Diagnostic micrbiologique des infections respiratoires basses et de la tuberculose

DR T.DJERBOUA
Pharmacien maitre assistant en microbiologie
Faculté de médecine Mouloud Maammeri
Chef de service du
laboratoire central de biologie clinique
Hôpital BELLOUA-CHU TIZI-OUZOU.
DIAGNOSTIC
MICROBIOLOGIQUE
DES INFECTIONS BRONCHO-PULMONAIRES
ET DE LA TUBERCULOSE
UNIVERSITE MOULOUD-MAAMERI DE TIZI-
OUZOU
FACULTE DE MEDECINE
DEPARTEMENT DE PHARMACIE
COURS DE 4ème ANNEE PHARMACIE
MODULE DE MICROBIOLOGIE
PLAN
1.INTRODUCTION
2.OBJECTIFS PEDAGOGIQUES
3.RAPPELS ANAMOCLINIQUES ET PATHOGENESE
4.MICROBIOLOGIE DES INFECTIONS BRONCHO-PULMONAIRES
5.EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE :
a) Étapes pré-analytiques
b) Étapes analytiques
c) Étapes post-analytiques et critères d’interpretation
6) DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE DE LA TUBERCULOSE
II.OBJECTIFS PEDAGOGIQUES
*connaitre les circonstances de prescription et la typologie des prélèvements broncho-pulmonaires (IBP)
*connaitre les circonstances de prescription et la typologie des prélèvements destinés au diagnostic de la tuberculose
*Connaitre les principaux agents infectieux impliqués dans les infections respiratoires basses (IRB)
*connaitre la démarche pré-analytique et la valeur microbiologique des prélèvements
*connaitre la démarche a suivre face a un prélèvement destiné au diagnostic des infections IBP
*Connaitre les critères d’interprétation d’un prélèvement broncho-pulmonaire et de diagnostic de la tuberculose
*Connaitre les moyens de détermination de la sensibilité aux antituberculeux
1- DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE DES
INFECTIONS BRONCHOPULMONAIRES
I.INTRODUCTION
Les infections broncho-pulmonaires (IBP) regroupes plusieurs entités cliniques :
-Les Bronchites et bronchiolites aigues communautaires
-Les pneumonies aigues communautaires
-Les exacerbations des bronchopneumopathies chroniques obstructives (bronchite chronique et
emphysème pulmonaire)
-Les pneumonies acquises sous ventilation mécanique (pneumonies nosocomiales)
La symptomatologie d’une IRB communautaire inclut la toux (productive d’emblée ou secondairement)
des signes généraux (fièvre frissons, céphalées…), des signes fonctionnels d’une atteinte basse (douleurs
thoraciques, dyspnée, signes auscultatoires.
Les infections respiratoires basses représentent la 3ème cause de mortalité dans le monde en particulier en
raison des pneumonies bactériennes.
En raison de plusieurs facteurs limitant (modalités de prélèvements, difficultés analytiques et
d’interprétation…) Le diagnostic des IBP est indiquée préférentiellement face a :
-Présence de signes de gravité
-Echec thérapeutique
II.RAPPELS ANATOMO-
CLINIQUES ET PATHOGENESE
Le terme « voies aériennes inférieures »
ou « étage sous-glottique » désigne :
-La trachée
-Les Bronches
-Les Poumons
Ces derniers se distinguent sur la plan
microbiologique par l’absence de flore
de colonisation grâce a de nombreux
mécanismes de clairance microbienne
II.RAPPELS ANATOMO-CLINIQUES ET PATHOGENESE
-L’action mécanique : toux, clairance muco-ciliaire
-Action physicochimique de l’environnement bronchique : mucus, lysozyme,
sidérophores, peptides bactéricides, complément, IgA sécrétoires, IgG…
EFFET MURAILLE / ESCALATOR DE L’EPITHELIUM BRONCHIQUE
Assurée par les Macrophages et autres
cellules présentatrices d’antigènes
EFFET SENTINEL-ALERTE
EFFET ARTILLERIE LOURDE
A composante cellulaire et humorale ,
Assurée par les polynucléaires neutrophiles,
les Macrophages et les Lymphocytes NK
suivi en des cellules de l’immunité
adaptative.
Formation de nodules lymphoïdes (BALT) suite a une infection
broncho-pulmonaire
Tout facteur altérant ces barrières défensives rend
le sujet vulnérable aux infections respiratoires
III. MICROBIOLOGIE DES INFECTION BRONCHO-PULMONAIRES
A) LES INFECTIONS BACTERIENNES : touchent principalement le poumon (d’ou la mortalité élève en
particulier des pneumonies nosocomiales). La répartition est bactéries incriminés est variable et dépend de
plusieurs paramètres :
-Le sujet atteint (age, statut vaccinal, comorbidités…)
-Le contexte dans lequel l’infection a eu lieu (sous ventilation mécanique, exposition aux eaux chaudes stagnantes,
contacte animalier particulier, pneumonie d’aspiration, corps étranger, pneumonie post grippale…)
Ainsi, la bactérie la plus fréquemment incriminée reste Streptococcus pneumoniae
A moindre fréquence voire dans des contextes particuliers, l’infection peut être causée par Staphylococcus aureus
Klebsiella pneumoniae, Hemophilus influenzae, Branhamella catarrhalis, Legionella pneumophila, Chlamydiophila
pneumoniae ,Mycoplasma pneumoniae, Bordetella pertussis, Mycobactéries,bactéries anaérobies strictes…
B) LES INECTIONS VIRALES : prédominantes dans les bronchites et bronchiolites aigues, on distingue deux
groupes selon le tropisme :
B.1) les virus a tropisme respiratoire primaire : affinité marquée pour l’épithélium respiratoirevirus de la grippe ,
Virus Parainfluenza, Virus respratoire syncitial, Metapneumovirus, Rhinovirus, Coronavirus, Adenovirus…
B.2) virus a tropisme respiratoire secondaire : atteinte respiratoire sur secondaire a partir d’un site primaire de
prédilection, l’atteinte respiratoire fait partie du tableau clinique , et est parfois liée a la présence d’un facteur
favorisant (ex immunodépression) : Virus de la Rougeole, VZV, HSV,CMV, Enterovirus…
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
A) INDICATIONS DES PRELEVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
• Prouver et identifier l’origine infectieuse face a un syndrome impliquant les voies respiratoires basses en
particulier si présence de signes ou de facteurs de gravité /complication , de non réponse au traitement ou a risque
épidémique
• Mettre en œuvre les moyens curatifs et préventifs adéquats face a un risque épidémique
• Dans une politique de rationalisation de l’usage des antibiotiques (infections souvent virales)
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
• Nombreux
• Peuvent etre non invasifs et invasifs , les prélèvements invasifs peuvent etre fait sous ou sans fibroscopie (a l’aveugle surtout si
lésion bilatérale) chez un sujet intubé-ventilé ou non selon les circonstances
• Classés selon la facilité d’accès et selon leurs qualité microbiologique en :
PRELEVEMENTS
NON INVASIFS
PRELEVEMENTS
INVASIFS
EXPECTORATIONS
Qualité microbiologique variable souvent
mauvaise (contamination salivaire+++)
PRELEVEMETS
A RISQUE DE
CONTAMINATION FAIBLE
PRELEVEMETS
A RISQUE DE
CONTAMINATION
ELEVE
SANS FIBROSCOPiE AVEC FIBROSCOPiE
*INTUBE-VENTILE
*SANS FIBROSCOPiE
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
expectorations
ASPIRATION
SUR SONDE
PRELEVEMENTS
DISTAUX
PREOTEGES
ET
LBA
PELEVEMENTS
DISTAUX
PROTEGES
ET
LBA
ASPRATION SUR
SONDE
EXPECTORATIONS
INVASIVITE QUALITE MICROBIOLOGIQUE
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
B.1) LES EXPECTORATIONS : effectués de préférence le matin a jeun après rinçage soigneux de la bouche
et dans un effort de toux ou aidé Kinésithérapie . Les expectorations sont recueillis dans un récipient stérile et
B.2) LES ASPIRATIONS ENDOTRACHEALES ET ENDOBRONCHIQES :effectues chez le sujet intubé-ventilé, il s’agit de
récupérer a l’aide d’une sonde d’aspiration , les secrétions qui se sont accumulé dans la sonde d’intubation. Ces dernières seront
mises dans un récipient stérile.
