1. EXPLORATION
DU
METABOLISME
ENERGETIQUE
BACTERIEN
DR T.DJERBOUA
PHARMACIEN MAITRE
ASSISTANT EN MICROBIOLOGIE
LABORATOIRE CENTRAL DE BIOLOGIE
MEDICALE
HOPITAL BELLOUA-CHU TIZI-OUZOU
ANNÉE UNIVERSITAIRE : 2019-2020
EMAIL : DRTAOUFIK123@HOTMAIL.FR
UNIVERSITE MOULOU-MAAMERI
DE TIZI-OUZOU
FACULTE DE MEDECINE
DEPARTEMENT DE PHARMACIE
COURS DE 4ème ANNEE
PHARMACIE
MODULE DE MICROBIOLOGIE

2. PLAN
I. Introduction et défitnitions
II. Objectifs pédagogiques
III. Intérêt et applications de l’étude du métabolisme bactérien
IV. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique bactérien
1) Les sources d’énergie
2) Les voies métaboliques
3) La production d’énergie
4) Régénération des transporteurs d’éléctrons et génération des dechets métaboliques
5) L’anabolisme bactérien
V. Exploration du métabolisme bactérien : application a l’identification bactérienne
1) Métabolisme des glucides
a) Exploration de la voie d’attaque des glucides
b) Détermination des sucres assimilables par une bactérie donnée
c) Recherche de l’assimilation des citrates
d) Recherche d’enzymes du métabolisme glucidique : la β-galactosidase
e) Identification de la voie fermentaire
f) Recherche des enzymes respiratoires : Oxydase, Catalase ,Nitrate réductase , sulfito-réduction
2) Métabolisme des acides aminés et de l’urée : décarboxylases , désaminases , Tryptophanase et uréase
3) Métabolisme des lipides : lipase et lécithinase
4) Voies métaboliques et Enzymes spécifiques : gélatinase et pyrrolydonyl-aryl-amidase
5) Exploration des métabolites secondaires : exemple des pigments de pSeudomonas spp

3. OBJECTIFS PEDAGOGIQUES
 Connaitre les capacités métaboliques des bactéries et leurs role crucial dans leurs environnement
 Connaitre les application du métabolisme bactérien comme outil utilizable par l’homme
 Connaitre le place de l’étude du métabolisme bactérien dans le diagnostic microbiologique
 Connaitre les principals voies métaboliques explores au laboratoire de microbiologie médicale
 Connaitre les avantages et les limites de l’exploration du métabolisme bactérien comme outil
d’identification bactérienne

4. INTRODUCTION
Le métabolisme désigne l’ensemble des réactions chimiques ce produisant dans une cellule et
assurant sa survie, sa croissance et sa multiplication
Il se répartir en 02 grands volets
Le Catabolisme : désignant la dégradation des macromolécules complexe en blocs biochimiques
simples et en énergie
L’Anabolisme : désigne l’utilisation des blocs biochimiques simples et d’énergie pour la
production de macromolécules complexes
Chaque processus métabolique est catalysé par un ensemble d’enzyme constituant la voie
métabolique
Malgré leurs petite taille, chaque cellule bactérienne autant qu’individu ou en « population » est
capable de démontrer des fonctions biochimiques formidables par leurs nombre et complexité,
dont nombreuses sont absentes chez les autres êtres vivants.

7. Intérêt et application de l’étude du métabolisme
bacterien
les bactéries au service de l’homme
Nombreux dont :
-Industrie : pharmaceutique (antibiotiques, probiotiques, prébiotiques, enzymes
bactériennes) , textile , alimentaire…
-Biotechnologie : insuline et autres hormones ainsi que plusieurs autres substances
-Ecologie : dépollution , digestion , compostage, fertilisation
-Scientifique : Identification bactérienne (un des outils), étude des voies métaboliques,
découverte de nouvelles enzymes, vectorisation et expression de gènes …
Etc…

