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Atelier Paludisme - IPM - 2007
ADN ET GENOTYPAGE
Razafinjato Célestin
INSPC ANTANANARIVO
MADAGASCAR
EVALUATION
par les FACILITATEURS
Atelier Paludisme - IPM - 2007
PLAN
• Définition et historique
• Rappel sur la structure de l’ADN
• Diversité
• Outils de génotypage
Hybridation
Séquençage
PCR
RFLP
• Paludisme et génotypage
• Conclusion
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Définition et historique (1)
• Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité.
• Watson et Crick- 1953
• ADN: le support de l'information génétique :
• longues molécules agglomérées sous forme de
CHROMOSOMES
• Unité d’information(transcription) = gène.
Atelier Paludisme - IPM - 2007
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• Ensemble gènes = génome
• Génotype: forme allélique d’un gène(jeu de gène ).
• ADN = diverses formes.
• Génotypage = technique pour différencier les génotypes.
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Rappel sur la structure de l’ ADN (1)
• La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN par
diverses méthodes.
• Sa structure moléculaire
– sorte d'échelle constituée de 2 brins;
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Atelier Paludisme - IPM - 2007
Rappel sur la structure de l’ ADN (2)
L'ADN = 3 éléments:
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• Les quatre nucléotides, sous-unités de l'ADN: 2 groupes de
bases azotées :
– les bases PURIQUES: guanine (G) et adénine (A),
– les bases PYRIMIDIQUES: cytosine (C) et thymine (T).
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Rappel sur la structure de l’ ADN (3)
La synthèse de l’ADN
Les protéines sont assemblés à partir des acides aminés en
fonction de l’information présente dans les gènes.
2.Etapes:
Transcription
Traduction
Chaque étapes a 3 phases:
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• bases azotées attachées / liaisons faibles. cassées par une
enzyme l'ADN polymérase thermostable la chaîne ouverte 2
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Atelier Paludisme - IPM - 2007
http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:R%C3%A9plicationdelADN.png
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Diversité (1)
• Le développement des techniques de biologie a permis
la mise en évidence d'une très importante variabilité de
l'ADN = polymorphisme.
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l'existence, dans un même génome, d’un gène sous
deux ou plusieurs formes alléliques.
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Diversité (2)
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– Mutations ponctuelles.
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Atelier Paludisme - IPM - 2007
Outils de génotypage (1)
• Hybridation:
– technique particulière d’hybridation moléculaire qui
permet de déterminer la ressemblance entre les
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comparer.
– Degré de parenté
• Séquençage:
fragmentation d’un génome et vérifier l'ordre
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Atelier Paludisme - IPM - 2007
Outils de génotypage (2)
PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADN
la production de grandes quantités de l ’ADN en utilisant
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• analyse quantitative et qualitative pour la détection du
polymorphisme génétique.
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Outils de génotypage (3)
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ÉTAPES DE LA TECHNIQUE RFLP
extraction de l'ADN
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Outils de génotypage (4)
L’application :
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Organismes génétiquement modifiés en agronomie: plantes;Les
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Atelier Paludisme - IPM - 2007
Le génotypage permet:
de déterminer l’efficacité thérapeutique (recrudescence
et nouvelle infection).
Ex: MSP 1- MSP2 ( PCR, hybridation, RFLP) .
de diagnostic pour le traitement adéquat.
analyse épidémiologique moléculaire (prévalence de tel
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indicateur pour évaluer les programmes de lutte contre
le paludisme (diminution des clones parasitaires).
Paludisme et génotypage
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Conclusion
Génotypage :
– Diverses techniques puissantes.
– Amélioration de notre connaissance.
– Un outil très utile à la gestion de la santé de la population.
– Bon diagnostic pour traitement adéquat.
– Moyen de lutte efficace
Atelier Paludisme - IPM - 2007
Référence
• http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html
• http://www.cns.fr/externe/Francais/Presentation/ADN_historique.ht
ml
• http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/bulletin/2000/affiches/thellier.htm
• http://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/2004/2004n4/T97-4-2648-
2p.pdf
• http://fr.wikipedia.org/wiki/Adn
• http://www.proadn.com/fr/communique_communique_18
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ADN et génotypage

  • 1. Atelier Paludisme - IPM - 2007 ADN ET GENOTYPAGE Razafinjato Célestin INSPC ANTANANARIVO MADAGASCAR EVALUATION par les FACILITATEURS
  • 2. Atelier Paludisme - IPM - 2007 PLAN • Définition et historique • Rappel sur la structure de l’ADN • Diversité • Outils de génotypage Hybridation Séquençage PCR RFLP • Paludisme et génotypage • Conclusion
  • 3. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Définition et historique (1) • Acide désoxyribonucléique (ADN) : hérédité. • Watson et Crick- 1953 • ADN: le support de l'information génétique : • longues molécules agglomérées sous forme de CHROMOSOMES • Unité d’information(transcription) = gène.