Aspiration a travers une canule de trachéotomie Aspiration a travers une sonde d’intubation endotracheale
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
B.3) LES PRELEVEMENTS DISTAUX PROTEGES ET LBA:
se font le plus souvent sous fibroscopie (prélèvements orientés
sauf le cathéter distal protégé) , l’instrumentation est protégée
par un double cathéter obturé par un bouchon en polyéthylène
glycol permettant d’éviter toute contamination par la flore
salivaire.
Dans un premier temps, le fibroscope est logé dans une bronche
de 3ème ou 4ème génération puis le matériel de prélèvement est
introduit
Fibroscopie bronchique
Progression du fibroscope jusqu’aux bronches sous segmentaires
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
B.3.1) BROSSAGE BRONCHIQUE PROTEGE: après introduction dans le
fibroscope une légère pression est exercée permettant de détacher le capuchon
et de révéler la brosse. Elle prélève un volume avoisinant les 1 a 10 μL. La
brosse est ensuite extraite et l’extrémité est coupée aseptiquement et mise dans
01 ml de sérum salé.
B.3.2) CATHETER DISTAL PROTEGE : même principe que la technique
précédente mais sans fibroscopie et avec possibilité d’instillation d’un petit
volume de sérum physiologique (Mini LBA)
1) Brosse téléscopique protégée
2) Avec capuchon en place
3)Après sortie de la brosse Principe des prélèvements distaux
protégés incluant le LBA
(2)
(3)
(1)
IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES
B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES :
B.3,3) LE LAVAGE BRONCHO-ALVEOLAIRE (LBA):: l’installation du fibroscope est de
meme que pour le brossage protégé, un volume totale de 250 ml par fractionné en 4 a 6 fois
sera instillé puis respiré. Le volume récupéré est de l’ordre de 20% a 60% du volume
administré.
NB : une fois un site prélevé, le fibroscope peut être repositionné sur un autre territoire
bronchique.
Les prélèvements distaux protégés sont d’exellente qualité microbiologique, le LBA en
particulier permet la recherche d’agents septiques comme
Préparation du fibroscope pour la pratique du LBA
Instillation-aspiration
Les bactéries intracellulaires , Legionella , certains parasites
et les champignons ainsi que les mycobactéries, mais sont
caractère invasif en limite l’usage
C) PRELEVEMENTS NON RESPIRATOIRES:
-urines : antigènes solubles
-sang : sérologies et hémocultures
-Liquide pleural : en cas d’épanchement pleural associée
D) ACHEMINEMENT AU LABORATOIRE: immédiat,
a température ambiante, tout les prélèvements doivent
etre proprement identifiés et étiquetés, accompagnés
d’une fiche de renseignements exhaustive.
LA FICHE DE RENSEIGNEMENTS EST AU BIOLOGISTE CE
QUE LE DOSSIER MEDICAL EST AU CLINICIEN
DE CE FAIT
UNE FICHE DE RENSEIGNENTS VIDE
= RESULTATS ERRONES
V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES
A) TRAITEMENTS PREELIMINAIRES DES PRELEVEMENTS :
- Noter l’aspect des prélèvements (notamment la présence de sang et de
purulences, leurs absence dans les expectorations peut signer le
caractère buccal du prélèvement)
- Pour en faciliter la manipulation ,les expectorations et les secrétions
aspirés épaisses doivent être fluidifiés par mélange a quantité égale avec
un agent fluidifiant suivi d’une homogénéisation
- Les prélèvements dilués (LBA, cathéter et brossage distaux protégés,
aspirations semblant trop dilués), doivent être centrifugés après
ensemencement pour faciliter l’examen microscopique
B) EXAMEN MICROSCOPIQUE :
B.1) EXPECTORATIONS ET ASPIRATIONS: en raison de leurs faible
fiabilité diagnostique, les crachats doivent subir une qualification
microscopique qui déterminera la poursuite ou non de l’examen
cytobactériologique (Classification Bertlett-Murray-Washington).
Un frottis est confectionné a partir de l’homogénéisat ou a a défaut a partir
de la parcelle la plus suspecte du prélèvement puis colorée au bleu de
méthylène, au MGG ou toute autre coloration permettant de bien distinguer
les éléments cellulaires.
Classe Cellules
épithéliales
/Champ
Leucocytes
/champ
Qualification
1 >25 <10 REFUSE
2 >25 10-25 REFUSE
3 >25 >25 REFUSE
4 10-25 >25 ACCEPTE
5 <10 10-25 ACCEPTE
INTERPRETATION : un expectoration de bonne qualité
contient le moins possible de cellules épithéliales et le plus
possible de leucocytes.
NB: la présence de cellules caliciformes et de macrophages
alvéolaires est en faveur du caractère profond de l’expectoration
B,2) LES AUTRES TYPES DE PRELEVEMENTS :
subissent une étude cytologique qualitative et une coloration
bactériologique sur le culot de centrifugation.
Prélèvements de mauvaise qualité : nombreuses cellules épithéliales et flore buccale abondante
Prélèvements de bonne qualité : contamination salivaire minimal
V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES
C) CULTURE BACTERIENNE : PRATIQUE
pour faciliter la numération des colonies bactériennes , l’homogéneisat est dilué a 10-2 et 10-4 pour les expectorations et a 10-2 pour les
aspirations et le LBA. Les prélèvements distaux sont ensemencés tel quel. Chaque dilution sera ensemencée .
