sebagai berikut :
1. Air destilata (akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau
solvent
2. Hara-hara makro dan mikro
3. Gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi
4. Vitamin, asam amino dan bahan organic lain
5. Zat pengatur tumbuh
6. Suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan
7.
Agar-agar atau Gelrite sebagai pemadat media (Yusnita, 2003).
Keberhasilan penggunaan metode kultur jaringan sangat tergantung pada
media yang digunakan. Media kultur jaringan menyediakan tidak banyak unsure
hara – unsure hara makro dan mikro, tetapi yang kabohidrat yang pada umnya
beberapa gula untuk menggantikan karbon yang didapat dari fotosintetis.
Penggunaan media ½ MS+IBA dengan konsentrasi antara 10 sampai dengan 100
mg/l yang ditambah dengan ZPT NAA 1mg/l mampu mengindukasi akar sampai
70%. Kombinasi ZPT auksin dan sitokinin yang diberikan bersamaan kedalam
media yang sama nampaknya selalau berhasil ( Herawan dan M. Na”iem, 2006 )

13. Auksin yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah IAA.
Interaksi antara auksin dan sitokinin yang diberikan pada media yang diproduksi
secara endogen oleh tanaman menentukan arah perkembangan suatu kultur
tanaman. Sitokinin digunakan untuk pembelahan sel terutama bila ditambahkan
dengan auksin. Zat pengatur tumbuh mempunyai peran yang sangat penting dalam
mengatur pertumbuhan dan perkembangan eksplan dalam kultur. Pertumbuhan
dan morfogenesis dalam budidaya jaringan diatur oleh interaksi dan
keseimbangan antara pemberian ZPT pada media dengan hormon endogen yang
terdapat dalam eksplan (Hidayat, 2002).
Kultur jaringan atau biakan jaringan merupakan teknik pemeliharaan
jaringan atau bagian dari individu secara buatan (artifisial). Yang dimaksud secara
buatan adalah dilakukan di luar individu yang bersangkutan. Karena itu teknik ini
sering kali disebut kultur in vitro, sebagai lawan dari in vivo. Dikatakan in vitro
(bahasa Latin, berarti "di dalam kaca") karena jaringan dibiakkan di dalam tabung
inkubasi atau cawan petri dari kaca atau material tembus pandang lainnya. Kultur
jaringan secara teoretis dapat dilakukan untuk semua jaringan, baik dari tumbuhan
maupun hewan (termasuk manusia) namun masing-masing jaringan memerlukan
komposisi media tertentu (Anonim, 2008).
C. Metode Praktikum
1. Waktu dan Tempat Praktikum
Praktikum acara sterilisasi alat dam pembuatan media kultur dilaksanakan
pada hari Selasa, 8 Oktober 2012 pukul 19.00 s/d 21.00 WIB yang bertempat di
Laboratorium Kultur Jaringan
Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret
Surakarta.
2. Alat
Alat pembuatan larutan stock
- Timbangan analitik
- Sendok
- Pipet
- Erlenmeyer

14. Alat pembuatan media tanam
- Magneitk stirer
- Timbangan analitik
- Pipet
- Ph meter
- Gelas piala
- Botol-botol kultur
- Plastik pp 0.3 mm
- Karet gelang
- Kertas label
Alat sterilisasi
- Autoklaf
3. Bahan
Bahan pembuatan larutan stock
- Unsur hara makro dan mikro, vitamin, ZPT
- Aquadest
Bahan-bahan pembuatan media
- Aquadest
- Larutan stok, terdiri dari hara makro dan mikro, vitamin serta ZPT
- Agar-agar
- Gula
- NaOH 1 N dan HCL 1 N