  • 4. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Définition et historique (2) • Ensemble gènes = génome • Génotype: forme allélique d’un gène(jeu de gène ). • ADN = diverses formes. • Génotypage = technique pour différencier les génotypes.
  • 5. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Rappel sur la structure de l’ ADN (1) • La biologie moléculaire permet d’explorer l’ADN par diverses méthodes. • Sa structure moléculaire – sorte d'échelle constituée de 2 brins; – une double chaîne de nucléotides en forme hélicoïdale.
  • 6. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Rappel sur la structure de l’ ADN (2) L'ADN = 3 éléments: • un groupe phosphate • un sucre, le désoxyribose • Les quatre nucléotides, sous-unités de l'ADN: 2 groupes de bases azotées : – les bases PURIQUES: guanine (G) et adénine (A), – les bases PYRIMIDIQUES: cytosine (C) et thymine (T).
  • 7. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Rappel sur la structure de l’ ADN (3) La synthèse de l’ADN Les protéines sont assemblés à partir des acides aminés en fonction de l’information présente dans les gènes. 2.Etapes: Transcription Traduction Chaque étapes a 3 phases: – Initiation – Élongation – terminaison • bases azotées attachées / liaisons faibles. cassées par une enzyme l'ADN polymérase thermostable la chaîne ouverte 2 ADN (2 brins nouvellement formés)..
  • 8. Atelier Paludisme - IPM - 2007 http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:R%C3%A9plicationdelADN.png
  • 9. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Diversité (1) • Le développement des techniques de biologie a permis la mise en évidence d'une très importante variabilité de l'ADN = polymorphisme. • Le polymorphisme génétique a été défini comme l'existence, dans un même génome, d’un gène sous deux ou plusieurs formes alléliques.
  • 10. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Diversité (2) Génération du polymorphisme – Mutations ponctuelles. – Délétions et duplication. – Conversion génique. – Insertions de séquences mobiles. – L'excision de boucles chromatiniennes. – Le glissement intra-chromatidien (VNTR). – Recombinaisons.
  • 11. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Outils de génotypage (1) • Hybridation: – technique particulière d’hybridation moléculaire qui permet de déterminer la ressemblance entre les séquences de deux brins d’ADN que l’on veut comparer. – Degré de parenté • Séquençage: fragmentation d’un génome et vérifier l'ordre d'enchaînement des nucléotides de l’ADN: détection des maladies génétiques.
  • 12. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Outils de génotypage (2) PCR ou réaction de polymérisation en chaîne de l’ADN la production de grandes quantités de l ’ADN en utilisant une réaction enzymatique. • l 'amplification in vitro de l'ADN. • technique est basée sur la combinaison de 2 facteurs : les propriétés de synthèse enzymatique et d’initiation. • analyse quantitative et qualitative pour la détection du polymorphisme génétique. • utilisé en général pour diagnostic.
  • 13. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Outils de génotypage (3) RFLP ou polymorphisme de longueur des fragments de restriction: • Couper l'ADN en morceaux, à l'aide d'enzyme de restriction : – pour distinguer les unes des autres les molécules d’ADN, – technique de laboratoire pour différencier ou comparer des molécules d'ADN = empreintes génétiques et dans les tests de paternité séparation des fragments de restriction ÉTAPES DE LA TECHNIQUE RFLP extraction de l'ADN hydrolyse de l'ADN Dénaturation de l'ADN transfert sur membrane renforcement de la fixation
  • 14. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Outils de génotypage (4) L’application : Diagnostic. Thérapie. Dépistage systématique. Médecine légale: Typage d’un individu, recherche criminelle, test de paternité. Organismes génétiquement modifiés en agronomie: plantes;Les animaux.
  • 15. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Le génotypage permet: de déterminer l’efficacité thérapeutique (recrudescence et nouvelle infection). Ex: MSP 1- MSP2 ( PCR, hybridation, RFLP) . de diagnostic pour le traitement adéquat. analyse épidémiologique moléculaire (prévalence de tel ou tel allèle ou génotype dans une région donnée). de guider de stratégies de lutte contre le paludisme. indicateur pour évaluer les programmes de lutte contre le paludisme (diminution des clones parasitaires). Paludisme et génotypage
  • 16. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Conclusion Génotypage : – Diverses techniques puissantes. – Amélioration de notre connaissance. – Un outil très utile à la gestion de la santé de la population. – Bon diagnostic pour traitement adéquat. – Moyen de lutte efficace
  • 17. Atelier Paludisme - IPM - 2007 Référence • http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/genophenotype/phenotype.html • http://www.cns.fr/externe/Francais/Presentation/ADN_historique.ht ml • http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/bulletin/2000/affiches/thellier.htm • http://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/2004/2004n4/T97-4-2648- 2p.pdf • http://fr.wikipedia.org/wiki/Adn • http://www.proadn.com/fr/communique_communique_18
  • 18. Atelier Paludisme - IPM - 2007