L’ensemmencement est fait a l’aide d’une anse calibrée a 10 μL (en stries ou en Zig-Zag) ou avec un dépôt du même volume
(micropipette) qui sera ensuite étalé
A défaut , la parcelle la plus purulente est ensemencée par la technique des 4 quadrants ( a éviter car imprécise)
Anse calibrée
Nombre exprimé en CFU/Ml
Les milieux de culture ensemmencés doivent inclure au minimum une gélose
au Sang frais et une gélose au sang cuit additionée en suppléments
polyvitaminés.
Pour faciliter la lecture divers milieux sélectifs voire chromogéniques
peuvent être ajoutés : CLED, HEKTOEN, MACOKNEY, CHAPMAN,
gélose CNA (Pneumocoque), gélose Cétrimide (Pseudomonas aeruginosa)…
Les milieux sont incubés a 35-37° , selon le cas avec ou sans CO2 et
observés quotidiennement pendant une durée allant de 48h pour les
prélèvements non protégés a 05jours pour les autres parfois plus selon le
contexte et les résultats de l’examen microscopique (ex 03 semaines pour
Nocardia spp)
V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES
C) CULTURE BACTERIENNE : INTERPRETATION ET TESTS DE SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES
Deux critères sont garder a l’esprit:
1) Le caractère commensal de la plupart des germes associés aux infections respiratoires basses
2) La qualité variable des prélèvement
Les seuils de significativité ainsi retenu pour les différents prélèvements est variable par exemple LES EXPECTORATIONS : un germe est
considéré comme potentiellement pathogène si son abondance en culture surpasse les 107 CFU/mL (correspondant a 100colonies ayant poussé sur
la dilution 10-4)
-le germe considéré (parfois plusieurs en cas d’infection sur ventilation assistée) suissent des tests de
Sensibilité aux antibiotiques suivant les recommandations des sociétés savantes (CLSI, EUCAST)
-en raison du caractère invasif de ce type d’infection de de la propagation des résistances bactériennes
Aux antibiotiques , des CMI et la recherche des mécanismes de résistance aux antibiotiques
(ex Streptococcus pneumoniae de sensibilité diminuée aux pénicillines) doivent etre
systématiquement pratiqués.
TYPE DE PRELEVEMENT SEUIL DE SIGNIFICATIVITE
ASPIRATIONS 105
LBA 104
PDP 103
V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES
D) DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE ET TECHNIQUES RAPIDES /
COMPLEMENTAIRES :
D.1) BIOLOGIE MOLECULAIRE : existence de technique de PCR multiplex en
temps réel permettant la recherche de nombreux pathogènes respiratoires (14 a 22)
dans un même prélèvement inculant bactéries, virus , parasites et champignons .
D.2) SEROLOGIE : limitée par le caractère rétrospectif du diagnostic (virus) et les
difficultés d’interpretation (sérologie bactérienne)
D.3) RECHERCHE DES ANTIGENES BACTERIENS URINAIRES : de
performance limitée mais peuvent se révéler intéressant dans les pneumonies
communautaire de l’adulte et dans la légionellose
D.4) DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE : voir cours
Diagnostic micrbiologique des infections respiratoires basses et de la tuberculose
A) MORPHOLOGIE:
Principe de la coloration des mycobactéries :
En raison de la structure de leurs paroi, ces bactéries
peuvent retenir certains colorants meme en cas de
traitement prolongé par des agents de décoloration
colle l’acide sulfurique et l’alcool =) BACILLES ACIDO-
ALCOOLO RESISTANTS (BAAR)
Cette propriété est mise a profit dans les
prélèvements pour colorer spécifiquement les
mycobactéries tout en décolorant les autres
bactéries qui ne seront pas visibles
IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES
1) COLORATION DE ZIEHL-NEELSEN : coloration a
chaud d’un frottis avvec de la Fsuchine
phéniquée de Ziehl, (10 minutes) suivie d’une
double décoloration a l’acide sulfurique et a
l’alcool (07 minutes) puis d’une contre
coloration au bleu de méthylène
2) COLORATION a l’Auramine: même principe ,
sauf que le Colorant est une molécule
fluorescente =) lecture au Microscope a
fluorescence
Interprétation de la coloration
Ziehl-Neelsen
Coloration de Ziehl-Neelsen d’une biopsie
Réaction granulomateuse et bacilles
intracellulaires
Coloration de Ziehl-Neelsen d’un crachat
Il s’agit d’une Tuberculose pulmonaire dite
« a microscopie positive »
Ce sont des patients fortement contagieux
Les bacilles apparaissent fin, droits ou
légèrement incurvés parfois branchés.
Entre autre ces bactéries sont immobiles, non sporulés et
parfois capsulés (ex >10 BAAR/CHAMP)
Coloration de Ziehl-Neelsen d’une biopsie
Cutanée : Mycobacterium leprae
Coloration a l’Auramine
Mycobacterium tuberculosis
B) CARACTERES CULTURAUX :
Il s’agit d’une bactérie Fastidieuse, très exigeante, qui pousse sur
milieux enrichis
Le milieu solide le plus utilisé est le Lowenstein-Jensen (LJ)
Il existe des milieux liquide (ex Middelbrook 7H9)
Ces milieux ne sont pas sélectifs, les prélèvements poly
microbiens passent par une étape de décontamination.
C’est un Germe aérobie stricte, cultivant de préférence a 37°
Les cultures sont longues et peuvent prendre jusqu’à 03 mois.
Les colonies sont de couleur chamois ayant un aspect
caractéristique en « choux fleur »
La culture a été améliorée par l’avènement d’automates de
culture
IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES
Middelbrook 7H9Lowenstein-Jensen
Cultures de M.tuberculosis sur LJ
C) CARACTERES D’IDENTIFICATION :
IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES
grande diversité métabolique
Certains tests comme la catalase, l’exploration du métabolisme bactérien,la résistance
a certains inhibiteurs, les exigences vitaminiques, la pigmentation spontanée ou provoquée
… sont effectués mais dans Conditions différentes de celles des bactéries usuelles
En raison de leurs caractère laborieux de ces tests, l’identification antigénique et génomique est favorisée
Ce dernier permet a la fois l’identification de l’espèce ainsi que la recherche des gènes de résistance
aux antituberculeux
Détection rapide de l’antigène MPT64 par
immunochromatographie
PCR multiplex en temps réel
Identification et recherche des résistances type
GeneXpert
Diagnostic micrbiologique des infections respiratoires basses et de la tuberculose
LA TUBERCULOSE
EPIDEMIOLOGIE
M.tuberculosis est aussi bien retrouvé chez l’homme
que chez l’animal. La transmission interhumaine se
fait via les sujets présentant une maladie active et
éliminant le germe en grande quantité dans leurs
secretions respiratoires.