15. 4. Cara Kerja
A.Membuat larutan stok
a. Larutan stok media
1). Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan menjadi beberapa
kali konsentrasi, misalnya untuk unsur hara makro dikalikan 20 dan unsur
hara mikro dikalikan 100 kali konsentrasi.
2). Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam aquadest dengan
volume tertentu, misalnya 500 ml.
3).
Memasukkan
masing-masing larutan
ke
dalanm
botol
dan
menyimpannnya ke dalam refrigerator.
b. Larutan stok zat pengatur tumbuh
1). Menghitung kebutuhan BAP 100 ppm sebanyak 300 ml adalah sebagai
berikut :
100ppm
= 100mg/l
= 30 mg/0.3 l
= 30 mg/300 ml
2). Menghitung kebutuhan IBA 100 ppm sebanyak 100 ml adalah sebagai
berikut
100 ppm = 100 mg/l
= 10 mg/ 0.1 l
= 10 mg/100 ml
3). Melarutkan bahan dengan alkohol atau NaOH 1 N kemudian ditambah
dengan aquadest sampai 300 ml untuk BAP dan 100 ml untuk IBA.
4). Memasukkan masing-masing larutan tersebut ke dalam botol dan
menyimpannya ke dalam refrigerator.
B. Membuat media kultur
Langkah-langkah pembuatan media (1 liter) adalah sebagai berikut :
1). Mengambil masing-masing larutan stok sesuai dengan ukuran yang
telah ditentukan dan memasukkannya ke dalam gelas piala.
2). Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan
3). Menambah aquadest sampai 1000 ml.
4). Menambah gula sebanyak 30 gr.

16. 5). Mengatur pH dalam kisaran 5,8-6,3 dengan menambahkan beberapa
tetes NaOH untuk menaikkan pH atau HCL untuk menurunkan pH. Pada
saat pengukuran pH, larutan media diaduk dengan magnetik stirer.
6). Menambahkan agar-agar 8 gr kemudian dididihkan
7). Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur kurang lebih 25
ml tiap botol
8). Menutup botol berisi larutan media dengan plastik
9). Memasukkan botol-botol berisi media ke dalam autoklaf untuk proses
sterilisasi pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit
10). Menyimpan media pada rak penyimpan media yang bertujuan untuk
mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat
dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat
penanaman.
C. Media Penanaman
Dalam praktikum ini, media yang digunakan adalah media
Murashige dan Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan penambahan ZPT
BAP 2 ppm dan IAA 0,5 ppm. Media kultur tersebut digunakan untuk
penanaman 5 macam eksplan dengan masing-masing eksplan diulang
sebanyak 2 kali untuk setiap mahasiswa / praktikan.
D. Melakukan sterilisasi Alat dan Media Kultur
1). Sterilissasi alat dan media kultur jaringan dilakukan secara bersamasama menggunakan autoklaf .
2). Membungkus alat-alat kultur seperti petridish, pisau scalpel dan pinset
dengan kertas koran.
3). Memasukkan botol-botol berisi media dan alat-alat kultur yang telah
dibungkus kertas koran ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi pada
suhu 121 C, tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit.
4). Menyimpan alat-alat kultur dalam oven
5). Menyimpan media pada rak penyimpanan media yang bertujuan untuk
mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat

17. dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat
penanaman.
D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
1. Hasil Pengamatan
Gambar 1. 1 Media kultur jaringan

18. 2. Pembahasan
Media adalah tempat
tumbuh eksplan yang di dalamnya
mengandung banyak nutrisi untuk menunjang kehidupan dan pertumbuhan
eksplan.
Media
merupakan
faktor
penentu
keberhasilan
dalam
perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan (Matatula, 2003: 203).
Ciri-ciri media yang baik untuk kultur jaringan adalah
-
media padat dan tidak lembek
-
PH sesuai untuk kehidupan tanaman
-
Mengandung Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) yang mendukung
kehidupan tanaman.
Sesuai pendapat Endang Yuniastuti (2009: 10), komposisi utama
media tanam kultur jaringan terdiri dari komponen berikut: (1) air distilata
(akuades) atau air bebas ion sebagai pelarut atau solven, (2) hara-hara
makro dan mikro, (3) gula (umumnya sukrosa) sebagai sumber energi, (4)
vitamin, asam amino dan bahan organic lain, (5) zat pengatur tumbuh, (6)
suplemen berupa bahan-bahan alami, jika diperlukan dan (7) agar-agar
atau gelrite sebagai pemadat media. Perbedaan komposisi media dapat
mengakibatkan perbedaan pertumbuhan dan perkembangan eksplan yang
ditumbuhkan secara in vitro (Marlina, 2004: 4).
Praktikum kali ini menggunakan media Murashige Skoog (MS)
yang sebelumnya telah dibuat larutan stok. Larutan stok merupakan larutan
pekat senyawa-senyawa kimia penyusun media yang memudahkan
penimbangan sehingga jumlah atau volume masing-masing komponen
media yang terbentuk dalam jumlah tepat. Larutan stok dibuat dalam
konsentrasi pekat 10 atau 100 kali konsentrasi akhir yang dibutuhkan
untuk media. Pada praktikum kali ini, untuk hara makro kecuali
CaCl2.2H2O dibuat larutan stoknya, untuk CaCl2.2H2O dibuat larutan
stock tersendiri karena apabila di campur zat ini akan mengendap. Media
Murashige skoog (MS) terdiri dari komponen-komponen berikut:
a. Garam-garam anorganik terdiri dari makronutrient (C, H, O, N, S, P, K,
Ca, Mg). N didapatkan dari NO3- atau NH4+ atau asam amino. Mg dan S