8. Vue d’ensemble des principales voies du
métabolisme énergétique bactérien

9. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
Les sources d’énergie
-Les bactéries d’interet médical, chimio-hétéro-
organotrophes , puisent leurs énergie principalement a
partir des glucides , lipides et acides aminés. Toutes sont
capables de métaboliser le glucose comme substrat de
base.
-ces substances simples sont obtenu tel quel ou par
digestion de molécules complexes issues de
l’environnement de la bactérie (amidon , cellulose,
gélatine, corps gras, acides nucléiques...)
-Cependant , en ce qui consterne les autres oses, acides
aminés et lipides, les bactéries montrent différentes
capacités de métabolisme aidant a leurs identification ou
utilisation bénéfique potentielle
-Certaines bactéries sont capable d’extraire de l'Energie a
partir de substances très diverses voir considérés comme
déchets/toxiques comme l’urée ou le Toluène

10. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
Les voies métaboliques
-pour chaque substrat qu’elle est capable de métaboliser , la bactérie exprime un ensemble d’enzymes constituant la voie
métabolique. Pour une substance donnée , la bactéries peut exprimer plusieurs voies métaboliques
-ces dernières participent a l’entrée du substrat et sont activation (le cas échéant), a sa dégradation/synthèse et a
l’élimination des déchets métaboliques.
-Les voies métaboliques sont codés par des gènes pouvant être Chromosomiques (pouvant caractériser un groupe
bactérien , un genre ou une espèce donnée ) ces gènes sont qualifiés de « gènes de ménage ou Housekeeping genes » car
codent pour des fonctions cellulaires basiques vitales pour la bactérie, leurs perte ou leurs mutations la désavantagerait.
-en parallèle ,d’autres fonctions sont portés par des éléments génétiques extra-chromosomiques donnant la bactérie un
avantage biologique.
-Il arrive parfois qu’un ou plusieurs gène de ménage puisse muter sans perte de la voie métabolique, dans ce cas la
révélation fait appel a des analogues structuraux non dépendant du gène mutant
Ex : mutation (perte) de la Perméase au lactose donne en culture des bactéries Lactose – , pour s’assurer que la bactérie
est réellement mutante pour la voie lactose ou simple perte de la perméase , nous utilisons un analogue structural un a
diffusion libre (O-nitro-phénylgalactoside )

11. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
PRODUCTION D’ENERGIE
-La phosphorylation de l’ADP en ATP peut se faire de deux manières :
➢ Phosphorylation au niveau du substrat : il s’agit d’une extraction directe d’énergie a
partir d’un substrat préactivé par phosphorylation. L’exemple type a lieu au niveau de la
Glycolyse.
Ce type de met a la disposition de la cellule une énergie prête a l’emploi sans chaine
respiratoire ni d’accepteur final d’électrons mais le rendement énergétique est faible.
➢ La phosphorylation oxydative : dans ce processus l’énergie libérée au cours du
catabolisme des différentes substances , est transférée aux transporteurs d’électrons
(NADH2, FADH2). L’énergie est produite suivant 03 phénomènes :
1) Transfert des électrons a partir des transporteurs d’électrons vers les cytochromes jusqu’à
l’accepteur final d’électrons
2) Éjection concomitante des protons H+ du cytoplasme vers l’espace périplasmique créant
un gradient électrochimique
3) Le retour des protons H+ vers le cytoplasme via l’ATP synthase donne l'Energie a cette
enzyme pour transformer l’ADP+ Pi en ATP-
NB: d’autres bactéries peuvent générer de l'Energie par d’autres mécanismes ex : urée

12. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
Exemples de voies métaboliques : les Glucides
-Sucres simples :
-Sucres complexes :
GLUCOSE SUITE DE LA GLYCOLYSE PYRUVATEHK/G6PI FRUCTOSE-6-P
MANNITOL
FRUCTOSE
GALACTOSE
PTS M-1P M-1P D
GK GAL-1P GalUDPT/Epimerase GLUCOSE
HK
GLYCOLYSE
LACTOSE PERMEASE LACTOSE Β-GAL
GLUCOSE
GALACTOSE
GLYCOLYSE

13. 3 = Tryptophanase
Trp -) Indole + pyruvate
5 = Tryptophane
désaminase
Trp -) indole pyruvate +
NH3
Métabolisme du
Tryptophane chez les
bactéries

14. Catabolisme de la Lysine
chez les bactéries
LDC = Lysine décarboxylase
Catabolisme de la Cystéine
par la désulfhydrase
bactérienne

15. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
REGENERATION DES TRANSPORTEURS D’ELECTRONS ET DES DECHETS
METABOLIQUES
-Pour que les processus vitaux se poursuivent , le NAD+ et FAD+ doivent être regénérés a partir du NADHH+ et du FADH2. ce processus
se fait selon deux voies :
1) La respiration : dans ce cas la régénétation des transporteurs passe par la chaine respiratoire, selon l’accepteur final d’électrons
nous distinguons :
1,1) la respiration aérobie : l’accepteur final est le dioxygène qui est réduit en eau (H2O) , cette réaction est catalysée par le
Cytochrome VI (CYTOCHROME C OXYDASE) ou d’autres enzymes , les déchets métaboliques sont principalement le CO2 et l’H2O
1,2) la respiration anaérobie : dans ce cas l’accepteur final d’électrons est une substance minérale ou organique oxygénée . L’enzyme
catalysant la réaction et le produit final dépend de la substance en question
Exemples :
-Respiration des nitrates avec libération de produits métaboliques comme le NO2- ou l’azote N2)
-Respiration du CO2 en méthane chez les bactéries méthanogenèse
-Respiration des Sulfates en hydrogène sulfuré chez les sulfatoréducteurs
NB : Certaines bactéries ( Clostridium) sont capables de générer directement de l’hydrogene gazeux par réduction directe du NADH2

16. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique bactérien
REGENERATION DES TRANSPORTEURS D’ELECTRONS ET DES DECHETS METABOLIQUES
-Pour que les processus vitaux se poursuivent , le NAD+ et FAD+ doivent être regénérés a partir du NADHH+ et du FADH2. ce processus se fait selon trois
voies :
2) La Fermentation : processus qui se produit en l’absence totale de dioxygène ou de substrat oxygéné
Dans ce cas la régénération des transporteur d’éléctrons passe par des molécules organiques (oses, acides aminés …) qui en seront les accepteurs finaux sans passer
par la chaine respiratoire.
Il existe plusieurs voies fermentaires parfois spécifiques de groupes bactériens dont 03 sont les plus communes , selon le produit final obtenu :
-La voie de l’acide lactique : le métabolite final est l’acide lactique
-La voie butanediolique : le métabolite final est le 2,3-Butanediol
-La voir butyrique : donne du butyrate , retrouvée principalement chez les anaérobies strictes et a l’origine de l’odeur nauséabonde .
-La voie des acides mixtes : le processus généré un mélange d’acides organiques : acétique, méthanoique, propionique …
NB : -Certaines bactéries ( Clostridium) sont capables de générer directement Du dihydrogène gazeux par réduction directe du NADH2
-Certaines bactéries ENVIRONNEMENTALES sont capables de fermentation alcoolique.
3) L’oxydation cytoplasmique directe : transfert direct des électrons a l’oxygene avec génération sur peroxyde d’hydrogène
NADH. H+ + O2 –) H2O2 + NAD+
Le H2O2 étant toxique par décomposition spontanée en H2O + O* il est neutralisé par des comme :
La Catalse : 2 H2O2 -------------) 2H2O + O2 (gazeux)
La peroxydase : NADH.H+ + H2O2 ------------) 2 H2O + NAD+
Ces enzymes sont abondantes chez les aérobies strictes et aéro-anaérobies facultatifs

17. Fermentations des
acides aminés :
réaction de
Stickland

18. Vue d’ensemble des principales voies du métabolisme énergétique
bactérien
LES VOIES ANABOLIQUES BACTERIENNES
-Comme pour le catabolisme, certaines bactéries sont capables de synthétiser de nombreux métabolites primaires (prototrophes) ,
d’autres en sont incapables (auxotrophes) .
Aussi, elles sont capables de synthétiser un nombre important d’enzymes ainsi qu’une panoplie de métabolites secondaires.
Ces deux caractères sont utilisés entre autre pour l’identification bactérienne

19. Tests d’exploration du métabolisme
bactérien
APPLICATION A L’IDENTIFICATION
BACTERIENNE
NB:
-le cheminement des tests cités ici ne suit pas ce qui a lieu au laboratoire. Dans ce dernier les tests les plus rapides d’orientation sont effectués en
premier.
-Il existe une infinie variété de tests applicables au laboratoire , mais seuls ceux qui sont utilisées en routine sont cités dans ce cours.

20. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
TYPE METABOLIQUE
Bactérie fermentaire
Bactérie non-
fermentaire
RECHERCHE DES ENZYMES
RESPIRATOIRES ET TYPES ACCEPTEURS
FINAUX D’ELECTRONS
ASSIMILATION DES NUTRIMENTS DE BASE ENZYMES ET VOIES CATABOLIQUES
SPECIFIQUES
METABOLITES II aires
SPECIFIQUES
IDENTIFICATION DE
LA VOIE
FERMENTAIRE
GLUCIDES
LIPIDES
A.AMINES

21. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Milieux de culture: présentation, mode d’ensemencement , modalités d’incubation
et de Lecture.
• Les milieux de culture utilisés dans l’étude du métabolisme bactérien sont soit :
-) des milieux de culture a proprement dits , permettant la croissance
bactérienne. dans ce cas l’ensemencement se fait a partir d’une colonie ou a partir
d’une suspension de bactéries.
-) des milieux d’identification non nutritifs, mettant en évidence l’expression de
voies métaboliques par la bactérie a étudier mais ne permettent pas de croissance
bactérienne. dans ce cas , le milieu en question doit être ensemencé abondamment
avec plusieurs colonies ou une suspension dense. Ex : milieu urée-indole.
• Ces milieux peuvent se présenter sous forme de : milieu solides (en boite pétri ,
en tube sous forme de culot, de gélose inclinée ou de l’association des deux) ou
liquide (tube, flacon , ballon…)
• L’ensemecement des milieux liquides se fait par déchargement de colones ou par
addition de quelques gouttes de la suspension bactérienne.
• Les milieux solides s’ensemencent par : technique des 04 quadrants (boite
Pétri), piqure centrale (culot, gélose profonde) , stries serrés (gélose inclinée) et
piqure centrale du culot + stries sérrés sur la pente pour les milieux en contenant
les deux.

22. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Milieux de culture: présentation, mode d’ensemencement , modalités d’incubation
et de Lecture.
• L’incubation est variable , mais la plupart s’incubent comme les
cultures classiques.
• D’autres tests sont a incubation courte a température ambiante : ex
ONPG OU a exécution et lecture immédiate : Oxydase/Catalase
• La lecture est visuelle , elle peut être :
➢ Directe sans aucune addition (présence ou absence de colonies,
présence ou absence de trouble en milieux liquide , changement de
coloration du milieu liquide)
➢ Indirecte après addition de REVELATEURS ENZYMATIQUES.
NB: tout ses tests sont automatisables incluant l’ensemencement et la
lecture

23. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLISME DES GLUCIDES
1) Détermination de la voie d’attaque des glucides: la détermination du caractère fermentaire et/ou oxydatif du germe AINSI
que les sucres qu’un germe est capable de fermenter se fait sur GELOSE MEVAG (milieu d’études de la voie d’attaque des
glucides) . Ce test est appelé épreuve de Hugh et Leifson (EHL)
- A la base ce milieu SANS SUCRES est régénéré (100°/30minutes) puis additionné d’une solution de glucose pour obtenir une
concentration finale de 1% (ceci est de même pour l’étude du métabolisme d’autres sucres). Le rouge de phénol est l’indicateur
utilisé
- Pour pratiquer une EHL , deux tubes sont régénérés, refroidis et ensemencés par la bactérie a étudier par piqure centrale, a la fin
un tube sera scellé par addition de quelques gouttes d’huile de paraffine, l’autre reste au contacte de l’air
Lecture : la fermentation, associée a une culture tout le long du tube (bactéries aéro-anaérbies facultatives) induit la production
d’acides organiques et ainsi le virage de l’indicateur coloré vers sa zone acide (la production de gaz peut etre detectée)
-La respiration n’induite que peu d’acidification , elle est associée a une culture en surface du tube ouvert;
Tube fermé Tube ouvert lecture Exemple
Negatif Negatif Bacterie inactive vis-à-
vis du glucose
Certains
anaerobies strictes
Negatif Positif faible en
surface
Bacterie oxydative Pseudomonas
aeruginosa
Acinetobacter
baumannii
Positif tout au long du
tube
Positif tout au long du
tube
Bacterie fermentaire Enterobacteries

24. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLISME DES
GLUCIDES
2) Détermination de l’assimilation d’autres sucres: peut se faire sur milieu MEVAG . Mais d’autres milieux (d’isolement ou
d’identification ) peuvent combiner l’exploration de plusieurs caracteres dont l’assimilation de sucres .
a) La gélose Tri Sugar Iron : Glucose, Lactose, saccharose (en plus de la Cystéine et de la production de gaz)
b) La gélose Kligler Iron Agar : Glucose, Lactose (en plus de la Cystéine et de la production de gaz)
c) La gélose Mannitol-mobilité-Nitrate : fermentation du Mannitol et observation de la mobilité et de la respiration des nitrates
d) La gélose Hektoen: milieu selectif contenant du Lactose et du Saccharose
e) La gélose Chapman: milieu Selectif contenant du Mannitol
f) La gélose BCP : Milieu d’isolement contenant du Lactose.
… etc

25. a) La gélose Tri Sugar Iron (au rouge de phénol) : Glucose, Lactose,
saccharose (en plus de la Cystéine et de la production de gaz)
-Ensemencement par piqure centrale suivie de stries sur la pente
-incubation de 24h
-Les tubes ne doivent pas être hermétiquement fermés
-Lecture :
• Pente : LAC/SAC/GLU (si + virage au jaune)
• Culot : Glu (si+ virage au jaune)
• Cysteine : si + virage au noir
• Gaz : si + production de bulles voir déchiquètement de la gélose
Usage : identification des Entérobactéries
b) La gélose Kligler Iron Agar (au rouge de phénol): Glucose,
Lactose (en plus de la Cystéine et de la production de gaz)
-Ensemencement par piqure centrale suivie de stries sur la pente
-incubation de 24h
-Les tubes ne doivent pas être hermétiquement fermés
• Pente : LAC/GLU (si + virage au jaune)
• Culot : Glu (si+ virage au jaune)
• Cysteine : si + virage au noir
• Gaz : si + production de bulles voir déchiquètement de la gélose
Usage : identification de Vibrio cholerae

26. C) La gélose Mannitol-mobilité : fermentation du Mannitol et observation de la mobilité
et de la respiration des nitrates
-Ensemencement du milieu régénéré par piqure centrale
-Ensemencement par piqure centrale suivie de stries sur la pente
-incubation de 24h
-Les tubes ne doivent pas être hermétiquement fermés
Lecture :
-Virage de l’indicateur au jaune : mannitol +
-Bulles : production de gaz
-Trouble autour de la strie : Mobilité +
-Apparition d’une coloration après révélation de respiration des nitrates : Nitrate +
Usage :
-Identification des Staphylococques (aureus, saprophyticus)
-Identification des Enterobactéries (Enterobacter spp)

27. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLISME DES
GLUCIDES
3) Détermination de l’assimilation des Citrates comme seule source de carbone : se pratique sur gélose Citrate de Simmons
(Bleu de bromothymol + citrates de sodium + sels ammonium) et est utilisé dans l’identification des Entérobactéries et des BGN
non-fermentaires.
-La pente est ensemencée sur la moitié inférieure de la pente en stries serrées , la moitié
supérieure reste comme témoin négatif.
-Incubation 24h
-Lecture : l’assimilation des citrates et la libération d’ammoniac entraine l’alcalinisation
de la moitié inférieure du tube et le virage de l’indicateur vers la zone alcaline.
Ex : Escherichia coli : Citrate –
Klebsiella , Citrobacter : Citrate +
Pseudomonas : Citrate +

28. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLISME DES
GLUCIDES
4) Recherche de la β-galactosidase (β –gal): test fondamental pour les entérobactéries. Il permet de rechercher cet enzyme qui
métabolise le Lactose en galactose et glucose.
ce test peut se pratiquer de deux manières :
-soit par culture directe du germe sur milieu lactosé : dans ce cas la bactérie
possède aussi bien la β-gal que la Perméase permettant l’entrée du Lactose
dans la cellule
-Soit en utilisant un analogue structural du lactose ne nécessitant pas de perméase
pour son entrée dans a cellule (ONPG : ortho-nitro-phényl-galactoside). Dans ce
cas, la présence d’une
β-gal entraine la libération de glucose + ortho-nitro-phénol a coloration jaune
Le test a l’ONPG permet de différencier les Vrai LAC- des LAC+ ayant perdu la
perméase.
-Ensemmencement : quelques colonies en eau physiologique + disque d’ONPG
-incubation : 30 min a 37°

29. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLISME DES GLUCIDES
5)Identification de la voie fermentaire: ce test se pratique par ensemencement d’un Bouillon Clark
et Lubs par des colonies ou une suspension bactérienne suivi d’une incubation 18-24h a 37°C. le
lendemain , le contenu du tube est partagé en deux
a) Mise en évidence de la voie des acides mixtes : ce fait par adjonction de rouge de méthyl, si ce
dernier reste rouge = milieux acide = test RM+ =) voie des acides mixtes.
RM- = coloration jaune.
b) Mise en évidence de la voie du 2,3-butanediol : mis en évidence par la réaction de Voges et
Proskauer qui met en évidence un intermédiaire de cette voie : l’acétoine
-au tube sont ajouté les révélateurs enzymatiques : quelques gouttes (02-a 03) d’ α-Naphtol (réactif
VP1) puis de KOH (VP2) suivi d’une incubation de 10 minutes au voisinage du bec Bunsen (pour un
leger chauffage.
-la réaction est dite VP+ si une coloration rose est observée.
Ex : VP- : Escherichia , Citrobacter , Streptococcus agalactiae
VP+ : Klebsiella , Enterobacter , Serratia , Streptococcus pyogenes
NB : a quelques exeptions prés , les tests VP et RM sont mutuellement exclusifs.
Bouillon Clark et Lubs

30. RM- RM+ VP- VP+

31. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
ENZYMES RESPIRATOIRES
6) Recherche des enzymes respiratoires:
a) Recherche du cytochrome C Oxydase: complexe enzymatique multimérique permettant la réduction
du dioxygène en eau. Il est fondamental comme test d’orientation pour l’identification de :
-Bacilles a Gram négatif non exigeants : Pseudomonas et bactéries apparentés , Vibrio, Campylobacter
- Bactéries a Gram négatif exigeants :Haemophilus ,Bordetella ,Neisseria, Brucella…
-Micrococcus
Principe : une colonies est déposée a l’aide d’un support non métallique sur un disque ou un papier
imbibé du réactif d’oxydase (accepteur d’électrons artificiel) .
-la réaction est immédiate, le support du test vire en moins de secondes (oxydase immédiate) ou entre 30s
et 60 s (oxydase tardive)
b) Mise en évidence de la Catalase: enzyme de détoxification, sa mise en
évidence permet de différencier rapidement entre les
Straptocoques/Entérocoques (CAT-) et les Staphylococques (CAT+)
Principe : une colonies prise a l’aide d’une anse de platine est plongée dans
une goutte de peroxyde d’hydrogene préalablement posée sur une lame porte-
objet.
Une réaction positive se manifeste par libération de bulles de gaz.

32. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
ENZYMES RESPIRATOIRES
6) Recherche des enzymes respiratoires:
C) Recherche de la Nitrate réductase: enzyme permettant la respiration des nitrates.
-lors de ce processus les nitrates peuvent être réduits : en nitrites ou en Azote gazeux.
ensemencement d’un bouillon nitrate suivi d’une
incubation de 24h a 37°
addition du réactif de Griess-llosvay : Acide sulfanilique
(NR1) puis d’α-naphtylamine (NR2)
Apparition d’une coloration rose-rouge
= présence de nitrites
BACTERIE NR+ AU STADE NO2
AUCUN CHANGEMENT
ADDITION DE POUDRE DE ZINC
AUCUN CHANGEMENT=
ABSENCE DE NITRATES/NITRITES
BACTERIE NR+ AU STADE N2
Apparition d’une
coloration rose-rouge =
présence de nitrites
BACTERIE NR-

33. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
ENZYMES RESPIRATOIRES
6) Recherche des enzymes respiratoires:
D) Recherche de la respiration des sulfates: surtout chez les anaérobies, elle se
fait sur gélose Viande-foie additionné de sulfite de sodium et de sels de Fer
La libération de H2S par respiration des sulfites entrainent l’apparition d’un
précipité noir de sulfure de fer.

34. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Métabolisme des acides aminés et substances
azotés
1) Recherche des décarboxylases (fermentation des acides aminés) :
Les plus explorés sont :
- La Lysine décarboxylase ( Lysine-Cadaverine) = LDC
- L’Ornithine décarboxylase (Ornithine-Putrescine) =ODC
- L’arginine déshydrogénase (Arginine-citrulline-urée) = ADH
Le milieu utilisé est un Milieu Moeller ( Glucose 1% + Acide aminé a étudier + Pourpre de Bromocrésol)
-Procédure : ensemencement d’un tube pour chaque acide aminé + témoin sans acides aminés + huile de vaseline
(anaérobiose)
-dans un premier temps, les bactéries fermentent le glucose –) acidification -) virage de l’indicateur au jaune
-dans un deuxième temps, après épuisement du glucose , la bactérie fermente l’acide aminé entrainant l’alcalinisation du milieu et
le virage vers le violet
NB: le virage du tube témoin sans acide aminés est obligatoire et témoigne de la viabilité de la bactérie , sinon le test est
ininterprétable.

35. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Métabolisme des acides aminés et substances
azotés
2) Recherche des désulfhydrases (fermentation des acides aminés
souffrés ) :
La plus exploré est la Cystéine , dans ce cas on utilise une substance
soufrée analogue : le thiosulfate de sodium (réaction et lecture
identique a la recherche de sulfito-réducteurs)
-ce test est inclus dans de nombreux milieux multi-paramétriques : TSI
– KIA – Hektoen…

36. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Métabolisme des acides aminés et substances azotés
3) Métabolisme du Tryptophane et de l’Urée:
-les voies métaboliques les plus recherchés sont :
-) La voie de la Tryptophanase : entraine la libération d’indole et de pyruvate
-) La tryptophane désaminase : entraine la libération d’acide indole-pyruvique
-) l’urease : entrainant le métabolisme de l’urée en ammoniac et CO2
La recherche peut se faire sur plusieurs milieux liquides dont :
-Eau peptone exemple d’indole (Tryptophane exclusivement)
-Milieu de Ferguson (Milieu urée-indole) qui permet en plus l’exploration du métabolisme de l’urée.
Dans les deux cas, l’ensemencement se fait en abondance suivi d’une incubation de 18-24h a 37°
-Lecture de l’urée : visuelle, virage de la coloration de l’indicateur pH vers sa zone alcaline
-Tryptophanase : addition du reactif de Kovacs -) Anneau rouge vif --) Indole +
-Tryptophane désaminase : addition du réactif TDA (Chlorure de Fer) –) coloration ou précipité rouge
brique -) TDA +

37. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
Métabolisme des Lipides
1) Recherche de la Lipase / Esterase :
-Se pratique sur milieu a l’œuf ou au Tween 80
-La production d’esterases et ll’utilisation des lipides se traduit par un
eclercissement de la gélose autour de la culture
2) Recherche de la Licithinase: se pratique sur milieux a l’œuf, la production
d’une lécithinase induit la libération de phosphorylcholine et de diglycérides
insolubles qui précipitent autour des cultures.

38. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
ENZYMES ET VOIES CATABOLIQUES SPECIFIQUES
1) Recherche de la gélatinase: présente chez Pseudomonas aeruginosa ,
Serratia, Proteus et S.aureus Le test consiste en l’utilisation de médium
contenant de la gélatine et d’en observer l’hydrolyse.
2) Recherche de la Pyrrolydonyl aryl amidase: utilisé pour l’orientation
rapide entre groupes bactériens (Entérocoques, Streptocoque A et certaines
Enterobacteries). S’execute sur test en tube (04h) ou en disk a lecture
immédiate .

39. Tests d’exploration du métabolisme bactérien
METABOLITES II aires SPECIFIQUES
Recherche de la Pyocianine et de la Pyoverdine: permettent l’identification du
genre Pseudomonas (Pyoverdine) et de l’espece aeruginosa (Pyocyanine +
Pyoverdine)