*selon l’OMS en 2014: 9.6 M de nouveaux cas, 12%
HIV+ et une écrasante majorité dans les pays en voie
de développement. Les cas détectés et notifiés ne
représenteraient que 2/3 des cas totaux.
Dans la même année : 1.1 M de décès, 480 000 de
cas de tuberculose résistante
En Algérie : 22.000 cas déclarés dont 8445
pulmonaires et 13708 extra-pulmonaire
L’incidence annuelle de la tuberculose contagieuse
en 2014 : 10/100.000 habitants (pays endémique à
incidence moyenne)
*le jeune adulte est le plus touché (20-40 ans) et la
forme ganglionnaire (cervicale/pulmonaire)
constitue la forme la plus fréquente.
*la résistance est autours de 1% (2005)
LA TUBERCULOSE
PHYSIOPATHOLOGIEla porte d’entrée est le plus souvent
pulmonaire +++
Gouttelettes de Pflugge
PHYSIOPATHOLOGIEla porte d’entrée est le plus
souvent pulmonaire +++
• au niveau des alvéoles la bactérie se multiplie
et est phagocytée, si l’activation immunitaire
est réussie, on assiste à la formation d’un
granulome qui jugule l’infection.
*dans le cas contraire les lésions progressent et
sont riches en bactéries qui entretiennent le
processus
*l’ouverture des lésions vers les bronches
aboutissent a la forme contagieuse de la
tuberculose pulmonaire.
*à partir du foyer pulmonaire la maladie peut
disséminer via le sang (dans les macrophages
non activés) dans tout l’organisme et soit rester
latente soit réactiver donnant une tuberculose
extra pulmonaire
Diagnostic micrbiologique des infections respiratoires basses et de la tuberculose
CLINIQUE :
1)La tuberculose pulmonaire : principale localisation
• la primo infection pulmonaire est asymptomatique dans 90% des
cas et évolue favorablement avec mémoire immunitaire (IDR+).
• dans le cas restant l’infection évolue vers une tuberculose
pulmonaire active, se manifestant par des signes d’imprégnation
tuberculeuse (fièvre persistante inexpliquée, sueurs nocturnes,
perte de poids, perturbations biologique et altération de l’état
général), les signes pulmonaires sont dominés par la toux et
parfois l’hémoptysie quand la maladie progresse.
• à ce stade et sans traitement : mortalité 50%, mode chronique
25%, guérison 25% (chiffres très variables d’une région a une
autre). Le traitement améliore considérablement le pronostic de
la maladie.
Atteinte apicale (oxygene +++)
Tuberculose miliaire pulmonaire
• 2) La tuberculose extra-pulmonaire : fréquente
chez sujets fragilisés : miliaire tuberculseuse.
Atteinte des séreuses (pleurésie, méningite,
péritonite, péricardite), ganglions lymphatiques,
appareil ostéo-articulaire (Mal de Pott), appareil
génito-urinaire…
TUBERCULOSE GANGLIONNAIRE
PLEURESIE TUBERCULEUSE
TUBERCULOSE CEREBRALE
Sensibilite aux antibiotiques
M.tuberculosis est résistant à la plupart des antibiotiques utilisée en
routine. Il existe un groupe de molécules spécifiquement actives dites :
antituberculeux (ATT)
Sommairement, les antituberculeux sont classées en :
*Antituberculeux de 1ère ligne : utilisée en 1ère intention. On distingue
les ATT majeurs Rifampicine, isoniazide et Streptomycine. Sont très
bactéricides et permettent une stérilisation rapide des lésions
rendant ainsi le sujet non contagieux.
Les autres sont l’Ethambutol et le pyrazinamide (formes
intracellulaires dormantes) qui ont une action bactéricide
complémentaire
*Les antibiotiques de 2ème ligne : sont utilisée chez les patient
résistants au traitement et sont représentés par les aminosides
(kanamycine/amikacine) les fluoroquinolones
(ofloxacine/ciprofloxacine/moxifloxacine)) ainsi que la cyclosérine , le
para-amino salycilate et l’éthionamide…
DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE
PRELEVEMENTS: crachats+++ , 3 sont recueillis sur 3 jours jours successifs , le premier lors de la 1ère consultation
Le crachat se fait de préférence le matin , a jeun et dans un effort de tous
Pour les patients ne pouvant pas cracher (femme, enfant en bas age), un tubage gastrique est effectuée pour recueillir les
secrétions avalés pendant la nuit
Autres: Aspiration bronchique, LBA, PDP…
Les prelevements doivent etre gardes a l’abri de la lumière !
Extra-pulmonaires : liquides pleuraux, articulaires, LCR, biopsies, ponction d’abcès,…
DIAGNOSTIC DIRECT :
*examen direct :
Tuberculose pulmonaire : l’examen directe est l’examen de référence , elle permet le diagnostic et le suivi des patients
*Coloration Ziehl-Neelsen a partir des crachats
TBM+ : tuberculose pulmonaire a microscopie positive : contagieuse+++
TBM- : tuberculose pulmonaire a microscopie négative : contagion – =) CULTURE
Tuberculose extra pulmonaire : la culture est l’examen de référence
*les extra pulmonaires le Ziehl-Neelsen n’est pas recommandé (pauci bacillaires le plus souvent donc la microscopie est négative)
DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE
*culture et tests de sensibilité aux antituberculeux sur Lowenstein-Jensen ou autre
En raison de son caractère fastidieux et dangereux, En Algérie, elle n’est pas obligatoire pour les crachats a microscopie
positive
Elle l’est en cas de :
-Forte suspicion de tuberculose pulmonaire avec microscopie négative sur les 3 crachats
-tuberculose extra-pulmonaire
Les Tests de sensibilité aux antituberculeux quand a eux sont indiqués au cas ou il existe une rechutes une non réponse
au traitement ou reprise de la croissance bactérienne après une phase de diminution de la charge bactérienne dans les
crachats (recherche d’une résistance au traitement)
Cette recherche ce fait soit par méthode phénotypique (méthode des proportions) ou génotypique. (recherche directe
des gènes de résistance )
Methode des proportions Detection directe des
gènes mutants
DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE
Diagnostic indirect
Regroupe :
1) l’intradermoréaction a la tuberculine
2) Recherche de l’immunité cellulaire par dosage
de l’interféron Gamma
PREVENTION DE LA TUBERCULOSE
*prélèvements : pulmonaires +++, les etxra pulmonaires selon la localisation
Isolement du patient infecté contagieux jusqu’à négativation des crachats
Suivi des patients contacts et chimioprophylaxie en cas de facteurs de risque de tuberculose
grave (nouveau née…)
Respect des règles d’hygiènes et des règles de sécurité respiratoire
Hygiène des mains
