1. UNIVERSIDAD AUTONOMA DE GUADALAJARA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS
BIOTECNOLOGÍA
PRACTICA 3. EFECTO DE LA FUENTE DE CARBONO
OBJETIVO. Analizar y comparar la capacidad de una levadura para fermentar diferentes
fuentes de carbono.
INTRODUCCION.
Cada organismo debe encontrar en su ambiente todas las sustancias que requiere para la
generación de energía y la biosíntesis celular, esto es, un organismo necesita de nutrientes
para crecer y desarrollarse. Cuando un microorganismo es utilizado para la producción de
metabolitos es necesario diseñar un medio de cultivo que favorezca su crecimiento.
Dentro de estos nutrientes tenemos a la fuente de carbono, que reviste una gran
importancia por ser la fuente de donde muchos organismos obtienen tanto su energía
como sus materiales para los componentes celulares. Sin embargo, la naturaleza de la
fuente de carbono juega un papel importante en la nutrición del microorganismo, más aún
condicionada la velocidad de crecimiento dependiendo de la facilidad que tiene un
microorganismo para metabolizar la fuente de carbono.
Generalmente la glucosa representa ventajas energéticas su consumo al ser incorporada a
la glicólisis de manera directa en los organismos heterótrofos, de los cuales forman parte
las levaduras y específicamente Saccharomyces cerevisiae.
Saccharomyces cerevisiae la capacidad de degradar la glucosa hasta bióxido de carbono y
agua a través del proceso de respiración aerobia, mientras que en ausencia de oxígeno la
transforma el etanol y bióxido de carbono a través del proceso denominado fermentación
alcohólica.
El bióxido de carbono crea la efervescencia en la cerveza y hace que el pan “suba” dentro
del horno. El etanol que se produce es el alcohol presente en la cerveza, vinos y bebidas
alcohólicas (ron, tequila, brandy, etc.).
En la presente práctica se demostrará el efecto que tiene la naturaleza del sustrato sobre la
velocidad de fermentación de Saccharomyces cerevisiae.

2. MATERIAL.
Solución de azul de metileno 0.01%
Levadura seca
Glucosa
Sacarosa (azúcar de mesa)
Fructosa
Maltosa
Lactosa
Agua destilada
6 Pipetas Pasteur
6 Tubos de vidrio medianos
7 pipetas graduadas de 1 mL
Baño maría
Termómetro
Gradilla para tubos de ensayo
Lápiz de cera
Parafilm
METODOLOGIA.
1.- Suspensión de levadura: Pesar 5 g de levadura y colocar en 100 de agua destilada
previamente hervida que esté a 33ºC y mantener a esta temperatura hasta su uso.
2.- Solución de azúcares: Preparar una solución al 20% de cada uno de los siguientes
carbohidratos – glucosa, fructosa, sacarosa, maltosa, lactosa.
3.- Rotular seis tubos del 1 al 6.
4.- Colocar un baño maría a 33ºC para incubar los tubos de ensayo del experimento,
utilizar un vaso de precipitado de 300 mL
5.- En cada tubo identificado, colocar 1 mL de solución de carbohidrato al 20%,
adicionar a cada uno, una gota de azul de metileno para generar una coloración azul cielo.
Incubar durante 5 minutos en baño maría a 33ºC.
6.- Tomar el tubo 1 con solución del carbohidrato correspondiente y adicionarle 1 mL de
suspensión de levadura, agitar suavemente para homogeneizar. Con esta solución llenar
una pipeta graduada, tapando el extremo con un dedo mientras sella el lado opuesto con
parafilm. Utilizando la pipeta Pasteur llenar completamente la pipeta graduada, después
invertir la pipeta en el tubo de ensayo 1. Inicie a contar el tiempo de incubación.
6.- Anotar el tiempo que tarda la solución en perder la coloración azul. Registrar
información en el cuadro 1.
7.- Cada 5 minutos anotar el volumen de gas que se genera en la parte superior de la
pipeta graduada. Registrar la información en el cuadro 2.
8.- Repita la operación con los tubos restantes del paso 5 al paso 8.
9.- Para reportar los resultados utilizar los siguientes cuadros.
10.- Realice un reporte por equipo que contenga: Titulo de la práctica, objetivo,
introducción breve, metodología, resultados, discusión, conclusión, bibliografía. Como
guía puede utilizar el formato de cualquier artículo científico.

3. Cuadro 1. Cambio de color del azul de metileno
Tubo número Carbohidrato Tiempo desaparece color azul
1
2
3
4
5
6
Cuadro 2. Volumen de gas formado
Tiempo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo5 Tubo 6
(min)
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué indica que la solución en un tubo de ensaye tenga una coloración azul cuando se
le adiciona azul de metileno? ¿Porqué cambia después el color?
2.- ¿Cuál es la mejor fuente de carbono para Saccharomyces cerevisiae para fermentar?
¿A qué se le puede asignar esta preferencia?
3.- Desde un punto de vista bioquímico explique brevemente la diferencia en la velocidad
de fermentación alcohólica de la levadura
4.-¿Qué sucedería si no sella con parafilm el extremo superior de la pipeta?
5.- A partir de la información obtenida puede deducir bajo que condición se producirá
más etanol, explique.