19. didapatkan dari MgSO4.7H2O. P didapat dari NaH2PO4.H2O dan
KH2PO4. K didapat dari KCl, K2NO3 atau KH2PO4. K didapatkan dari
KCl, K2NO3 atau KH2PO4. Ca didapatkan dari CaCl2.2H2O atau
Ca(NO3)2. Dan Cl dari KCl atau CaCl2. Selain itu dibutuhkan juga
mikronutrient yang terdiri dari Cu, Zn, FeEDTA, B, Mo, Co, dan I.
b. Sumber karbon yang digunakan adalah sukrosa, sebagai sumber energi.
Konsentrasi sukrosa yang digunakan adalah 20.000- 45.000 mg/L.
c. Asam amino merupakan sumber N organik. Asam amino yang sering
digunakan adalah glutamine, asparagin, sistein, dan glisin.
d. Vitamin berfungsi sebagai katalisator dalam sistem enzim dan
diperlukan dalam jumlah kecil. Vitamin yang dibutuhkan pada sebagian
besar kultur jaringan tumbuhan adalah thiamin, yang diberikan dalam
bentuk Thiamin-HCl. Vitamin lain yang biasa digunakan adalah asam
nikotinat dan piridoksin HCl (vitamin B6).
Dalam media juga perlu diperhatikan tingkat keasamannya ( pH ).
Sel-sel tanaman yang dikembangkan dengan teknik kultur jaringan
mempunyai toleransi pH yang relatif sempit dengan titik optimal antara pH
5,0 – 6,0 (Daisy, 1994). Dalam pembuatan media pH-nya harus dijaga
pada pH 5,8 sampai 6,3 dengan penambahan KOH atau NaOH untuk
menaikkan pH dan dan HCl untuk menurunkan pH. pH harus dijaga pada
5,8 sampai 6,3 sebab pada kawasan pH ini merupakan pH yang optimum
untuk penyerapan hara oleh tanaman. Pada praktikum kali ini dilakukan
penambahan HCl sebanyak kurang lebih 5 tetes karena campuran media
yang didapat terlalu basa dan setelah dilakukan penambahan HCl
dilakukan pula penambahan NaOH sebanyak 2 tetes karena pH yang
didapat terlalu asam. Media yang terlalu asam menyebabkan media sukar
mengendap. Namun harus juga dihindari penambahan HCl dan NaOH
secara berlebihan karena akan mengurangi tingkat keberhasilan pembuatan
media.
Dari hasil pengamatan, media yang dibuat oleh kelompok kami
kurang berhasil. Ini karena setelah disterilisasi dan diletakkan di dalam rak