Aération et exposition au soleil des locaux (bactérie sensible aux UV)
Gesstion des déchets
correction des facteurs d’immunodepression (malnutrition…)
Surveillance rigoureuse du traitement et sensibilisation des patients a la complaisance au
traitement
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Diagnostic micrbiologique des infections respiratoires basses et de la tuberculose

  • 1. DR T.DJERBOUA Pharmacien maitre assistant en microbiologie Faculté de médecine Mouloud Maammeri Chef de service du laboratoire central de biologie clinique Hôpital BELLOUA-CHU TIZI-OUZOU. DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE DES INFECTIONS BRONCHO-PULMONAIRES ET DE LA TUBERCULOSE UNIVERSITE MOULOUD-MAAMERI DE TIZI- OUZOU FACULTE DE MEDECINE DEPARTEMENT DE PHARMACIE COURS DE 4ème ANNEE PHARMACIE MODULE DE MICROBIOLOGIE
  • 2. PLAN 1.INTRODUCTION 2.OBJECTIFS PEDAGOGIQUES 3.RAPPELS ANAMOCLINIQUES ET PATHOGENESE 4.MICROBIOLOGIE DES INFECTIONS BRONCHO-PULMONAIRES 5.EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : a) Étapes pré-analytiques b) Étapes analytiques c) Étapes post-analytiques et critères d’interpretation 6) DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE DE LA TUBERCULOSE
  • 3. II.OBJECTIFS PEDAGOGIQUES *connaitre les circonstances de prescription et la typologie des prélèvements broncho-pulmonaires (IBP) *connaitre les circonstances de prescription et la typologie des prélèvements destinés au diagnostic de la tuberculose *Connaitre les principaux agents infectieux impliqués dans les infections respiratoires basses (IRB) *connaitre la démarche pré-analytique et la valeur microbiologique des prélèvements *connaitre la démarche a suivre face a un prélèvement destiné au diagnostic des infections IBP *Connaitre les critères d’interprétation d’un prélèvement broncho-pulmonaire et de diagnostic de la tuberculose *Connaitre les moyens de détermination de la sensibilité aux antituberculeux
  • 4. 1- DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIQUE DES INFECTIONS BRONCHOPULMONAIRES
  • 5. I.INTRODUCTION Les infections broncho-pulmonaires (IBP) regroupes plusieurs entités cliniques : -Les Bronchites et bronchiolites aigues communautaires -Les pneumonies aigues communautaires -Les exacerbations des bronchopneumopathies chroniques obstructives (bronchite chronique et emphysème pulmonaire) -Les pneumonies acquises sous ventilation mécanique (pneumonies nosocomiales) La symptomatologie d’une IRB communautaire inclut la toux (productive d’emblée ou secondairement) des signes généraux (fièvre frissons, céphalées…), des signes fonctionnels d’une atteinte basse (douleurs thoraciques, dyspnée, signes auscultatoires. Les infections respiratoires basses représentent la 3ème cause de mortalité dans le monde en particulier en raison des pneumonies bactériennes. En raison de plusieurs facteurs limitant (modalités de prélèvements, difficultés analytiques et d’interprétation…) Le diagnostic des IBP est indiquée préférentiellement face a : -Présence de signes de gravité -Echec thérapeutique
  • 6. II.RAPPELS ANATOMO- CLINIQUES ET PATHOGENESE Le terme « voies aériennes inférieures » ou « étage sous-glottique » désigne : -La trachée -Les Bronches -Les Poumons Ces derniers se distinguent sur la plan microbiologique par l’absence de flore de colonisation grâce a de nombreux mécanismes de clairance microbienne
  • 7. II.RAPPELS ANATOMO-CLINIQUES ET PATHOGENESE -L’action mécanique : toux, clairance muco-ciliaire -Action physicochimique de l’environnement bronchique : mucus, lysozyme, sidérophores, peptides bactéricides, complément, IgA sécrétoires, IgG… EFFET MURAILLE / ESCALATOR DE L’EPITHELIUM BRONCHIQUE Assurée par les Macrophages et autres cellules présentatrices d’antigènes EFFET SENTINEL-ALERTE EFFET ARTILLERIE LOURDE A composante cellulaire et humorale , Assurée par les polynucléaires neutrophiles, les Macrophages et les Lymphocytes NK suivi en des cellules de l’immunité adaptative. Formation de nodules lymphoïdes (BALT) suite a une infection broncho-pulmonaire Tout facteur altérant ces barrières défensives rend le sujet vulnérable aux infections respiratoires
  • 8. III. MICROBIOLOGIE DES INFECTION BRONCHO-PULMONAIRES A) LES INFECTIONS BACTERIENNES : touchent principalement le poumon (d’ou la mortalité élève en particulier des pneumonies nosocomiales). La répartition est bactéries incriminés est variable et dépend de plusieurs paramètres : -Le sujet atteint (age, statut vaccinal, comorbidités…) -Le contexte dans lequel l’infection a eu lieu (sous ventilation mécanique, exposition aux eaux chaudes stagnantes, contacte animalier particulier, pneumonie d’aspiration, corps étranger, pneumonie post grippale…) Ainsi, la bactérie la plus fréquemment incriminée reste Streptococcus pneumoniae A moindre fréquence voire dans des contextes particuliers, l’infection peut être causée par Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae, Hemophilus influenzae, Branhamella catarrhalis, Legionella pneumophila, Chlamydiophila pneumoniae ,Mycoplasma pneumoniae, Bordetella pertussis, Mycobactéries,bactéries anaérobies strictes… B) LES INECTIONS VIRALES : prédominantes dans les bronchites et bronchiolites aigues, on distingue deux groupes selon le tropisme : B.1) les virus a tropisme respiratoire primaire : affinité marquée pour l’épithélium respiratoirevirus de la grippe , Virus Parainfluenza, Virus respratoire syncitial, Metapneumovirus, Rhinovirus, Coronavirus, Adenovirus… B.2) virus a tropisme respiratoire secondaire : atteinte respiratoire sur secondaire a partir d’un site primaire de prédilection, l’atteinte respiratoire fait partie du tableau clinique , et est parfois liée a la présence d’un facteur favorisant (ex immunodépression) : Virus de la Rougeole, VZV, HSV,CMV, Enterovirus…
  • 9. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES A) INDICATIONS DES PRELEVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : • Prouver et identifier l’origine infectieuse face a un syndrome impliquant les voies respiratoires basses en particulier si présence de signes ou de facteurs de gravité /complication , de non réponse au traitement ou a risque épidémique • Mettre en œuvre les moyens curatifs et préventifs adéquats face a un risque épidémique • Dans une politique de rationalisation de l’usage des antibiotiques (infections souvent virales)
  • 10. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : • Nombreux • Peuvent etre non invasifs et invasifs , les prélèvements invasifs peuvent etre fait sous ou sans fibroscopie (a l’aveugle surtout si lésion bilatérale) chez un sujet intubé-ventilé ou non selon les circonstances • Classés selon la facilité d’accès et selon leurs qualité microbiologique en : PRELEVEMENTS NON INVASIFS PRELEVEMENTS INVASIFS EXPECTORATIONS Qualité microbiologique variable souvent mauvaise (contamination salivaire+++) PRELEVEMETS A RISQUE DE CONTAMINATION FAIBLE PRELEVEMETS A RISQUE DE CONTAMINATION ELEVE SANS FIBROSCOPiE AVEC FIBROSCOPiE *INTUBE-VENTILE *SANS FIBROSCOPiE
  • 11. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES expectorations ASPIRATION SUR SONDE PRELEVEMENTS DISTAUX PREOTEGES ET LBA PELEVEMENTS DISTAUX PROTEGES ET LBA ASPRATION SUR SONDE EXPECTORATIONS INVASIVITE QUALITE MICROBIOLOGIQUE
  • 12. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : B.1) LES EXPECTORATIONS : effectués de préférence le matin a jeun après rinçage soigneux de la bouche et dans un effort de toux ou aidé Kinésithérapie . Les expectorations sont recueillis dans un récipient stérile et B.2) LES ASPIRATIONS ENDOTRACHEALES ET ENDOBRONCHIQES :effectues chez le sujet intubé-ventilé, il s’agit de récupérer a l’aide d’une sonde d’aspiration , les secrétions qui se sont accumulé dans la sonde d’intubation. Ces dernières seront mises dans un récipient stérile. Aspiration a travers une canule de trachéotomie Aspiration a travers une sonde d’intubation endotracheale
  • 13. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : B.3) LES PRELEVEMENTS DISTAUX PROTEGES ET LBA: se font le plus souvent sous fibroscopie (prélèvements orientés sauf le cathéter distal protégé) , l’instrumentation est protégée par un double cathéter obturé par un bouchon en polyéthylène glycol permettant d’éviter toute contamination par la flore salivaire. Dans un premier temps, le fibroscope est logé dans une bronche de 3ème ou 4ème génération puis le matériel de prélèvement est introduit Fibroscopie bronchique Progression du fibroscope jusqu’aux bronches sous segmentaires
  • 14. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : B.3.1) BROSSAGE BRONCHIQUE PROTEGE: après introduction dans le fibroscope une légère pression est exercée permettant de détacher le capuchon et de révéler la brosse. Elle prélève un volume avoisinant les 1 a 10 μL. La brosse est ensuite extraite et l’extrémité est coupée aseptiquement et mise dans 01 ml de sérum salé. B.3.2) CATHETER DISTAL PROTEGE : même principe que la technique précédente mais sans fibroscopie et avec possibilité d’instillation d’un petit volume de sérum physiologique (Mini LBA) 1) Brosse téléscopique protégée 2) Avec capuchon en place 3)Après sortie de la brosse Principe des prélèvements distaux protégés incluant le LBA (2) (3) (1)
  • 15. IV. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES PRE-ANALYTIQUES B) LES PREVEMENTS BRONCHOPULMONAIRES : B.3,3) LE LAVAGE BRONCHO-ALVEOLAIRE (LBA):: l’installation du fibroscope est de meme que pour le brossage protégé, un volume totale de 250 ml par fractionné en 4 a 6 fois sera instillé puis respiré. Le volume récupéré est de l’ordre de 20% a 60% du volume administré. NB : une fois un site prélevé, le fibroscope peut être repositionné sur un autre territoire bronchique. Les prélèvements distaux protégés sont d’exellente qualité microbiologique, le LBA en particulier permet la recherche d’agents septiques comme Préparation du fibroscope pour la pratique du LBA Instillation-aspiration Les bactéries intracellulaires , Legionella , certains parasites et les champignons ainsi que les mycobactéries, mais sont caractère invasif en limite l’usage C) PRELEVEMENTS NON RESPIRATOIRES: -urines : antigènes solubles -sang : sérologies et hémocultures -Liquide pleural : en cas d’épanchement pleural associée D) ACHEMINEMENT AU LABORATOIRE: immédiat, a température ambiante, tout les prélèvements doivent etre proprement identifiés et étiquetés, accompagnés d’une fiche de renseignements exhaustive. LA FICHE DE RENSEIGNEMENTS EST AU BIOLOGISTE CE QUE LE DOSSIER MEDICAL EST AU CLINICIEN DE CE FAIT UNE FICHE DE RENSEIGNENTS VIDE = RESULTATS ERRONES
  • 16. V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES A) TRAITEMENTS PREELIMINAIRES DES PRELEVEMENTS : - Noter l’aspect des prélèvements (notamment la présence de sang et de purulences, leurs absence dans les expectorations peut signer le caractère buccal du prélèvement) - Pour en faciliter la manipulation ,les expectorations et les secrétions aspirés épaisses doivent être fluidifiés par mélange a quantité égale avec un agent fluidifiant suivi d’une homogénéisation - Les prélèvements dilués (LBA, cathéter et brossage distaux protégés, aspirations semblant trop dilués), doivent être centrifugés après ensemencement pour faciliter l’examen microscopique B) EXAMEN MICROSCOPIQUE : B.1) EXPECTORATIONS ET ASPIRATIONS: en raison de leurs faible fiabilité diagnostique, les crachats doivent subir une qualification microscopique qui déterminera la poursuite ou non de l’examen cytobactériologique (Classification Bertlett-Murray-Washington). Un frottis est confectionné a partir de l’homogénéisat ou a a défaut a partir de la parcelle la plus suspecte du prélèvement puis colorée au bleu de méthylène, au MGG ou toute autre coloration permettant de bien distinguer les éléments cellulaires. Classe Cellules épithéliales /Champ Leucocytes /champ Qualification 1 >25 <10 REFUSE 2 >25 10-25 REFUSE 3 >25 >25 REFUSE 4 10-25 >25 ACCEPTE 5 <10 10-25 ACCEPTE INTERPRETATION : un expectoration de bonne qualité contient le moins possible de cellules épithéliales et le plus possible de leucocytes. NB: la présence de cellules caliciformes et de macrophages alvéolaires est en faveur du caractère profond de l’expectoration B,2) LES AUTRES TYPES DE PRELEVEMENTS : subissent une étude cytologique qualitative et une coloration bactériologique sur le culot de centrifugation.