20. kultur, media tidak benar-benar memadat, agak cair dan agak lembek.
Permukaan media rata dan bagus tidak bergelombang sama sekali.
Keberhasilan dan kegagalan dalam membuat media dipengaruhi
oleh banyak hal meliputi :
a. Pengukuran komponen pembuatan media yang ditambahkan kurang
tepat.
b. Perataan komponen media dengan menggunakan magnetic stirer kurang
lama sehingga media yang di dapat belum benar-benar homogen.
c. Pemasakan media yang kurang matang sehingga komponen yang
ditambahkan terutama agar-agar belum tercampur dengan baik,
d. Pengambilan media dari autoklaf ketika sterilisasi terlalu cepat
sehingga media banyak yang gagal ditandai dengan penutup media
yang rusak ketika pengambilan.
Sterilisasi alat dan media
Untuk mendapatkan media yang baik harus didukung dengan
proses sterilisasi alat dan media yang baik pula, Sterilisasi adalah suatu
proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada atau di
dalam suatu benda.
Dalam praktikum pembuatan media, sterilisasi yang dilakukan
meliputi sterilisasi alat-alat penanaman dan media tanam.
a. Sterilisasi alat-alat penanaman
Alat-alat tanam yang disterilisasi meliputi : Pinset, scapel,
Petridish, Botol-botol kultur. Sterilisasi pada alat tanam dilakukan
dengan sterilisasi fisik melalui pemanasan maupun sterilisasi
mekanik dan kimawi. Sterilisasi mekanik dan kimiawi dilakukan
dengan mencuci alat-alat menggunakan sabun yang mengandung
bahan kimiawi.
b. Sterilisasi media tanam
Sterilisasi media tanam dilakukan dengan sterilisasi fisik,
yakni dengan pemanasan menggunakan autoklaf. Media tanam yang
telah dimasukkan dalam botol kultur selanjutnya ditata pada rak

21. autoklaf
dan dimasukkan ke dalam tabung autoklaf. Pada
prinsipnya, sterilisasi autoklaf menggunakan panas dan tekanan dari
uap air. Temperature sterilasi biasanya 121o C, tekanan yang biasa
digunakan antara 15-17,5 psi (pound per square inci) atau 1 atm
selama 45 menit. selanjutnya setelah 45 menit media dikeluarkan
dan ditata dalam rak kultur diruang steril.
Keberhasilan dan kegagalan sterilisasi bisa diakibatkan adanya
salah satu atau beberapa kunci pada autoklaf yang tidak menutup dengan
sempurna sehingga tekanan yang timbul dari autoklaf bocor ke luar.
Kegagalan sterilisasi akibat sebelum tekanan dalam autoklaf menurun dan
semua air yang ada di autoklaf belum habis autoklaf sudah terbuka
sehingga dapat menimbulkan ledakan atau kerusakan klep pengatur
tekanan pada autoklaf. Kegagalan sterilisasi dapat dihindari dengan jalan
mengikuti semua ketentuan dan prosedur pelaksanaan sterilisasi meliputi
penggunaan alat dan pelaksanaan prosedur sterilisasi.
1) Kesimpulan Dan Saran
a. Kesimpulan
Dalam pembuatan media sterilsasi alat yang dibutuhkan harus
steril dan terbebas dari jamur dan bakteri
Faktor penyebab kegagalan dalam sterilisasi alat dan pembuatan
media kultur antara lain karena alat yang digunakan tidak steril
ZPT yang digunakan harus sesuai yang dan memiliki takaran
yang tepat untuk perlakuan.
b. Saran
Alatnya harus lebih steril dan bebas dari jamur dan bakteri
Seharusnya lebih teliti lagi dalam pembuatan media kuljar

22. DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2008. Kultur Jaringan. http://id.wikipedia.org/wiki/Kultur_jaringan.
Diakses tanggal 15 Desember 2012 jam 18.00 wib.
Hendra, T. 2007. Kultur Jaringan. http://lelos66.com.htm. Diakses pada tanggal
16 desember 2012
Hidayat. 2002. Respon Subkultur Pisang Canvedish Terhadap Naphtalene Acetic
Acid dan Benzil Aminopuryn. Buletin Pertanian dan Peternakan. Vol 3(5):1-10.
Nugroho, A dan Sudito. 2000. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta: Penebar Swadaya.
Rahardja, P.E. 1988. Kultur Jaringan Teknik Perbanyakan Tanaman Secara
Modern. Panebar Swadaya. Jakarta
T . Herawan dan M. Na”iem. 2006. pengaruh Jenis Madia dan Konsentrasi ZPT
Kinetin Terhadap Perakaran Pada Kultur Jaringan Cendana ( Santalum album
Linn ). Agrosains Volume 19 ( 2 ) : 198.
Wetherel, D.F. 2008. Propagasi Tanaman Secara In Vitro. Avery Publishing
Group Inc. New Jersey.
Yuniastuti, Endang. 2012. Petunjuk Praktikum Kultur Jaringan. Surakarta:uns
Press
Yusnita. 2003. Kultur Jaringan. www.bioteknologi-unibraw.ac.id. Diakses pada 18
Desember 2012.