  • 17. Prélèvements de mauvaise qualité : nombreuses cellules épithéliales et flore buccale abondante Prélèvements de bonne qualité : contamination salivaire minimal
  • 18. V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES C) CULTURE BACTERIENNE : PRATIQUE pour faciliter la numération des colonies bactériennes , l’homogéneisat est dilué a 10-2 et 10-4 pour les expectorations et a 10-2 pour les aspirations et le LBA. Les prélèvements distaux sont ensemencés tel quel. Chaque dilution sera ensemencée . L’ensemmencement est fait a l’aide d’une anse calibrée a 10 μL (en stries ou en Zig-Zag) ou avec un dépôt du même volume (micropipette) qui sera ensuite étalé A défaut , la parcelle la plus purulente est ensemencée par la technique des 4 quadrants ( a éviter car imprécise) Anse calibrée Nombre exprimé en CFU/Ml Les milieux de culture ensemmencés doivent inclure au minimum une gélose au Sang frais et une gélose au sang cuit additionée en suppléments polyvitaminés. Pour faciliter la lecture divers milieux sélectifs voire chromogéniques peuvent être ajoutés : CLED, HEKTOEN, MACOKNEY, CHAPMAN, gélose CNA (Pneumocoque), gélose Cétrimide (Pseudomonas aeruginosa)… Les milieux sont incubés a 35-37° , selon le cas avec ou sans CO2 et observés quotidiennement pendant une durée allant de 48h pour les prélèvements non protégés a 05jours pour les autres parfois plus selon le contexte et les résultats de l’examen microscopique (ex 03 semaines pour Nocardia spp)
  • 19. V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES C) CULTURE BACTERIENNE : INTERPRETATION ET TESTS DE SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES Deux critères sont garder a l’esprit: 1) Le caractère commensal de la plupart des germes associés aux infections respiratoires basses 2) La qualité variable des prélèvement Les seuils de significativité ainsi retenu pour les différents prélèvements est variable par exemple LES EXPECTORATIONS : un germe est considéré comme potentiellement pathogène si son abondance en culture surpasse les 107 CFU/mL (correspondant a 100colonies ayant poussé sur la dilution 10-4) -le germe considéré (parfois plusieurs en cas d’infection sur ventilation assistée) suissent des tests de Sensibilité aux antibiotiques suivant les recommandations des sociétés savantes (CLSI, EUCAST) -en raison du caractère invasif de ce type d’infection de de la propagation des résistances bactériennes Aux antibiotiques , des CMI et la recherche des mécanismes de résistance aux antibiotiques (ex Streptococcus pneumoniae de sensibilité diminuée aux pénicillines) doivent etre systématiquement pratiqués. TYPE DE PRELEVEMENT SEUIL DE SIGNIFICATIVITE ASPIRATIONS 105 LBA 104 PDP 103
  • 20. V. L’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE : ETAPES ANALYTIQUES D) DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE ET TECHNIQUES RAPIDES / COMPLEMENTAIRES : D.1) BIOLOGIE MOLECULAIRE : existence de technique de PCR multiplex en temps réel permettant la recherche de nombreux pathogènes respiratoires (14 a 22) dans un même prélèvement inculant bactéries, virus , parasites et champignons . D.2) SEROLOGIE : limitée par le caractère rétrospectif du diagnostic (virus) et les difficultés d’interpretation (sérologie bactérienne) D.3) RECHERCHE DES ANTIGENES BACTERIENS URINAIRES : de performance limitée mais peuvent se révéler intéressant dans les pneumonies communautaire de l’adulte et dans la légionellose D.4) DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE : voir cours
  • 22. A) MORPHOLOGIE: Principe de la coloration des mycobactéries : En raison de la structure de leurs paroi, ces bactéries peuvent retenir certains colorants meme en cas de traitement prolongé par des agents de décoloration colle l’acide sulfurique et l’alcool =) BACILLES ACIDO- ALCOOLO RESISTANTS (BAAR) Cette propriété est mise a profit dans les prélèvements pour colorer spécifiquement les mycobactéries tout en décolorant les autres bactéries qui ne seront pas visibles IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES 1) COLORATION DE ZIEHL-NEELSEN : coloration a chaud d’un frottis avvec de la Fsuchine phéniquée de Ziehl, (10 minutes) suivie d’une double décoloration a l’acide sulfurique et a l’alcool (07 minutes) puis d’une contre coloration au bleu de méthylène 2) COLORATION a l’Auramine: même principe , sauf que le Colorant est une molécule fluorescente =) lecture au Microscope a fluorescence
  • 23. Interprétation de la coloration Ziehl-Neelsen
  • 24. Coloration de Ziehl-Neelsen d’une biopsie Réaction granulomateuse et bacilles intracellulaires Coloration de Ziehl-Neelsen d’un crachat Il s’agit d’une Tuberculose pulmonaire dite « a microscopie positive » Ce sont des patients fortement contagieux Les bacilles apparaissent fin, droits ou légèrement incurvés parfois branchés. Entre autre ces bactéries sont immobiles, non sporulés et parfois capsulés (ex >10 BAAR/CHAMP)
  • 25. Coloration de Ziehl-Neelsen d’une biopsie Cutanée : Mycobacterium leprae Coloration a l’Auramine Mycobacterium tuberculosis
  • 26. B) CARACTERES CULTURAUX : Il s’agit d’une bactérie Fastidieuse, très exigeante, qui pousse sur milieux enrichis Le milieu solide le plus utilisé est le Lowenstein-Jensen (LJ) Il existe des milieux liquide (ex Middelbrook 7H9) Ces milieux ne sont pas sélectifs, les prélèvements poly microbiens passent par une étape de décontamination. C’est un Germe aérobie stricte, cultivant de préférence a 37° Les cultures sont longues et peuvent prendre jusqu’à 03 mois. Les colonies sont de couleur chamois ayant un aspect caractéristique en « choux fleur » La culture a été améliorée par l’avènement d’automates de culture IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES Middelbrook 7H9Lowenstein-Jensen
  • 28. C) CARACTERES D’IDENTIFICATION : IV.CARACTERISTIQUES BACTERIOLOGIQUES grande diversité métabolique Certains tests comme la catalase, l’exploration du métabolisme bactérien,la résistance a certains inhibiteurs, les exigences vitaminiques, la pigmentation spontanée ou provoquée … sont effectués mais dans Conditions différentes de celles des bactéries usuelles En raison de leurs caractère laborieux de ces tests, l’identification antigénique et génomique est favorisée Ce dernier permet a la fois l’identification de l’espèce ainsi que la recherche des gènes de résistance aux antituberculeux
  • 29. Détection rapide de l’antigène MPT64 par immunochromatographie PCR multiplex en temps réel Identification et recherche des résistances type GeneXpert
  • 31. LA TUBERCULOSE EPIDEMIOLOGIE M.tuberculosis est aussi bien retrouvé chez l’homme que chez l’animal. La transmission interhumaine se fait via les sujets présentant une maladie active et éliminant le germe en grande quantité dans leurs secretions respiratoires. *selon l’OMS en 2014: 9.6 M de nouveaux cas, 12% HIV+ et une écrasante majorité dans les pays en voie de développement. Les cas détectés et notifiés ne représenteraient que 2/3 des cas totaux. Dans la même année : 1.1 M de décès, 480 000 de cas de tuberculose résistante En Algérie : 22.000 cas déclarés dont 8445 pulmonaires et 13708 extra-pulmonaire L’incidence annuelle de la tuberculose contagieuse en 2014 : 10/100.000 habitants (pays endémique à incidence moyenne) *le jeune adulte est le plus touché (20-40 ans) et la forme ganglionnaire (cervicale/pulmonaire) constitue la forme la plus fréquente. *la résistance est autours de 1% (2005)
  • 32. LA TUBERCULOSE PHYSIOPATHOLOGIEla porte d’entrée est le plus souvent pulmonaire +++ Gouttelettes de Pflugge
  • 33. PHYSIOPATHOLOGIEla porte d’entrée est le plus souvent pulmonaire +++ • au niveau des alvéoles la bactérie se multiplie et est phagocytée, si l’activation immunitaire est réussie, on assiste à la formation d’un granulome qui jugule l’infection. *dans le cas contraire les lésions progressent et sont riches en bactéries qui entretiennent le processus *l’ouverture des lésions vers les bronches aboutissent a la forme contagieuse de la tuberculose pulmonaire. *à partir du foyer pulmonaire la maladie peut disséminer via le sang (dans les macrophages non activés) dans tout l’organisme et soit rester latente soit réactiver donnant une tuberculose extra pulmonaire
  • 35. CLINIQUE : 1)La tuberculose pulmonaire : principale localisation • la primo infection pulmonaire est asymptomatique dans 90% des cas et évolue favorablement avec mémoire immunitaire (IDR+). • dans le cas restant l’infection évolue vers une tuberculose pulmonaire active, se manifestant par des signes d’imprégnation tuberculeuse (fièvre persistante inexpliquée, sueurs nocturnes, perte de poids, perturbations biologique et altération de l’état général), les signes pulmonaires sont dominés par la toux et parfois l’hémoptysie quand la maladie progresse. • à ce stade et sans traitement : mortalité 50%, mode chronique 25%, guérison 25% (chiffres très variables d’une région a une autre). Le traitement améliore considérablement le pronostic de la maladie. Atteinte apicale (oxygene +++) Tuberculose miliaire pulmonaire
  • 36. • 2) La tuberculose extra-pulmonaire : fréquente chez sujets fragilisés : miliaire tuberculseuse. Atteinte des séreuses (pleurésie, méningite, péritonite, péricardite), ganglions lymphatiques, appareil ostéo-articulaire (Mal de Pott), appareil génito-urinaire… TUBERCULOSE GANGLIONNAIRE PLEURESIE TUBERCULEUSE TUBERCULOSE CEREBRALE
  • 37. Sensibilite aux antibiotiques M.tuberculosis est résistant à la plupart des antibiotiques utilisée en routine. Il existe un groupe de molécules spécifiquement actives dites : antituberculeux (ATT) Sommairement, les antituberculeux sont classées en : *Antituberculeux de 1ère ligne : utilisée en 1ère intention. On distingue les ATT majeurs Rifampicine, isoniazide et Streptomycine. Sont très bactéricides et permettent une stérilisation rapide des lésions rendant ainsi le sujet non contagieux. Les autres sont l’Ethambutol et le pyrazinamide (formes intracellulaires dormantes) qui ont une action bactéricide complémentaire *Les antibiotiques de 2ème ligne : sont utilisée chez les patient résistants au traitement et sont représentés par les aminosides (kanamycine/amikacine) les fluoroquinolones (ofloxacine/ciprofloxacine/moxifloxacine)) ainsi que la cyclosérine , le para-amino salycilate et l’éthionamide…
  • 38. DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE PRELEVEMENTS: crachats+++ , 3 sont recueillis sur 3 jours jours successifs , le premier lors de la 1ère consultation Le crachat se fait de préférence le matin , a jeun et dans un effort de tous Pour les patients ne pouvant pas cracher (femme, enfant en bas age), un tubage gastrique est effectuée pour recueillir les secrétions avalés pendant la nuit Autres: Aspiration bronchique, LBA, PDP… Les prelevements doivent etre gardes a l’abri de la lumière ! Extra-pulmonaires : liquides pleuraux, articulaires, LCR, biopsies, ponction d’abcès,… DIAGNOSTIC DIRECT : *examen direct : Tuberculose pulmonaire : l’examen directe est l’examen de référence , elle permet le diagnostic et le suivi des patients *Coloration Ziehl-Neelsen a partir des crachats TBM+ : tuberculose pulmonaire a microscopie positive : contagieuse+++ TBM- : tuberculose pulmonaire a microscopie négative : contagion – =) CULTURE Tuberculose extra pulmonaire : la culture est l’examen de référence *les extra pulmonaires le Ziehl-Neelsen n’est pas recommandé (pauci bacillaires le plus souvent donc la microscopie est négative)
  • 39. DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE *culture et tests de sensibilité aux antituberculeux sur Lowenstein-Jensen ou autre En raison de son caractère fastidieux et dangereux, En Algérie, elle n’est pas obligatoire pour les crachats a microscopie positive Elle l’est en cas de : -Forte suspicion de tuberculose pulmonaire avec microscopie négative sur les 3 crachats -tuberculose extra-pulmonaire Les Tests de sensibilité aux antituberculeux quand a eux sont indiqués au cas ou il existe une rechutes une non réponse au traitement ou reprise de la croissance bactérienne après une phase de diminution de la charge bactérienne dans les crachats (recherche d’une résistance au traitement) Cette recherche ce fait soit par méthode phénotypique (méthode des proportions) ou génotypique. (recherche directe des gènes de résistance )
  • 40. Methode des proportions Detection directe des gènes mutants
  • 41. DIAGNOTIC DE LA TUBERCULOSE Diagnostic indirect Regroupe : 1) l’intradermoréaction a la tuberculine 2) Recherche de l’immunité cellulaire par dosage de l’interféron Gamma
  • 42. PREVENTION DE LA TUBERCULOSE *prélèvements : pulmonaires +++, les etxra pulmonaires selon la localisation Isolement du patient infecté contagieux jusqu’à négativation des crachats Suivi des patients contacts et chimioprophylaxie en cas de facteurs de risque de tuberculose grave (nouveau née…) Respect des règles d’hygiènes et des règles de sécurité respiratoire Hygiène des mains Aération et exposition au soleil des locaux (bactérie sensible aux UV) Gesstion des déchets correction des facteurs d’immunodepression (malnutrition…) Surveillance rigoureuse du traitement et sensibilisation des patients a la complaisance au traitement